大鼠肺移植受体OB与细胞凋亡关系的初步研究

目的探讨大鼠肺移植受体闭塞性细支气管炎(OB)与细胞凋亡的关系。方法采用大鼠气管异位移植模型模拟肺移植术后OB。随机分为对照组、移植组和免疫抑制剂治疗组,分别于术后7、14和28?d取出移植物。原位末端标记法（TUNEL）检测移植气管细胞凋亡情况;免疫组织化学EnVison法检测移植气管Caspase 3和Bax基因蛋白的表达。结果① 动物模型气管HE染色检测到术后排斥反应,与OB组织学改变符合;② TUNEL检测到大鼠OB模型存在细胞凋亡,免疫抑制剂治疗组较移植组细胞凋亡数少,移植中后期两组差异有统计学意义（P＜0.05）;③ 免疫组织化学检测到大鼠OB模型Caspase 3、Bax基因蛋白表达在移植组和免疫抑制剂治疗组增高,移植中后期两组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论① 大鼠肺移植受体OB与细胞凋亡相关;② 抑制细胞凋亡可治疗肺移植受体OB。     

坐骨神经缺损1周背根神经节组织中microRNA的表达变化

目的：研究大鼠坐骨神经缺损后背根神经节中microRNA（miRNA）的表达变化。方法：采用miRNA芯片检测神经缺损0 d（对照组）和7 d（实验组）背根神经节组织中miRNA的表达情况,应用Real time Taqman PCR对芯片结果进行验证。结果：实验组与对照组比较发生上调1.4倍和下调〉1%以上的miRNA分别有13个和5个,Real time TaqmanPCR检测的4个miRNA的表达变化与芯片一致（上调：miR-21,miR-221;下调：miR-500,miR-551b）。结论：大鼠坐骨神经缺损1周后背根神经节组织中miRNA的表达谱发生改变。     

大鼠气管原位移植建立闭塞性细支气管炎模型

目的 建立大鼠同种异体原位气管移植模拟肺移植后发生的闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis,OB)的病变过程,为研究OB提供动物模型.方法 选用近交系Brown Norway(BN)和Lewis大鼠进行原位气管移植,同系移植组:Lewis(供体)→Lewis(受体),18只;异系移植组:BN(供体)→Lewis(受体),18只.于移植后7、14、30、60 d通过Micro-CT扫描观察移植气管影像学变化,并评价阻塞情况;7、30、60 d取出移植气管,HE染色观察移植物的组织病理变化.结果 各时间点,同系移植组移植气管内膜均无明显增厚,炎症细胞浸润少,气道阻塞率在8%左右;异系移植组移植气管内膜明显增厚,早期有大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润,晚期主要是淋巴细胞浸润伴纤维组织增生,气道明显狭窄、阻塞,其中以第7天阻塞最重,随后渐改善,7、14、30、60 d气道阻塞率分别为(56.8±9.04)%、(51.05±9.79)%、(44.01±7.92)%和(42.97±8.82)%,各时间点异系移植组和同系移植组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 原位气管移植能够稳定形成可模拟肺移植后OB的气道阻塞性病变,克服了肺移植和异位气管移植用于OB研究的一些限制,可更好地作为OB的动物模型应用于实验研究中.     

microRNA在大鼠肥胖模型心肌中的变化

目的建立高脂饮食诱导肥胖易感（obesity prone，OP）大鼠模型，筛查肥胖大鼠心脏微小RNA（microRNA，或miRNA）的表达变化，寻找肥胖诱发心肌损伤及心律失常相关的miRNA。方法高脂饲料喂饲健康雄性SD大鼠10周后，筛选出肥胖大鼠动物模型。实验结束后，测量体脂肪含量，并收集血清，以检测血脂水平，同时取心脏组织常规抽提总RNA，采用含有468种miRNA的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析。结果肥胖大鼠睾周脂肪、肾周脂肪、网膜脂肪、体脂肪含量均显著高于基础对照组，甘油三酯水平和总胆固醇显著高于基础对照组；与基础组相比，肥胖模型组的miRNA表达谱中明显差异表达的miRNA共有7个，其中miR-196a、miR-205、miR-369-5p表达上调，miR-206、miR-483、miR-341和miR-204表达下调。结论在大鼠肥胖模型中，部分心肌miRNA的表达发生明显变化，提示miRNA可能参与肥胖诱发心肌损伤和心律失常的调节作用。     

胃癌组织miRNA差异表达的初步分析

目的 分析胃癌组织特异性微小RNA（miRNA）表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生和发展的关系以及寻找新的胃癌分子标志物奠定基础。方法 利用miRNA芯片就21对胃癌和癌旁配对正常组织的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-Time PCR验证miRNA芯片检测结果。结果 miRNA芯片检测发现,在胃癌及其癌旁配对正常组织中共有88个差异表达miRNA,其中上调最明显的是miR-21、miR-196b、miR-301a、miR-431*、miR-550*、miR-18a和miR-135b;下调最明显的是miR-139-3p、miR-628-3p、miR-596、miR-99b*和miR-638。Real-Time PCR对其中2个上调（miR-181、miR-19b）和2个下调（miR-134、miR-31）miRNA的验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。结论 胃癌组织具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌分子标志物。     

胃癌组织miRNA差异表达的初步分析

目的分析胃癌组织特异性微小RNA（miRNA）表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生和发展的关系以及寻找新的胃癌分子标志物奠定基础。方法利用miRNA芯片就21对胃癌和癌旁配对正常组织的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-TimePCR验证miRNA芯片检测结果。结果 miRNA芯片检测发现,在胃癌及其癌旁配对正常组织中共有88个差异表达miRNA,其中上调最明显的是miR-21、miR-196b、miR-301a、miR-431＊、miR-550＊、miR-18a和miR-135b;下调最明显的是miR-139-3p、miR-628-3p、miR-596、miR-99b＊和miR-638。Real-TimePCR对其中2个上调（miR-181、miR-19b）和2个下调（miR-134、miR-31）miRNA的验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。结论胃癌组织具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌分子标志物。     

裸大鼠人肝癌原位模型的建立及其生物学特性的初步观察

目的 探讨人肝癌原位移植后肿瘤在裸大鼠（rnu/rnu）生长和转移等生物学特性.方法 Huh-7细胞株接种于裸小鼠皮下成瘤组织块移植于裸大鼠皮下成瘤,之后将裸大鼠皮下肿瘤移植至其肝脏以建立原位移植模型,观察所建立模型原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况,同时进行病理组织学、超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察.结果 原位移植瘤模型裸大鼠成瘤率高达90.0%,其肺转移率形成率为50.0%.结论 应用裸大鼠建立肝癌原位移植模型,为探讨肝癌转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的实验动物模型.     

A preliminary analysis of microRNA expression profiles in pulmonary tissues of rats with left-to-right shunt pulmonary hypertension

目的 检测晚期肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)大鼠肺组织中microRNA (miRNA)的表达,初步预测差异表达的microRNA调控的靶基因.方法 4～5周龄健康雄性SPF级SD大鼠20只,体质量90～110 g,按完全随机分组法分成分流组(n=10)和对照组(n=10).分流组采用套管法行右侧颈总动脉-颈外静脉分流术以建立左向右分流型肺动脉高压模型,对照组行假手术,建立左向右分流型肺动脉高压大鼠模型.12周后,取大鼠外周肺组织,运用microRNA表达谱芯片检测分流组和对照组大鼠肺组织microRNA的差异性表达.运用Miranda、TargetScan、PicTar软件预测可能调控的靶基因,实时定量PCR验证miR-98、miR-130b和miR-127等的表达.结果 平均肺动脉压(mPAP)、肺动脉中膜厚度百分比(MT％)及右心室肥厚指数(RVHI)均明显高于对照组(P＜0.01),microRNA芯片结果提示:与对照组相比,在分流组大鼠肺组织中表达明显上调的miRNA有30个(miR-122、miR-130b、miR-146b等),明显下的miRNA有7个(miR-382、miR-192、miR-29c等),RT-PCR结果与芯片结果一致.结论 microRNA在左向右分流型肺动脉高压大鼠中表达存在差异,microRNA可能参与肺动脉高压大鼠肺血管的重构.     

肺移植慢性排异反应动物模型研究进展

慢性排异反应是导致肺移植后期移植失败的主要原因。闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis, OB) 是肺移植后慢性排异反应的最主要病理学特征改变。而动物模型在肺移植慢性排异反应研究过程中,起到了不可或缺的作用。到目前为止,已经有多种动物模型被建立并用来模拟人类肺移植后中、远期慢性排异反应。但这些动物移植模型都或多或少存在缺陷。近年来,发展出的小鼠原位肺移植模型为研究OB提供了潜在可能。本文通过回顾各类肺相关移植模型的建立,对之间优缺点进行分析比较,探讨今后肺移植慢性排异疾病模型建立的可能途径。     

MicroRNA在非特异性精神发育迟滞患者外周血中的异常表达

目的 研究非特异性精神发育迟滞患者外周血中miRNA的异常表达.方法 采用基因芯片筛查技术对3例非特异性精神发育迟滞儿童和健康儿童外周静脉血的miRNA进行筛查,进行生物信息学分析,并选取其中10个感兴趣miRNA,运用实时定量PCR技术在34例非特异性精神发育迟滞患者与32例正常个体之间进一步验证芯片筛查的结果.结果 经筛查27个miRNA的表达差异具有统计学意义（上调或者下调倍数变化值≥2.0,P≤0.05）,其中22个表达上调,5个表达下调.经实时定量PCR验证miR-664a-5p,miR-1207-5p,miR-3141,miR-1228-5p,miR-4505在病例组（3.93±3.82,2.48±3.45,2.75±3.62,10.03±3.59,5.35±3.44）中表达较对照组（5.47±3.59,3.95±1.3.57,4.14±3.68,13.23±5.05,6.85±3.22）上调,差异有统计学意义（P＜0.05 ～ 0.01）.结论 多种miRNA在非特异性精神发育迟滞患者外周血中有异常表达.     

模拟肺移植后闭塞性细支气管炎小鼠模型的建立

目的 为了更好地研究肺移植术后闭塞性细支气管炎( obliterative bronchiolitis,OB)的发病机制和预防治疗策略,建立一种稳定的小鼠闭塞性细支气管炎模型的方法.方法 20～ 25 g清洁级的C57BL/6,雄性,25只;BALB/c雄性,5只,按体质量配对分为两组,实验组A:BALB/c(n=5)→C57BL/6(n=10);对照组B:C57BL/6(n =5)→C57BL/6(n=10),进行气管原位移植.使用H-E染色,对比观察同种异体气管移植、同系气管移植和未进行气管移植小鼠闭塞性细支气管炎的发生情况.结果 小鼠模型建立过程中病死率0％ (0/20),术后4周病死率5％(1/20).病理显示实验组小鼠气管内皮受损,黏膜下层有大量炎症细浸润,纤维组织增生,模型闭塞性细支气管炎的发生率为100％.而对照组均未发生OB,移植气管形态接近正常,无管腔狭窄.结论 本研究成功地建立了模拟肺移植术后闭塞性细支气管炎的小鼠原位气管模型,为研究闭塞性细支气管炎的发病机制和预防治疗策略奠定了基础.     

巨噬细胞极化介导闭塞性细支气管炎发生的机制研究

目的研究巨噬细胞的极化状态及IL-17在OB发生中的作用。方法采用小鼠同种异体原位气管移植模型模拟闭塞性细支气管炎的病理改变。20~25 g清洁级C57BL/6,雄性,20只;IL-17基因敲除C57BL/6,雄性,10只;BALB/c雄性,10只,按体质量随机配对分为三组。正常C57BL/6（n=10）无手术对照组;实验组A：BALB/c（n=5）→C57BL/6（n=10）组;实验组B：BALB/c（n=5）→IL-17基因敲除C57BL/6（n=10）组。分别于术后第14、30天取出移植气管进行病理形态学检测。于术后第7、14、30天检测脾脏中巨噬细胞M1型巨噬细胞的标记CD86的表达水平。结果与对照组相比,接受气管移植的野生型小鼠中,M1型巨噬细胞的标记CD86随移植后时间的延长,逐渐下调;IL-17基因敲除受体组巨噬细胞表面CD86的表达水平与对照组相比,明显下调。BALB/c→C57BL/6组较对照组管腔明显狭窄,BALB/c→IL-17基因敲除组较BALB/c→C57BL/6组管腔狭窄明显减轻。结论巨噬细胞向M1方向极化与OB发生的病理过程密切相关,IL-17基因敲除明显下调小鼠气管移植模型体内巨噬细胞表面CD86的表达水平,并减轻气管移植物的病理改变。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4＋T淋巴细胞中miRNAs表达谱分析

目的 通过基因芯片技术筛选系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T淋巴细胞中miNRAs的表达情况,寻找SLE与健康者外周血CD4＋T淋巴细胞中差异表达的miNRAs,探讨CD4＋T淋巴细胞参与SLE的发病机制.方法 采集43例SLE患者作为实验组,23例健康者作为对照组,取受试者外周静脉血,用磁珠分选法分离外周血CD4＋T淋巴细胞,提取RNA进行芯片分析,筛选差异表达的miRNAs.其筛选结果通过荧光实时定量PCR在43例重度活动期SLE患者和23例健康者中进行验证.结果 与对照组相比,SLE患者外周血CD4＋T淋巴细胞中有13个miNRA表达差异具有统计学意义（P＜0.05）,其中上调基因8个,下调基因5个.进一步通过荧光实时定量PCR检测了miR-NAs的表达情况,最终确定miR 410与miR-181在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显下调,miR-31在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显上调.结论 CD4＋T淋巴细胞中的miRNA很可能参与了SLE患者的病情活动.     

索拉非尼对肝癌患者血清中肿瘤相关 miRNAs 的影响

目的 探讨索拉非尼治疗前后对肝癌患者血清中肿瘤相关miRNA表达谱改变情况.方法 收集2011年10月～2012年9月在绍兴第二医院及浙江大学医学院附属第一医院接受治疗的6例肝癌患者的血清样本,采用miRNA表达谱芯片检测HCC患者经索拉非尼治疗前后血清中差异表达的miRNAs,并应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）对筛选出的miRNAs进行验证.结果 索拉非尼治疗前后肝癌患者血清miRNA表达谱出现明显改变,16个miRNAs在索拉非尼治疗后肝癌患者血清中表达明显升高,10个miRNAs在索拉非尼治疗后肝癌患者血清中表达明显降低.治疗前肝癌患者血清miR-122相对表达值为（1.07±0.32）,治疗1个月后的miR-122相对表达值为（9.10±1.89）,差异有统计学意义（P＜0.05）,较治疗前表达水平显著上调.结论 索拉非尼治疗前后肝癌患者血清中表达谱发生明显变化,索拉非尼对肝癌相关miRNAs的调控可能是其治疗肿瘤的重要机制之一.     

尿液中miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p检测在前列腺癌中的诊断及临床意义

目的:建立尿液miRNA检测板,作为诊断前列腺癌（PC）的无创性生物标志物。方法:采用miRNAs芯片分析对照1组（6名）及PC1组（18例）中miRNAs表达,并进一步利用qRT-PCR对20名对照2组及59例PC2组（GS2 6组22例,GS2 7组19例,GS28组18例）尿液、血清标本进行差异基因的进一步验证。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析组合诊断模型的准确真实性。结果:获得在PC1组中20个miRNAs差异表达谱,与对照1组相比,miRNA-24-3p及miRNA-222-3p显著表达下调（T=5.79、4.59,均P＜0.05）,用于PC诊断检测。在扩大样本量的PC患者尿液及血清样本中,根据GS分组的GS26、GS27及GS28组中,与对照2组相比,miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p表达水平也都显著下调（t=3.89,P＜0.05）,ROC分析联合诊断模型具有较高的准确度（曲线下面积为0.93,OR=1.37,95% CI:0.92~1.76,P＝0.02）。结论:在尿液、血清样本中建立了miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p组合模型,可作为诊断PC的无创性生物标志物。     

Thl7＆Treg细胞在肺移植后OB的研究进展

肺移植是终末期肺病唯一有效的治疗方式,移植后慢性排斥反应主要表现为闭塞性细支气管炎（obliterative bronchiolitis,OB）,OB是导致肺移植患者长期存活率较低的主要原因,其5年存活率仅有30%~40%。目前临床对OB的治疗效果不佳,因此寻找一种新的治疗策略具有重要的临床意义,然而OB的发生机制至今仍不清楚,探索OB的危险因素与发病机制为防治新策略的研究奠定重要的基础。Th17＆Treg细胞以及相互作用与OB的发生发展存在着密切的联系,Th17＆Treg细胞是CD4＋T细胞的两个亚群,以分泌IL-17为特征的Th17细胞参与一系列炎症反应、自身免疫性疾病以及移植排斥反应的发生发展,而Treg细胞对移植排斥、自身免疫性疾病等具有重要的调节功能。本文就这一方面的研究进展做一简要综述。     

抗结核药物肝毒性对血浆miRNA分子表达的影响

目的探讨抗结核药物肝毒性（ATDH）对患者血浆中微RNA（miRNA）分子表达的影响。方法对3例活动性肺结核患者用药前和发生ATDH后的血浆标本进行miRNA芯片检测。对存在差异性表达的miRNA分子,采用Real Time-PCR进行验证。应用互联网miRNA靶基因预测软件对经证实存在差异性表达的miRNA进行靶基因预测,采用PANTHER蛋白分类系统查找靶蛋白基因本体（GO）功能分类。结果ATDH发生后,血浆中共筛选出22个与用药前比较差异性表达的miRNA分子,表达上凋和下调的miRNA各11个。RealTime-PCR验证结果显示：ATDH发生后,患者血浆中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-378i、miR-125b-5P、miR-1224-5P、miR-194-5P和miR-34a-5P;下调的miRNA有3个,分别为miR-1260a、miR-338．3P和miR-4286。结论ATDH发生患者血浆中存在与用药前比较差异性表达的miRNA分子,这些分子的存在可能与ATDH的发生有关。