异种生物骨衍生材料与大鼠骨髓基质细胞黏附的体外实验研究

目的:探寻良好的骨组织工程支架材料.方法:以新西兰大白兔的四肢长骨制备一种生物骨衍生材料,将此材料与大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)联合培养,通过光镜及电镜对联合培养过程进行动态观察. 结果:生物骨衍生材料具有三维立体多孔隙结构,并有良好的生物相容性和材料-细胞界面.结论:异种生物骨衍生材料是一种有临床应用前景,适用于组织工程骨构建的支架材料.     

部分去蛋白脱钙骨的细胞相容性研究

目的：探讨部分去蛋白脱钙骨的细胞相容性。方法：将猪肋骨用理化方法处理制得部分去蛋白脱钙骨(PDDB)，在对PDDB理化性能检测的基础上，将其与人胎骨膜成骨细胞体外复合培养，了解其细胞相容性。结果：PDDB的无机成份为羟基磷灰石。含有少量蛋白质，仍具有原骨组织骨盐支架的二三维多孔网状孔隙结构系统，对复合培养的人胎骨膜成骨细胞的形态特征、细胞周期、倍体水平尤有害影响。结论：PDDB具有原骨组织的网状孔隙结构系统，具有良好的细胞相容性，可望用于成骨细胞的支架材料。     

异种生物衍生骨与兔骨髓间充质干细胞的体外黏附实验研究

目的:探寻良好的骨组织工程支架材料。方法:以市售新鲜猪股骨制备一种生物骨衍生材料,将材料与兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合培养,扫描电镜下对复合培养过程进行动态观察。结果:异种生物衍生骨具有三维立体多孔结构,并有良好的生物相容性和材料细胞界面。结论:异种生物衍生骨是一种具有临床应用前景、适用于构建组织工程骨的支架材料。     

生物衍生骨与成骨细胞联合培养体内异位成骨实验研究

目的：探讨生物衍生骨作为组织工程骨支架复合成骨细胞体内植入的成骨作用，了解其用于骨组织工程支架材料的可行性。方法：将经过物理化学方法处理制得的冻干猪脱蛋白型松质骨与胎兔颅骨来源的成骨细胞体外培养10d后，在无菌条件下植入30只成年新西兰兔背部肌肉内（左侧），对照组为同体单纯植入猪脱蛋白型松质骨（右侧）。于8周后取材，行大体观察、X线摄片、脱钙后组织学染色（HE法）及荧光标记检测，观察新骨形成情况。结果：8周后，实验组：X线片有高密度的阴影；大体标本呈红色，质硬；脱钙组织切片示大量的类骨质骨形成并相互连接成骨小梁结构，骨细胞位于陷窝中；荧光标记后在荧光显微镜下，骨小梁呈现淡绿色，类骨质呈黄色。对照组：X线片仅见植入处低密度阻射阴影；组织学检查及荧光标记检测均无类骨形成，在支架的孔洞内有大量的纤维组织长入。结论：猪脱蛋白型松质骨可作为骨组织工程的支架材料，具有良好的应用前景。     

猪松质骨支架兔体内移植后周围组织Th1，和Th2细胞因子的变化

骨缺损修复是临床治疗的难题之一、骨组织工程学的研究发展为此提供了新的思路。天然生物骨材料具有类似人体骨骼的三维网状结构，作为人体的异种组织，直接植入人体必然引起强烈的免疫排斥反应而导致骨修复的失败，而通过深低温冷冻、脱脂、脱钙、脱蛋白等方法处理获得的生物衍生骨，因其具有良好的骨传导性能、生物相容性和一定的成骨诱导能力，已被单独或作为其它成骨诱导因子的载体，广泛地应用于骨组织工程。但天然生物骨在处理过程中没有完全也不可能完全消除抗原成分，因此，以生物衍生骨为支架构建组织工程骨植入机体后必然引发宿主产生移植免疫反应。     

间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的形态学观察

目的：探讨以间质干细胞（MSC）与同种异体脱钙骨复合培养法构建组织工程化生物衍生骨的可行性。方法：预先制备同种异体脱钙骨，取健康成人骨髓，用单核细胞分离液分离MSC，间充质干细胞基础培养基原代和传代培养。倒置显微镜下观察细胞生物学特性，用FITC标记的抗CD105对第3例细胞进行流式细胞鉴定，并与同种异体脱钙骨复合培养1周后行扫描电镜观察。结果：原代及传代培养的MSC增殖迅速，第3代CD105阳性细胞占64．1％，复合同种异体脱钙骨培养1周后细胞生长状态良好，增殖迅速，在材料表面形成细胞层。结论：未诱导的MSC是骨组织工程适宜的种子细胞，与同种异体脱钙骨复合可作为骨组织工程的载体。     

新型脱细胞骨基质-壳聚糖骨组织工程支架的制备及性能评价

目的探寻新型脱细胞骨基质（Acellular Bone Extracellular Matrix,ABECM）材料及脱细胞骨基质-壳聚糖（Chitosan,CS）复合多孔支架的制备方法,并对其性能进行评价。方法采用Triton X-100、十二烷基硫酸钠（Sodium Dodecyl Sulfate,SDS）的脱细胞方法对猪股骨进行脱细胞处理,应用溶液共混、冷冻干燥法制备脱细胞骨基质-壳聚糖复合支架。对ABECM材料进行定性分析,观察ABECM-CS复合多孔支架的形态学、孔隙率、力学性能和细胞-支架复合培养的相容性。结果 ABECM材料HE染色、Hoechest33258荧光染色均无细胞残留,茜素红染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色、骨形态发生蛋白-2抗体染色阳性。扫描电镜显示支架具有多孔结构,孔径50-200μm,孔隙率为（53.50±4.23）%,力学测试支架干燥状态纵向压缩模量为（33.23±14.45）MPa,支架湿润状态下的压缩模量为（2.27±1.13）MPa。细胞-支架复合培养相容性良好。结论制备的ABECM-CS复合多孔支架去细胞彻底,保留了脱细胞骨基质主要成分,具备合适的孔径和孔隙率,细胞相容性良好,是理想的骨组织工程支架。     

纤维粘连蛋白对部分脱蛋白骨细胞相容性影响研究

目的研究纤维粘连蛋白（fibronectin,FN）对细胞在部分脱蛋白骨（partially deproteinised bone,PDPB）支架材料上的粘附、增殖的影响,为体内构建组织工程骨提供理论依据．方法（1）用猪椎骨制备部分脱蛋白骨,纤维粘连蛋白修饰部分脱蛋白骨的细胞相容性制成部分脱蛋白生物骨,扫描电镜观察修饰过的部分脱蛋白生物骨表面情况;（2）取5×106／mL浓度脂肪干细胞接种部分脱蛋白骨和部分脱蛋白生物骨片,MTr法检测吸光度,评价纤维粘连蛋白脂肪干细胞在PDPB生长影响．结果（1）猪椎骨制备部分脱蛋白骨孔隙分布均匀,由大量的羟基磷灰石纤维编织而成;部分脱蛋白生物骨表面可见大量颗粒状蛋白结晶．（2）部分脱蛋白骨细胞增殖曲线呈“S”形,部分脱蛋白生物骨细胞增殖曲线失去“s”形,第10天均达到高峰,各分组之间差异有统计学意义（P〈0．001）．结论纤维粘连蛋白能促进细胞在PDPB支架材料上的增殖和粘附,改善部分脱蛋白骨的细胞相容性．     

间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的形态学观察

目的探讨以间充质干细胞(MSC)与同种异体脱钙骨复合培养法构建组织工程化生物衍生骨的可行性。方法预先制备同种异体脱钙骨,取健康成人骨髓,用单核细胞分离液分离MSC,间充质干细胞基础培养基原代和传代培养。倒置显微镜下观察细胞生物学特性,用FITC标记的抗CD105对第3代细胞进行流式细胞鉴定,并与同种异体脱钙骨复合培养1周后行扫描电镜观察。结果原代及传代培养的MSC增殖迅速,第3代CD105阳性细胞占64.1%,复合同种异体脱钙骨培养1周后细胞生长状态良好,增殖迅速,在材料表面形成细胞层。结论未诱导的MSC是骨组织工程适宜的种子细胞,与同种异体脱钙骨复合可作为骨组织工程的载体。     

脱细胞骨基质的立体构筑及TritonX-100残留量测定

目的 制备骨组织工程的新型天然支架材料.方法 取兔双侧胫骨,修整成片状,使用含3%TritonX-100及蛋白酶抑制剂的Tris-HCL的缓冲液洗脱掉骨片中的细胞成份.取脱钙后骨片行HE染色及阿利新蓝染色并用免疫组化方法检测骨片中纤维连接蛋白及层黏连蛋白;Mallory-Heidenhain染色测量骨陷窝形态;对骨片进行扫描电镜及透射电镜观察;使用反相高效液相色谱检测TritonX-100残留量.结果 HE、阿利新蓝染色见脱细胞骨基质胶原纤维排列规则,骨陷窝空虚;骨陷窝形态测量表明脱细胞骨基质的骨陷窝数量与正常骨的骨陷窝数量没有差异;免疫组织化学染色及免疫透射电镜均见纤维连接蛋白与层黏连蛋白存在于脱细胞骨基质和正常骨的骨陷窝周边;TfitonX-100残留量测定表明脱细胞骨基质最低检出极限为0.5μ/UmL.结论 脱细胞骨基质保持了骨的正常立体构筑,是一种新型的生物衍生材料,具有广阔的应用前景.     

超声波辅助脱钙技术用于猪脱钙骨基质制备的效果评价

目的以猪后腿骨干骺端为对象,考察超声波技术在脱钙骨基质制备过程中的作用。方法 6月龄公猪后腿骨清洗切片,分别用传统脱钙制备法和超声波辅助脱钙制备法进行脱钙骨基质的制备,超声波功率:220 W,频率:25 kHz。超声波处理时间:0～6h。以脱钙骨的脱钙率考察超声波对脱钙效果的影响;利用Micro-CT和显微镜观察脱钙骨的大体三维结构;测量其孔隙率和孔径大小;利用物性测试仪测量脱钙骨的压缩模量以表征其力学性能。结果脱钙骨脱钙率的测量结果显示,与传统脱钙法相比,超声波辅助脱钙制备法仅需6 h就可使脱钙率达到100%,脱钙时间可缩短45.5%;且制备的脱钙骨具有良好的孔隙率和互相连通的孔径结构,孔隙率达到85%以上,孔径大小为(348.18±64.86)μm,与传统制备方法无显著差异;并具有良好的力学性能,在脱除90%以上的钙后脱钙骨的压缩模量仍可达到(6.42±0.83)N/mm2。结论超声波辅助脱钙技术可以有效提高脱钙骨基质的制备效率,且制备效果良好。     

脱钙骨修复骨肿瘤术后骨缺损115例

目的探讨脱钙骨治疗骨肿瘤术后骨缺损的疗效。方法应用脱钙骨充填治疗骨肿瘤术后骨缺损115例,男72例,女43例;年龄5～65岁,平均34岁。结果全部病例均获随访,随访时间l～8年,平均4年2个月。满意106例,占92.2%;不满意9例,占7.8%。结论脱钙骨修复骨肿瘤术后骨缺损组织相容性好,方法简便,疗效肯定,是理想的植骨材料。     

纳米晶胶原基骨材料在临床上的应用

目的 观察纳米晶胶原基骨材料（nano-hydroxyapatite／collagen，nHAC）种植人体后的骨修复效果，探讨该材料的临床应用前景。方法 采用仿生方法制备纳米相羟基磷灰石／胶原复合材料，并用于临床，通过影像学方法观察和评价病人骨创愈合情况。结果 纳米晶胶原基骨材料在成分与微结构上与天然骨类似，种植人体后患者无高热、渗出和免疫排斥反应，骨修复情况良好。结论 纳米晶胶原基骨材料是优良的骨修复材料之一。     

不同生物活性骨生物学特性的研究现状

作者对目前临床上主要应用的三种生物活性骨：冷冻骨、冻干骨和脱钙骨，从移植免疫机制和生物力学特性方面进行比较和探讨。     

表面脱钙骨基质明胶诱导成骨修复颅骨大面积缺损的实验研究

目的:寻找替代自体骨移植修复颅骨大面积缺损的理想材料。方法:用表面脱钙骨基质明胶修复大鼠颅骨8 mm的圆形缺损,术后不同时间行x线、组织学检查。结果:表面脱钙骨基质明胶具有诱导成骨能力,保留骨的部分生物力学特性,但完全被新骨替代时间较长。结论:表面脱钙骨基质明胶是修复大面积颅骨缺损的理想材料。     

Experimental Observation on Osteogenetic Effects of Allogenic Decalcified Bone Matrix

This experiment was designed to evaluate the osteogenetic effects ofdifferent forms of allogenic decalcified bone matrix.39 rabbits were em-ployed and a bony defect of 1cm in length was made on the shaft of theulnas of the animals.They were divided into 4 groups.In the first group,the bony defects were filled with allogenic decalcified bone powder,in thesecond group,with decalcified bone blocks,in the third group,with unde-calcified bone blocks,and in the fourth group,nothing was filled into thebony defects.Roentgenological and histological studies were made regularly.It was found that after 8-10weeks,70-80% of the bony defects filledwith DBM showed firm union between the host bone and the graftedmaterial and no difference of the osteogenecity could be found between thetwo kinds of DBM,incomplete union occurred in the third group,andnonunion was seen in the fourth group.It is suggested that allogenic decalcified bone powder be used as a graftma-terial to fill up bony defects or cavities because it is easily preparedand used,has good plasticity,and can be stored in room temperature.     

Jy-Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用

目的：探讨Jy-Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用。方法收集200例骨髓活检穿刺组织,选取其中150例采用Jy-Ⅱ脱钙液脱钙,同时选取50例采用5%的硝酸脱钙液脱钙做对照观察,脱钙后分别做HE染色、特殊染色（Go-mori氏网状纤维染色）和免疫组织化学染色（MaxVisionTM法CD38染色）,观察Jy-Ⅱ脱钙液对骨髓活检组织结构的保存及染色情况。结果经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整,完整率达98.67%。镜下形态结构清晰,组织结构清晰率达100.00%,染色情况良好,脱钙时间短,为150 min。脱钙完全,效果好。经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织,结构保持不完整,完整率达60.00%,镜下形态结构欠清晰,清晰率达52.00%,染色情况欠佳,脱钙时间长,长达240 min,脱钙不完全,效果欠佳（P〈0.05）。结论 Jy-Ⅱ脱钙液效果明显优于5%的硝酸脱钙液,骨髓活检组织结构保持良好,操作简便,脱钙时间短,在脱钙过程中无需更换脱钙液,HE染色、特殊染色、免疫组化染色效果也较满意,实用性强,不失为一种良好的脱钙液,值得推广