树鼩胆固醇酯转运蛋白的cDNA和蛋白质结构分析

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的cDNA序列 ,并推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较。结果　获得的树CETPcDNA(在GenBank中的注册号为AF334 0 33)长 16 36bp ,编码 485个氨基酸 ,其成熟蛋白由 477个氨基酸组成 ,比人多一个氨基酸 (Gly318) ,该蛋白与人、家兔的同源性分别为 88%和 82 %。序列中与CETP结合和转运中性脂质功能相关的区域均非常保守 ,但在Asn34 2位的N 糖基化位点缺失 ,可能使其转运胆固醇酯的活性增加 ,利于外周组织和血浆中的胆固醇及其酯的清除。通过对不同种属蛋白序列的比较 ,初步分析了树CETP蛋白与功能相关的结构特点。结论　树CETP糖基化的特点有可能是该动物对动脉粥样硬化具有不易感性的分子机理之一     

胆固醇酯转运蛋白的提纯和鉴定

目的：分离纯化人血清胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ），为制备ＣＥＴＰ单克隆抗体和ＣＥＴＰ浓度测定提供物质基础。方法：制备无脂血清，用Ｂｕｔｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ、ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００三步柱层析分离、纯化ＣＥＴＰ。结果：纯化的ＣＥＴＰ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ与ＣＥＴＰ特异性单克隆抗体免疫反应和活性测定等鉴定证实为纯化ＣＥＴＰ。结论：经三步柱层析获得了纯化ＣＥＴＰ，得率约２５％，活性３０ｎｍｏｌ／（μｇ·ｈ）。     

胆固醇酯转运蛋白与动脉粥样硬化

胆固醇酯转运蛋白（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌｅｓｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＥＴＰ）催化血浆脂蛋白之间非极性脂质，特别是胆固醇酯（ＣＥ）的交换和平衡，关系到各种脂蛋白颗粒大小和脂质组成，决定高密度脂蛋白（ＨＤＬ）和低密度脂蛋白（ＬＤＬ）质和量...     

正常妊娠中胆固醇酯转运蛋白水平的研究

目的 :研究正常妊娠者血清胆固醇酯转运蛋白 (CETP)水平特征。　方法 :采用”Sandwich”酶免疫法测定 2 96例正常妊娠者血清CETP ,同时测定血脂和雌激素水平 ,并以年龄匹配的 92例正常非孕女性为对照。　结果 :早孕组 (孕 7～ 2 0周 )CETP浓度为 (3.79± 1.33)mg/L ,明显高于对照组 (2 .6 4± 1.2 5 )mg/L ,P <0 .0 0 0 1,同时也高于孕中期 (孕 2 1～ 2 8周 ) [(2 .84± 1.5 0 )mg/L ,P <0 .0 0 0 5 ]和孕晚期组 (孕 2 9- 4 0周 ) [(2 .79± 1.6 4 )mg/L ,P <0 .0 0 0 1];孕中、晚期组CETP水平与对照组相比有增加 ,但无明显差异。另外 ,三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B随着妊娠周期的增加而逐渐增高 ,高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白AI则在孕中期达到最大值。　结论 :妊娠期间激素 /血脂水平的变化以及与卵巢中一些因子协同作用而影响CETP水平     

心脑血管疾病患者胆固醇酯转运蛋白活性测定

目的 :探讨胆固醇酯转运蛋白 (CETP)活性与心脑血管疾病的关系。　方法 :应用体外合成 1 4 C标记的高密度脂蛋白 (HDL )样颗粒 ,测定了 45例冠心病患者、2 6例脑卒中患者和 40例健康人 CETP活性。　结果 :冠心病患者、脑卒中患者 CETP活性分别为 (17.6± 5 .4) %、(15 .2± 3.8) % ,而健康人为 (12 .7± 2 .0 ) % ,两组患者与健康人比较均有显著差异 (P<0 .0 1)。　结论 :提示 CETP与动脉粥样硬化的发生、发展密切相关。     

胆固醇酯转运蛋白基因型研究进展

胆固醇酯转蛋白 (ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｅｓｔｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｐｒｏｔｅｉｎ ,ＣＥＴＰ)于1978年首先由Ｚｉｌｖｅｒｓｍｉｔ等从人血浆中分离纯化出来 ,主要负责血浆中中性脂质胆固醇酯 (ＣＥ)和甘油三酯 (ＴＧ)的转运。2 0多年来 ,人们对ＣＥＴＰ究竟是抗动脉粥样硬化 (ＡＳ)因子还是致ＡＳ因子一直争论不休 ,其基因表达特别是基因多态性和 (或 )基因突变引起的不同基因型在ＣＥＴＰ调节和活性中的作用及机制更是扑朔迷离 ,令许多希望揭示ＣＥＴＰ与ＡＳ的关系从而为ＡＳ的防治开辟新途径的科学家们进行了大量研究工作。随着分子生…     

血清胆固醇酯转运蛋白的变化及临床应用

目的 :了解胆固醇酯转运蛋白 (CETP)对动脉粥样硬化的致病关联性。方法 :以ELISA法检测正常健康者及患者血清中CETP的浓度 ,同时检测了血脂其他相关指标。进行统计学处理 ,进行正态性检验 ,相关性分析 ,参考值的确定。结果 :正态性检验呈正偏态分布。参考范围 0 .33～ 4 .7mg·L- 1 。CETP与脂类其它指标无明显的相关性。结论 :显示CETP浓度过高或过低或缺乏均与动脉粥样硬化的形成存在着明显的关联性 ,具有临床应用价值。     

胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性与脑梗死关系

目的探讨胆固醇酯转运蛋白(CETP)TaqIB基因多态性与动脉粥样硬化性血栓性脑梗死之间的关系。方法对220例脑梗死患者和220例健康者进行研究。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定所有研究对象血标本的CETP TaqIB基因多态性,通过对脑梗死组和对照组的CETP TaqIB基因多态性比较,对比分析。结果脑梗死组B1B1、B1B2、B2B2基因型比例分别是59.09%、32.73%、8.18%,对照组分别为47.27%、39.09%、13.64%,两者比较差异有统计学意义。B1、B2等位基因在脑梗死组的频率分别为75.45%、24.55%,在对照组为66.36%、33.64%,两者差异也有统计学意义。结论胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性可能与动脉粥样硬化性血栓性脑梗死的发生有关。其中B1等位基因可能是易感基因,而B2基因可能是保护基因。     

树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶cDNA和蛋白质序列结构分析

目的克隆获得树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶cDNA序列并进行结构分析。方法以树鼩肝脏mRNA逆转录出的Ⅰ链cDNA为模板,运用SMARTRACEPCR扩增技术,扩增得到树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)cDNA序列,并推导出LCAT氨基酸序列。利用分子生物学软件DNAMAN对氨基酸序列的一、二级结构及主要结构域进行分析和比较。结果树鼩LCATcDNA序列由1340个核苷酸构成,开放阅读框架1320bp,编码440个氨基酸的LCAT前体(含24个氨基酸构成的信号肽和416个氨基酸组成的成熟蛋白)熏3'非翻译区18bp,终止密码TAA,加尾信号AATAAA和一个25bp的poly(A)尾。树鼩LCATcDNA序列已作为新基因被GenBank接受,登记号AF272861。树鼩与人和狒狒LCATcDNA的同源性分别为90%和89%。结论树鼩LCATcDNA序列与人及其他实验动物高度同源。     

树鼩载脂蛋白AI cDNA的克隆及其组织表达

目的克隆不易感动脉粥样硬化动物树（ｔｒｅｅｓｈｒｅｗ,ＴＳ）载脂蛋白ＡＩ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡＩ,ａｐｏＡＩ）的基因,比较分析其结构特点。方法以提取的肝组织ｍＲＮＡ为模板,反转录构建了ＴＳ肝组织ｃＤＮＡ文库。利用制备的兔抗ＴＳ载脂蛋白ＡＩ多抗血清为探针筛选该文库,对阳性克隆进行测序、序列分析及组织表达实验。结果克隆获得了ＴＳａｐｏＡＩｃＤＮＡ序列,全长序列由９００个核苷酸构成,包括２８ｂｐ组成的５′非翻译区;７９５ｂｐ组成的一个完整开放阅读框架,编码翻译２６５个氨基酸的ＴＳａｐｏＡＩ前体（含１８个氨基酸构成的信号肽、６个氨基酸的原肽片段及２４１肽的成熟蛋白）;两个终止密码ＴＧＡ、ＴＡＡ和随后７２ｂｐ的３′非翻译区。新基因已被ＧｅｎＢａｎｋ接受。对编码蛋白质的亲疏水性分析表明ＴＳａｐｏＡＩ的疏水性强于人的相应蛋白。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ显示ＴＳａｐｏＡＩ基因主要在肝脏和小肠组织表达。结论获得了不易感动脉粥样硬化动物ＴＳａｐｏＡＩ的新基因,编码的蛋白质结合胆固醇及胆固醇酯的能力可能大于人的ａｐｏＡＩ。     

树鼩肝组织cDNA文库的快速构建

目的:为了研究不易感动脉粥样硬化动物树鼩多种载脂蛋白的基因分子结构,我们在国内外首次快速构建了树鼩肝细胞cDNA文库。方法:采用一步法提取树鼩肝细胞总RNA;以寡核胸苷酸为吸附介质,柱层析法进一步纯化mRNA。以此为模板,利用改良的cDNA快速合成方法,反转录合成树鼩肝细胞cDNA第一、二链。对cDNA双链末端修饰,连接含双酶切位点的连接子后重组于噬菌体载体。结果:包装后获得2.1×10~6高滴度的树鼩肝细胞cDNA文库,放射自显影显示合成的cDNA产物大小在400～5000个核苷酸之间,该文库的克隆重组率为98.5％以上,PCR扩增随机提取的白色噬菌斑DNA,电泳鉴定均有cDNA插入片段。以制备的两种多价抗血清为探针,从构建的cDNA文库中筛选克隆出完整的树鼩apoAI和apoCI的cDNA核苷酸序列。结论:与常规方法比较,本法简便、快速,易于操作和掌握。本研究还对应用此方法构建cDNA文库的某些环节进行了探讨。     

树Ju载脂蛋白AIcDNA的克隆及其组织表达

克隆不易感动脉粥样硬化动物树Ｊｕ（ｔｒｅｅｓｈｒｅｗ,ＴＳ）载脂蛋白Ａ－Ｉ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡＩ,ａｐｏＡＩ）的基因,比较分析其结构特点,方法以提取的肝组织ｍＲＮＡ为模板,反转录构建了ＴＳ肝组织ｃＤＮＡ文库。利用制备的兔抗ＴＳ载脂蛋白ＡＩ多抗血清为探针筛选该文库,对阳性克隆进行测序,序列分析及组织表达实验。结果克隆获得了ＴＳａｐｏＡＩｃＤＮＡ序列,全长序列由９００个核苷酸构成,包括２８     

胆固醇酯转移蛋白抑制剂Anacetrapib

高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）低于正常水平是诱发心血管疾病的因素之一,升高较低水平的HDL-C能够降低患心血管疾病的风险。一些代谢疾病,如胰岛素耐受、高三酰甘油血症都会增强胆固醇酯转移蛋白的活性,高活性的胆固醇酯转移蛋白可诱发动脉粥样硬化和增加患心血管疾病的风险。因此,抑制胆固醇酯转移蛋白是治疗动脉粥样硬化症的新靶点。Aanncetrapib是一小分子 唑烷酮类选择性胆固醇酯转移蛋白抑制剂,能很好地作用于低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）和HDL-C,安全有效地调节冠状动脉心脏病患者以及冠状动脉心脏病高危患者的脂质水平。