亲和素-生物素酶复合物酶联免疫吸附技术应用于检测HBsAg的研究

作者应用免疫化学 ABC-ELISA 作人群血清中 HBsAg 的检测,验证了该法在检测 HBsAg 方面具有高敏感性。ABC-ELISA 与 ELISA、R-PHA 及 RICEPA 三种方法相比,HBsAg 的检出率按其敏感程度高低为 ABC-ELISA>ELISA>R-PHA>RICEPA。ABC-ELISA 与经典 ELISA单独相比,其HBsAg 检出率由 ELISA的16.07％提高到 ABC-ELISA 的23.58％,并且可将ELISA漏检的32例 HBsAg 携带者检出。此外,该法在检测 HBsAg中还具有特异性高,操作简便和快速等优点。     

内源性生物素对SP免疫组织化学结果的影响

生物素是参与糖原异生和脂肪酸合成的一种联合酶 ,内源性生物素广泛存在于多种组织和器官 ,如肝、肾、脑、胰、乳腺、脂肪、子宫内膜和骨骼肌组织等[1～ 3] 。当利用链亲素卵白素 过氧化物酶 (streptavidin peroxidase ,SP)技术进行免疫组织化学检测时 ,内源性生物素与链亲素卵蛋白 过氧化物酶结合 ,是导致假阳性结果出现的主要原因之一[3～ 7] ,本文研究了内源性生物素对SP免疫组织化学结果的影响 ,并对如何避免假阳性结果进行了讨论。1　材料与方法1 2　标本　收集 1994～ 2 0 0 0年本校湘雅医院和湘雅二医院外科肝细胞癌 (HCC)手术标本 32例 ,所有组     

慢性乙型肝炎肝组织HBsAg和HBcAg的表达

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达与血清HBV-DNA含量、肝组织中HBV-DNA含量、肝组织病理及临床之间的关系。方法选择慢性乙肝患者83例,检测血清HBV-DNA的含量,并行肝穿刺取肝组织,用免疫组化法检测乙肝患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达并检测肝组织中HBV-DNA的含量,同时行常规肝组织病理染色。结果在慢性乙型肝炎患者肝组织内HBsAg和HBcAg阳性表达率分别为81.9%和53%。HBsAg 98.5%是浆膜型;HBcAg浆膜型占62.8%、胞核型占37.2%,浆膜型的肝组织炎症、纤维化较胞核型明显。HBsAg表达强度与血清HBV-DNA定量、肝组织HBV-DNA定量及肝组织炎症和纤维化之间均无相关性。HBcAg表达强度随着血清HBV-DNA定量的增加而增加,呈正向关联（r=0.291,P=0.008）,与肝组织HBV-DNA定量呈现明显的正向关联（r=0.664,P〈0.001）,与肝组织炎症、纤维化分级也呈正相关（r=0.611,0.841,P〈0.001）。结论慢性乙肝患者肝组织免疫损伤发生的免疫应答的主要抗原是HBcAg。将肝组织中HBcAg的表达结合HBV-DNA载量作为抗病毒治疗指标更可靠。     

乙型肝炎患者肝组织中前S_2蛋白存在状态的初步研究

为了观察Pre-s_2在肝患者肝组织内的存在状况,本文应用免疫组织化学PAP法对64例乙肝患者肝组织石蜡切片进行了Pre-s_2检测,同时应用PAP法或ABC法检测了HBsAg和HBcAg。结果表明:(1)乙肝肝组织石蜡切片上能检出Pre-s_2,经胰蛋白酶消化则能破坏Pre-s_2;(2)Pre-s_2与HBsAg在肝组织内存在状况基本一致;(3)粗膜型Pre-s_2主要见于病变明显的肝组织中,其分布区易见到肝细胞坏死现象。     

小肝癌及癌周肝组织内HBsAg的免疫组化研究

<正> 应用免疫组织化学观察肝组织内乙型肝炎病毒的特点以及与肝细胞损伤的关系,是当前研究病毒性肝炎发病机理的一个重要手段。大量的研究提示,乙肝病毒(HBV)感染与肝细胞癌有着密切关系。自Blumberg(1965)发现乙型肝炎表面抗原(HBsAg)以来,检测HBsAg的方法不断出现,并开拓了免疫病理学的新领域。本文采用敏感的PAP法观察小肝癌及癌周肝组织内HBsAg的检出率,表达方法,并与对     

应用消减免疫法筛选纯系小鼠脾细胞库

应用消减免疫法免疫Balb/c小鼠,免疫组化法检测小鼠血清与正常成人肝组织、肝癌组织的反应性,结果显示免疫小鼠血清未与正常肝组织发生反应,而肝癌组织染色明显,胞核着染为著。提示应用此法免疫初步筛选了较好的抗人肝癌小鼠脾细胞库,为今后的实验研究奠定了基础。     

生物素标记HBV-DNA探针的临床应用

本文报告用自制的生物素HBV-DNA探针进行斑点杂交检测HBV感染患者血清中的HBV-DNA,并与同位素探针相比较。用生物素探针测定HBV-DNA之阳性率在HBsAg和HBeAg同时阳性者中为84.2%,HBsAg和抗-HBe同时阳性者中为23.5％,单纯HBsAg阳性者中为18.6％结果表明生物素HBV-DNA探针其特异性、敏感性和重复性与同位素探针相似,且生物素探针有效时间长,稳定性好。     

免疫组织化学染色中消除内源性生物素的方法研究

内源性生物素(endogenous avidin-bindingacticity,EABA)指得是体内能够与亲和素结合的分子或基因.虽然早已被发现,但是由于对它的研究或观察的样本较少,所以未引起人们的高度重视.随着免疫组织化学技术的发展,在应用单克隆抗体检测石蜡包埋组织,加热抗原修复在增强抗原决定簇表达的同时,也增强了组织中内源性生物素的反应.常用的SP法属于亲和素一生物素法之一,如果待检组织和细胞中富含EABA,则可出现假阳性,导致假阳性结果.     

乙型肝炎肝组织内HBV抗原表达与分布及其意义

为探讨乙型肝炎免疫损伤机理,应用双桥PAP法检查了215例肝活检组织内HBsAg和162例肝活检组织内HBcAg。观察到急性肝炎肝组织内有较高的HBV抗原检出率,肝组织内HBV抗原不能及时     

利用生物素标记法和Westernblotting技术检测血小板膜糖蛋白

为了建立一种简便的血小板膜糖蛋白检测方法，用生物素标民血小板膜糖蛋白，然后用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法进行检测。结果显示生物素可标记十几种血小板膜糖蛋白。用以标记的生物素浓度以５ｍｍｏｌ／Ｌ较为适宜。     

肝活检标本中检测乙型肝炎表面抗原方法的比较

应用地衣红、醛复红染色、免疫荧光和双桥PAP法,对显示石蜡切片肝活检标本中的HBsAg进行了比较。结果表明组化染色中地衣红染色简便、实用。双桥PAP染色显示HBs-Ag阳性率高达90％,且方法具有特异性、敏感性。     

豚鼠小肠EC细胞的免疫细胞化学和银染法的比较研究

本实验利用同一切片标本，在光镜水平上，对豚鼠小肠ＥＣ细胞进行了免疫细胞化学和不同银染法的比较研究。实验结果显示，全部Ｍａｓｓｏｎ－Ｆｏｎｔａｎａ亲银染色阳性细胞均呈ＰＡＰ染色阳性；另一方面，小部分（１５％）Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色阳性细胞却表现为亲银染色和ＰＡＰ染色双阴性。以上结果表明，在显示ＥＣ细胞上，亲银染色具有很高的特异性，因此仍不失为一种经济和实用的方法；嗜银染色显示ＥＣ细胞，尽管其敏感性稍高于亲银染色法，但不具有免疫细胞化学与亲银染色技术那样明显的特异性。     

肝细胞癌的免疫组织化学及组织病理学研究

对153例HCC外检标本进行了HBsAg及HBcAg定位观察。结果发现癌周围肝组织中HBsAg检出率为61%,HBcAg为26%。癌组织中HBsAg检出率为4.6%,HBcAg为3.9%,二者在癌组织中的总检出率为7.2%。此外对AFP、AAT、AACT及CEA进行了定位检测。癌组织中AFP、AAT检出率均为47%,AACT为71%,CEA为62%。与临床血清检测结果一致。同时还观察到LCD的出现与HBV感染有密切关系,LCD细胞中AFP、AAT、AACT及CEA的检出与癌周正常肝细胞无明显区别。     

乙型肝炎与肝硬化和肝细胞癌的关系

近年来,应用免疫组织化学技术观察肝组织内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的研究屡有报导。大多数作者认为乙型肝炎在肝硬化、肝癌的发病中起重要作用;但有的流行病学研究则认为在某些地区,肝炎不是肝癌的病因。我省是肝癌高发区之一,关于这方面尚未见有报道。本文应用免疫酶法标记定位观察肝硬化、肝癌病人肝组织中HBsAg,以探讨本地区肝炎与肝硬化和肝细胞癌的关系。     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞内检出HBsAg-HBV基因表达的可能

已知乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中可有HBVDNA存在,但对HBV基因在PBMC内是否表达及如何表达,至今所知尚少.本文用完整PBMC涂片,PAP染色等方法研究了血清中HBV标志阳性者PRMC内HBsAg-HBV基因表达产物.实验结果表明,27例受试者中13例PBMC内HBsAg阳性.对阳性者中的4例,进一步分析HBsAg在单核细胞、T细胞及非T细胞内的分布,结果有2例HBsAg同时存在于T细胞和非T细胞内,另2例分别仅在非T细胞或单核细胞内检出.本文发现HBsAg仅存在于PBMC的胞浆中,并可分为两种染色类型:弥漫型及局灶型.提示PBMC可受HBV感染,HBV基因也可在PBMC内表达.     

非标记抗体技术在流行性出血热病毒抗原研究中的应用

将非标记抗体技术应用于流行性出血热病毒抗原研究,对感染细胞内病毒抗原及经免疫转印到硝酸纤维膜上的病毒多肽抗原进行了检测,并分别与间接免疫荧光和间接酶标抗体方法进行了比较。结果表明,非标记抗体技术敏感性高,背景浅,可用于流行性出血热病毒抗原检测与分析。用非标记抗体技术及间接免疫荧光法对流行性出血热单克隆抗体培养上清液进行筛选,两种方法阳性检出率相同(7.29％,7/96),但前者滴度(1:16～256)高于后者(1:4～32)。     

肝硬变组织内HBV DNA和HBsAg的分布及意义

作者用原位杂交和免疫组织化学PAP法双标记,在51例人肝硬变石蜡组织切片中检测HBV DNA和HBsAg.共检出HBV DNA 21例(41.2％),HBsAg 43例(84.3％),二者同时检出共19例(37.3％).HBVDNA阳性颗粒主要分布于肝细胞的胞浆或同时分布于胞核及胞浆内,少数仅位于核内或沿胞膜内侧分布.51例肝硬变患者中,活动性肝硬变与静止性肝硬变组织中HBV DNA的阳性检出率分别为52.8％和13.3％,HBV DNA和HBsAg二者均阳性的检出率分别为47.2％和13.3％,均以活动性肝硬变为高(P<0.05).结果说明,HBV的感染以及HBV DNA在肝组织中的存在和持续活动是肝硬变发生发展的重要因素之一.     

PAP法检测末梢血白细胞中乙型肝炎病毒表面抗原及核心抗原的研究

用 PAP 法检测了32例乙型肝炎患者末梢血白细胞乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)及核心抗原(HBcAg),发现有2例患者的白细胞 HBcAg 染色阳性,其阳性细胞数分别为0.1%和0.2%,提示该细胞中仅有极微量的 HBcAg 表达.但未检出 HBsAg 染色阳性的白细胞,这与以前报道的结果有差距,这是否与本文收集的病例及末梢血中白细胞数相对减少有关?尚需进一步研究.