实时荧光定量聚合酶链反应在丙型肝炎检测中的临床应用价值分析

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）在检测丙型肝炎病毒（HCV）方面的差异。方法采用随机抽样分组方法,在2011年6月-2012年6月于我院就诊的HCV患者与同期在我局进行健康体检的正常人群中,各抽取90例,分为HCV组（A组）与正常对照组（B组）。对每一组样本,分别采用FQ-PCR和ELISA法,进行HCV-RNA和抗-HCV检测。结果 A组90例HC患者中,FQ-PCR和ELlSA分别检出阳性82例和73例,阳性率分别为91.1%和81.1%;B组90例健康对照组样本中,FQ-PCR和ELISA分别检出阴性90例和87例,阴性率分别为100%和96.7%。结论在检测HCV方面,FQ-PCR比ELISA更具灵敏性和特异性,其临床应用价值更高,但ELISA也有操作简便,费用与耗时均较低的优点,在实际应用中可考虑两种方法联合检测,在提高了出入境人员和患者HCV的诊断准确率的同时,又可以减轻患者经济负担。     

实时荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究

目的研究CXCR4、CTGF、MMP-1、IL-11、MST1R、ETV-1 6种基因在鼻咽癌细胞5-8F与骨共培养前后的表达情况,分析这些基因在鼻咽癌骨转移中的作用。方法采用基于SYBR GREENⅠ法的实时荧光定量RT-PCR检测5-8F细胞与骨共培养前后骨转移相关基因的表达情况。结果5-8F细胞与骨共培养后CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1的表达水平较共培养前差异有显著性(P<0.05),均表达上调;MMP-1、IL-11则差异无显著性。结论实时荧光定量RT-PCR能够敏感、特异地检测出鼻咽癌细胞在与骨组织共培养前后的mRNA的表达变化,方法准确可靠,操作方便;CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1有可能成为判断鼻咽癌骨转移的潜在标志物。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床价值

目的：探讨荧光定量PCR（ FQ-PCR）检测乙型肝炎病毒（ HBV）-DNA的临床意义。方法：采用FQ-PCR检测265例乙型肝炎（乙肝）患者和150名健康体检者的血清HBV-DNA,并将结果与酶联免疫吸附试验测定的乙肝血清标志物进行比较。结果：不同血清标志物模式的各组均可检出 HBV-DNA 阳性,其中 HBsAg、HBeAg、HBcAb 阳性组和 HBsAg、HBeAg 阳性组的HBV-DNA阳性率和病毒拷贝数均显著高于其他血清标志物模式组和对照组（P〈0.01）。 HBV所致不同疾病类型的HBV-DNA阳性率差异均无统计学意义（P〉0.05）,但急性乙肝病毒拷贝数均明显高于其他疾病（P〈0.01）。结论：FQ-PCR检测HBV-DNA可以直接反映是否存在HBV感染,判断病毒的复制能力和传染性,指导临床用药和观察疗效,具有重要的临床意义。     

实时荧光定量RT-PCR检测肝癌组织中miR-122a及miR-224的表达

目的 运用实时荧光定量RT-PCR方法分析miR-122与miR-224两种miRNAs在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨以miRNAs为靶点在早期肝癌中的临床诊断意义.方法 采用基于2(-△△ACT)的实时荧光定量RT-PCR法对35例肝癌组织及癌旁组织的miR-122a及miR-224进行了定量分析,结果经由Noahernblot验证.结果 与正常组织相比,在所有的被检肝癌组织中,均发现了miR-122a有不同程度的表达下调(P<0.01),而上述肝癌组织中的miR-224的定量结果显示该miRNA表达显著增加(P<0.001).结论 HCC组织中存在上述两种miRNAs表达水平的改变.实时荧光定量RT-PCR法为早期、准确的在临床上检测肝组织癌变提供了新的思路.     

实时荧光定量PCR在肝炎检测中的应用

目的:探讨实时荧光定量PCR在肝炎尤其是乙型肝炎(乙肝)检测中的应用。方法:对450例急、慢性乙肝患者,采用经酶联免疫吸附试验检测血清,并按血清学标志分为三组,并对所用患者血清实时荧光定量PCR检测。结果:不同血清学标志模式的实时荧光定量PCR检测阳性率分别为95.95%、31.47%、52.20%,三组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:实时荧光栋梁PCR检测可以为乙肝病毒感染诊断、治疗及预后判断提供客观依据。但对于病毒非复制感染不能有效检测,不可在肝炎检测中完全替代血清标志物检测。     

实时荧光定量RT-PCR检测大肠癌腹腔冲洗液游离癌细胞的初步研究

目的 运用实时定量荧光RT-PCR方法检测大肠癌病人腹腔中脱落的游离癌细胞，并探讨其临床意义。方法 从2003年5月至2004年1月，在日本爱知癌症中心采集81例手术大肠癌腹腔冲洗液标本，从mRNA提取cDNA，用两种引物合成（随机引物和寡核苷酸引物）进行CEA和CK-20 mRNA的定量分析。结果 CEA和CK-20mRNA的值与肿瘤的侵润度，肿瘤的期别，淋巴结转移呈显著相关；CEA和CK-20的敏感性和特异性分别为：80％，100％和100％，100％，而常规的细胞学检查只有33％和100％。结论 结果提示CEA和CK-20mRNA的定量分析是研究大肠癌腹腔冲洗液中脱落癌细胞的敏感和特异的指标。     

TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测外周血CK19 mRNA

目的:应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术,建立定量检测CK19 mRNA的方法. 方法:采用RT-PCR从胃癌细胞中克隆CK19片段(230 bp),装入pMD 18-T Simple载体.纯化质粒,制备荧光定量PCR标准品.应用LightCycle荧光定量PCR仪检测标准品、30例正常人外周血和5例肿瘤组织CK19 mRNA. 结果:PCR扩增及测序均证实CK19 cDNA片段重组到pMD 18-T载体上,建立了稳定的检测CK19 mRNA的标准,即设定CT值在35个循环之内,检测结果低于100个拷贝数量级为阴性标本.结论:采用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术检测外周血CK19 mRNA是一种稳定可靠的方法.     

实时荧光定量PCR技术检测iASPP基因在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 建立iASPP基因的实时荧光定量检测方法,并观察原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中iASPP mRNA的表达情况,分析临床病理学因素在肝癌iASPP基因和扩增中的作用.方法 对46例病理学证实的HCC患者,利用荧光定量RT-PCR检测肝癌组织及癌旁组织iASPP mRNA...     

PD-L1基因实时荧光定量RT-PCR法的建立及在大鼠肝移植中的应用

目的 建立real-time RT-qPCR(实时荧光定量RT-PCR)检测大鼠PD-L1的方法,应用该方法检测大鼠移植肝中PD-L1 mRNA的水平.方法 两袖套法复制大鼠肝移植耐受组(BN→BN)及排斥组( LEW→BN)模型,术后7d处死受体,检测肝功能ALT和AST水平,HE染色病理分析排斥程度,Trizol法提取移植肝总RNA并反转录为cDNA;选β-actin作为内参,复制SYBR Green I real-time RT-qPCR检测法.利用该方法检测移植肝中PD-L1和β-actin的初始模板量,PD-L1/β-actin计算PD-L1 mRNA的相对表达量.结果 异基因LEW→BN组出现急性排斥反应,ALT、AST排斥组均高于耐受组(均P＜0.05).RAI评分排斥组高于耐受组(均P ＜0.05).PD-L1扩增效率为98.8％,相关系数为0.996;溶解曲线为特异单峰;变异系数小于2.0％;移植肝中PD-L1 mRNA相对表达为耐受组[(0.95±0.10)×10-2]高于排斥组[(0.81±0.09)×10-2],差异有统计学意义(t=2.62,P=0.026).结论 成功建立了大鼠源PD-L1的real-time RT-qPCR检测方法,耐受组PD-L1的高表达提示其可能有利于大鼠移植肝的存活,为研究肝移植免疫耐受奠定了理论基础.     

实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体的比较

目的：比较实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体水平的敏感性及准确率。方法：收集108例孕前筛查妇女,同时采用实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测外周血巨细胞病毒-IgM抗体水平,并对这两种检测方法的阳性率进行比较。结果：实时荧光定量-PCR法阳性率为74%,酶联免疫吸附法为57%,两者差异有统计学意义（P〈0.05）;18例荧光定量-PCR法阳性的妇女血清巨细胞病毒-IgM拷贝数低于10-4/ml。结论：实时荧光定量-PCR与酶联免疫吸附法相比,对巨细胞病毒-IgM抗体检测具有较高的敏感性和准确率,值得临床推广使用。     

探讨丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）和丙型肝炎病毒核酸（HCV-RNA）荧光定量检测在丙型肝炎诊断中的临床应用价值

目的探讨丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）和丙型肝炎病毒核酸（HCV-RNA）荧光定量检测在丙型肝炎诊断中的临床应用价值。方法对我院96例丙型肝炎患者同时应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测丙型肝炎抗体（抗-HCV）,应用实时荧光定量法(FQ-PCR)检测HCV-RNA。结果FQ-PCR检测阳性率为73.96%(71/96),漏检率为26.04%。ELISA法检测阳性率为75.0%（72/96）,漏检率为25%。两种方法联合检测敏感性为92.71%(89/96),漏检率为7.29%（7/96）。结论两种方法联合检测,可实现优势互补,降低丙型肝炎病毒的漏检率,有利于疾病的早期诊断,有利于“窗口期”感染的筛选并提高输血安全。     

实时荧光RT-PCR法在手足口病患儿病原检测中的应用

目的:了解核酸检测(RT-PCR)法在抚顺市手足口病患儿病原谱调查中的应用价值,为疾病防控提供依据。方法:在全市范围内收集2013年和2014年疑似手足口病患儿咽拭子、肛拭子标本,使用人肠道病毒通用引物、肠道病毒71型(EV71)引物和萨奇病毒A组16型(Cox A16)引物,采用实时荧光RT-PCR方法进行病原核酸检测。结果:2013年检测标本461份,其中EV71阳性16份,Cox A16阳性316份,其他肠道病毒阳性46份。2014年检测标本253份,其中EV71阳性112份,Cox A16阳性57份,其他肠道病毒阳性35份。两年标本肠道阳性率平均为81.51%,其中EV71型和Cox A16型占阳性标本总数的86.08%。结论:实时荧光RT-PCR方法因具有操作简便、快速和特异性高的优点,非常适合于手足口病患儿病毒核酸的快速分型。EV71型和Cox A16型肠道病毒是抚顺市近两年引起手足口病患儿感染的主要病原体。     

荧光定量聚合酶链反应在梅毒患者诊断中的应用价值

目的对比分析快速血清反应(RPR)、梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)与荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在梅毒实验诊断中的应用价值,探究FQ-PCR诊断梅毒的相关优势。方法选取2016年6月‐2018年6月该院接收的70例经病史、临床症状及血清学试验确诊的70例梅毒患者为病例组,同期接收的20例非梅毒患者为对照组。所有研究对象均给予RPR、TP-ELISA和FQ-PCR 3种检测方式,比较3种检测方式的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。结果 90例研究对象,RPR法检测出阳性49例,TP-ELISA法52例,FQ-PCR法测出阳性65例。FQ-PCR检测梅毒的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及诊断准确率分别为92.9%、95.0%、98.5%、79.2%和93.3%,RPR分别为70.0%、30.0%、77.8%、22.2%和61.1%,TP-ELISA分别为74.3%、45.0%、82.5%、33.3%和67.8%,FQ-PCR显著高于RPR与TP-ELISA(P 0.05)。结论应用FQ-PCR检测梅毒具有较高的灵敏度、特异度和准确度,值得临床上推广应用。     

实时荧光定量RT-PCR与ELISA检测孕妇血清风疹病毒的比较分析

目的应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术定量检测孕妇血清标本中风疹病毒RNA,并与ELISA法比较其敏感度与特异度,为孕妇早期风疹病毒检测提供迅速准确的方法。方法收集126例已确诊风疹病毒阳性孕妇血清标本与107例女性健康查体者血清标本,同时进行实时荧光定量RT-PCR核酸检测与风疹病毒ELISA法IgM抗体检测,比较两种方法的敏感度与特异度。结果以细胞培养法为金标准,实时荧光定量RT-PCR法敏感度为92.9%,特异度为98.1%。ELISA IgM抗体法的敏感度和特异度分别为97.6%,86.9%。两种方法的敏感度无显著性差异（p〉0.05）,实时荧光定量RT-PCR法的特异度明显高于ELISA IgM抗体法（p〈0.01）。结论实时荧光定量RT-PCR简便快捷、敏感性高、特异性高、定量准确,在临床风疹病毒基因检测中具有很大的应用潜力。     

登革热病毒RNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的 建立TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法,测定登革热病毒(DV)及DV病毒的RNA拷贝数.方法 利用TaqMan探针,建立实时荧光定量RT-PCR方法,通过对登革热病毒RNA定量外标准品的定量分析,优化反应体系.检测TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性.结果 该方法检测灵敏度可达1×103 copies/mL,特异性及重复性良好,对同一样品进行5次重复检测,其循环阈值的平均标准偏差为O.792.结论 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定登革热病毒及DV RNA载量.     

时间分辨荧光技术在乙肝病毒标志物定量检测中的应用

目的比较时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法在测定乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)时结果的符合程度,了解TRFIA测定HBV-M的可行性。方法分别用TRFIA和ELISA测定120份随机血清样本乙肝两对半并计算结果符合率。结果TRFIA、ELISA法测定120份随机样本HBV-M结果符合率较高,经配对资料的χ2检验,P>0.05,无显著性差异。结论TRFIA是定量检测HBV-M的方法,它可为临床诊断、临床疗效的观察及注射疫苗提供科学依据。     

荧光定量RT-PCR检测肿瘤微转移

肿瘤微转移的定量检测不仅有助于肿瘤微转移的早期诊断、判断预后,而且为临床指导化疗提供有效的依据。本文主要论述荧光定量RT-PCR技术检测肿瘤微转移的原理、基本程序、提高定量检测准确性的一些手段及其临床意义。     

荧光定量PCR与ELISA法检测HBV-DNA结果分析

目的 :应用荧光定量PCR方法精确检测HBV -DNA的拷贝数 ,为临床判断病毒复制程度提供指标 ;对比分析荧光定量PCR方法和ELISA方法检测HBV -DNA的结果。方法 :用荧光定量PCR法检测 10 14例用ELISA法诊断为乙型肝炎病人的血清HBV -DNA拷贝数。结果 :10 14例病人中 ,病毒拷贝数≥ 1× 10 5的 4 99例 ,阳性率4 9.2 % ;HBeAg阳性患者的HBV -DNA拷贝数≥ 1× 10 5的阳性率显著高于HBeAg阴性患者。结论 :荧光定量PCR检测HBV病毒复制情况结果准确 ,对临床工作指导意义更大 ;HBeAg是一项重要指标。