MCP-1/CCR2通路参与骨髓基质细胞向脊髓全横断损伤区迁移的实验研究

 【目的】 探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）及其受体CCR2在骨髓基质细胞（MSC）体内、外迁移中的作用。【方法】体外培养、纯化大鼠MSC，取第五代MSC行免疫荧光鉴定；免疫组化、RT-PCR检测纯化MSC表达CCR2情况；Boyden 小室法检测趋化因子MCP-1（5～500 ng/mL）对MSC的趋化迁移作用及其特异性。42只成年大鼠用于体内研究（脊髓全横断组24只，假手术组9只，正常大鼠9只），分别于术后1，3，7，14d取材，行免疫组化检测MCP-1表达，或行MCP-1的Real-time PCR定量分析，或颈内静脉注射荧光标记的MSC，观察MSC向脊髓迁移情况。【结果】第五代MSC都表达间充质干细胞标记物Vimentin、Laminin及Fibronectin；细胞免疫荧光、RT-PCR证实MSC表达趋化因子受体CCR2；MCP-1（5～50 ng/mL）体外可趋化MSC迁移（P﹤0.05），抗MCP-1抗体可对抗其趋化迁移作用（P﹤0.05）。脊髓全横断组、对照组脊髓均表达MCP-1，但细胞分布、染色存在差异，影响MCP-1定量。脊髓损伤后趋化因子MCP-1RNA在1d、3d及7d较对正常对照组差异有统计学意义（P <0.05），术后14d时MCP-1RNA与正常对照相比差异无统计学意义（P ＞0.05），伴随其变化，脊髓损伤区迁移MSC较对照差异有统计学意义（P﹤0.05）。【结论】 MCP-1体内、外可趋化MSC迁移，MCP-1/CCR2通路参与MSC向脊髓全横断损伤区的迁移。     

趋化因子MCP-1体外趋化骨髓基质细胞迁移的实验研究

目的探讨趋化因子MCP-1对骨髓基质细胞的体外迁移作用.方法采用全骨髓法培养成年Wistar大鼠骨髓基质细胞,取第5代骨髓基质细胞行免疫荧光鉴定;后通过细胞免疫荧光及RT-PCR的方法检测骨髓基质细胞表达趋化因子受体CCR2的情况,利用Boyden小室法探讨趋化因子MCP-1对骨髓基质细胞的体外趋化作用及其特异性.结果第5代骨髓基质细胞都表达间充质干细胞标记物Vimentin、Laminin及Fibronectin;细胞免疫荧光及RT-PCR结果证实骨髓基质细胞表达趋化因子受体CCR2,趋化因子MCP-1（5～500ng/mL）体外可趋化骨髓基质细胞迁移,抗MCP-1多克隆抗体可对抗其趋化迁移作用.结论MCP-1/CCR2通路参与骨髓基质细胞体外迁移,为进一步研究骨髓基质细胞的迁移机制提供了理论依据.     

骨髓基质细胞迁移机制研究进展

骨髓基质细胞(BMSC)是骨髓细胞中除去造血干细胞(非黏附细胞)之外的黏附细胞部分,也称为塑料黏附细胞、克隆形成单位成纤维细胞或骨髓间充质干细胞(MSC).     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 研究骨髓基质细胞(BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响,探讨骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤的机制.方法 取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代.参照Taoka's方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型.脊髓损伤后30 min,进行BMSCs或DMEM培养液损伤周围局部四点注射.在术后3、7和14 d,应用TUNEL方法检测脊髓损伤周围神经细胞凋亡情况.结果 脊髓损伤后,损伤区周围组织内TUNEL阳性细胞数量明显增加,阳性细胞分布于脊髓灰质和白质内,但以白质内神经细胞为主.与DMEM组大鼠相比,移植术后3、7和14 d,BMSCs移植显著减少脊髓损伤周围区凋亡的神经细胞数目(P＜0.05).结论 脊髓损伤后,BMSCs移植能够抑制神经细胞凋亡.     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究骨髓基质细胞（BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（SCI）后神经细胞凋亡的影响,探讨骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤的机制。方法取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代。参照Taoka＇s方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型。脊髓损伤后30min,进行BMSCs或DMEM培养液损伤周围局部四点注射。在术后3、7和14d,应用TUNEL方法检测脊髓损伤周围神经细胞凋亡情况。结果脊髓损伤后,损伤区周围组织内TUNEL阳性细胞数量明显增加,阳性细胞分布于脊髓灰质和白质内,但以白质内神经细胞为主。与DMEM组大鼠相比,移植术后3、7和14d,BMSCs移植显著减少脊髓损伤周围区凋亡的神经细胞数目（P〈0．05）。结论脊髓损伤后,BMSCs移植能够抑制神经细胞凋亡。     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后COX-2基因表达的影响

目的观察骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤后COX-2 mRNA表达的影响。方法分离培养BMSCs并传代。取Wistar雌性大鼠72只随机分为3组：A组18只（假手术组）、B组27只（细胞培养基对照组）和C组27只（BMSCs组）。B组和C组脊髓损伤后进行DMEM或BMSCs损伤周围区注射。应用RT-PCR法和免疫荧光方法检测损伤脊髓组织内COX-2 mRNA的表达及COX-2蛋白分布情况。结果 COX-2 mRNA在A组大鼠脊髓组织中低水平表达。脊髓损伤移植术后,C组COX-2 mRNA表达水平均显著高于相应时间点的B组（P〈0.01）。免疫荧光结果显示,A组COX-2仅表达于脊髓内的血管。脊髓损伤后,B组和C组COX-2表达分布则发生变化,主要见于损伤周围区脊髓内的血管和少数脊髓腹侧灰质内的神经元。结论 BMSCs移植能够增加脊髓损伤后COX-2 mRNA的表达。     

骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤进展

脊髓损伤是脊柱骨折最严重的合并症，长期以来人们对脊髓损伤的治疗态度是悲观的，常规的治疗方法对脊髓损伤的治疗效果并不令人满意，骨髓基质细胞是骨髓内造血干细胞以外的非造血干细胞。近年研究发现这类细胞具有高分化潜能，有向神经细胞分化的能力，为脊髓神经损伤的修复提供了一条新的途径。     

SDF-1/CXCR4促进骨髓基质细胞迁移的作用

目的研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,SDF-1对BMSCs迁移、趋化作用,分析促进迁移规律和机理。为改善和提高骨髓基质细胞迁移能力寻找更有效的途径。为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础。方法体外培养大鼠骨髓基质细胞,应用免疫组化方法对骨髓基质细胞的CXCR4受体表达水平进行检测,运用微孔隔离室穿越实验方法,研究SDF-1对骨髓基质细胞迁移、趋化作用,并用SDF-1阻断剂加以证实。结果CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,SDF-1可促进骨髓基质细胞迁移。结论虽然CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,但是对促进骨髓基质细胞迁移起到至关重要的作用。     

骨髓基质细胞移植对大鼠损伤脊髓GDNF mRNA表达的影响

目的:研究骨髓基质细胞(BMSCs)移植对大鼠损伤脊髓胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响.方法:将大鼠36只随机分为移植组和对照组,每组3个时相点,每个时相点每组6只动物.移植或手术后24,72 h和7 d,用RT-PCR方法对GDNF的表达进行半定量分析.结果:移植组GDNF mRNA 24,72 h和7 d时都明显高于单纯损伤组(P＜0.05).结论:BMSCs移植可使损伤脊髓表达GDNF增强.     

骨髓基质干细胞不同移植方式治疗脊髓损伤的实验研究

目的探讨MSCs不同的移植方法对脊髓损伤修复的影响．方法90只成年大鼠，随机分为对照组、静脉移植组和腹腔移植组（每组再分为1、3、7、14、21d组），．在脊髓损伤后2d，经腹腔及静脉移植带绿色荧光的MSCs，，大鼠于移植后1、3、7、14、21d分批处死．连续冰冻切片观察细胞是否能够通过觑脑屏障并迁移到损伤部位，同时用体视学方法观察MSCs在脊髓损伤与非损伤部位的密度，用BBB评分法和爬网格法观察大鼠后肢运动功能的恢复．结果静脉移植后第1天，在损伤部位仅有少量的MSCs，而腹腔移植组未见MSCs。第3天有少量的MSCs．腹腔移植组与静脉移植相比7，14d有显著差异（P〈0．05）．21d后两种移植方法在损伤部位的细胞无差异（P〉0．05）．BBB评分，移植后7d无差异，14d后有明显差异（P〈0．05）．脊髓损伤处的细胞密度明显多于非损伤部位（P〈0．05）．结论MSCs经静脉和腹腔移植均能透过血脑屏障迁移到脊髓损伤部位并对脊髓损伤有一定的修复作用，静脉移植优于腹腔移植．     

大鼠脊髓横断性损伤胶质细胞凋亡实验研究

为证实大鼠脊髓损伤后胶质细胞凋亡的存在及其随时间变化的规律,采用TUNEL法标记凋亡细胞,并用透射电镜加以证实。结果提示,胶质细胞损伤后凋亡出现于4h,高峰在损伤后1周。持续3周以上,提示骨髓损伤胶质细胞同坏死一样,亦是细胞死亡的重要形式。     

骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury SCI)是一种致残率很高的疾病,且损伤后病理生理机制非常复杂因而脊髓损伤防治与再生修复是当今神经科学的重大难题.在临床上由于缺乏行之有效的治疗手段,长期以来人们对脊髓损伤的治疗态度是悲观的.近年来干细胞移植对损伤脊髓组织的修复倍受关注,尤其是骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤成为近年研究热点.骨髓基质细胞是骨髓内造血干细胞以外的非造血干细胞,这类细胞具有高分化潜能,有向神经细胞分化的能力,为脊髓神经损伤的修复提供了一条新的途径     

骨髓基质细胞体外诱导分化移植治疗大鼠脊髓损伤的研究

目的 探讨大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)在体外由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、全反式维甲酸(RA)联合诱导下分化成的神经细胞样细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性.方法 采用出生4周SD大鼠的全骨髓细胞进行培养,利用bFGF+EGF+RA在体外诱导BMSCs向神经细胞样细胞分化.在倒置相差显微镜下每日观察、记录BMSCs的诱导分化情况,并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体鉴定.实验动物分为3组:细胞移植组(A组)、模型对照组(B组)、正常对照组(C组).A、B组采用改良Allens法建立大鼠急性脊髓损伤模型.A组在造模后立即将诱导后的BMSCs悬液多点缓慢注入到损伤节段的头侧和尾侧,B组同法注射等量磷酸盐缓冲液.C组不造模,于相同部位注射等量磷酸盐缓冲液.于伤后1～5周,按照BBB法观察脊髓神经功能恢复情况并处死动物取材,用HE染色观察脊髓病理变化.结果 诱导7 d后有部分细胞具备神经元样细胞形态,胞体呈锥形或圆形,有较长单极或多极的突起,有NSE阳性细胞表达;细胞移植后1～5周,A、B组动物运动功能均有不同程度恢复,但B组恢复较慢,BBB评分差异有统计学意义(P<0.05);组织形态学观察示A组损伤脊髓恢复较好.结论 bFGF、EGF和RA可以联合诱导BMSCs向神经干细胞分化,并可调控神经元分化,将其移植于大鼠脊髓损伤区,可促进脊髓损伤的恢复.     

生长因子和细胞外基质与脊髓损伤

脊髓损伤(SCI)是神经科学领域内一道尚未解决的难题。多项研究表明生长因子和细胞外基质是构成中枢神经系统微环境的必不可少的成分,研究它们在SCI和修复中所起的作用,有利于找到针对性的治疗手段,从而最大程度地提高SCI后的功能恢复。本文对神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子3、血管内皮生长因子、转化生长因子β1、细胞因子和促进或抑制轴突再生的细胞外基质蛋白在SCI中的作用作一综述。     

趋化因子受体CXCR4在骨髓基质细胞中的表达及分析

目的 研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,分析其表达规律.为改善和提高骨髓基质细胞的增殖和迁移能力寻找更有效的途径.为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察其增殖及生长特性,应用免疫组化和RT-PCR方法对MSCs的CXCR4受体及CXCR4 mRNA表达水平进行检测,并应用神经胶质细胞进行对比,探讨其表达异常的因素.结果 骨髓基质细胞CXCR4m RNA表达水平稳定,CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,且随传代数增加而减少.结论 CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,如果促进其CXCR4表达将会极大增强骨髓基质细胞的增殖与迁移能力.     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后环氧化酶-2和血管内皮生长因子表达的影响

目的：观察骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤后环氧化酶-2（cyclooxygenase-2, COX-2）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达的影响。方法大鼠随机分为3组：A为假手术组,B为细胞培养基（DMEM）对照组,C为BMSCs移植组。B组和C组大鼠进行脊髓压迫损伤模型制作。脊髓损伤后, B组和C组大鼠分别给予DMEM培养液或BMSCs脊髓损伤周围区注射。术后应用Western Blot方法检测COX-2、VEGF蛋白在损伤脊髓组织中的表达变化。结果 COX-2、VEGF蛋白在A组大鼠未损伤脊髓组织中均低水平表达。B组与A组相比,脊髓损伤后COX-2蛋白表达水平明显增加（P＜0.01）,VEGF蛋白表达水平则短暂显著增加（P＜0.05）。C组与B组相比, COX-2和VEGF蛋白表达水平均显著增加。结论 BMSCs移植能够增加脊髓损伤后COX-2、VEGF蛋白的表达。     

巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化影响的实验研究

为探讨巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响,采用含药血清的方法体外培养骨髓基质细胞,分A组(巴戟天水提物组)、B组(巴戟天醇提物组)、C组(对照组)、D组(经典成骨诱导组)、E组(巴戟天水提物+经典成骨诱导组)、F组(巴戟天醇提物+经典成骨诱导组),观察各组碱性磷酸酶染色、茜素红染色、碱性磷酸酶比活性及骨钙素含量,结果显示碱性磷酸酶染色和茜素红染色反应强弱的顺序为F组＞E组＞D组＞B组＞A组,C组为阴性;碱性磷酸酶比活性和骨钙素(BGP)含量测定结果为:A、B、D、E、F组在同一时间点均高于C组(P<0.05),E组、F组在同一时间点均高于D组(P<0.05).说明巴戟天水提物及醇提物均能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,且巴戟天醇提物的作用强于水提物.     

小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究

目的 研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞（CFU－GM）培养法。结果 伤后3－7d，有基质细胞贴壁的CFU－GM生长明显低于无贴壁组；伤后14d贴壁层形成后，放射损伤组的CFU－GM生长明显低于正常对照组；放射损伤后3－7d，骨髓基质细胞可抑制正常CFU－GM生长，用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞，其抑制作用减弱。当无外源性集落刺激因子（CSF）时，基质细胞贴壁层对CFU－GM生长仍显示一定刺激作用，结论 辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤，但在放射损伤造血修复与重建过程中，骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”双重的动态平衡调控作用。     

自体骨髓基质细胞源性干细胞治疗脊髓损伤的临床研究

目的观察自体骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤的疗效及其安全性。方法 31例脊髓损伤患者均经CT或MRI确诊并行手术或非手术治疗,并分为治疗组和对照组,其中治疗组14例,对照组17例。两组在年龄、病程、损伤程度等方面均具有可比性（P〉0.05）。治疗组在综合康复治疗的基础上给予自体骨髓基质干细胞（bonemarrowstromalcells,BMSCs）移植,采集自体骨髓分离提取骨髓基质干细胞,体外诱导分化后经蛛网膜下腔分次注射。对照组仅给予综合康复治疗。两组均于入院当天、治疗后第1、3、12月进行运动与感觉功能、膀胱功能评定。结果 1）治疗组感觉、运动和膀胱功能改善更明显,但与对照组比较差异无显著性意义;2）ASIA分级评定：治疗组、对照组均有4例患者在12月评估中分别提高1级;3）BMNCs移植的不良反应为术后低热2例,未发现新生肿瘤。结论自体骨髓BMNCs经蛛网膜下移植治疗脊髓损伤有一定疗效而且安全。     

细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

细胞移植治疗脊髓损伤是近年来脊髓损伤修复研究的热点之一.本文综述了采用细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状,并提出了笔者的一些见解.本文着重综述了嗅鞘细胞、雪旺细胞和骨髓基质干细胞移植应用于脊髓损伤修复的实验研究,评价了三种细胞移植各自的优缺点,期望为脊髓损伤及其修复的相关研究提供较全面的综合参考资料.