不同白血病细胞N-乙酰氨基半乳糖转移酶Ⅰ-ⅦmRNA的表达

目的从mRNA水平观察不同白血病细胞中ppGalNAcT1-T7的表达情况.方法采用RT-PCR技术,检测ppGalNAcT1-T7在NB4和K562细胞株中mRNA水平的表达.结果 K562细胞中ppGalNAcT2、T4、T5、57和NB4细胞中ppGalNAcT1、T2、T3、T4、T7有不同程度表达.结论不同白血病细胞中ppGaINAcT1-T7的表达情况不一样,两者之间的相关性有待进一步的研究.     

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(Polypeptide:N-Acetylgalactosaminyltransferases,pp-GalNAc-T2, E.C.2.4.1.41)的mRNA表达谱研究

多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2是O-糖链合成第一步的糖基转移酶,而O-糖基化与血管内皮细胞的功能密切相关.随着近年来人类基因组计划的迅速发展,人们对糖基转移酶的功能也开始有了新的认识.本文采用RT-PCR法观察了六种不同组织中PP-GalNAC-T2的表达水平,发现PP-GalNAc-T2在胃肠道粘膜等呈高表达,在脑组织中也有一定的表达,提示它在不同组织中的分布与组织功能存在相关性,值得进一步研究.     

小鼠多肽：N一乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研穷

目的探讨小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。为多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族各成员间结构相似但功能不同的特征提供一定的依据。方法采用生物信息学软件和网上数据库对核酸、蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论各成员来自于同一祖先的同一家族,结构相似,但其进化方式属于趋异性进化。     

不同白血病细胞N-乙酰氨基半乳糖转移酶Ⅰ一ⅦmRNA的表达

目的 从mRNA水平观察不同白血病细胞中ppGalNAcT1-T7的表达情况。方法 采用RT-PCR技术，检测ppGalN-AcT1-T7在NB4和K562细胞株中mRNA水平的表达。结果 K562细胞中ppGalNAcT2、T4、T5、T7和NB4细胞中ppGalNAcT1、T2、T3、T4、T7有不同程度表达。结论不同白血病细胞中ppGaINAcT1-T7的表达情况不一样，两者之间的相关性有待进一步的研究。     

RNAi技术沉默星形胶质细胞Adam10基因模型的建立

目的:建立离体星形胶质细胞Adam10基因沉默模型。方法:体外培养SD大鼠乳鼠星形胶质细胞,采用免疫荧光方法标记胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以鉴定星形胶质细胞及其纯度。通过RNA干扰(RNAi)技术,使用转染试剂Lipofectamine2000将靶向作用于大鼠Adam10基因的si RNA序列转染至星形胶质细胞内,通过Real time-PCR和Western blotting技术在RNA水平和蛋白水平检测沉默效率。结果:靶向作用于星形胶质细胞Adam10基因的si RNA序列成功转染入星形胶质细胞,并且转染Adam10基因靶向干扰序列的星形胶质细胞Adam10基因的表达在RNA水平和蛋白水平较阴性对照组明显降低(P0.05)。结论:可以通过RNAi技术建立离体星形胶质细胞Adam10基因沉默模型。     

靶向β-catenin的siRNA对宫颈癌细胞恶性表型的影响

目的探讨靶向β-链蛋白（β-eatenin）的小干扰RNA（siRNA）对宫颈癌细胞Hela细胞功能的影响以及相关作用机制。方法脂质体介导转染β-catenin小干扰RNA（β-cateninsiRNA）敲低Hela细胞β-catenln的表达。MTT法检测转染后细胞增殖水平,流式法评价转染后细胞周期分布及凋亡变化,并结合Western印迹研究β-catenin在Hela细胞中的作用机制。结果体外转染β-catenin小干扰RNA能明显抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,并且能够明显下调Bcl-2及CyclinD1蛋白水平表达,上调Bax蛋白表达水平。结论β-cateninsiRNA能明品柳制Hela绅晌毕长．β-catPnin可作为宫颈癌基因治疗的靶点。     

ppGalNacT2与B7-H3在胃癌患者组织中的表达及意义

目的探讨胃癌患者组织中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNacT2)与共刺激分子B7-H3蛋白的表达及其临床意义。方法用免疫组化染色法检测54例胃癌组织及相应的癌旁组织中ppGalNacT2与B7-H3蛋白的表达,分析两者的相关性及其与胃癌患者临床病理参数的关系。结果胃癌患者癌组织中ppGalNacT2及B7-H3蛋白的阳性表达率分别为55.5%(30/54)及46.3%(25/54),明显高于相应的对照组[7.4%(4/54)及9.2%(5/54),χ~2=29.01,P0.05;χ~2=18.46,P0.05];在高、中度分化的胃癌患者ppGalNacT2及B7-H3蛋白的阳性表达率(11.1%,9.3%)均明显低于低分化者(44.4%,37%),差异有统计学意义(P均0.05)。在胃癌组织中ppGalNacT2与B7-H3蛋白的表达水平呈正相关(r=0.46,P0.05)。结论ppGalNacT2与B7-H3均参与胃癌的发病,并与胃癌分化程度有关。     

沉默DNMT1基因对骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化的影响

目的:探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase,DNMT1)基因沉默对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞内细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling,SOCS-1)甲基化的影响。方法:应用靶向沉默DNMT1基因的短发卡RNA(RNA-Short hairpin RNA,shRNA)通过脂质体(lipofectamineTM2000)介导转染骨髓瘤细胞RPMI8226,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染前后DNMT1基因和蛋白表达,应用甲基化特异性PCR检测转染前后骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化水平的变化。结果:转染后骨髓瘤细胞DNMT1 mRNA表达水平(0.176±0.004)和蛋白表达水平(0.065±0.014)均明显低于阴性对照组(0.956±0.033,0.415±0.027),其差异具有统计学意义(P0.01)。转染后SOCS-1基因甲基化水平较转染前明显降低。结论:利用shRNA能靶向沉默DNMT1基因的表达,并可以有效逆转SOCS-1基因高甲基化状态。     

多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2与共刺激分子B7-H3相互作用的结构信息学初步探讨

目的 研究多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2（ppGalNAc-T2）与共刺激分子B7-H3的相互关系.方法 通过同源模拟,得到共刺激分子B7-H3两种不同剪接体（2IgB7-H3,4IgB7-H3）的分子结构,寻找PDB数据库中的ppGalNAc-T2的蛋白质晶体结构,利用软件GRAMM（http：//vakser.bioinformatics.ku.edu/main/resources_gramm.php）,与同源模拟得到的两种不同剪接体的B7-H3分子结构相结合,寻找两者之间是否存在直接结合的可能.结果 成功地模拟了共刺激分子B7-H3两种剪接体的分子结构,发现ppGalNA-T2与共刺激分子B7-H3有相互结合的可能性.结论 结构生物信息学的研究发现ppGalNAc-T2分子与B7-H3具有潜在相互作用位点,ppGalNAc-T2可能参与B7-H3蛋白质的O-糖链合成反应,并且很有可能是通过直接接触来催化控制B7-H3分子的O-糖链合成.     

靶向VEGF基因的siRNA联合树突状细胞介导的CTL对MCF-7细胞作用的研究

目的探讨靶向血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的小干扰RNA(siRNA)联合负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)致敏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的联合抗瘤作用。方法体外应用靶向VEGF基因最佳转染浓度(100nmol/L,增加浓度不再提高沉默作用)的siRNA联合负载人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)抗原的DC介导的CTL(siRNAVEGF+CTL组)共同作用于MCF-7细胞,同时设立空白对照组和空白+CTL组(只加无血清无抗生素培养基);脂质体组和脂质体+CTL组(只加LipofectamineTM2000);siRNAVEGF-组(100nmol/LsiRNA);siRNASCR组和siR-NASCR+CTL组(100nmol/LsiRNASCR),每组做6个平行孔,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测siRNAVEGF+CTL组和各对照组肿瘤杀伤活性(n=6),Hoechst33258核染色观察细胞的凋亡(n=3)。结果siRNAVEGF+CTL组、siR-NAVEGF-组siRNASCRCTL组肿瘤杀伤活性分别为99.37%,51.17%和43.94%,siRNAVEGF+CTL组与对照组比较可明显杀伤肿瘤细胞,瘤细胞几乎完全溶解,Hoechst33258显示细胞核呈明显的细胞凋亡改变。结论体外实验显示靶向VEGF的siRNA联合负载肿瘤抗原DC致敏的CTL能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,二者的联合应用抗瘤效果显著。     

RNA干扰敲除Smac基因的表达促进人肺癌细胞的生长及增强顺铂耐药性

目的 探讨RNA干扰敲除Smac基因的表达对肺癌细胞的生长及顺铂(cDDP)耐药性的影响.方法 通过转染含有以人Smac基因为靶基因的慢病毒载体系统,即含有小分子干扰RNA序列的pGC-FU载体,分别在A549和95D细胞中实施Smac基因敲除.通过转染含有Smac全长编码序列的pGC-FU载体来实现Smac的高表达.细胞生长、细胞周期及凋亡采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、克隆形成实验及流式细胞仪测定.药物耐药用10 μg/ml顺铂检测.结果 Smac下调表达促进A549和95D细胞中肺癌细胞的生长及增强顺铂耐药性;Smac高表达抑制A549细胞生长并且增强其对顺铂的敏感性.结论 Smac抑制肺癌细胞生长并且增强其对顺铂的敏感性.     

RNA干扰对急性髓系白血病AML1-ETO融合基因表达的抑制作用

目的 应用RNA干扰技术抑制Kasumi-1细胞AML1-ETO融合基因的表达,研究随后出现的细胞增殖和细胞周期变化.方法 体外化学合成针对AML1-ETO融合基因的小干扰RNA(siRNA),并用电穿孔方法将AML1-ETO siRNA转染Kasumi-1细胞,以非特异性的siRNA转染细胞作阴性对照;电转带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的载体,流式细胞术检测其绿色荧光以确定电转效率;荧光染料实时定量PCR及Western blot检测AML1-ETO siRNA的抑制效应;并应用CCK-8实验法检测细胞增殖率;采用碘化丙锭(PI)法测定细胞周期DNA含量.结果 电转增强EGFP的转染效率可达44.5%;电转AML1-ETO siRNA可以有效抑制AML1-ETO融合基因在mRNA和蛋白水平的表达;电转AML1-ETO siRNA 72 h后细胞增殖率[(47.90±0.02)%]低于对照组[(66.90±0.08)%](P<0.05);PI染色显示AML1-ETO siRNA转染细胞72 h后,G1期细胞比例为38.3%,对照组为31.6%,而处于G2/M期细胞分别为1.8%和2.4%.结论 化学合成的特异性siRNA能抑制AML1-ETO融合基因的表达,siRNA介导的AML1-ETo融合蛋白表达减少阻滞Kasnmi-1细胞在G1期,进而抑制细胞增殖.     

大麻素2型受体在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达

目的研究大麻素受体2(CB2受体)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌中的表达,探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用和意义。方法采用免疫组织化学方法分别检测正常宫颈组织、各级宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中CB2受体的表达情况。结果 CB2受体在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中均有表达;宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中CB2受体表达水平明显高于正常组;CB2受体表达水平随组织恶性程度的增加而升高(P均<0.01)。结论 CB2受体在宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中表达明显升高,且其升高水平随病变组织恶性程度的增加而增加,提示CB2受体可能在正常宫颈组织向宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的逐级演变过程中起着重要作用。     

RNA干扰抑制JMJD3基因表达对肝癌细胞生长,增殖和侵袭的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)抑制含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)基因对肝癌细胞QGY-7703和HepG2的生长、增殖和侵袭能力的影响。方法利用RNA干扰技术沉默JMJD3(siR-JMJD3),以非特异性序列(pSilencer 2.1)转染肝癌细胞QGY-7703细胞和HepG2细胞作为阴性对照,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法、集落形成、Transwell侵袭实验来检测肝癌细胞生长、增殖和侵袭能力的变化。结果 Western Blot检测结果显示,转染siR-JMJD3质粒的试验组成功抑制肝癌细胞中JMJD3的蛋白表达水平。MTT结果显示转入siR-JMJD3后,QGY-7703和HepG2细胞的生长活性与对照组相比分别降低了约25%和17%。集落形成结果显示2种细胞系的集落形成数分别降低了约31%和25%。Transwell侵袭实验结果显示穿膜细胞数分别下降了约44%和47%。结论应用siRNA技术能有效抑制JMJD3基因的表达,同时有效抑制肝癌细胞QGY-7703和HepG2体外生长、增殖和侵袭,为肝癌的生物学治疗提供了新思路。     

二氢杨梅素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响

目的研究二氢杨梅素(DMY)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法 2014年3月至2015年2月,该院采用99%纯度的DMY为抑制剂,以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,采用MTT法、流式细胞术法和免疫细胞化学来分析乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的情况。结果当使用浓度大于20μg/mL的DMY处理细胞时,出现了抑制效果,但效果不佳;当用40与80μg/mL的DMY时,明显地抑制了乳腺癌细胞MCF-6的增殖,且有不同程度的敏感性。当DMY为80μg/mL时,其IC50为226.9μg/mL。抑制率和IC50分别与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。40与80μg/mL的DMY处理乳腺癌细胞MCF-6可以诱导其周期阻滞在G2/M期(P0.01),并表现出明显的细胞凋亡现象,同时,G0/G1期也受到阻滞,S期细胞比例降低明显,差异有统计学意义(P0.05);当使用浓度大于20μg/mL的DMY时,PCNA阳性率有所下降,当浓度为40μg/mL的DMY时,乳腺癌细胞MCF-6的PCNA阳性率明显下降(P0.01),尤其浓度为80μg/mL的DMY时,阳性率为10.00%。与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论对乳腺癌患者采用DMY可以有效抑制癌细胞快速增殖,加速器凋亡,减缓患者病情,疗效突出。     

萘普生对体外宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨萘普生对人子宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法:用含不同浓度的萘普生细胞培养液(1、10、100、300、500μg/mL)于不同作用时间(6、12、24、48h)处理宫颈癌Hela细胞48h后,采用MTT法检测不同浓度的萘普生细胞培养液在不同作用时间下对Hela细胞增殖率的影响;用500μg/mL的萘普生细胞培养液处理宫颈癌Hela细胞48h后荧光显微镜观察细胞形态变化,并采用Annexin V-FITC/PI染色,以流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:(1)MTT法显示,不同浓度的萘普生细胞培养液对Hela细胞均有抑制作用,不同药物浓度组在同一作用时间下对Hela细胞生长抑制率的差异有统计学意义(P<0.01),同一药物浓度在不同作用时间组之间的细胞生长抑制率的差异也有统计学意义(P<0.01)。(2)Hoechst33342染色后,经荧光显微镜观察,可见到染色质浓缩及凋亡小体等凋亡特征。(3)流式细胞仪检测显示萘普生处理宫颈癌Hela细胞48h后,细胞凋亡率明显增加。结论:萘普生在体外对Hela细胞增殖具有抑制作用,且抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性。     

IGFBP7基因表达下调对急性髓系白血病细胞的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)基因表达下调对急性髓系白血病细胞系U937细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 利用肝癌细胞株SMMC7721细胞,筛选最有效的IGFBP7干扰序列,瞬时转染处于对数生长期U937细胞,用Western blot法检测转染后U937细胞IGFBP7蛋白表达.观察转染IGFBP7基因干扰序列后U937细胞的增殖、黏附、穿膜和浸润能力.结果 IGFBP7基因干扰序列转染24 h后U937细胞增殖能力明显下降,明显低于对照1组(未转染siRNA组)和对照2组(阴性干扰序列组)(A值分别为0.580 ±0.159、1.049 ±0.274、0.946±0.195)(P<0.01).IGFBP7基因下调后的U937细胞黏附于人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞的数量明显低于对照1组和对照2组(A值分别为0.247±0.031对0.406±0.023和0.395±0.011)(P<0.01);穿越ECV304细胞包裹的细胞培养小室到底层的细胞明显减少[(0.387±0.021)×105对(1.017±0.031)×105、(0.908±0.027)×105];实验组黏附于Matrigel基质膜的细胞数明显低于对照组[(0.197±0.098)×105对(0.493±0.067)×105和(0.469±0.083)×105],差异有统计学意义(P值均<0.01).结论 IGFBP7基因通过影响U937细胞增殖以及与基质内皮细胞的黏附、穿膜、侵袭能力而参与急性髓系白血病的发生、发展过程.     

社会支持与应对方式对宫颈癌患者生存质量影响的研究

目的探讨社会支持和应对方式对宫颈癌患者生存质量的影响。方法采用世界卫生组织生存质量测定量表简表,领悟社会支持量表及医学应对问卷对63例宫颈癌患者进行问卷调查。结果患者生存质量的生理领域、社会领域得分低于常模;领悟社会支持总分与患者生存质量的心理领域、社会领域、环境领域等因子呈正相关,其中家庭的支持与患者生存质量的各个因子均呈正相关;应对方式中,患者多采取正确面对,面对与生理领域和心理领域呈正相关。结论为宫颈癌患者制定护理计划和健康咨询时,要充分帮助患者利用其社会支持,同时评估患者采用的应对方式对其情绪和生存质量的影响,通过有效的护理干预进行正性引导,促进患者疾病的康复和生存质量的提高。     

宫颈癌患者睡眠质量的现况调查及其影响因素分析

目的 了解宫颈癌患者的睡眠质量状况,探讨影响其睡眠质量的相关因素,为改善宫颈癌患者的睡眠质量提供依据.方法 选取手术后组织病理确诊为FIGO Ⅰ、Ⅱ期的宫颈癌患者,在手术前、术后第7日、术后第1个月随访时(共3次),使用人口学调查表、匹兹堡睡眠质量指数问卷(PSQI)、CES-D抑郁自评量表、POMS-SF焦虑自评量表及癌症治疗功能问卷(FACT-G)等对宫颈癌患者及同期住院良性肿瘤(子宫肌瘤)患者进行调查分析.结果 宫颈癌患者与子宫肌瘤患者在社会人口学调查表上无统计学差异(P>0.05);不同分期宫颈癌患者在术前、术后第7日、术后第1个月随访时的PSQI总分、CES-D抑郁、POMS-SF焦虑以及FACT-G评分等均无明显统计学差异(P>0.05);而与子宫肌瘤组患者相比,宫颈癌患者在手术前、术后第7日和术后第1个月随访时的PSQI总分、CES-D抑郁和POMS-SF焦虑评分均较高,但FACT-G生活质量评分均低于子宫肌瘤组患者,差异均有统计学意义(均P<0.01);多因素Logistic回归分析提示婚姻状况、教育水平、工作状态、家庭经济状况、医疗付费方式、疾病诊断与分期、疼痛评分、抑郁、焦虑、生活质量等与宫颈癌患者睡眠障碍明显相关.结论 不同分期宫颈癌患者术前和术后早期各时段睡眠质量低于良性肿瘤患者,且宫颈癌患者睡眠障碍发生率也较高.睡眠障碍不仅导致患者容易出现抑郁、焦虑,而且影响患者的生活质量.     

CD24与CD44v6在宫颈癌中的表达及意义

目的研究宫颈癌中CD24和CD44v6的表达及意义,探讨宫颈癌的发病机制及检测和治疗的新途径。方法采用免疫组化Elevision法检测正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中CD24和CD44v6的表达情况。结果 CD24在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织中的阳性表达率分别为0.00%、45.00%和87.50%,三者差别有统计学意义（P〈0.05）。CD24与宫颈癌的病理分级、临床分期及淋巴结转移均不相关（P〉0.05）。CD44v6在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织中的阳性表达率分别为0.00%、35.00%和76.25%,三者差别有统计学意义（P〈0.05）。CD44v6与宫颈癌的病理分级、淋巴结转移相关,与临床分期不相关（P〉0.05）。CD24与CD44v6在宫颈癌中无相关性（P〉0.05）。结论 CD24、CD44v6与宫颈癌的发生、发展密切相关。CD44v6与宫颈癌的病理分级、淋巴结转移的相关性,提示其可能在宫颈癌的进展及转移方面起着一定的作用。