肿瘤坏死因子-α对Graves病甲状腺细胞凋亡的调节

Ｇｒａｖｅｓ病 (ＧＤ)是一种器官特异性自身免疫病 ,肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)参与其病理过程 ,但对ＧＤ甲状腺细胞凋亡的作用尚未见报道。为此 ,本文系统观察ＴＮＦ α对ＧＤ甲状腺细胞凋亡和凋亡相关蛋白Ｆａｓ基因及蛋白表达的影响 ,旨在探讨ＴＮＦ α在ＧＤ发病机理中的作用。甲状腺组织取自ＧＤ手术标本 ,采用原代细胞培养方法。孵育 5ｄ后 ,以含或不含ＴＮＦ α的试验液 (0、1、10、10 2 Ｕ ｍｌ)培养 72ｈ。采用流式细胞术测定甲状腺上皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白Ｆａｓ表达阳性率。细胞培养上清液中ｓＦａｓ含量采用ＥＬＩＳＡ法…     

TNF-α促进鼠模型中免疫复合物的清除

近来研究证明ＬＰＳ能显著增强ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠单核吞噬细胞系统 (ＭＰＳ)清除免疫复合物 (ＩＣ)的功能。该实验作者以同源ＩｇＧ致敏红细胞 (ＥＡ)作为ＩＣ ,给小鼠静脉注射 ,建立鼠模型 ,用以研究小鼠注射ＬＰＳ后最早诱导释放的细胞因子之一—ＴＮＦ α在清除ＩＣ中的作用。方法 :给ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠静脉注射 5 0 μｇ/ｍｌＬＰＳ 1 0 0 μｌ,1小时后血清ＴＮＦ α达最高峰 ,取此时血清为ＴＮＦ α( )血清 ,血清ＴＮＦ α浓度用Ｌ92 9细胞测定 ,注射后 4小时和 2 4小时ＴＮＦ α活性与注射前及盐水处理组无差别。取注射后 4小时血清为ＴＮ…     

抗HBs-HBsAg复合物诱生体液免疫应答的研究

目的研究抗ＨＢｓ－ＨＢｓＡｇ复合物在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠诱生体液免疫应答的特点。方法分别用鼠抗ＨＢｓ－ＨＢｓＡｇ免疫原性复合物（ＩＣ）或单独ＨＢｓＡｇ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠（加或不加氢氧化铝），分析其诱生的抗ＨＢｓＩｇＧ效价及ＩｇＧ亚类。结果用ＩＣ加氢氧化铝为佐剂免疫小鼠诱生的抗ＨＢｓ中以ＩｇＧ１亚类为主，而用ＨＢｓＡｇ免疫鼠则以ＩｇＧ２ｂ亚类较高。ＩＣ不加氢氧化铝佐剂诱生的抗ＨＢｓ中ＩｇＧ１及ＩｇＧ２ａ均高于单独ＨＢｓＡｇ免疫鼠。研究还显示，抗ＨＢｓＩｇＧＦｃ段是巨噬细胞（ＭΦ）等抗原提呈细胞摄取ＩＣ的主要途径。结论抗ＨＢｓ－ＨＢｓＡｇ复合物免疫诱生的体液免疫应答较单独ＨＢｓＡｇ免疫强。抗ＨＢｓ主要通过Ｆｃ段的介导作用，改变了机体抗原提呈细胞对ＨＢｓＡｇ的摄取、加工及抗原提呈，并可增强ＨＢｓＡｇ的免疫原性。     

TNFα对血管内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响

ＴＮＦα主要由巨噬细胞、Ｔ细胞和ＮＫ细胞产生,是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质。动脉粥样硬化（ＡＳ）是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程。ＡＳ时ＴＮＦα合成增多,且与ＡＳ的严重程度成正比。ＰＤＧＦ是以二聚体（ＡＡ,ＢＢ和ＡＢ）形式存在的促分裂剂。其中,ＰＤＧＦ－Ｂ链由ＰＤＧＦ－Ｂ链基因编码,该基因ｍＲＮＡ在ＡＳ血管内皮细胞中表达明显增高。因此,研究在ＴＮＦα作用下,血管内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要…     

抗人IgGFc和Fab单克隆抗体的鉴定及应用

本文将采用木瓜蛋白酶水解和ＳＰＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析等手段获得的人ＩｇＧＦｃ和Ｆａｂ，以抗人ＩｇＧＦｃ和抗人ＩｇＧＦａｂ单抗为参比品（Ｓｉｇｍａ）．鉴定了细胞库中抗人ＩｇＧ系列的部分细胞林，得到分泌特异性抗人ＩｇＧＦｅ和抗人ＩｇＧＦａｂ单抗的细胞各一株。在此基础上。应用抗人ＩｇＧＦｃ及抗人ＩｇＧＦａｂ单抗分别制备了Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱，纯化了酶解的人ＩｇＧＦｃ和Ｆａｂ。经ＥＬＩＳＡ法鉴定，相互间无交叉反应。同时用此方法还制备了人抗ＨＢｅＦａｂ，并将此Ｆａｂ标记过氧化物酶。配制ＨＢｅＥＬＩＳＡ诊断盒，证明其生物学活性未受影响，而且消除了类风湿因子引起的ＨＢｅＡｇ假阳性现象。     

Apo－1／Fas抗原与细胞程序化死亡

Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ抗原是一种跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）受体超家族的一个成员，Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ是细胞程序化死亡信号传导系统的重要组成部份。Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ系统介导的细胞程序化死亡，与粘附分子ＣＤ５４、原癌基因Ｂｃｌ－２的表达，以及二磷酸腺苷多聚化过程有关。Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ系统的研究，有助于自身免疫疾病的发病机制，以及抗肿瘤基因治疗方案的设计和研究。     

抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

目的 尝试将１株来源于人源性噬菌体抗体库的抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ,转换成完整的抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ。方法 采用重叠ＰＣＲ方法,在抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ和Ｖκ的ＶＨ基因的５’端接上人工合成的人κ链的前导序列,构建表达完整ＩｇＧ１的真核表达载体,转染ＧＨＯ（ＤＨＦＲ＾－）细胞,用ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹检测抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ的表达。通过ＤＨＦＲ／ＭＴＸ体系及金属离子诱导提高Ｉｇ表达。结果：获得     

将抗体库所获抗-HBs Fab转换为全长人IgG

目的 将大肠杆菌表达的抗－乙肝表面抗原（ＨＢｓ）人Ｆａｂ转换为真核表达的全长人ＩｇＧ１。方法 用重叠ＰＣＲ法将人工合成的人Ｖｋ前导序列拼到抗－ＨＢｓ的ＶＨ和ＶＫ上,构建人ＩｇＧ１真核表达载体。转染真核细胞,通过ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹检测抗－ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结果 用轻链和重链同时表达的单一载体在ＣＨＯ细胞中获得了抗－ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结论 通过噬菌体抗体库所获Ｆａｂ段可经拼接人     

TNF-α对内皮细胞粘附分子NFκB表达的影响

目的 :目前认为动脉粥样硬化 (ＡＳ)是一种炎症性疾病 ,其致病因素多种 ,细胞因子生长因子等在其发病机制中起着重要的作用。因而通过ＴＮＦ α作用于内皮细胞 (ＥＣ)后 ,观察单核细胞对其粘附的变化 ,粘附分子表达以及对调控粘附分子基因的转录因子 (ＮＦκＢ)变化 ,以探讨ＴＮＦ α在ＡＳ发生早期细胞行为中的作用。方法 :人脐静脉内皮细胞和γＴＮＦ α(5ｎｇ/ｍｌ)作用 4ｈ后 ,用细胞计数法测Ｕ937细胞以ＥＣ粘附率 ,用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＣ膜上粘附分子ＶＣＡＭ 1、ＩＣＡＭ 1、Ｐ ｓｅｌｅｃｔｉｎ的表达 ,以及采用细胞免疫化学方法测…     

肿瘤坏死因子α基因转导的疫苗对小鼠肝癌移植瘤的影响

应用我院已构建的肿瘤坏死因子基因转导的人肝癌细胞作为免疫原 ,进行小鼠免疫接种 ,观察接种后小鼠对移植的肿瘤细胞的免疫排斥作用 ,探索其能否作为一种肝癌疫苗。培养已转入ＴＮＦ基因的ＢＥＬ 740 4 ＴＮＦ细胞和未转入基因的ＢＥＬ 740 4细胞。分别给予总剂量各为 80Ｇｙ和 40Ｇｙ的60 Ｃｏ照射 ,照射方法为每天 1次每次2 0Ｇｙ连续进行 ,完成总剂量后作为疫苗。昆明种小白鼠 40只 ,雌雄各半 ,随机分转入基因组 (ＢＥＬ 740 4 ＴＮＦ)、转入基因60 Ｃｏ照射组 (ＢＥＬ 740 4 ＴＮＦ Ｃｏ)、未转入基因组 (ＢＥＬ 740 4)、未转入基因60 …     

CD27分子研究进展

ＣＤ２７分子是ＮＧＦＲ／ＴＮＦＲ基因超家族成员之一。表达于大多数外周Ｔ细胞、髓质胸腺细胞、Ｂ细胞亚群和某些ＮＫ细胞。在Ｔ细胞激活、ＣＴＬ分化和细胞毒功能的发挥、Ｂ细胞分化和Ｉｇ产生、ＮＫ细胞毒活性的调节等过程中起重要作用。本文就ＣＤ２７分子结构、生物学功能、ｓＣＤ２７的生物学意义等方面的研究进展作一综述。     

CD27分子研究进展

ＣＤ２７分子是ＮＧＦＲ／ＴＮＦＲ基因超家族成员之一。表达于大多数外周Ｔ细胞、髓质胸腺细胞、Ｂ细胞亚群和某些ＮＫ细胞。在Ｔ细胞激活、ＣＴＬ分化和细胞毒功能的发挥、Ｂ细胞分化和Ｉｇ产生、ＮＫ细胞毒活性的调节等过程中起重要作用。本文就ＣＤ２７分子结构、生物学功能、ｓＣＤ２７的生物学意义等方面的研究进展作一综述。     

IgGimmunoreactivities(IgGIR) in the rat central nervous system following administration of the antineurons antibody

以猪脊髓运动神经元（Ｍｎｓ）为抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠制备抗Ｍｎｓ抗体（ＭｃＡｂ,３６Ｆ６）,该抗体与人和大鼠脊髓Ｍｎｓ有交叉反应。把这些ＩｇＧ抗体注射到肌肉中,ＩｇＧ便经逆行轴浆运输到Ｍｎｓ胞体,而不进入到感觉神经元。用改变的ＡＢＣ方法定位大鼠中枢神经系统的小鼠的ＩｇＧ免疫反应（ＩｇＧ－ＩＲ）。肌肉注射３６Ｆ６后,动物存活４８－７２ｈ,ＭｃＡｂ跨细胞作用可能发生从逆行标记的Ｍｎｓ到Ⅷ、Ⅹ板层（在脊髓水平）,甚至到脑干网状结构的神经元。在同一切片上,网状结构内出现了神经元的跨细胞作用。ＩｇＧ－ＩＲ细胞还可分布在下丘脑室旁核、视上核、新皮质和室管膜细胞以及不规则出现的血管周的胶质细胞和／或神经元。     

中期因子及其与肿瘤的关系

在细胞表面和细胞外基质中,存在着一些对葡氨聚糖肝素和硫酸肝素具有高度亲和力的多肽,总称为肝素结合性生长因子（ＨＢＧＦｓ）,如血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）等。ＦＧＦｓ是ＨＢＧＦｓ中最大的群体,至少包含１０个不同的分子。近年来发现一个新的ＨＢＧＦｓ家族,其生物学活性类似ＦＧＦｓ,但结构明显不同于ＦＧＦｓ以及其它已知的生长因子。这个家族包含两个成员,即多向因子（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｎ,ＰＴＮ）和中期因子（ｍｉｄｋｉｎｅ,ＭＫ）,其相对分子量分别为１８×１０３、１４×１０…     

抗人IgGFc和Fab单克隆抗体的鉴定及应用

本文将采用木瓜蛋白酶水解和ＳＰＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｅｓ４Ｂ柱亲和层析等手段获得的人ＩｇＧ Ｆｃ和Ｆａｂ，以抗人ＩｇＧ Ｆｃ和抗人ＩｇＧ Ｆａｂ单抗为参比品（Ｓｉｇｍａ），鉴定了细胞库中抗人ＩｇＧ系列的部分细胞株，得到分泌特异性抗人ＩｇＧ Ｆｃ和抗人ＩｇＧ Ｇａｂ单抗的细胞各一株。在此基础上，应用抗人ＩｇＧ Ｆｃ及抗人ＩｇＧ Ｆａｂ单抗分别制备了Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱，纯化了酶解的人ＩｇＧ     

shTNFR75在酵母细胞中分泌表达及表达产物的活性分析

肿瘤坏死因子受体(ＴＮＦｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＮＦＲ)分为ＴＮＦＲⅠ和ＴＮＦＲⅡ两类,也称ＴＮＦＲ55和ＴＮＦＲ75,两者均为跨膜糖蛋白。两种跨膜蛋白经蛋白酶作用,其胞外区可从细胞膜表面脱落形成可溶性ＴＮＦ受体(ｓＴＮＦＲ)。近年来,有实验证明ｓＴＮＦＲ在体内、体外能中和ＴＮＦ诱导的细胞毒性和免疫反应〔1〕,具有临床应用潜力。本文报道毕赤酵母系统分泌表达ｓｈＴＮＦＲ75及其表达产物的活性分析。材料和方法菌株、质粒及试剂:大肠杆菌ＤＨ5α、鼠成纤维细胞Ｌ929、酵母整合载体ｐＰＩＣＺαＡ、毕赤酵母细胞ＧＳ115(Ｈｉｓ4-)为…     

抗人重组IL—1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株 ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定，抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ＩｇＧ１，免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带，ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α，ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无     

健康人外周血中CD8~+颗粒酶B~+T细胞亚群含有活化的和易于凋亡的细胞

有关健康人外周血淋巴细胞上颗粒酶存在的问题有一些争论的报道,此文的研究是应用针对人类天然ＧｒＢ的单克隆抗体分析了健康人Ｔ细胞中ＧｒＢ的表达,并分析了ＣＤ８＋ＧｒＢ＋Ｔ细胞亚群的表型及对自发凋亡和Ｆａｓ介导的凋亡的易感性。方法：从人类ＮＫＣ系ＹＴＩＮＤＹ中纯化的天然ＧｒＢ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠制备ＩｇＧ１ＭｃＡｂＧｒＢ１１。经放免及ＥＬＩＳＡ分析此ＭｃＡｂ仅与ＧｒＢ特异性结合,以免疫细胞化学方法用此单克隆抗体检测健康人ＰＢＭＣ中的ＧｒＢ＋细胞。ＧｒＢ＋细胞表型的分析采用ＦＩＴＣ标记的针对不同淋巴…     

AngⅡ、mm-LDL和TNFα对ECV304细胞 PDGF-B链基因转录调控的影响

目的 :从基因转录水平探讨ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因表达的影响。方法 :( 1 )以ＧＡＰＤＨ为内参照 ,用反转录 -多聚酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)方法检测 1 0 - 6 ｍｏｌ/ＬＡｎｇⅡ、1 0 0 μｇ/ｍＬｍｍ -ＬＤＬ及 2 0 0Ｕ/ｍＬＴＮＦα作用于ＥＣＶ30 4细胞 1 8ｈ后各实验组ＰＤＧＦ -Ｂ链基因ｍＲＮＡ水平 ,分别为对照组的 1 5倍、2 0倍和 1 3倍 ,提示ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα在转录水平对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因的表达有促进作用。 ( 2 )构建一系列含人ＰＤＧＦ -Ｂ链基…     

自身免疫病中肿瘤坏死因子的遗传多态性

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）是体内具有多种生物活性的细胞因子，其基因位于ＨＬＡ复合体中。已经证明，ＴＮＦ在自身免疫病的发病中起很重要的作用。为了弄清这种作用，人们对ＴＮＦ基因的遗传多态性进行了大量的研究，并进一步探讨在自身免疫疾病的情况下ＴＮＦ基困遗传多态性与ＨＬＡ单倍型的关系、ＴＮＦ活性与ＭＨＣ其它基因的关系等问题，为认识ＴＮＦ在自身免疫病的作用机理提供理论基础。