阿霉素对人肝癌细胞SMMC—7721抑制作用的研究

目的 研究阿霉素对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的影响。方法 应用ＭＴ法、流式细胞术及航向电镜技术观察阿霉素对ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长的作用及细胞周期和形态学改变。结果 阿霉素明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的生长（Ｐ〈０．０５）,半数生长抑制剂量（ＩＣ５０）为０．４４ｍｇ／Ｌ。流式细胞术证实,阿霉素作用１２ｈ,细胞阻滞于Ｇ２期,４８ｈ细胞阻滞于Ｇ１期。航向电镜超微结构观察发现阿霉素可使肿     

激活细胞外信号调节激酶-丝裂原蛋白激酶信号通路对人结肠癌细胞增殖及相关基因的影响

目的探讨野生型RAF和MEK持续激活细胞外信号调节激酶．丝裂原蛋白激酶信号通路（ERK-MAPK）对人结肠癌细胞增殖及细胞周期相关基因的影响。方法培养人结肠癌细胞系SW1116,脂质体介导RAF、MEK基因和空质粒转染,G418筛选阳性克隆。流式细胞仪分析细胞周期,光学显微镜下观察细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,生长曲线和软琼脂集落形成检测细胞增殖,实时定量PCR检测p21^WAF1和p16^INK4A及癌基因c-myc转录水平。结果建立稳定表达RAF或MEK的细胞系,RAF或MEK高表达均能明显降低G0／G1期细胞百分比,促进细胞周期由G1向S期进行,增加DNA合成的S期细胞百分比,细胞活力和增殖力升高3—4倍,细胞分裂增殖旺盛。转染RAF／MEK质粒后,细胞均呈现p21^WAF1和p16^INK4A转录水平降低,c-myc转录水平升高。结论ERK-MAPK信号通路激活可下凋细胞周期相关基因p21^WAF1和p16^INK4A表达,并上调c-myc表达,减少G0期时相,加速G1／S期转化,促进细胞增殖。     

阿霉素对人肝癌细胞SMMC-7721抑制作用的研究

目的:研究阿霉素对人肝癌细胞SMMC-7721生长的影响。方法:应用MTT法、流式细胞术及透射电镜技术观察阿霉素对SMMC-7721细胞生长的作用及细胞周期和形态学改变。结果:阿霉素明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长(P相似文献   

细胞外钙调素与细胞增殖的调控

０引言钙调素（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）作为一种耐热的脑环核苷酸磷酸二酯酶的激活剂,于１９７０年分别被Ｃｈｅｕｎｇ（张槐耀）和Ｋａｃｈｉｕｃｈｉ发现。１９７３年Ｔｅｏ和Ｗａｎｇ阐述了激活机制。随后Ｂｒｏｓｔｒｏｍ等发现该蛋白激活脑腺苷酸环化酶,Ｌ...     

靶向下调SGTA抑制肝细胞肝癌细胞周期及细胞增殖

目的 :研究靶向下调小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α抗体(small glutamine-rich tetratricopeptide repeatcontaining protein alpha,SGTA)的表达对肝癌Hu H7细胞周期及细胞增殖的影响。方法:选择Hu H7细胞系作为研究对象,进行血清饥饿释放同步化处理后采用Western Blot方法检测SGTA蛋白表达水平变化;通过SGTA特异性si RNA下调Hu H7细胞中SGTA的表达,采用细胞计数盒8(cell counting kit 8,CCK8)、流式细胞术等方法检测细胞增殖能力及细胞周期。结果:血清饥饿使Hu H7细胞生长周期停滞,血清释放后刺激Hu H7细胞增殖,Western Blot显示SGTA﹑增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白随着细胞周期的进展表达增加,而细胞周期负性调控因子p27kip1蛋白表达却下降。SGTA缺失可引起cyclin A、cyclin B的表达下降、细胞增殖的下降以及细胞周期的阻滞。结论:SGTA特异性si RNA能明显抑制肝癌Hu H7细胞的增殖,细胞周期阻滞,提示其可为肝癌的靶基因治疗提供新的分子靶点。     

反义抑制Survivin表达对槲皮素诱导肝癌SSMC-7721细胞凋亡的影响

目的:采用Survivin反义寡核苷酸(ASODN)复合物抑制survivin的表达,研究其对槲皮素诱导肝癌SSMC-7721细胞凋亡的影响.方法:体外培养人肝癌SSMC-7721细胞,取对数生长期细胞进行实验. 实验分Ⅰ,Ⅱ两部分:Ⅰ分为空白对照组(设平行组)、等量脂质体LipofectamineTM2000对照组、400 μmol/L SODN复合物组、400 μmol/L ASODN复合物组(设平行组),转染48 h;Ⅱ弃掉Ⅰ部分各组培养液,换新指定培养液,分为空白对照组、40 μmol/L槲皮素组、脂质体LipofectamineTM2000组、SODN复合物组、ASODN复合物组、ASODN复合物 40 μmol/L槲皮素组(联合组),孵育细胞24 h后检测. Ⅰ结束时采用RT-PCR、细胞免疫组化染色检测各组SSMC-7721细胞survivin表达变化;Ⅱ结束时用吖啶橙染色法观察细胞凋亡时形态变化,MTT法检测SSMC-7721细胞生长抑制率,Annexi-V/PI双染流式细胞仪检测SSMC-7721细胞凋亡率.结果:ASODN复合物作用肝癌SSMC-7721细胞48 h后能下调survivin mRNA及Survivin蛋白的表达 (P＜0.01);与其他组比较,联合组AO染色图片可观察到凋亡小体等典型的细胞凋亡形态特征变化且凋亡细胞数量明显增多,并用MTT法、Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测显示联合组细胞的生长抑制率增高(P＜0.01)、细胞凋亡率提高(P＜0.01).结论:ASODN复合物可有效抑制肝癌SSMC-7721细胞survivin基因的表达;ASODN复合物能增强槲皮素对SSMC-7721细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用即二者具有协同作用,该作用可能与抑制survivin基因的表达有关.     

细胞外调节蛋白激酶介导的脂蛋白（a）促血管平滑肌细胞迁移作用

目的:研究细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在脂蛋白(a)[Lp(a)]诱导的人血管平滑肌细胞(VSMC)迁移及细胞骨架构建中的作用.方法:用不同浓度的ERK激酶抑制剂PD98059抑制人VSMC内ERK的活化,再用Lp(a)诱导处理后的细胞,Western blot检测P-ERK的表达,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架构建变化,迁移试验观察VSMC迁移数量的变化.结果:Western blot检测显示PD98059的终浓度在10 μmol/L时,P-ERK表达无明显变化(P>0.05),从20～40 μmol/L,随其终浓度的逐渐升高,P-ERK的表达逐渐降低(P<0.01),达到40 μmol/L后,其抑制作用达到高峰.PD98059预处理人VSMC,Lp(a)诱导20 min后,细胞内未见明显的张力纤维、粘着斑及丝状伪足.对照组VSMC迁移细胞数为(78.87±7.43)个,PD98059处理组为(49.20±6.47)个, PD98059处理组较正常对照组明显减少(P<0.01).结论:Lp(a)诱导的VSMC细胞骨架构建及细胞迁移依赖于ERK的活化.     

丝裂原活化蛋白激酶通路对脂多糖诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α基因表达的协同调节作用

目的 探讨脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的协同调节作用及其分子机制。方法 用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW264．7细胞引起的激酶活性变化;用报告基因技术和反转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法研究LPS诱导的TNF－α基因转录的分子机制。结果 LPS刺激RAW264．7细胞可引起细胞外信号调节激酶1（ERK1）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和p38MAPK的一过性激活,用MAPK上游激酶的活性突变体分别转染RAW264．7均可不同程度地诱导TNF－α启动子转录活性;而且,这些MAPK通路激活诱导的TNF－α启动子转录活性表现出明显的协同效应;三种MPAPK的无活性突变体均显示出对LPS刺激引起的TNF－α启动子转录激活的抑制效应;RT－PCR的结果证实,ERK、JNK和p38MAPK的特异性抑制剂对TNF－αmRNA表达具有不同程度的抑制作用。结论 LPS刺激引起的TNF－α启动子转录活性增加,可能涉及了ERK、p38和JNK三条通路的激活;这些通路通过协同效应共同发挥对TNF－α基因表达的调控。     

β细胞素下调对肝癌细胞增殖能力的影响及其机制探讨

目的:在肝癌细胞系中通过下调β细胞素(BTC)的表达研究其对肝癌细胞侵袭能力的影响并探究其影响机制。方法:通过siRNA转染下调BTC后,通过Transwell侵袭实验检测SMMC7721和MHCC97-H细胞的侵袭能力变化,并用RT-PCR和Western blot检测与肝癌侵袭能力相关的PI3K/AKT-XIAP信号通路的表达变化。结果:与阴性对照组相比,siRNA下调组中SMMC7721和MHCC97-H细胞的侵袭能力明显降低,PI3K/AKT-XIAP信号通路受到明显抑制。结论:下调BTC表达可能通过抑制PI3K/AKT-XIAP信号通路抑制肝癌细胞的侵袭能力。     

Regulative Function of Telomerase and Extracelluar Regulated Protein Kinases to Leukemic Cell Apoptosis

In order to investigate the regulative function of telomerase and phosphorylated (activated) extracelluar regulated protein kinase (ERK) 1 and 2 in the leukemic cell lines HL-60 and K562 proliferation inhibition and apoptosis,three chemotherapeutic drugs Harringtonine (HRT),Vincristine (VCR) and Etoposide(Vp16) were selected as inducers.The proliferation inhibition rate was detected by MTT method,the cell cycle and cell apoptosis was analyzed by flow cytometry and the telomerase activity was detected by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP) assay and bioluminescence analysis method.The phosphorylated ERK 1/2 protein expression was detected by western blot method.The results showed that HRT,VCR and Vp16 could inhibit cell proliferation,induce apoptosis,inhibit telomerase activity and down-regulate the protein expression of phosphorylated ERK.It was suggested that ERK signal transduction pathway was involved in the down-regulation of telomerase activity and the onset of apoptosis in the leukemic cells treated by HRT,VCR and Vp16.     

丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的: 研究力达霉素(LDM)对鼠骨髓瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs) 信号传导通路的影响及MAPKs在LDM抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用,为LDM治疗人多发性骨髓瘤的研究提供依据。方法: 选取处于对数生长期鼠骨髓瘤细胞株SP2/0,随机分为空白对照组、4种不同浓度LDM组,采用Western blotting 方法检测各组细胞48 h后MAPK家族的三个主要成员c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38 MAPK的表达水平。选取处于对数生长期SP2/0,随机分为对照组、LDM组、SP600125组(JNK抑制剂)、SB203580组(p38抑制剂)、U0126组(ERK抑制剂)、LDM+SP600125组、LDM+SB203580组和LDM+U0126组,采用MTS法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。结果: 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组JNK、ERK和p38 MAPK的表达水平高于空白对照组（P<0.05）;各抑制剂组细胞增殖率和细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),即对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均不明显;但LDM+SP600125组、LDM +SB203580组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均降低（P<0.05）,而LDM+U0126组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用则增强（P<0.05）。结论: LDM能够通过激活JNK、p38 MAPK抑制鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖,诱导其凋亡。     

富含半胱氨酸蛋白61对子宫内膜癌细胞增殖及细胞周期的影响及其机制研究

目的 研究富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)对子宫内膜癌(EC)细胞株HEC-1B增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法 取对数生长期HEC-1B细胞,随机分为Control组(不处理)、pcDNA3.1-NC 组(转染 pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1 CYR61组(转染 pcDNA3.1 CYR61)、pcDNA3.1 CYR61+ LiCl(Wnt/β-catenin 通路激活剂)组(转染 pcDNA3.1 CYR61,并加入 LiCl 使其终浓度为 60 mmol/L)。转染48 h后采用MTT法检测增殖抑制率,PI染色法检测细胞周期占比,Western blotting检测细胞β-catenin、Caspase-3、Cyclin D1蛋白的表达。结果 与Control组、pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1 CYR61组CYR61、β-catenin、Caspase-3、Cyclin D1 蛋白相对表达量、G₀/G₁期占比升高(P <0.05),S、G₂/M 期占比降低(P <...     

抑制USP22基因对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的 利用RNA干扰技术探讨泛素特异性肽酶22（USP22）对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法 免疫荧光检测结直肠癌组织中USP22的表达;Western blotting检测体外培养的HCT-116、SW480、HC-29结直肠癌细胞株中USP22的表达,筛选出表达量最高的细胞作为研究细胞。设计、合成针对USP22特异性siRNA,同时设置阴性对照siRNA,利用脂质体转染结直肠癌细胞后,Western blotting检测siRNA抑制效率;通过MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞的周期及凋亡;Western blotting检测周期相关蛋白CyclinB1、p21、p53、CDK2的表达。结果 结直肠癌组织中USP22表达量与癌旁组织比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,结直肠癌组织中USP22表达量升高。SW480细胞中USP22的表达量最高,因此作为靶细胞进行后续研究。与对照组比较,USP22 siRNA能够降低USP22的表达（P?<0.05）。USP22抑制后,与对照组比较,能够抑制SW480细胞的增殖,促使SW480细胞停滞于G0/G1期,抑制细胞周期进程,增加细胞凋亡率（P?<0.05）,进而抑制细胞增殖（P?<0.05）;同时,与对照组比较,CyclinB1、CDK2的表达量降低（P?<0.05）,p53和p21的表达量升高（P?<0.05）。结论 USP22抑制后,能够抑制结直肠癌细胞的增殖,其机制可能与抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡有关。     

鼻腔黏膜恶性黑色素瘤BRAF基因突变与活化细胞外调节蛋白激酶的表达分析

目的 研究鼻腔黏膜恶性黑色素瘤中BRAF基因突变发生的概率、突变类型,以及其下游活化细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达改变,分析其与皮肤恶性黑色素瘤中两者表达的不同,探讨发生于鼻腔黏膜和皮肤的恶性黑色素瘤的发病机制是否存在差异.方法 选取复旦大学附属眼耳鼻喉科医院20例鼻腔黏膜恶性黑色素瘤患者新鲜冻存瘤组织,提取基因组DNA,经PCR扩增BRAF基因的15号外显子编码区,纯化后直接测序分析突变.提取总蛋白,用Western印迹法检测活化ERK的表达.结果 鼻腔黏膜恶性黑色素瘤组织BRAF基因突变率为5%(1/20),明显低于皮肤恶性黑色素瘤;活化ERK表达率60%(12/20),与皮肤恶性黑色素瘤相似.结论 BRAF基因突变并不是鼻腔黏膜恶性黑色素瘤活化ERK高表达的主要原因,其发病机制与皮肤恶性黑色素瘤有所不同.     

重组人TFAR19蛋白对羟基喜树碱诱导人7721肝癌细胞凋亡的增敏作用

目的 :探讨新的人凋亡相关基因产物TFAR19蛋白对羟基喜树碱诱导人 772 1肝癌细胞凋亡的增敏作用。方法 :将不同浓度的rhTFAR19蛋白单独或与羟基喜树碱 (hydroxycamptothecin ,HCPT)同时加入处于指数生长期的 772 1肝癌细胞中共同培养 ,通过透射电镜、DNA片段化分析、PI及AnnexinV标记进行流式细胞仪分析 ,观察细胞的形态学和细胞凋亡的变化。结果 :不同质量浓度的rhTFAR19蛋白单独作用于 772 1肝癌细胞未见明显凋亡 ,但同时加 5mg·L-1的羟基喜树碱后 ,各质量浓度组均观察到细胞凋亡 ,并且显示了明确的量效关系 :5mg·L-1的HCPT加 5mg·L-1rhTFAR19蛋白的细胞凋亡率为 2 9.5 8% ,而加 2 0mg·L-1rhTFAR19蛋白的细胞凋亡率为6 3 .77%。结论 :rhTFAR19蛋白对HCPT诱导的细胞凋亡有明显的剂量依赖性促进作用 ,临床用HCPT行局部化疗时 ,若加rhTFAR19蛋白 ,可能会在不增加化疗药物毒性的情况下 ,提高化疗效果     

食管鳞癌中CDC2、MCM2的表达及其临床意义

目的:检测细胞分裂周期2(CDC2)、微小染色体维持蛋白2(MCM2)在食管鳞癌组织中的表达情况,探讨其与食管鳞癌临床病理参数的关系以及在食管鳞癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组化Elivision法检测90例食管鳞癌患者癌组织、28例食管鳞癌患者癌旁正常上皮组织及16例重度不典型增生患者上皮组织中CDC2、MCM2的表达情况。结果:CDC2、MCM2在食管鳞癌组织中的表达明显高于食管癌旁正常上皮、重度不典型增生组织(P<0.01);食管鳞癌组织中CDC2的表达程度与其临床分期有关(P<0.05),MCM2的表达与其分化程度和淋巴结转移均有一定关系(P<0.05);食管鳞癌组织中CDC2和MCM2表达呈正相关关系(P<0.05)。结论:CDC2、MCM2在细胞周期调控中起决定性作用,两者相互协调共同促进了食管鳞癌的发生、发展,可作为临床早期诊断的重要指标。     

青蒿素对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响

目的：探讨青蒿素对细胞株HepG2细胞增殖的影响。方法采用MTT法检测青蒿素对HepG2细胞作用后的增殖抑制率,流式细胞术检测药物作用HepG2后细胞周期及细胞凋亡的情况。结果80μmol／L的青蒿素对肝癌细胞株HepG2具有增殖抑制作用,其抑制率呈剂量、时间依赖效应,可使HepG2细胞周期阻滞于G0／S期,并诱导肝癌细胞发生凋亡。结论青蒿素能抑制肝癌HepG2细胞增殖。     

E6-AP对前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究E6相关蛋白(E6-AP)对前列腺癌细胞增殖和细胞周期的影响,阐明E6-AP在雄激素受体通路中的作用机制及在前列腺癌发生发展中的作用.方法:采用电穿孔方法制备tTA及E6-AP稳定转染细胞株;利用强力霉素(DOX)的调节作用,通过MTT实验观察E6-AP过表达及低表达对LNCaP细胞增殖的影响;利用流式细胞仪...     

他莫西芬促进HeLa 宫颈癌细胞系增殖

目的: 研究他莫西芬(tamoxifen, TAM)对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响. 方法: 应用生长曲线测定、MTT、流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜等技术. 结果: TAM（1×10-7mol*L-1）使HeLa细胞的生长曲线向上移动；TAM（1×10-8～1×10-6 mol*L-1）可显著促进HeLa细胞增殖；TAM（1×10-6 mol*L-1）促进细胞G1/S期转化，并显著促进细胞内Ca2+释放. 结论： TAM可能对子宫颈癌细胞的生长分化具有重要的调节作用,这种调节作用可能是通过影响细胞周期和胞内Ca2+水平而实现的.