鬼臼毒素衍生物OAMDP诱导HeLa细胞凋亡

鬼臼毒素衍生物OAMDP对人宫颈癌HeLa细胞显示了细胞增殖抑制活性,并呈现一定的时间和剂量的依赖性,对其作用机制进行初步研究。Hoechst 33258染色荧光显微镜观察发现OAMDP能诱导HeLa细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;Annexin Ⅴ-FITC/PI荧光双染流式细胞术检测亦证实OAMDP可以诱导HeLa细胞发生凋亡;Rhodamine123染色线粒体膜电位检测发现OAMDP会引起HeLa细胞线粒体膜电位的下降。Western Blot分析显示OAMDP上调HeLa细胞凋亡相关蛋白Bax,下调Bcl-2的表达。此外OAMDP能使HeLa细胞阻滞于S期。总之,OAMDP能够诱导HeLa细胞凋亡和S期阻滞,可能成为一种新型的抗肿瘤药物。     

川陈皮素诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的研究

目的：探讨川陈皮素（5，6，7，8，3′4′-hexamethoxyflavone）促非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用。方法：以不同浓度的川陈皮素作用于A549细胞，分别用细胞生长曲线、集落形成抑制实验研究川陈皮素对A549的增殖抑制作用，Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态变化，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，流式细胞术观察细胞周期改变。结果：生长曲线提示川陈皮素对A549细胞的抑制作用呈明显的时效和量效关系；集落形成抑制实验表明：药物浓度10μg/mL～40μg/mL对A549集落形成抑制率为10％～50％。Hoechst33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化；DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型DNA梯状务带。流式细胞仪检测到细胞周期阻滞于G2／M期，G0／G1期细胞明显减少；随着刑量的增加凋亡率明显增高。结论：川陈皮素可以诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡。     

大肠杆菌致U937细胞凋亡的研究

目的 探讨大肠杆菌感染对人U937细胞凋亡的诱导作用。方法 以细胞形态学观察及Annexin V／PI双染流式细胞仪检测分析大肠杆菌感染U937细胞后，不同作用时间U937细胞的凋亡情况。结果 Hoechst 33258染色荧光显微镜下观察：大肠杆菌感染20min及30min后偶见细胞凋亡，感染60min及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变，并可见凋亡小体；AnnexinV／PI双染可见U937细胞凋亡百分率随大肠杆菌感染时间延长而增高。感染60min及90min时，细胞凋亡率与其它组相比明显增高，差异有显著性（P〈0．001）。结论 大肠杆菌以时间依赖方式诱导人类U937细胞凋亡。     

大肠杆菌感染对人巨噬细胞系U937凋亡的影响

目的：探讨大肠杆菌（E.coli）感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系.方法：以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测及Hoechst 33258荧光染色,Giemsa染色等细胞形态学观察为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用.结果：Giemsa染色：E.coli感染10,20 min（U937：E.coli=1：20）后偶见细胞凋亡,感染30,60及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变,并可见凋亡小体;Annexin V FITC/PI双染可见U937细胞凋亡百分率随E.coli感染时间的延长而增高.感染30,60及90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高,有显著性差异（P＜0.001）.Hoechst 33258荧光染色结果表明当细胞与细菌浓度比较低时（1：10）即可引起部分U937细胞发生凋亡,U937细胞凋亡百分率随E.coli感染剂量的增加而增加,且Hoechst 33258荧光染色及流式细胞仪二种方法所得结果一致.结论：E.coli以时间和剂量依赖方式诱导U937细胞凋亡.     

蛇床子素对人肺鳞癌NCI-H520细胞系增殖、凋亡的影响

目的 探讨天然化合物蛇床子素对肺鳞癌NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT比色法检测蛇床子素对NCI-H520细胞增殖的影响;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测诱导细胞凋亡;Hoechst 33342核染色观察细胞核的形态变化.结果 蛇床子素对NCI-H520有明显的增殖抑制作用,且呈现明显时间剂量依赖性;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法结果显示蛇床子素可以诱导细胞凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性;药物处理组细胞核经Hoechst 33342染色可见染色质边集、核碎裂等典型的细胞凋亡改变,而空白对照组没有相应的变化.结论 蛇床子素可以抑制NCI-H520细胞的增殖、诱导细胞凋亡.     

土槿皮乙酸作用PI3K/Akt通路诱导HeLa细胞凋亡

 【目的】探讨土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的作用。【方法】通过Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核固缩和染色体碎片等形态学变化，MTT法测定土槿皮乙酸对HeLa细胞的生长抑制作用，采用流式细胞仪和免疫印迹实验检测MTT法测定HeLa细胞的生长凋亡情况及其相关蛋白的表达变化。【结果】 土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用，并能诱导细胞发生凋亡，随着药物浓度的增加和作用时间的延长，细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高。土槿皮乙酸抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中，细胞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B (Akt)、糖原合酶激酶3（GSK3）、FKHRL (Forkhea like family)表达水平及活性显著降低，导致抑制凋亡抑制因子bcl-2受到表达抑制，同时Bax表达增加。【结论】土槿皮乙酸能够通过多条信号途径促进人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，通过抑制PI3K/Akt的活性是其体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡和抑制增值的重要作用机制。     

塞来昔布与茶多酚合用对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究塞来昔布与茶多酚合用对三阴乳腺癌MDA—MB-231细胞增殖及凋亡的影响。方法：MTT比色法检测塞来昔布、茶多酚单药及两者联合用药对乳腺癌MDA—MB-231细胞增殖的影响。Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学改变。流式细胞术Annexin V—FITC／PI双染检测细胞凋亡率。结果：MTT结果显示塞来昔布（10umol／L）与不同浓度茶多酚（6．25、12．5、25、50、100ug／mL）单用及合用均对MDA—MB-231细胞产生增殖抑制作用,且联合用药组的抑制率高于各单用组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。Hoechst33258荧光染色结果显示塞来昔布（10umol／L）与茶多酚（50、100ug／mL）合用组的凋亡细胞较单用组明显增加,出现典型凋亡形态学特征。流式细胞术进一步证明两药合用使凋亡率显著增加。结论：塞来昔布与茶多酚合用具有显著抑制三阴乳腺癌MDA—MB-231细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。     

一种特异性检测细胞凋亡和细胞周期的新方法

目的 应用流式细胞技术，建立一种特异性的同时检测细胞凋亡和细胞G0／G1期、S期以及G2／M期各时相百分比的快速测定方法。方法采用Annexin V—FITC/PI双标记染色凋亡细胞，再在该染色样品基础上，进一步地打孔，同时加入高剂量的DNA染色试剂进行活细胞DNA饱和染色，流式细胞仪检测分析。结果 可在同一份细胞样品上获得特异性较强的细胞凋亡、细胞坏死和细胞周期各时相的百分数变化。结论 该方法测量结果准确，检测时间短，人为影响因素少，节约细胞样品用量，为细胞生物学、肿瘤学研究，尤其是细胞动力学研究提供了一种新的、更为实用的分析方法。     

C pd5抗宫颈癌作用的研究磁

目的：观察2‐（2‐巯基乙醇）‐3‐甲基‐1,4‐萘醌（Compound 5,Cpd5）对人宫颈癌 HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑蓝（M T T ）法观察Cpd5对HeLa细胞的生长抑制作用,Annexin V／PI双标记流式细胞术检测Cpd5对 HeLa细胞的凋亡诱导,Hoechst‐33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态。结果10、20、30、40、50μmol／L Cpd5处理 HeLa细胞48 h ,生长抑制率分别为4.23、13.11、35.13、51.37、79.90％。不同时间点（12、24、48和72 h ）检测,细胞生长抑制率存在剂量‐时间依赖关系。流式细胞术检测,30μmol／L Cpd5处理12、24和48 h后,细胞凋亡率分别达7.15、16.07、44.16％;50μmol／L组的细胞凋亡率明显高于30μmol／L ,且随时间增加而显著增加。结论 Cpd5能以剂量－时间依赖的方式抑制HeLa细胞增殖并诱导调亡,是潜在的抗宫颈癌新药。     

蓝舌病毒HbC3株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式的研究

目的:研究蓝舌病毒湖北株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式及其作用机制。方法:原位末端标记(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡情况;激光扫描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性变化。结果:凋亡染色未见明显凋亡细胞,共聚焦检测见细胞核膜不完整,染色质分散,有的凝集在核膜周围,部分染色质外溢,内质网分散,混浊不清,细胞与细胞之间分界不清;萤光照度仪检测酶活性可见Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性均无明显变化。结论:蓝舌病毒湖北株诱导HeLa细胞胀亡而发挥其抑瘤作用。     

塞来昔布诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的研究

目的探讨塞来昔布体外诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的作用。方法设立空白对照组(培养液中不加任何药物)及塞来昔布5、25、50、100、150μmol.L-1 5个剂量组,作用时间分为24、48、72 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察塞来昔布不同浓度和作用时间对QGY-7701细胞生存率的影响,选择合适的作用时间和3个剂量再做其他凋亡方法的检测;采用Hoechst 33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化;采用双荧光染色(AnnexinV-EGFP/PI)流式细胞检测、末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)检测、DNA含量分析(检测细胞周期)等方法多指标检测细胞凋亡率。结果通过Hoechst 33258染色可以从细胞形态上看出塞来昔布诱导QGY-7701细胞凋亡,而Annexin V-EGFP/PI流式细胞检测、TUNEL检测、细胞周期及MTT检测结果显示随着塞来昔布浓度升高和作用时间延长,凋亡率升高(P<0.05,P<0.01)。结论塞来昔布有诱导肝癌细胞QGY-7701凋亡,抑制其生长的作用,具有治疗肝癌的潜在功能。     

弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响

目的: 探讨不同数量弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响。方法: 24孔板培养HeLa细胞16 h,各孔接种不同数量弓形虫速殖子继续培养4 h,在培养液中加入终质量浓度为0.5 μg/mL放线菌素D诱导凋亡,于加放线菌素D后8、12、24、36 h收集细胞,采用Hoechst 33258染色法和Annexin V FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率。结果： 当虫体量/细胞量（MOI）≤1时,弓形虫感染表现为抑制放线菌素D诱导的HeLa细胞凋亡;随着虫体数量增加（MOI＞1）和感染时间延长（≥24 h）,虫体感染则表现为促进HeLa细胞凋亡。结论： 弓形虫感染可影响体外培养的HeLa细胞的凋亡,影响程度与感染虫体数量相关。     

模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响

目的：观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响。方法：组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC）,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养48h,同时设1g对照静置培养。采用Hoechst33258染色,荧光显微镜观细胞凋亡的形态学改变;采用Annexin V—FITC试剂盒对细胞染色,以流式细胞仪进行细胞凋亡检测。结果：回转模拟失重48h后,Hoeehst33258染色结果发现细胞凋亡明显增加;流式细胞仪定量结果表明回转48hPMVEC的凋亡率为19．85％,显著高于同步对照组PMVEC的凋亡率13．72％（19．85％±1．29％vs13．72％±1．15％,P〈0．01）。结论：48h回转模拟失重可明显诱导PMVEC发生凋亡。     

和厚朴酚对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导其凋亡的作用。方法利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时间下对Hela细胞增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色和DNA ladder检测和厚朴酚作用下Hela细胞的凋亡。结果MTT结果显示和厚朴酚可明显抑制Hela细胞的增殖,且抑制率存在剂量和时间依赖性;流式结果表明10μg/mL和20μg/mL和厚朴酚作用细胞24h后,凋亡细胞的比例分别为22.5%和62.2%,而对照组为8.7%;和厚朴酚处理过的Hela细胞,经Hoechst33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯状条带。结论和厚朴酚具有抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡的作用。     

基因重组白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对人肝癌细胞系SSMC7721增殖、凋亡和侵袭的影响

[目的]研究基因重组白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对SSMC7721细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。[方法]用Hoechst33258试剂盒染色,观察Adinbitor对细胞形态的影响;Western-blotting检测浓度梯度Adinbitor作用下Caspase-3表达情况,分光光度法考察Caspase-3活化程度;MTT法检测Adinbitor对细胞增殖的作用,Transwell及Matrigel检测其对细胞侵袭的影响。[结果]Hoechst染色显示Adinbitor可明显促进细胞凋亡。在Adinbitor作用下,胞浆Caspase-3含量减少,活化程度增高,活化倍数2.24－3.85。Adinbitor可明显抑制SSMC7721细胞增殖,IC50为0.296μmol,也可抑制细胞侵袭能力。[结论]基因重组Adinbitor可明显抑制SSMC7721细胞的增殖及侵袭,并且可通过活化Caspase-3促进细胞凋亡。     

和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响

 【目的】 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响&#65377;【方法】 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3&#65380;Caspase-7 mRNA水平变化&#65377;【结果】 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关&#65377;HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显&#65377;【结论】 HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖&#65380;诱导U937细胞凋亡&#65377;     

骨形态发生蛋白2对体外培养结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨骨形态发生蛋白2对体外培养的结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法重组人骨形态发生蛋白（rhBMP-2）不同浓度（分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml）、不同时间干预细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）检测rhBMP-2对细胞增殖的影响;Hoechest 33342染色观察细胞形态变化;An-nexinV/PI染色流式细胞仪分析细胞凋亡。结果BMP-2对HT-29细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性,100 ng/ml浓度24 h内抑制作用最强。随时间延长抑制作用无显著性差异。BMP-2作用24 h后Hoe-chest 33342染色可见核固缩、核碎裂等细胞凋亡表现增加明显。AnnexinV/PI染色流式细胞仪分析显示作用24 h后细胞凋亡较对照组有显著性差异。结论BMP-2在一定作用时间、浓度条件下对结肠癌HT-29细胞有明确的抗增殖促凋亡作用。     

黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及可能机制。方法:采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测黄芩素对HeLa细胞生长的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法观察黄芩素对HeLa细胞凋亡的诱导作用;比色法测定黄芩素对HeLa细胞内caspase-3活性的影响。结果:不同浓度黄芩素作用24、36、48h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05~P<0.01);黄芩素作用24h后,HeLa细胞凋亡率增加(P<0.01),细胞内caspase-3活性增强(P<0.05~P<0.01)。结论:黄芩素能抑制HeLa细胞生长,其机制可能与诱导细胞凋亡及增强caspase-3活性有关。     

胡桃醌联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的促凋亡作用及其机制

目的：探讨胡桃醌与顺铂联合应用对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的机制,阐明其对相关信号转导通路的作用。方法：选取处于对数生长期的HeLa细胞,将其分为对照组、胡桃醌组、顺铂组和胡桃醌＋顺铂组（联合用药组）。采用MTT法观察不同时间点HeLa细胞的增殖抑制率;Hoechst 33258染色法荧光显微镜下观察细胞凋亡形态;Westernblotting法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase-3及PI3K/AKt通路中AKt和pAKt表达水平。结果：MTT法,各用药组HeLa细胞增殖于24、48和72h均可被抑制,与对照组比较,胡桃醌组及顺铂组对细胞的抑制较明显,而联合用药组抑制更加显著;与单用药组比较,联合用药组对细胞的抑制更显著。Hoechst 33258染色,胡桃醌组和顺铂组在处理细胞12 h后,出现明显的凋亡细胞形态,联合用药组该现象更明显。Western blotting检测,与对照组比较,12 h后胡桃醌组和顺铂组HeLa细胞中Bcl-2和pAKt蛋白表达水平明显降低,而Bax、Cleave-caspase-3和AKt蛋白表达水平明显升高,联合用药组上述变化更加明显。结论：胡桃醌和顺铂联合应用可通过抑制PI3K/AKt通路,进而促进HeLa细胞凋亡。