重组腺病毒介导的反义c-myc基因对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察重组反义c-myc腺病毒(Ad-Asc-myc)对急性早幼粒白血病HL-60细胞周期及增殖的影响,探讨其作用的分子机制.方法:将Ad-Asc-myc与鱼精蛋白硫酸盐(Protamine sulfate)混合后转染HL-60细胞,MTF法观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞增殖周期,RT-PCR检测c-myc转录变化,免疫细胞化学检测c-myc及增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化.结果:Ad-Asc-myc转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,细胞周期呈现G1期延长、S期缩短,增殖指数逐渐下降,出现大量凋亡细胞.c-myc基因转录及表达下降,PCNA表达降低.结论:Ad-Asc-myc可使HL-60细胞的生长减缓,增殖能力降低,凋亡细胞增加.其生物学活性与HL-60细胞c-myc和PCNA表达受抑有关.     

重组Lac-Z、反义c-myc腺病毒载体的增殖及鉴定

目的：建立重组反义c-myc腺病毒载体（Ad-AS-c-myc）、LacZ腺病毒（AD-Lac-Z）的增殖的方法。方法：对培养的293细胞转染重组反义c-myc、Lac-Z腺病毒载体,使重组反义c-myc、Lac-Z腺病毒载体在293细胞内大量复制,及时收集病变细胞,反复冻融以释放293细胞中的病毒载体,过滤除细胞碎片,利用倍比稀释法测定病毒载体滴度。PCR技术对扩增重组反义c-myc、Lac-Z腺病毒载体进行鉴定。结果：利用293细胞扩增重组腺病毒载体,获得的Ad-AS-c-myc滴度为：2.3×109pfu/ml;Ad-LacZ滴度为：1.2×1010pfu/ml。在Ad-LacZ可见在800bp出现一特异性PCR扩增条带,为腺病毒特异扩增带。Ad-AS-c-myc在800及608bp处出现两条特异扩增条带,分别为腺病毒及反义c-myc特异扩增条带。结论：对转染的293细胞冻融后收集重组腺病毒载体具有高效、可靠、简便、相对经济实用的优点,有推广价值。     

c-myc脱氧核酶对白血病细胞端粒酶活性的抑制作用

目的:探讨c-myc脱氧核酶的切割作用及对白血病细胞端粒酶活性的影响.方法:合成针对c-myc mRNA的"10～23"型脱氧核酶DzMycI及其类似物DzMycI'提取总RNA在细胞外切割c-myc mRNA;转染白血病细胞系HL-60后,用RT-PCR扩增c-myc基因片段和端粒酶蛋白亚基hTERT的片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性.结果:脱氧核酶DzMyel在细胞外和细胞内均能够有效地切割c-myc mRNA;在转染HL-60后,DzMycI显著抑制白血病细胞生长(P<0.05),下调端粒酶蛋白亚基hTERT的表达,显著降低HL-60细胞端粒酶活性(P<0.05).DzMycI催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzMycI'在胞外和胞内均不表现对c-myc mRNA的切割作用.结论:脱氧核酶DzMycI确实能够高效特异地切割c-myc mRNA,降低白血病细胞端粒酶活性,抑制白血病细胞生长,有可能作为c-myc抑制剂用于白血病的基因治疗领域中.     

奥普佐米协同三氧化二砷抑制急性早幼粒白血病细胞增殖的分子机制

目的 探讨奥普佐米协同三氧化二砷抑制急性早幼粒白血病细胞增殖分子机制.方法 MTr法检测不同联合用药对急性早幼粒白血病NB4、HL-60细胞存活率的影响:①梯度浓度三氧化二砷(NB4细胞:0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μmol/L;HL-60细胞:0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 μmol/L)...     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

苦参碱对急性白血病早幼粒细胞 HL-60的抑制细胞增殖与诱导凋亡作用

目的：探讨苦参碱对急性白血病早幼粒细胞 HL-60的抑制细胞增殖与诱导凋亡作用。方法：以早幼粒急性白血病细胞系（HL-60细胞）为实验对象,采用体外培养技术,试验检测不同浓度苦参碱对HL-60细胞活力、细胞周期以及细胞凋亡的作用。结果：随着苦参碱浓度（12.5~50μg/ ml）的增加,苦参碱对 HL-60细胞增殖的作用不断增强;苦参碱处理72 h 后的 HL-60细胞与空白对照组比较,G0/ G1期细胞明显增多,S 期细胞明显减少,但比较差异无统计学意义（P〉0.05）;细胞凋亡率均明显高于空白对照组（P〈0.01）。结论：苦参碱对于急性白血病早幼粒细胞 HL-60的增殖具有明显的抑制作用,并能促进其凋亡。     

盐酸小檗碱对HL-60细胞的诱导分化及其作用机制

目的：研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞诱导分化的作用履其分子机制。方法：HL-60细胞经盐酸小檗碱处理后，观察细胞形态学变化，以及细胞NBT还原能力的改变，用流式细胞仪测定细胞增殖周期、CD11b、C-myc、C-fos表达。结果：盐酸小檗碱作用于HL-60细胞后，形态学观察显示分化细胞的特征；NBT还原能力增强；CD11b表达升高；细胞被阻滞于G0／G1期，S期细胞数明显减少；C-myc基因表达减弱，C-fos基因表达增强。结论：盐酸小檗碱可诱导HL-60细胞分化戍熟，其机制可能是通过调控与HL-60细胞增殖、分化相关基因表达，抑制DNA合成，从而抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

当归多糖对人粒单系祖细胞和粒系白血病细胞株增殖分化的实验研究

目的：研究当归多糖(APS)对人粒单系造血祖细胞(CFU—GM)和急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)增殖分化的影响。方法：采用造血细胞体外培养，形态学观察，流式细胞术和免疫细胞化学等实验血液学技术。结果：APS对正常CFU-GM的体外增殖有显著刺激作用；而对HL-60细胞的增殖却有明显的抑制作用；APS可能通过阻止HL-60细胞从静止期进入增殖周期，抑制DNA的合成等途径来抑制细胞增殖；APS可能诱导HL-60细胞发生凋亡。结论：APS有可能成为既能促进正常造血，又能抑制白血病等肿瘤细胞增殖，并诱导其凋亡或分化的天然诱导剂。     

高温抑制HL-60细胞核酸合成与集落形成具有部分可逆性

作者证实高温(42℃,60min)对人早幼粒白血病细胞(HL-60细胞)的损伤程度存在异质性,短期(24 h)液体培养能使受抑制HL-60细胞的集落存活率及~3H-TdR掺入率获得部分恢复.结果提示,高温对白血病细胞DNA合成及集落形成抑制具有部分可逆性.作者对其临床意义及发生机理做了分析.     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因表达的抑制和诱导分化作用

目的研究ｃｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法采用针对原癌基因ｃｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５’ｄ（ＣＴＴＣＴＣＧＡＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧ）３’与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃｍｙｃｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。结果用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测出ＨＬ６０细胞ｃｍｙｃｍＲＮＡ的含量减少；细胞形态学变化以及非特异性酯酶（ＮＳＥ）染色、硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验均提示ＨＬ６０细胞出现了分化，部分细胞向粒细胞方向分化，部分细胞向单核细胞方向分化。结论ｃｍｙｃ反义寡核苷酸能够抑制ｃｍｙｃ基因的表达并能诱导ＨＬ６０细胞分化。     

反义脱氧寡核苷酸诱导HL-60细胞分化及对c-myc基因表达的影响

目的 研究二个针对c-myc基因的反义脱氧寡核苷酸（简称反义核酸）对急性白血病细胞HL－60的分化及基因表达的作用。方法 以人工合成二个硫代寡核苷酸作用于HL－60细胞后,采用流式细胞仪检测c-myc蛋白表达和HL－60细胞分化抗原,RT－PCR方法检测c-myc基因表达,并在光镜下观察以瑞特染色及NBT染色的HL－60细胞形态。结果 经反义核酸作用后,c-myc蛋白的表达有明显下降,与作用浓度与时间相关。急性白血病HL－60细胞出现中,晚幼粒细胞增多,出现CD15增高,HLA－DR及CD34降低是细胞分化的表现。同时RT－PCR分析c-myc基因扩增明显减少。结论 反义核酸对急性白血病细胞HL－60的诱导分化的同时抑制c-myc基因表达。     

HL-60细胞端粒酶活性的调控因素

目的 探讨HL－60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN－wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL－60细胞,用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化后,采用TRAP－ELISA－PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）对HL－60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL－60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL－60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL－60细胞分化的同时,可使HL－60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL－60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）的调节。     

蝌蚪提取液诱导人早幼粒白血病细胞分化的实验研究

目的 :探讨蝌蝌提取液 (T871)对白血病细胞的诱导分化作用。方法 :利用细胞生长曲线、形态学观察、细胞免疫化学及原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术 ,观察了T871诱导HL 60细胞分化的作用和分化过程中癌基因c myc、c myb表达的变化。结果 :T871能抑制HL 60细胞的增殖 ,形态学表现为类似单核 /巨噬细胞 ,同时T871还能使HL 60细胞的NBT还原能力、ANAE活性显著增强 ,同时伴有癌基因c myc、c mybmRNA表达的下调。结论 :T871能诱导HL 60细胞向单核 /巨噬细胞方向分化 ,c myc、c myb癌基因可能参与了此过程     

8-Br-cAMP对人白血病HL-60细胞生长、分化及有关基因表达的影响

目的　观察 8 Br cAMP对HL 6 0细胞生长、分化及其相关基因的调节。方法　组织化学、原位杂交和完整细胞RNA斑点印迹。结果　 8 Br cAMP作用 2 4h ,HL 6 0细胞c fos癌基因和p2 1waf1抑癌基因表达明显升高 ,c myc癌基因表达明显降低 ;8 Br cAMP作用 48h ,HL 6 0细胞生长、增殖明显受抑制 ,并向中性粒细胞方向分化。结论　 8 Br cAMP可调整HL 6 0细胞生长、分化及相关癌基因和抑癌基因的表达 ,抑制HL 6 0细胞的生长 ,促进HL 6 0细胞的分化     

不同修饰型反义寡核苷酸抑制癌基因表达生物学效应的初步观察

比较了两种不同的反义寡核苷酸抑制ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的效应。二者有相同的碱基序列,但有不同的修饰方式,即全硫代修饰及卟啉修饰;另外还合成了两种非修饰型的反义和错义寡核苷酸作为对照。ＭＴＴ细胞增殖实验、ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的Ｄｏｔｂｌｏｔ检测、ｃ－ｍｙｃ蛋白的免疫组化检测等结果显示卟啉修饰的寡核苷酸除了具有明显的的特异性抑制基因表达的效果外,还伴有细胞裂解效应     

表达反义N-myc逆转录病毒载体对神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的影响

目的研究反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染后人神经母细胞瘤细胞在神经生长因子处理后的诱导分化情况,探讨Ｎ－ｍｙｃ在神经生长因子诱导分化中的意义。方法用基因重组技术构建表达反义Ｎ－ｍｙｃ的逆转录病毒载体。用ＴｒａｎｓｆｅｃｔａｍＲｅａｇｅｎｔ等多种基因转染方法,转染已经基因转染恢复了神经生长因子受体表达的人神经母细胞瘤系,建成表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系。用神经生长因子处理转化细胞系,观察ＮＧＦ是否能诱导分化。同时用ＴＵＮＥＬ原位凋亡检测技术及超微结构技术研究表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系凋亡的情况。结果表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系经单链ＲＮＡ探针杂交,证实其Ｎ－ｍｙｃ的表达明显降低。用神经生长因子处理这些转化细胞系,细胞出现明显的形态学分化。ＴＵＮＥＬ技术及超微结构研究表明,经反义Ｎ－ｍｙｃ转染的细胞系细胞凋亡增多。结论反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能有效抑制Ｎ－ｍｙｃ的表达,进而促进神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞的分化。反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能使神经母细胞瘤细胞凋亡增多。     

大蒜油诱导HL-60细胞分化的实验研究

目的：观察大蒜油对HL-60细胞的诱导分化作用。方法：MTT法检测大蒜油对HL-60细胞的增殖抑制,Giemsa染色观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期改变,并检测CD11b、CD15的表达。RT-PCR检测bcl-2、c-myc／mad、mpo基因mRNA的表达。同时设ATRA、As2O3为阳性对照,与大蒜油的作用进行比较分析。结果：大蒜油明显抑制了HL-60细胞增殖,使大部分细胞阻滞于G0／G1期,作用强于ATRA和As2O3;诱导细胞成熟分化的能力与ATRA接近,优于As2O3;通过抑制bcl-2、c-mvc和mpo基因的表达,促进mad基因的表达来发挥作用。结论：大蒜油对HL-60细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,有可能成为新的临床诱导分化剂。     

反义c-myc重组腺病毒对人肝细胞癌细胞的实验性治疗

目的：研究携带反义c-myc的重组腺毒（Ad-Asmyc)对人肝细胞癌细胞体外,体内的治疗作用及其机制,方法：用Ad-Asmyc感染人肝细胞癌细胞系BEL－7402和QSG－7701,绘制细胞生长曲线,进行克隆形成实验,研究Ad-Asmyc在体外的抗瘤作用,在瘤内注射Ad-Asmyc,观察裸鼠皮下移植的生长情况,应用逆转聚合酶链反应（RT－PCR）及Western blot检测相关基因表达,应用流式细胞术,梯形DNA,DNA原位末端标记研究细胞周期及细胞凋亡情况,结果：感染Ad-Asmyc后,BEL－7402及PSG－7701细胞内c-myc基因表达降低,肿瘤细胞的生长受到明显抑制,而且出现了G1期阻滞及凋亡,体内注射Ad-Asmyc基因表达降低,肿瘤细胞的和长受到明显抑制,而且出现了G1期阻滞及凋亡,体内注射Ad-Asmyc后裸鼠皮下移植的生长也得到明显掏,结论：Ad-Asmyc在体外及体内可使肝细胞癌出现的细胞生长抑制,发生凋亡,具有明显的抗癌作用,是有应用前景的抗癌药物。     

反义c-myc重组腺病毒载体的构建及其对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:观察反义c-myc重组腺病毒载体对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用. 方法:构建大鼠反义及正义c-myc细菌质粒,并将所得细菌质粒及腺病毒E1缺失质粒导入293细胞系,经共转染得到正义及反义重组腺病毒载体. MTT法检测重组腺病毒载体对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用,免疫组织化学染色检测重组腺病毒载体对c-Myc蛋白的表达. 结果:反义c-myc重组腺病毒载体可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖,降低气道平滑肌细胞c-Myc蛋白的表达. 结论:反义c-myc重组腺病毒载体可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖.