Immunity,virus evolution,and effectiveness of SARS-CoV-2 vaccines

Phylogenetic and pathogenesis studies of the severe acute respiratory syndrome-related coronaviruses (SARS-CoVs) strains have highlighted some specific mutations that could confer the RNA genome fitness advantages and immunological resistance for their rapid spread in the human population. The analyses of 30 kb RNA SARS-CoVs genome sequences, protein structures, and functions have provided us a perspective of how host-virus protein-protein complexes act to mediate virus infection. The open reading frame (ORF)1a and ORF1b translation yields 16 non-structural (nsp1-16) and 6 accessory proteins (p6, p7a, p8ab, p9b) with multiple functional domains. Viral proteins recruit over 300 host partners forming hetero-oligomeric complexes enabling the viral RNA synthesis, packing, and virion release. Many cellular host factors and the innate immune cells through pattern-recognition receptors and intracellular RNA sensor molecules act to inhibit virus entry and intracellular replication. However, non-structural ORF proteins hijack them and suppress interferon synthesis and its antiviral effects. Pro-inflammatory chemokines and cytokines storm leads to dysfunctional inflammation, lung injury, and several clinical symptoms in patients. During the global pandemic, COVID-19 patients were identified with non-synonymous substitution of G614D in the spike protein, indicating virus co-evolution in host cells. We review findings that suggest that host RNA editing and DNA repair systems, while carrying on recombination, mutation, and repair of viral RNA intermediates, may facilitate virus evolution. Understanding how the host cell RNA replication process may be driven by SARS-CoV-2 RNA genome fitness will help the testing of vaccines effectiveness to multiple independent mutated coronavirus strains that will emerge.     

siRNA对单纯疱疹病毒2型ICP4基因抑制作用的研究

目的 探讨RNA干扰对单纯疱疹病毒2型（HSV2）ICP4基因表达和HSV2 DNA复制的抑制作用.方法 化学合成靶向作用于HSV2 ICP4的四对siRNA和阴性对照siRNA,分别命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,siRNA-4及siRNA-N,转染Vero细胞,过夜后用HSV2 HG52标准毒株感染上述Veto细胞,1、2、3、4d和5d收集Vero细胞和上清液,荧光定量RT-PCR检测ICP4 mRNA的表达水平,荧光定量PCR检测HSV2 DNA拷贝数,Western-Blot检测ICP4蛋白表达水平.结果 与阴性对照相比,四对siRNA对HSV2 ICP4 mRNA和蛋白均有不同程度的抑制作用,以siRNA-2抑制作用最强,并且均可显著降低HSV2 DNA拷贝数.结论 靶向作用于HSV2 ICP4的siRNA可显著抑制ICP4mRNA及蛋白表达和HSV2 DNA拷贝数,提示siRNA可通过抑制HSV2 ICP4基因表达而抑制HSV2的复制.     

siRNA对单纯疱疹病毒2型ICP4基因抑制作用的研究

目的 探讨RNA干扰对单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因表达和HSV2 DNA复制的抑制作用.方法 化学合成靶向作用于HSV2 ICP4的四对siRNA和阴性对照siRNA,分别命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,siRNA-4及siRNA-N,转染Vero细胞,过夜后用HSV2 HG52标准毒株感染上述Veto细胞,1、2、3、4d和5d收集Vero细胞和上清液,荧光定量RT-PCR检测ICP4 mRNA的表达水平,荧光定量PCR检测HSV2 DNA拷贝数,Western-Blot检测ICP4蛋白表达水平.结果 与阴性对照相比,四对siRNA对HSV2 ICP4 mRNA和蛋白均有不同程度的抑制作用,以siRNA-2抑制作用最强,并且均可显著降低HSV2 DNA拷贝数.结论 靶向作用于HSV2 ICP4的siRNA可显著抑制ICP4mRNA及蛋白表达和HSV2 DNA拷贝数,提示siRNA可通过抑制HSV2 ICP4基因表达而抑制HSV2的复制.     

siRNA对单纯疱疹病毒2型ICP4基因抑制作用的研究

目的 探讨RNA干扰对单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因表达和HSV2 DNA复制的抑制作用.方法 化学合成靶向作用于HSV2 ICP4的四对siRNA和阴性对照siRNA,分别命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,siRNA-4及siRNA-N,转染Vero细胞,过夜后用HSV2 HG52标准毒株感染上述Veto细胞,1、2、3、4d和5d收集Vero细胞和上清液,荧光定量RT-PCR检测ICP4 mRNA的表达水平,荧光定量PCR检测HSV2 DNA拷贝数,Western-Blot检测ICP4蛋白表达水平.结果 与阴性对照相比,四对siRNA对HSV2 ICP4 mRNA和蛋白均有不同程度的抑制作用,以siRNA-2抑制作用最强,并且均可显著降低HSV2 DNA拷贝数.结论 靶向作用于HSV2 ICP4的siRNA可显著抑制ICP4mRNA及蛋白表达和HSV2 DNA拷贝数,提示siRNA可通过抑制HSV2 ICP4基因表达而抑制HSV2的复制.     

重组人干扰素α-2b喷雾剂预防SARS等呼吸道病毒感染的人群试验研究

目的评估重组人干扰素α2b喷雾剂(远策素喷雾剂)预防SARS等常见呼吸道病毒感染的效果。方法研究对象共14391人,用药剂量为90万IU/次,每日2次,连用5d,未次用药后15d取血,或用药前和用药3周后采取双份血清。采用随机、对照方法检测血清抗SARSCoVIgG抗体;采用双盲、随机、安慰剂对照方法测定血清抗常见呼吸道病毒(B型流感病毒、副流感病毒1～3型,呼吸道合胞病毒及腺病毒3、7型)的血清IgM抗体。结果两次实验中,干扰素组血清SARS病毒IgG抗体阳性率均较试验组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。但用药组应用干扰素后副流感病毒1～3型,B型流感病毒,腺病毒3、7型和呼吸道合胞病毒IgM抗体阳性率(依次为6.45%、4.52%、4.30%和17.20%)均低于对照组(依次为19.40%、13.60%、7.12%和25.62%)。其中副流感病毒、B型流感病毒、腺病毒3种病毒IgM抗体阳性率差异均有统计学意义(P<0.01)。结论应用远策素喷雾剂鼻和咽部喷雾能不同程度地降低用药人群常见呼吸道病毒的感染率。     

抗人SARS病毒单链抗体库的构建

目的:利用细胞内重组的方法,构建大库容量的人源性抗SARS病毒单链抗体(scFv)库,为筛选SARS病毒抗原的人源性抗体奠定基础。方法:取6例SARS康复患者的80mL外周血,分离淋巴细胞后提取总RNA。分离纯化mRNA并反转录成cDNA后,扩增抗体重链、轻链可变区基因片段。然后经重叠延伸PCR装配成scFv基因并克隆入噬粒载体pDAN5中,电转化大肠杆菌TG1构建初级抗体库。制备初级库噬菌体后,感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组制备次级抗体库。结果:初级库库容量为3×109,在大肠杆菌BS1365中重组后得到3×1011的次级抗体库。结论:细胞内重组方法的应用可使大库容量抗体库的构建变得简单易行。构建的抗SARS病毒单链抗体次库不仅接近人类天然抗体库的水平,而且多样性好,为筛选抗SARS病毒抗原的抗体提供了保证。