恐伤孕鼠对其仔鼠大脑海马区乙酰胆碱代谢的影响

目的：观察恐伤孕鼠对其仔鼠脑发育关键期大脑海马区乙酰胆碱代谢相关酶的影响。方法：采用恐伤孕鼠的方法造模,造模时间为整个妊娠期间。雌鼠分娩后,在仔鼠出生后14d取右侧大脑海马组织匀浆,检测乙酰胆碱代谢相关酶的活力。结果：模型组仔鼠海马区脑组织乙酰胆碱酯酶（AchE）和乙酰胆碱转移酶（CHAT）的活力均明显升高,与正常组和补肾组样本比较,有极显著性差异（P〈0.01）。结论：恐伤孕鼠可以影响仔鼠脑发育关键期大脑海马区乙酰胆碱代谢。     

恐伤孕鼠对其仔鼠大脑海马区细胞凋亡的影响

目的：观察恐伤孕鼠对其仔鼠大脑海马区细胞凋亡的影响。方法：采用恐伤孕鼠的方法造模，受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组、补肾组，造模时间为整个妊娠期间。仔鼠出生后14天，取其大脑海马区组织用流式细胞术检测其细胞凋亡率；用免疫组化ABC法观察Bcl-2、Bax在大脑海马区的蛋白表达。结果：模型组仔鼠海马区脑组织细胞凋亡率较正常组和补肾组增加（P〈0．05）。同时，模型组仔鼠海马区脑组织Bcl．2阳性表达数下降、Bax阳性表达数升高，与正常组和补肾组比较均有极显著性差异（P〈0．01）。结论：恐伤孕鼠通过凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达增加共同作用引起其仔鼠海马区脑细胞凋亡增加，从而影响到仔鼠脑的发育，而补肾治疗可逆转此效应。     

恐伤孕鼠对其仔鼠生长发育的影响

目的:观察恐伤孕鼠对其仔鼠生长发育的影响。方法:受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常对照组、模型组、补肾组。采用猫恐吓孕鼠的方法造模,造模时间为整个妊娠期间。孕鼠妊娠20天时每组随机抽取1只,取出胎鼠2只断头取脑固定,行光镜观察;仔鼠出生当天每组随机抽取10只测其平均体重,在饲养期间,观察其出牙、开眼、张耳、被毛生长的情况,生后14天再测其平均体重后灌流固定仔鼠脑组织,行光镜观察。结果:出生当天,模型组仔鼠平均体重与正常对照组和补肾组比较,有显著性差异(P<0.05);生后14天,模型组仔鼠平均体重与正常对照组和补肾组比较,有极显著性差异(P<0.01)。模型组仔鼠出牙时间略晚于正常对照组及补肾组(P<0.05),其被毛生长时间明显晚于正常对照组及补肾组(P<0.01)。胎鼠和生后14天仔鼠脑组织光镜观察可见散在片状水肿,神经细胞减少,部分切片可见海马组织层次结构模糊。结论:恐伤孕鼠可造成其仔鼠生长发育迟缓,脑发育障碍,补肾治疗可阻断此损伤的发生。     

恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达影响

目的观察恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质组织形态学影响及对大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表达影响。方法将受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组、补肾组,每组各10只。运用恐吓为主的复合应激法刺激模型组和补肾组孕鼠,正常组不予刺激。同时补肾组每日以中药左归丸浓缩剂2ml/100g体重灌胃,正常组及模型组则根据雌鼠体重予以等量生理盐水灌胃,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠。雌鼠分娩后,仔鼠出生当天每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑,固定,染色,切片,在光镜和电镜观察其组织结构和超微病理改变。另每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑匀浆做定量PCR,观察各组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达变化。结果模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;电镜下可见到多数神经细胞出现细胞器结构异常,如线粒体肿胀,高尔基复合体肥大,部分伴有细胞核固缩。补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变。补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达均低于正常组(P0.01),模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达低于补肾组(P0.01)。结论恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过补肾填精法调节Reelin信号通路从而阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生。     

恐伤孕鼠对其仔鼠脑皮质神经元早期发育影响的实验研究

目的根据肾藏精主髓,髓充于脑,肾主脑发育理论,研究先天肾虚影响脑皮质神经元早期发育的情况及补肾法的作用。方法 SD大鼠(雌雄2∶1)合笼,制备孕鼠,分为模型组、空白组、补肾组。模型组、补肾组采用梅花针叩击孕鼠头部和模拟地震平台两种方法复合不定时恐吓刺激孕鼠整个孕期直至生仔,补肾组在造模过程中同时给予左归丸灌胃治疗,空白组自然喂养至生产;检测出生当日仔鼠脑湿重体质比;血清FT3、FT4含量;光镜及电镜观察脑皮质神经元结构。结果与空白组比较,模型组仔鼠脑湿重体质比下降(P0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P0.01),光镜下脑皮质神经元细胞个数明显减少,脑神经元超微结构残缺,轮廓凹凸不平,核形不规整,核膜塌陷;补肾组仔鼠脑湿重体质比下降(P0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P0.01),脑皮质神经元细胞个数增多,脑神经元超微结构接近正常。结论复合法恐吓刺激孕鼠可引起胎产数下降,仔鼠脑湿重体质比、血清FT3、FT4变化,脑皮质层神经元发育异常;中药补肾法治疗后,可有效改善先天肾虚仔鼠脑早期不良发育。     

孕期恐应激对孕鼠及其子代近远期海马NMDAR1、NR2B表达的影响

目的观察孕期恐应激对孕鼠自身及其子代近远期海马NMDAR1、NR2B表达的影响。方法方法受孕雌鼠随机分为模型组和空白组,每组15只,模型组采用旁观电击法制备孕期恐惧应激动物模型。孕鼠产仔后仔鼠延续孕鼠的分组,每窝随机选择5只饲养至80日龄。以仔鼠21日龄代表幼儿期,80日龄代表成年期,采用免疫组化法检测孕鼠及仔鼠海马NMDAR1、NR2B的表达。结果①与空白组比较,模型组孕鼠海马区NMDAR1、NR2B蛋白表达均下调,差异有统计学意义(P0.01);②与同日龄空白组相比,模型组21日和80日龄仔鼠海马区NMDAR1、NR2B蛋白表达均下调,差异有统计学意义(P0.01)。结论恐伤孕鼠可导致其自身及子代近远期海马NMDAR1、NR2B蛋白表达下调,这可能是孕期恐刺激后孕鼠及子代学习记忆能力下降的部分机制。     

恐伤孕鼠所产21日龄仔鼠的认知发育与海马区GLU、GABA、GLY的相关性研究

目的:考察恐伤孕鼠所产21日龄仔鼠认知发育与海马区谷氨酸(Glutamic acid, GLU)、γ-氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid, GABA)、甘氨酸(Glycine, GLY)的相关性。方法:应用旁观电击法建立恐伤肾孕鼠模型,通过对21日龄仔鼠进行Morris水迷宫实验,观察其认知发育;通过脑立体定位仪在右侧海马区采集脑透析液,应用HPLC-ECD法测定仔鼠脑透析液中GLU、GABA、GLY含量。结果:与对照组比较,21日龄模型组仔鼠平均逃避潜伏期时间久、游泳速度慢、跨台次数少、20%边缘区域停留时间长,差异均有统计学意义(P0.05);21日龄模型组仔鼠海马组织细胞外液中GLU、GLY的水平在各个灌流时间点均升高,而GABA的水平在各个灌流时间点均降低,差异有统计学意义(P0.05);21日龄仔鼠海马区氨基酸类神经递质GLU、GLY与其平均逃避潜伏期、跨台次数存在负相关,与20%边缘区域停留时间呈正相关关系,差异有统计学意义(P0.05);神经递质GABA与其平均逃避潜伏期、跨台次数存在正相关,与20%边缘区域停留时间呈负相关关系,差异有统计学意义(P0.05)。结论:恐伤孕鼠可影响其21日龄仔鼠的认知发育及海马区GLU、GABA、GLY的含量,其认知发育水平与海马区GLU、GABA、GLY的含量改变有一定的关系。     

补肾中药对肾虚质大鼠脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察补肾中药对肾虚质大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨生物体海马区神经元功能活动与肾藏志理论相关性。方法采用"猫吓鼠"经典造模法造成先天不足加后天失养复合型肾虚质模型仔鼠,分为模型组、左归丸组、右归丸组,空白组产自正常孕鼠,选用补肾中药进行调理。检测大鼠脑质量、肾质量、脑重指数及海马区BDNF的表达。结果与空白组比较,肾虚质大鼠脑质量、肾质量、脑重指数和BDNF光密度值降低;镜下观察海马区出现片状水肿,神经细胞数目减少、结构松散。补肾中药干预后,脑质量、肾质量、脑重指数及BDNF光密度值得到一定程度回升;大脑皮质包括海马区神经细胞增多,细胞结构致密且层次清楚,无明显水肿区。结论大鼠海马BDNF表达变化与肾藏志理论具有相关性;补肾中药可显著改善肾虚质大鼠脑功能衰退状况。     

金匮肾气丸对“恐伤肾”模型仔鼠皮质酮水平的调节作用

目的:观察金匮肾气丸对恐伤孕鼠孕仔数及仔鼠体质、血清皮质酮(CORT)水平的影响。方法:采用模拟地震的生物学实验,造成"恐惧"心理应激,建立"恐伤肾"模型,观察孕鼠每胎孕仔数、仔鼠体重、翻身能力及CORT水平。结果:中药金匮肾气丸能显著提高"恐伤肾"孕鼠的孕仔数(P<0.01),增加仔鼠平均体重,提高仔鼠翻身能力(P<0.01),改善应激条件下仔鼠CORT水平的变化(P<0.01)。结论:中药金匮肾气丸可预防恐伤孕鼠肾精不足,同时通过对仔鼠CORT的调节,有效地改善仔鼠恐惧应激反应,具有良好的抗恐惧应激损伤作用。     

丹龙醒脑片对沙土鼠脑缺血再灌注保护作用的实验研究

目的：研究丹龙醒脑片(DLXNP)对脑缺血再灌注沙土鼠模型脑组织兴奋性氨基酸(EAAs)含量的影响及对海马区神经元的保护作用。方法：用双侧颈总动脉反复夹闭再灌注方法建立脑缺血再灌注沙土鼠模型。用高效液相色谱分析荧光法(HPLC)检测脑组织谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)浓度，用病理光学显微镜观测其双侧海马CA1区神经元数目。结果：模型组与正常对照组和假手术组相比，Glu、Asp含量明显升高(P＜0．01)，海马区神经细胞数明显减少(P＜0．01)。丹龙醒脑片3个剂量组脑组织中Glu、Asp的含量明显低于模型组(P＜0．0l-0．05)，海马区神经细胞数明显多于模型组(P＜0．01)。结论：丹龙醒脑片能调节缺血再灌注大鼠脑组织兴奋性氨基酸含量、减轻其兴奋性毒性，保护大脑海马区神经元，这可能是丹龙醒脑片的作用机制之一。