兔肌腱细胞和成纤维细胞与人工材料体外联合培养的形态学观察

在兔肌腱细胞、成纤维细胞分离培养的基础上，将冻存复苏的传代细胞与碳纤维、涤纶及几丁质三种材料体外联合培养，观察细胞与材料的相容性以及细胞在材料上的生长情况，比较这两种细胞在三种材料上的生长差异。结果发现，在体外培养条件下，碳纤维与两种细胞的相容性均好，有良好的吸附性；涤纶材料上两种细胞生长均少，可能与其表面结构有关；几丁质明显抑制这两种细胞生长。同时发现，无论肌腱细胞，还是成纤维细胞，在碳纤维上座落的数量都明显优于涤纶、几丁质。三种材料交错在一起时，胶原纤维方向是以碳纤维为轴，形成网状，交织缠绕在材料之间。随时间延长，细胞在单根碳纤维或多根碳纤维上排列均匀，包绕碳纤维，且相互衔接。研究结果，为进一步研究有生命的人工肌腱、韧带提供了依据。     

兔肌腱细胞与成纤维细胞生物学特性研究

为了研究在体外培养条件下，肌腱细胞与成纤维细胞的生物特性，按Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ方法作兔肌腱细胞与皮肤成纤维细胞体外培养，观察细胞形态、贴壁时间及延展时间。采用免疫组织化学的方法对细胞合成胶原的类型进行了测定。结果表明：两种细胞未贴壁前均呈圆形，贴壁后呈梭形或多角形。成纤维细胞的贴壁时间、延展时间较肌腱细胞快；贴壁后细胞群体的排列方向，肌腱细胞群体排列趋于一致、规则，成纤维细胞排列呈不规则。肌腱细胞合成Ⅰ型胶原，成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原。根据细胞的贴壁时间、延展时间、排列方向及合成胶原类型，可以区分肌腱细胞及成纤维细胞。     

人工材料作为细胞体外培养载体的观察实验研究

目的：在体外培养的条件下了解人工材料与细胞的相容性以及细胞在材料上的生长情况。方法：将冻存复苏后的传代细胞在碳纤维、头发、涤纶、几丁质四种材料联合培养，进行光镜、扫描电镜观察。结果：在Ｆ－１２培养基中，碳纤维与成纤维细胞、肌腱细胞相容性均好，有良好的吸附性；眷属材料次之；涤纶材料上两种细胞生长均少，可能与其表面结构有关；几丁质则明显抑制这两种细胞生长。同时发现两种细胞在碳纤维上坐落的数量都明显优于     

体外培养的不同个体人肌腱细胞与皮肤成纤维细胞中胶原表达水平的比较研究

目的 对几种胶原在体外培养的不同个体的人第二代肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达水平进行比较研究,以探讨利用皮肤成纤维细胞作为组织工程肌腱构建种子细胞的可行性.方法 在无菌条件下取外伤病人术中修剪的废弃的肌腱和皮肤组织,经胶原酶和胰蛋白酶消化获取两种细胞,体外培养至第二代后,取两种细胞进行细胞学检测.采用基因芯片和RT-PCR技术对两种细胞几种胶原进行检测及比较.结果 体外培养的第二代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞两种细胞贴壁后形态相似.从基因水平可以看出体外培养的第二代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞在几种胶原的合成方面差异不大.结论 第二代人肌腱细胞与皮肤成纤维细胞的胶原表达基本相似,皮肤成纤维细胞有可能替代肌腱细胞,作为肌腱组织工程新的种子细胞来构建组织工程化肌腱.     

兔自体肌腱细胞与碳纤维联合培养后体内植入实验研究

为了观察兔自体肌腱细胞与碳纤维联合培养后植入体内的改变，采用自体肌腱细胞传代后与碳纤维编织带联合体外培养，植入兔体内，分期观察了肌腱细胞的形态学改变及合成胶原的类型。结果发现：体内植入后肌腱细胞能继续增殖，并能合成Ⅰ型胶原。同时发现肌腱细胞在植入４周后脱离碳纤维支架，在编织带间增殖、合成胶原，其胶原纤维相互衔接，形成了致密的组织结构。桥接肌腱处，胶原纤维互相衔接，表明植入体与受体肌腱已愈合。扫描电镜下观察肌腱细胞在碳纤维间排列整齐、均匀，胶原纤维间相互连接形成网状，纤维条索主体与碳纤维方向一致。透射电镜下细胞核核仁清晰，细胞器丰富。为进一步研究有生命的人工材料提供了依据。     

不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对体外培养兔肌腱细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养兔肌腱细胞增殖的影响,并确定促进肌腱细胞增殖的最佳浓度。方法在体外培养第2代兔肌腱细胞的培养液中分别加入不同浓度(0.5、1、2、5、10、20、30、40、50μg/L)的bFGF,继续培养48 h,噻唑蓝(MTT)法染色,在酶联免疫检测仪上测出不同浓度bFGF组光密度(OD)值。结果与对照组OD均值相比:5、10、20、30、40、50μg/L bFGF组差异均有统计学意义(P<0.05);各组OD均值随bFGF浓度的增加,先逐渐增大(5～20μg/L),达到峰值后又逐渐降低(20～50μg/L)。结论 bFGF有明显促肌腱细胞增殖的作用,且与浓度有一定相关性,即促肌腱细胞增殖的起始bFGF浓度为5μg/L,而20μg/L时可达到促肌腱细胞增殖的最佳浓度。     

表皮细胞、成纤维细胞和几丁质-胶原蛋白复合人工皮的体外构建

目的 探讨几丁质—胶原蛋白膜作为表皮细胞、成纤维细胞培养支架的可能性，体外构建包含双层细胞的复合皮。方法 取健康成人环切包皮，分离成纤维细胞、表皮细胞，分别制成单细胞悬液，将几丁质-胶原蛋白膜(有孔面向上)平铺于60mm培养皿中，首先接种成纤维细胞，培养2d后，将含10％小牛血清的DMEM更换成完全型DMEM，翻转膜，使光滑面朝上，再种植表皮细胞，每日换液。定期观察细胞与材料的粘附、细胞贴壁及其生长增殖情况。结果 几丁质—胶原蛋白膜对成纤维细胞、表皮细胞无明显毒性作用，成纤维细胞培养1d后，细胞贴附于材料支架，细胞胞体较大，呈典型的梭形。加入表皮细胞复合培养2d示表皮细胞贴壁生长，并分化、增殖。复合皮构建2周，网格支架及孔内均有大量细胞生长，膜表面细胞融合成片，表皮细胞分化形成复层。结论 几丁质—胶原蛋白膜对细胞无毒性，有利于培养细胞的粘附、生长。在体外可以构建成功类似生理性皮肤的人工皮肤。     

角质形成细胞和成纤维细胞两步法培养的实验观察

目的应用中性蛋白酶和胰蛋白酶两步消化法原代培养角质形成细胞和成纤维细胞，并进行传代培养。方法取乳鼠背部皮肤，分离出表皮和真皮，加入中性蛋白酶和胰蛋白酶消化，进行原代和传代培养，通过倒置显微镜观察细胞的生长情况。结果原代培养的角质形成细胞和成纤维细胞长成单层且分布均匀；传代培养后排列规律、生长良好。结论两步消化法可以培养出角质形成细胞和成纤维细胞，并且比以往的培养方法更加方便快捷。     

人羊膜细胞外基质与成纤维细胞体外培养的实验研究

目的通过人羊膜细胞外基质(HA-ECM)与成纤维细胞体外培养,观察成纤维细胞在HA-ECM上的生长特性,以及胶原原纤维产生情况,为使HA-ECM成为皮肤组织工程化的载体打下基础.方法将不同浓度的成纤维细胞种植于HA-ECM上进行体外培养,通过倒置显微镜、光镜及透射电镜,观察细胞在HA-ECM的生长、排列,以及细胞的粘附和胶原原纤维产生情况.结果梭形的成纤维细胞在HA-ECM上生长良好,呈放射状或平行排列;组织切片发现HA-ECM上有较多梭形细胞附着,细胞排列紧密;电镜下见成纤维细胞胞膜基底部向HA-ECM内伸出数个突起,细胞与羊膜基质粘附相当牢固,胞外有较多胶原原纤维堆积. 结论种植于HA-ECM的成纤维细胞有一个最适宜的细胞浓度(3.5×106 个/ml);HA-ECM具有良好的支架和渗透作用,成纤维细胞在其上生长、粘附良好,胶原合成、分泌旺盛,HA-ECM是一种较理想的成纤维细胞载体.     

组织工程人工肌腱的实验研究

目的 为构建组织工程肌腱积累经验。方法 应用显微外科技术剥除人胚肌腱外膜组织后,经过胰蛋白酶及胶原酶分步消化分离出人胚腱细胞,使用Ｆ１２培养液将其传代培养。该细胞贴壁生长,接触抑制的性质。细胞群体倍增时间大致为４ｄ。通过冻存后复苏的细胞继续培养后发现,冻存对其生长、形态、遗传学等特征无明显影响。经测定培养细胞分泌的羟脯氨酸含量,证实培养的人胚腱细胞与体内腱细胞同样具有合成胶原的能力,并且这种能力不     

人工肌腱的研究进展

人工材料的研究及应用已越来越被人们所关注重视，本世纪中科研工作者及临床医生的不断努力和探索，现人工材料不仅在发现和应用都取得了长足的进展和突破。尤其是人工肌腱的发现和研究更是实现了肌腱替代材料的突破和飞跃。     

联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞增殖和形态的影响

目的:观察体外联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞形态和增殖的影响,为研究成纤维细胞和平滑肌细胞生物学特性和相互关系以及体外构建含此两种细胞的组织工程皮肤提供理论和实践基础。方法:在体外分别分离培养成纤维细胞和平滑肌细胞并常规传代培养。模拟组织工程皮肤的结构及成纤维细胞和平滑肌细胞间的相互影响途径,按照不同比例(平滑肌细胞:成纤维细胞=1:1,1:2,1:3)建立以胶原凝胶为基质的成纤维细胞与平滑肌细胞联合培养模型。应用荧光标记、组织学观察和MTT法对平滑肌细胞的形态和代谢进行研究。结果:联合培养模型法可以有效地建立起成纤维细胞和平滑肌细胞的相互影响模式。1:1组的成纤维细胞对联合培养的平滑肌细胞增殖有促进作用,1:3组的促增殖作用则不明显。结论:1:1联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞增殖有促进作用,对它们体外培养和扩增以及相互关系的研究对阐明这两种细胞组合作为真皮替代物种子细胞具有重要的意义。     

成纤维细胞成骨潜能的体外培养研究

本研究采用新西兰种家兔皮肤的成纤维细胞进行体外培养，通过活体相关显微缩时录像，体视显微镜摄影，ＨＥ染色以及组织化学染色等技术做系列观察。发现成纤维细胞在体外培养条件下，不仅能产生粘多糖，胶原等基质成分，而且还能提供钙盐沉积。培养中期，成纤维细胞培养液显示Ａ１Ｐ阳性反应；培养后期，培养液与成纤维细胞都可显示Ａ１Ｐ阳性反应。     

转化人胚肌腱细胞的体外培养及生物学特性研究

目的 研究经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞的生物学特性,探讨细胞生长特性与体外培养条件改变的关系,方法 取人胚肌腱细胞和经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞,进行体外培养,对细胞进行形态学,超微结构及一般特征的观察。在不同培养条件下进行生长曲线绘制,平板克隆实验和软琼脂培养以及免疫组织化学法胶原染色,结果 在正常培养条件下,人胚肌腱细胞和转经人胚肌腱细胞的生长性状几乎无差异,且冻存复苏并不     

许旺细胞在人工神经支架材料上三维培养的体外活性研究

目的　探讨许旺细胞在组织工程支架材料上体外三维培养的生长活性。　方法　对聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝支架进行生物学修饰 ,把原代培养的许旺细胞悬液接种在支架材料上 ,用MTT法、单细胞凝胶电泳法及显微分光光度和显微图像联合法测定许旺细胞的生长活性。　结果　聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝支架上的许旺细胞各项活性指标与正常培养的许旺细胞比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,实验组许旺细胞DNA无损伤。　结论　聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝适于构建具有许旺细胞活性的组织工程化人工神经。     

组织工程肌腱种子细胞的比较研究

目的 探讨猪肌腱细胞、真皮成纤维细胞、骨髓问充质干细胞中何种细胞最适宜作为体外组织工程化肌腱构建的种子细胞.方法 收集猪肌腱细胞、真皮成纤维细胞及骨髓间充质干细胞,以50×106个细胞密度均匀接种于圆柱状聚羟基乙酸(Polyglycolic acids,PGA)上,按细胞种类分为三组,每组n=3,体外培养,并于1、2、6周取材,进行组织学检测、免疫组化检测、胶原定量测定和大体观察.结果 细胞-PGA复合物体外培养时有细胞外基质产生,六周时肌腱细胞组产生胶原量最多,明显优于真皮成纤维细胞和骨髓间充质干细胞(p＜0.01).免疫组化显示形成的主要为Ⅰ型胶原.结论 体外构建组织工程肌腱时肌腱细胞合成胶原能力最强,在现有条件下是体外构建组织工程肌腱的最佳种子细胞.     

牛肌腱复合胶原与人牙周膜成纤维细胞培养的实验研究

目的　观察牛肌腱复合胶原三维支架材料 (tendon mixed extraction of bovine collagen,t MEBC)与人牙周膜成纤维细胞的生物相容性 ,探讨其应用于牙周组织工程的可行性。　方法　胎牛肌腱经脱细胞、冷冻 -干燥方法构建复合胶原三维支架载体 ,取 4～ 6代人牙周膜成纤维细胞 (human periodontal ligament fibroblasts,HPDL Fs) ,接种浓度 5× 10 6 / ml与 t MEBC复合材料共培养 ,于培养第 1、3、5及 10天 ,细胞计数法了解细胞附着及增殖情况 ;培养第 5、10天 HE染色、扫描电镜行形态学观察。　结果　 t MEBC具有良好的多孔网状结构 ,HPDL Fs黏附良好 ,复合培养 1d细胞密度达 0 .5 5 6× 10 4 / ml,随培养时间延长细胞增殖明显 ,培养第 10天细胞密度达 3.94 4× 10 4 / ml;组织学检测显示细胞均匀分布于材料内部 ,形成良好的细胞材料复合体。　结论　 t MEBC具有良好的生物相容性 ,可作为支架材料复合HPDL Fs应用于牙周组织工程研究。     

高能震波对体外培养的大鼠成骨细胞和成纤维细胞的影响

目的 探讨高能震波(HESW)对成骨细胞和成纤维细胞的直接作用效应及其促进骨折愈合的机理。方法 对体外培养的上述两种细胞悬液分别施以不同剂量HESW，检测细胞的存活率、贴壁率及增殖能力，结果随着HESW剂量的增加，各实验组细胞的存活率、贴壁率及增殖能力逐渐降低。在相同的剂量，成纤维细胞组的上述各项指标均明显低于成骨细胞组(P＜0.05）。结论 HESW对成纤维细胞和成骨细胞均有杀伤和抑制生长怍用，日成纤维细胞对HESE的损伤更为敏感。这种敏感性不同可能使敏感性较差的成骨细胞在体内可获得更好的生长条件，而有利于骨折愈合。     

维甲酸对体外培养成纤维细胞超微结构的影响

为阐明维甲酸治疗瘢痕的作用机理，观察了维甲酸对体外培养成纤维细胞超微结构的影响，证明维甲酸对成纤维细胞合成胶原有抑制作用。提示维甲酸抑制胶原生成可能是治疗瘢痕作用机制的一个方面。     

自体及异体皮肤肌腱细胞中生长因子分子水平的差异研究

目的:对自体及异体皮肤成纤维细胞和肌腱细胞的生长因子在分子水平的表达差异进行研究.方法:体外培养自体及异体人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,用基因芯片的方法对两种细胞的生长因子进行检测及比较,并用RT-PCR的方法进一步验证.结果:自体皮肤、肌腱细胞生长因子的分子水平表达无差异,而异体皮肤、肌腱细胞生长因子分子水平的表达略有差异.结论:自体皮肤成纤维细胞与肌腱细胞的生长因子表达相似,证实两种细胞具有同源性,自体皮肤成纤维细胞可以成为构建组织工程化肌腱的种子细胞.而异体皮肤成纤维细胞和肌腱细胞的生长因子表达略有差异,可能为个体差异所致.