肿瘤的HLA相关生物治疗

人类白细胞抗原(HLA)作为人类最复杂、最具多态性的遗传系统，其功能涉及到机体免疫的各个方面，肿瘤的发生发展和HLA有非常重要的关系，因此HLA相关的肿瘤生物治疗成为近年来肿瘤研究的热点，包括发现和鉴定某HLA基因型匹配的、CD8^ T细胞所识别的肿瘤特异性抗原肽，寻找CD4^ T细胞所识别的抗原肽，针对HLA表型缺失的不同原因而采取的各种HLA基因治疗，以及对HLA分子表达异质性和动态性等的研究，各项研究的进展将为肿瘤的免疫基因治疗提供更科学的理论依据。     

HLA分型及其在个体化肿瘤肽疫苗中的应用

恶性肿瘤临床治疗已经进入肿瘤综合性治疗和个体化治疗的时代,肿瘤免疫治疗也是目前肿瘤治疗研究的热点之一,尤其是个体化肿瘤肽疫苗已成为肿瘤治疗的一种新思路。人类白细胞抗原(HLA)分子和抗原决定簇的良好结合是个体化肿瘤肽疫苗、肿瘤肽刺激的树突状细胞瘤苗及体外培养后回输的抗原特异性T细胞能否产生抗肿瘤免疫作用的关键因素。本文介绍了HLA与个体化肿瘤肽疫苗的关系并分析目前HLA相关的个体化肿瘤肽疫苗的临床研究情况及我国人群HLA分布。     

生存素—肿瘤免疫治疗中的新靶点

 细胞毒性T细胞(CTL)的免疫功能在机体抗肿瘤免疫中起决定作用。肿瘤抗原激活CTL及CTL杀伤肿瘤细胞的前提是CTL对肿瘤抗原的有效识别。与抗体和B细胞受体不同，CTL既不能直接识别游离抗原，也不单独识别出现于细胞表面的抗原片段，但是CTL的T细胞受体(T Cell Receptor，TCR)既能识别抗原递呈细胞(Antigen-presenting Cell，APC)又能识别靶细胞上MHC-1类分子及其所递呈的表位肽，这就是所谓的“双识别”，也是MHC限制性的基础。“双识别”产生CTL活化的第一信号，CTL与APC间CD28-B7、LFA-1-CD54、CD2-CD58等多种共刺激分子的相互结合可产生多种第二信号，从而使CTL充分活化。     

本刊协办单位及特邀编委名单

黑色素瘤的早期临床试验表明 ,表达肿瘤抗原的树突细胞 (DC)能诱导免疫应答 ,并在临床治疗中起一定作用 ,但难以用于免疫原性弱的乳腺肿瘤。研究者曾经以前列腺癌黑色素瘤为模型 ,观察到负载有凋亡的同种肿瘤细胞的DC能诱导CD8+ T细胞分化成针对共同肿瘤抗原的特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)。研究观察了DC能否捕获凋亡的乳腺癌细胞 ,并将其抗原呈递给自体的CD4 + 和CD8+ T细胞。实验采用乳腺癌细胞株MCF 7和HCC180 6 ,均为HLA A2 0 1+ 型。先用放线菌酮致敏HCC180 6细胞 (Fas敏感细胞株 ) ,后经抗Fas单克隆抗体处理诱导HCC180…     

人类肿瘤抗原的鉴定及应用进展

人类肿瘤抗原的鉴定是肿瘤免疫研究中极其重要的一环,T细胞识别的肿瘤抗原以各种分子生物学和免疫学方法被鉴定,包括CTL筛选法、血清学鉴定重组cDNA表达文库(SER-EX)法、组合肽库技术及多种系统性基因分析法.通过对肿瘤抗原的鉴定,可更好地了解抗原的本质、抗肿瘤免疫反应过程和免疫逃逸机制,对促进和发展肿瘤免疫治疗,发现肿瘤标记物具有重要意义.     

人类肿瘤抗原的鉴定及应用进展

人类肿瘤抗原的鉴定是肿瘤免疫研究中极其重要的一环,T细胞识别的肿瘤抗原以各种分子生物学和免疫学方法被鉴定,包括CTL筛选法、血清学鉴定重组cDNA表达文库（SER-EX）法、组合肽库技术及多种系统性基因分析法.通过对肿瘤抗原的鉴定,可更好地了解抗原的本质、抗肿瘤免疫反应过程和免疫逃逸机制,对促进和发展肿瘤免疫治疗,发现肿瘤标记物具有重要意义.     

T细胞介导性抗肿瘤免疫治疗的研究进展

在肿瘤发生与发展的过程中 ,机体的免疫系统发挥着重要的免疫监视功能 ,其中 T细胞介导的细胞免疫起关键性作用。因此 ,基于 T细胞的肿瘤免疫治疗策略与方法的探索一直是肿瘤免疫研究领域的热点。1　T细胞介导的抗肿瘤免疫的效应机制大量研究结果表明 ,细胞毒性 T淋巴细胞(CTL)在体内提供了有效的抗肿瘤免疫。事实上 ,CTL介导的对移植肿瘤的排斥是体内特异性抗肿瘤免疫的唯一例证。CD8 CTL是主要的抗肿瘤效应细胞 ,通过识别肿瘤细胞表面由 类 MHC分子所呈递的肿瘤抗原肽 ,进而启动对靶细胞的杀伤。CTL介导的针对致癌病毒感染细胞…     

肿瘤排斥抗原SART1

T细胞识别的鳞状细胞癌抗原(SART)是近年来从鳞状细胞癌中发现的肿瘤自身抗原,能特异性诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)产生杀瘤作用.SART1基因表达抗原蛋白SART-1259和SART-1800.SART-1259蛋白表达于多种肿瘤细胞细胞质,而在睾丸组织之外的正常组织不表达.从该抗原中得到的某些肽段能特异性诱导HLA限制性CTL产生杀瘤作用.现综述近年来SART1基因研究概况.     

Th细胞在抗肿瘤免疫中的地位

长期以来 ,肿瘤的免疫治疗研究者一直把重点放在CD8 CTL上 ,而忽视了CD4 Th细胞在肿瘤免疫中的重要地位。近来研究表明CD4 Th可特异性地识别肿瘤抗原肽 ,通过不同机制发挥抗肿瘤效应 ,成为抗肿瘤免疫研究的一个新方向。     

MAG E-3/CEA(HLA-A2/A24+)肽疫苗诱导消化道肿瘤患者CTL的研究

目的：研究肿瘤患者树突状细胞经MAGE－3／CEA(HLA-A2/A24 肽疫苗冲击后诱导特异性CTL的杀伤活性。方法：选择MAGE－3－HLA－A2／A24＋或CEA－HLA－A24肿瘤患者，收集PBMNC中的贴壁细胞在含有rhGM-CSF、rhIL-4的1640中培养诱导DC细胞，第7日加入HLA－A2－MAGE－3，HLA－A24－MAGE－3、HLA－A24－CEA肽冲击。以肽冲击后的DC与未经纯化的T细胞混合培养诱导的CTL作为效应细胞，Mel526,803,Raji,K562作为靶细胞，以LDH法检测特异性CTL的杀伤力。结果：未纯化的T细胞及肽冲击后的DC与该T细胞混合培养后的细胞表型变化表明CD3、CD4、CD25、CD16／CD56均无显著性差异，表达的CD8、CD86、CD69、CD45RO／CD8、HLA－DR有显著性差异。T－IL－2细胞与T－DC－P细胞对Raji和K562细胞株的杀伤活性无显著性差异。T－IL－2细胞与T－DC－P细胞对Mel256和803细胞株的杀伤活性有显著性差异。结论：肽疫苗可以诱导MAGE、CEA特异性的CTL应答。DC为基础的疫苗是肿瘤免疫治疗的重要的新方法，因其简便、快速的特点，具有良好的前景。     

修饰的肿瘤抗原肽CEA-610D疫苗的体外抗肿瘤作用

目的: 评价修饰的CEA610D抗原肽疫苗体外抗肿瘤免疫的有效性,为其临床应用提供依据。方法： 多肽固相合成法合成HLAA2 CEA修饰肽(CEA610D)、HLAA2天然肽CEA605613（天然肽）和HLAA2无关肽MAGE3（无关肽）,采用同种异体混合淋巴细胞与肽共孵育的方法,诱导肽特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),利用MTT法检测CTL的增殖和杀伤活性;流式细胞术观察细胞表型;RTPCR检测细胞穿孔素的表达;ELISA法检测CTL上清中IFNγ的水平。结果：CEA610D疫苗产生肽特异性CTL的能力最强（P<0.05）,其CD8+T细胞数也高于天然肽组和无关肽组;在效靶比为40〖DK〗∶1时,CEA610D和天然肽所诱导的CTL对CEA+HLAA2限制性人结肠癌细胞T84的杀伤活性可达(56.7±3.73)%和(51.2±1.86)%,而3种肽特异性CTL细胞对CEA+HLAA2人结肠癌lovo细胞杀伤活性维持在本底水平;CEA610D组的CTL所释放的杀伤相关介质穿孔素和上清中IFNγ的水平也显著高于其余两组（P<0.01）。结论：与天然肽相比,CEA610D疫苗可打破自身表位的免疫耐受,在体外抗肿瘤免疫中更具优势。     

肿瘤排斥抗原SART1

T细胞识别的鳞状细胞癌抗原(SART)是近年来从鳞状细胞癌中发现的肿瘤自身抗原，能特异性诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)产生杀瘤作用。SART1基因表达抗原蛋白SART-1259和SART-1800。SART-1259蛋白表达于多种肿瘤细胞细胞质，而在睾丸组织之外的正常组织不表达。从该抗原中得到的某些肽段能特异性诱导HLA限制性CTL产生杀瘤作用。现综述近年来SART1基因研究概况。     

人类肿瘤特异性免疫能否实现

在过去几十年里,免疫学家试图缩小动物肿瘤模型与人类肿瘤免疫研究之间的差异。最近发现,接受IL-2激活淋巴细胞和同种或异种肿瘤“疫苗”治疗的病人肿瘤消退,引起了对肿瘤疫苗研究的兴趣。另外,包括基因治疗在内的新技术能够在鼠肿瘤模型中增强抗肿瘤免疫效应。 人们试图认别免疫应答中作为靶抗原的肿瘤特异抗原或肿瘤相关抗原,Boon,Finn和其他研究者采用细胞毒性T细胞分别对MAGE1MUCI进行了分析研究,证明其为存在于多种人类肿瘤的肿瘤抗原。进一步的研究是利用病人血清,根据人体抗体识别多种肿瘤细胞成分,确定潜在的肿瘤抗原。Winter等建立了一系列肺癌细胞株(主要是小细胞肺癌),为研究相关肺肿瘤的细胞生物学和分子生物学提供了丰富     

肾腺癌中T细胞亚群和HSP96肿瘤抗原肽复合物关系的探讨

目的：探讨肾腺癌无出血坏死者和肾腺癌有出血坏死与行肾动脉栓塞术者T细胞亚群的分布及意义、两组肾腺癌患者肿瘤组织中热休克蛋白（HSP96）的分布有无差异及意义。通过提取出肾腺癌患者癌组织中的HSP96肽复合物找到肿瘤相关的抗原肽。方法：1）选取肾腺癌无出血坏死患者30例,肾腺癌有出血坏死者17例, 行肾动脉栓塞术患者13例。应用两步法免疫组织化学染色观察其T亚群的分布及HSP96的含量和分布。2） 通过经典的HSP96-抗原肽复合物提取方法提取出热休克蛋白肽复合物并进行质谱分析。结果：1）两组比较CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+的比值有统计学差异（P<0.05）。2）两组比较肾腺癌中含有的HSP96没有统计学意义（P>0.05）。3）经LC-ESI-MS-MS测得其中两个主要肽段的序列分别为LVPLE?GWGGNVM和PPVYYVPYVVL,其分子量分别为1 270.68和1 307.70。结论：术前行动脉栓塞术和肾腺癌有出血坏死者因为肿瘤细胞的坏死而使其细胞内具有抗原性的肽段释放出来,从而提高了效应T细胞在肿瘤局部的数量, 对肿瘤组织的杀伤及抑制肿瘤细胞的扩散具有重要的意义。根据gp96结合肽的特点推测其可能为肿瘤抗原肽, 有待进一步鉴定。     

细胞毒T淋巴细胞识别的人类肿瘤抗原

在多数肿瘤患者外周血淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中,存在对自体肿瘤细胞有特异性杀伤作用的细胞毒T淋巴细胞(CTL).已鉴定出众多可被特异性CTL所识别的抗原,一些抗原仅在肿瘤组织中表达,另一些是组织分化抗原或由广泛表达的基因点突变所产生.肿瘤抗原中部分人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子限制性CTL表位已被确定;临床应用已知抗原或抗原肽进行免疫治疗已取得一定疗效.     

OVA66抗原肽与HLA-A2分子结合性和结合稳定性的研究

目的：建立利用T2细胞体外筛选肿瘤相关抗原OVA66中HLAA2限制性抗原肽表位的实验方法。方法：应用计算机预测获得OVA66抗原中多个不同分值的九肽分子，在不同浓度(0.2 μg/ml,2 μg/ml,5 μg/ml和20 μg/ml)下与T2细胞共同孵育4 h，并分别在其后的0，2,4 h测定T2细胞表面HLAA2分子的平均表达强度，抗原肽与HLAA2的亲和力以20％MFImax时的抗原肽作用浓度表示；抗原肽与HLAA2分子结合稳定性以MFI(4 h)/MFI(0 h)的百分比表示。结果：经计算机预测所获得的分值不同的4种候选OVA66抗原肽表位与T2细胞表面HLAA*0201的结合能力和结合稳定性显示出差别，并且与预测的分值不尽符合，其中L235和L238与HLAA *0201的结合力优于L236和L237。 结论：利用T2细胞可以在体外初步筛选获得与HLAA *0201具有高亲和力的抗原肽。     

肿瘤疫苗的研究,应用与开发—21世纪的展望

1 百年历史回顾1.1 早期阶段(本世纪初～中叶):盲目尝试1.2 奠基阶段(本世纪中叶～1990):曲折进展①ISTA的证实;②肿瘤胚胎性抗原和NK细胞抗癌作用的发现;③“误导与弯路(从体液免疫研究入手);④主要困难与限制1.3 发展阶段(1990～):突破“待飞”——两项突破①人类肿瘤抗原的确立;②抗原提呈与免疫识别理论的阐明2 当前主要进展2.1 肿瘤排斥抗原(TRA)的分析是进行临床诊治的依据,是研究、“改建”的基础2.1.1恶性黑色素瘤(黑瘤):是抗瘤免疫研究的首选模型——已可在分于水平上理解人癌的免疫应答,分析黑掩免疫的过程和机制,并借以评估推断人癌免疗成果可能提高到什么程度等.目前CD8~ T细胞识别的多种黑瘤抗原(肽)已被确定,包括组织特异性蛋白(如黑素体melanosome)癌一睾丸抗原(Cancer-Testis antigen)、肿瘤特异性突变肽(如-catenin)等;其免疫学特征已较清楚;各种新的肿瘤抗原特异性免疫疗法正在研究开拓.     

个体化肿瘤特异TCR的筛选策略

基因修饰T细胞疗法在肿瘤治疗领域取得突破性进展，主要包括嵌合抗原受体基因修饰T（chimeric antigen receptor engineered T，CAR-T）细胞和T细胞受体基因修饰T（T-cell receptor modified T，TCR-T）细胞。虽然CAR-T细胞疗法在血液系统 肿瘤治疗领域呈现良好的临床治疗效果，但CAR-T细胞仅能识别肿瘤细胞膜抗原（占细胞全部抗原的比例约10%），而TCR-T细 胞可以识别人白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）提呈的细胞内抗原，因此TCR-T细胞可以识别更多种类的肿瘤抗原，进 而实现对CAR-T细胞的合理补充。由于TCR-T细胞需要同时识别细胞内抗原和对应的HLA，而不同患者的HLA分型和表达的 肿瘤抗原都可能存在巨大差异，因此有必要为每个/每类肿瘤患者定制个体化的TCR-T细胞，其中的关键为筛选特异识别肿瘤抗 原的TCR。当前主要有筛选靶向“已知”肿瘤抗原TCR和筛选靶向“未知”肿瘤抗原TCR的两种策略，但其各有适用性，应针对每 个患者制定适合的筛选方法，以制备多种肿瘤特异性TCR-T细胞，从而实现个体化TCR-T细胞的肿瘤治疗。     

细胞毒T淋巴细胞识别的人类肿瘤抗原

在多数肿瘤患者外周血淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中，存在对自体肿瘤细胞有特异性杀伤作用的细胞毒T淋巴细胞(CTL)。已鉴定出众多可被特异性C1L所识别的抗原，一些抗原仅在肿瘤组织中表达，另一些是组织分化抗原或由广泛表达的基因点突变所产生。肿瘤抗原中部分人类白细胞抗原(HLA)-I类分子限制性CTL表位已被确定；临床应用已知抗原或抗原肽进行免疫治疗已取得一定疗效。     

造血干细胞移植后淋巴细胞增殖症患者单个核细胞来源DC负载EBV抗原肽制备DC-CIK

目的：以造血干细胞移植后并发淋巴细胞增殖症（posttransplant lympholiferative disorder, PTLD)患者外周血单核细胞培养诱导DC,负载抗原肽后制备DCCIK（cytokineinduced killer cell）,为探索新的PTLD治疗方法奠定基础。方法: 分离造血干细胞移植后EBV（EpsteinBarr virus)感染致PLTD患者外周血单个核细胞,贴壁细胞培养诱导DC,悬浮细胞诱导CIK;负载EBV抗原肽LMP2后建立DCCIK共培养体系。流式细胞仪分析共培养前后细胞的免疫表型,ELISA检测共培养前后细胞上清IFNγ的分泌水平,基因扫描仪分析T细胞受体(T cell receptor, TCR)β家族基因谱。结果: 成功制备负载EBV抗原肽的DCCIK,HLADR+CD86+DC细胞从诱导前的12.5%增加到91.17%;DCCIK共培养14 d后,两例患者的CIK数量分别增加了5.3和6.8倍;CD3+、CD8+、CD3+CD8+以及CD3+CD56+ 细胞比例在DCCIK共培养后均明显升高(均P<005)。抗原肽负载的DCCIK共培养体系中IFNγ的分泌水平明显高于未经抗原肽负载的DC组\[（1 332.6±92.38）pg/ml vs (693.42±62.41) pg/ml,P<0.01）\]。DCCIK培养后细胞的TCRβ家族基因在5.2家族出现单克隆表达峰。结论：EBV抗原肽负载后DC可诱导DCCIK共培养体系中CD3+CD8+以及CD3+CD56+ 细胞扩增,并分泌高水平IFNγ,为临床应用DCCIK对移植后EBV感染致PTLD患者进行过继性细胞免疫治疗提供实验基础。