谷胱甘肽—S—转移酶多克隆抗体免疫金测定法检测日本血？…

目的 探讨谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）多克隆抗体诊断日本血吸虫病的应用价值。方法 以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体为捕获并检测抗体，并建立双抗体夹心斑点免疫检测技术，用于检测日本血吸虫循环抗原，并以斑点免疫金测定法和ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果 ３种方法检测急性血吸虫病的敏感性均为１００％，对慢性血吸虫病的敏感性分别为７６．４％、９８．１％和９６．２％。特异性分别为９５．０％、９８．０     

谷胱甘肽-S-转移酶多克隆抗体免疫金测定法检测日本血吸虫循环抗原的研究

目的探讨谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）多克隆抗体诊断日本血吸虫病的应用价值。方法以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体力捕获并检测抗体，建立双抗体夹心斑点免疫金测定技术，用于检测日本血吸虫循环抗原，并以斑点免疫金测定法和ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果３种方法检测急性血吸虫病的敏感性均为１００％；对慢性血吸虫病的敏感性分别为７６．４％、９８．１％和９６．２％；特异性分别为９５．０％、９８．０％和９６．０％。结论ｒＳｊ２６ＧＳＴ抗原对日本血吸虫病具有诊断价值，可望有较好的应用前景。     

单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

本文用抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体Ｓｊ１１６和Ｓｊ１０ｃ作双夹心ＥＬＩＳＡ检测粪检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达９３．４％。正常人假阳性率为６．７％。与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分别为３．２％、０、１３．３％和１３．３％。     

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG_4考核疗效的比较研究

目的探讨ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病人的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法,用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常人和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ＞０．０５）;用ＳｊＭＡｇ和ＫＬＨ分别检测治疗后１２个月血清中ＩｇＧ和ＩｇＧ４的阴转率均显著高于ＳＥＡ（Ｐ＜０．０１）、检测治疗后２４个月血清中ＩｇＧ４的阴转率均达９７．６％。结论ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２具有与ＳＥＡ相似的诊断价值和较高的疗效考核价值;特异性ＩｇＧ４可能系一种疗效敏感抗体,可望成为疗效考核评价指标。     

单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

本文用抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体Ｓｊ１１６和Ｓｊ１０ｃ作双夹心ＥＬＩＳＡ检测粪检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达９３．４％。正常人假阳性率为６．７％。与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分另伪３．２％、０、１３．３％和１３．３％。     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（ｒＳｊＣＴＰＩ）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫ｒＳｊＣＴＰＩ表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）的多克隆抗体（ＩｇＧ）为捕捉系统,以酶标的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ比较。结果获得了一株抗ｒＳｊＣＴＰＩ的单克隆抗体,其抗体同型为ＩｇＧ１。Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ检浊急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为１００％、９１．７％、０、０和０。而ＳＥＡ－ＥＬＴＳＡ为１００％、９８．３％、６．     

Dot－ELISA检测抗原与IHA、COPT检测抗体诊断血吸虫病的比较

本文比较了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测循环抗原，间接血凝试验（ＩＨＡ）、环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）检测抗体诊断血吸虫病的效果。１２例急性血吸虫病患者血清３种方法检测均为阳性；２７７例慢性血吸虫病患者血清３种方法检测阳性率分别为７９．４２％、６４．６２％和６３．１８％。１４例华支睾吸虫病患者血清和８９例健康人血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测均为阴性。１０例急性血吸虫病患者，在离开流行区经吡喹酮治疗后３７周时粪检全部转阴，检测血清循环抗原４例转阴，其余６例滴度大幅度下降；ＩＨＡ检测３例转阴，其余７例几何平均倒数滴度（ＧＭＲＴ）由４７．５７降至９．３５；ＣＯＰＴ检测平均环沉率由２１．５％降至４．１２％。结果表明Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测血吸虫循环抗原具有较好的敏感性和特异性。这３种方法在血吸虫病诊断及疗效考核中均有一定价值。     

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。     

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG4 …

探讨ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法，用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳＪ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ〉０．０５）     

糖脂抗原和包膜抗原血清学检测活动性结核IgG抗体价值评估

目的评估脂阿拉伯甘露糖─ＩｇＧ（ＬＡＭ－ＩｇＧ）和包膜蛋白─ＩｇＧ对活动性结核的诊断价值。方法两种抗原分别采用快速和常规酶朕免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）进行检测。选择１０８例活动性结核（其中９７例活动性肺结核、１１例肺外结核），６９例非结核肺部疾患（其中肺癌１６例，其它肺部疾患５３例）血清平行检测结核分支杆菌ＩｇＧ抗体。结果９７例活动性肺结核涂阳敏感性分别为７１．８％（２８／３９）和９２．３％（３６／３９），涂阴为６０．３％（３５／５８）和７７．６％（４５／５８）。６９例非结核肺部疾患组两法阳性分别为４例和１４例，假阳性率分别为５．８％（４／６９）和２０．３％（１４／６９）；特异性分别为９４．２％（６５／６９）和７９．７％（５５／６９）。结论提示快速ＥＬＩＳＡ血清ＬＡＭ－ＩｇＧ测定操作简便、快速、不需任何仪器设备且特异性较高，对活动性结核病有较高的临床辅助诊断价值。     

日本血吸虫成虫表膜抗原的诊断效果及疗效考核价值

[目的 ]探讨日本血吸虫成虫表膜抗原 (Sj MAg)检测日本血吸虫病患者的特异性和敏感性及考核疗效价值。 [方法 ]采用 Sj MAg- EL ISA检测治疗前、后不同时期血吸虫病患者血清中特异性 Ig G、 Ig G4及健康人、并殖吸虫、华支睾吸虫及囊尾蚴病患者血清中的交叉抗体。 [结果 ]Sj MAg的敏感性和特异性与可溶性虫卵抗原(Sj SEA)比较 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;用 Sj MAg- EL ISA检测治疗后 12个月患者血清中 Ig G的阴转率为80 .0 % ,显著高于 SEA- EL ISA的 43.3% ,而检测 Ig G4的阴转率为 93.3% ,显著高于 Sj SEA- EL ISA的 6 0 % ,检测治疗后 2 4个月患者血清中 Ig G和 Ig G4的阴转率分别达 92 .9%和 97.6 %。 [结论 ]Sj MAg- EL ISA检测日本血吸虫病具有与 Sj SEA- EL ISA相同的诊断价值和较高的考核疗效价值。     

rSj26GST-Sj32融合蛋白-IgG4-ELISA诊断慢性血吸虫病的研究

目的探讨rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA诊断慢性血吸虫病的价值。方法用rSj26GST Sj32融合蛋白作为包被抗原,通过rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果该法检测慢性血吸虫病的敏感性和特异性分别为95.00%和100.00%,且与泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为100.00%、95.56%和97.59%。结论rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA可用于慢性血吸虫病的免疫诊断。     

日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶编码基因表达及诊断应用

目的克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶（Sj32）,探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。方法用PCR法从Sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段,以pET-28（a）为表达载体,用大肠埃希菌表达,制备重组抗原（rSj32）;应用ELISA方法检测待检血清,并比较rSj32、日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）以及重组诊断抗原rSj23对人工感染兔、小鼠及水牛血吸虫病的检测效果。结果成功表达了Sj32成熟体,表达产物rSj32的分子量为41 kDa,可用H is柱纯化,得率约为68.8 mg/L培养物。用rSj32检测人工感染兔、小鼠和水牛血清以及对照兔、小鼠和水牛血清,特异性分别为100.0%、96.7%和96.9%,敏感性分别为88.9%、85.0%和71.8%,该抗原对牛血清的敏感性略低于SEA和rSj23,其余检测结果三者相比无显著差异。结论rSj32在诊断动物血吸虫病方面具有研究和应用价值。     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性,抗原和单抗可规模化     

应用重组信号蛋白14-3-3间接ELISA诊断日本血吸虫病

目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3与成虫抗原(SjAWA)间接ELISA法分别检测51份急性和49份慢性日本血吸虫病患者和50份正常人血清,以上血清标本同时用SEA致敏的间接血凝试验(SEA-IHA)检测。再以3种方法检测30份华支睾吸虫感染者、24份卫氏并殖吸虫感染者和31份钩虫感染者血清,分析其交叉反应性。结果51份急性和49份慢性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3抗体阳性率分别为98.0%和91.8%;SjAWA的检出率分别为96.1%和90.0%;IHA的阳性率分别为98.0%和93.9%。经统计学分析,以上结果无显著性差异(P>0.05)。Sj14-3-3间接ELISA、SjAWA间接ELISA和SEA-IHA对于30份华支睾吸虫感染者的交叉反应性分别为13.3%、20.0%和16.7%,24份卫氏并殖吸虫感染者分别为8.3%、12.5%和12.5%,31份钩虫感染者分别为12.9%、16.1%和12.9%。经统计学分析结果也无显著性差异(P>0.05)。结论rSj14-3-3抗原间接ELISA法诊断日本血吸虫病,具有高度的敏感性和特异性,可用于血吸虫病的免疫诊断。     

重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。     

水蛭可溶性抗原诊断日本血吸虫病的初步研究

目的　探讨水蛭可溶性抗原 (L SA)用于诊断日本血吸虫病的可能性。　方法　首先用 Western blot对 L SA与日本血吸虫病患者血清的交叉反应性进行分析 ,进而对 L SA- EL ISA用于诊断慢性血吸虫病的效果作出评价。　结果　经 SDS- PAGE及 Western blot技术分析的结果表明 ,L SA的主要蛋白组分区带为 8条 ,其中分子质量为 116～ 118、72、4 5和 31ku蛋白组分可被日本血吸虫病患者血清所识别 ;用 L SA- EL ISA检测慢性血吸虫患者血清 85份 ,阳性检出率为90 .5 9% (77/ 85 )检测正常人血清 87份和其它 3种寄生虫病患者血清 5 6份 ,假阳性率分别为 4 .6 0 % (4/ 87)和 1.79% (1/5 6 )。与 SEA- EL ISA法比较 ,两者敏感性和特异性差异无显著性 (P>0 .0 5 )。　结论　日本血吸虫病患者血清中存在较多的抗 L SA抗体 ;用 L SA检测慢性血吸虫病显示出较好的敏感性和特异性 ,因而水蛭是一种值得进一步研究的血吸虫异源抗原     

rSj26-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的 探讨rSj26-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值.方法 利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)建立IgG-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者和健康人血清作对照.结果 rSj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为90.00%(45/50)、97.67%(42/43)和92.00%(46/50)、97.67%(42/43),二者比较差异无统计学意义(x2值均为0.0,P均＞0.05);SjAWA与泡型棘球蚴病患者血清的交叉反应率为20.00%(2/10),rSj26-Sj32与泡型棘球蚴病患者血清未见交叉反应,二者比较差异无统计学意义(x2=0.5,P＞0.05);rSj26-Sj32和SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清的交叉反应率分别为14.29%(3/21)、7.69%(1/13)和19.05%(4/21)、7.69%(1/13),与囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均未见交叉反应,二者比较差异无统计学意义(x2值均为0.0,P均＞0.05).rSj26-Sj32-IgG-ELISA和SjAWA-IgG-ELISA诊断急性日本血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值和诊断效率分别为97.83%(45/46)、89.36%(42/47)、93.55%(87/93)和97.87%(46/47)、91.30%(42/46)、94.62%(88/93),二者比较差异无统计学意义(x2值均为0.0,P均＞0.05).结论 rSj26-Sj32融合蛋白可用于急性日本血吸虫病的免疫诊断.

Abstract：

Objective To study the diagnostic value of rSj26-Sj32-IgG-ELISA for acute schistosomiasis japonica. Methods Purified rSj26-Sj32 fusion protein and crude Schistosoma japonicum antigen (SjAWA)were used to establish IgG-ELISA to detect serum of patients with acute schistosomiasis, and clonorchiasis sinensis,paragonimiasis westermani, alveolar echinococcosis, cystic echinococcosis, type B hepatitis, lung tuberculosis patients and healthy human serum were used as control. Results The sensitivity and specialty were 90.00%(45/50) ,97.67% (42/43) and 92.00% (46/50),97.67% (42/43) in detection of acute schistosomiasis japonica with rSj26-Sj32and SjAWA, respectively, and the difference was not statistically significant(x2 were both 0.0, all P ＞0.05). The serum cross-reaction reactivity was 20.00%(2/10) in patients with alveolar echinococcosis with SjAWA,but no cross-reaction with rSj26-Sj32, the difference was not statistically significant(x2 = 0.5, P ＞ 0.05). The serum cross-reactivity were 14.29% (3/21 ), 7.69% (1/13) and 19.05% (4/21 ), 7.69% (1/13) among patients with clonorchiasis sinensis and paragonimiasis westermani by rSj26-Sj32 and SjAWA, but no cross reaction with type B hepatitis and lung tuberculosis patients, the difference was not statistically significant (x2 were both 0.0, all P ＞ 0.05). The positive predictive value, the negative predictive value and the diagnostic efficiency with acute schistosomiasis japonicum by rSj26-Sj32-IgG-ELISA and SjAWA-IgG-ELISA were 97.83% (45/46),89.36% (42/47),93.55% (87/93)and 97.87% (46/47),91.30% (42/46),94.62% (88/93), respectively, and the difference was not statistically significant (x2 were both 0.0, all P ＞ 0.05). Conclusion rSj26-Sj32 fusion protein can be used for the immune diagnosis of acute schistosomiasis japonica.     

Cystatin-ELISA法诊断日本血吸虫病的研究

目的 建立一种敏感、高特异性的血吸虫病诊断方法。方法 应用Cystatin捕获血吸虫吐出物中的半胱氨酸蛋白酶，再进行ELISA试验检测日本血吸虫（Sj)病人血清中相应的特异抗体。结果 检测120例慢性血吸虫病人血清，84例非疫区正常人血清和36例华支睾吸虫病人血清，Cystatin-ELISA检测Sj病人阳性率为98．4％，与正常人及华支睾吸虫病人无交叉反应。其敏感性（98．4％）与SEA－ELISA法的敏感性（93．4％）比较无明显区别（P＞0．05），但特异性显著高于后者（P＜0．05）。Cystatin-ELISA敏感性和特异性亦均高于AWA－ELISA和ES－ELISA。结论 Cystatin-ELISA敏感性高，特异性强，是一种有效的诊断血吸虫病的方法。