大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用

目的： 研究大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用。方法：0、18 μg/mL大蒜素处理人食管癌EC9706细胞,应用细胞计数、流式细胞仪、Hoechst33258染色、HE染色和电镜观察经大蒜素诱导处理后EC9706细胞的凋亡情况。结果：与对照组比较,经18 μg/mL大蒜素诱导处理7 d后,EC9706细胞的增殖活动受到明显抑制,细胞生长抑制率达75.89％ (P<0.05);细胞周期检测出现亚二倍体 (亚G1期)细胞峰值,细胞凋亡率达23.8％ (P<0.05),并发生G2/M期阻滞;经Hoechst33258 染色出现细胞核浓染及致密的固缩形态和颗粒状荧光;光镜和电镜观察结果均显示,大蒜素处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,出现染色质凝聚、边集化等显著的凋亡特征。结论：大蒜素对人食管癌EC9706细胞具有凋亡诱导作用。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导胶质母细胞瘤凋亡研究

目的：研究斑蝥酸钠维生素B6（ Sodium cantharidinate ,SCA）体外诱导胶质母细胞瘤U87凋亡作用及其机制。方法利用 MTT 法检测0．3125μg/mL,0．625μg/mL,1．25μg/mL,2．5μg/mL,5μg/mL SCA在24 h、48 h和72 h对U87的生长抑制作用,Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察SCA作用24 h后U87细胞的形态学变化,利用流式细胞术分别检测SCA作用12 h,24 h后U87细胞凋亡率及细胞周期阻滞。 RT-PCR分析SCA作用24小时后U87凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达变化。结果 MTT法结果显示SCA对U87细胞的生长抑制作用随着药物浓度的增加而增强,流式细胞术检测结果显示SCA可将细胞周期阻滞于G2/M期,并且可诱导U87细胞凋亡。 Hoechst 33258染色可见经SCA作用后U87细胞出现凋亡形态：染色质凝集、细胞核固缩、部分核碎裂和凋亡小体的形成。 RT-PCR结果显示：SCA作用后,Caspase-3、Bax表达较对照组明显增高（P＜0．05）,Bcl-2表达明显下降（P＜0．05）, p53表达无显著增高（P＞0．05）。结论体外实验研究表明SCA可抑制U87细胞增殖,并诱导其凋亡。     

光敏化姜黄素诱导人胃癌MGC80-3细胞调亡研究

姜黄素(curcumin)是从中药姜黄中提取的酚性化合物,广泛用于食品添加剂.近年来已发现姜黄素具有多种医疗作用以及显著的防癌和抑癌作用,并发现可诱导多种癌细胞凋亡.我们在研究姜黄素诱导人胃腺癌MGC 80-3细胞凋亡时,偶然发现姜黄索在光照下(光敏化姜黄素)也可诱导细胞凋亡.本文以MGC 80-3细胞为对象,研究光敏化姜黄素诱导细胞调亡的效应,以探讨姜黄素光敏化反应在光动力学治疗肿瘤上的应用前景.以台盼蓝拒染计数法、Giemsa染色法和Hoechst 33258染色法分别观察姜黄素 光照对MGC 80-3细胞存活及细胞形态的影响;DNA琼脂糖电泳法观察姜黄素 光照诱导癌细胞DNA片断化作用;并以DNA Hoechst33258染色荧光测定法定量检测断裂及未断裂DNA含量;流式细胞仪检测术检测经姜黄素 光照处理后的细胞周期变     

纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞的细胞毒性和遗传毒性

目的： 研究纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探讨其作用机制。方法：以梯度浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 μg/mL)纳米银染毒CHL细胞,MTT比色法计算IC50以评估纳米银的细胞毒性水平。利用PI染色分析细胞周期变化并计算细胞增殖指数;Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡和坏死发生率,同时观察细胞染毒后的形态变化,记录前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)信号;Giemsa染色中期分裂相涂片分析染色体畸变发生率。结果：纳米银毒性水平与纳米银浓度呈正相关(r=0.804,P<0.05),IC50为21.68 μg/mL。22.0 μg/mL纳米银与CHL细胞接触24 h后,细胞形态发生明显改变;细胞群SSC信号显著增强,为细胞摄入纳米银提供间接证据;细胞周期在G2/M期被捕获,对G0/G1期、S期以及细胞增殖指数变化情况影响显著(P<0.01);22.0 μg/mL纳米银染毒CHL 24 h后凋亡发生率与对照组差异明显(P<0.01);各浓度纳米银诱导染色体结构畸变率均大于5%(P<0.01),中高浓度四倍体发生率达到溶剂对照组的10倍以上(P<0.01)。结论：纳米银对CHL细胞有显著的细胞毒性和遗传毒性,线粒体功能受损、细胞凋亡在纳米银的细胞毒性和遗传毒性中起到重要作用。     

姜黄素诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡研究

八十年代以来已陆续发现姜黄素具有抗炎、抗氧化、抗凝和降血脂作用,并发现姜黄素还具有显著的防癌和抑癌作用.近年有实验证据表明姜黄素能诱导多种癌细胞凋亡.但姜黄素作为一种可食用的食品添加剂,对胃癌细胞是否有诱导凋亡作用尚无报道.我们的前期工作曾发现姜黄素可显著抑制人胃腺癌细胞MGC 80-3生长,本文以该细胞株为对象,研究和探讨姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的效应及可能机制.以苔酚蓝拒染计数法、Giemsa染色法和Hoechst 33258染色法分别观察姜黄素对MGC80-3细胞存活及细胞形态的影响;DNA琼脂糖电泳法观察姜黄素诱导癌细胞DNA片断化作用;并以DNA-Hoechst 33258染色荧光测定法定量检测断裂及未断裂DNA含量;流式细胞仪检测术检测经姜黄素处理后的细胞周期变化.结果显示经5,10及20μmol/L终浓     

Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色技术检测神经细胞凋亡的对比研究

目的： 利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法(TUNEL)染色检测纳米二氧化硅(nm-SiO2)对神经细胞凋亡的影响,比较两种检测方法的优缺点。方法：以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象,15和30 nm粒径的nm-SiO2(剂量为2.5、5、10 μg/mL)分别处理细胞24 h,另设1~5 μm SiO2组和溶剂对照组,采用Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色检测各处理组对SK-N-SH细胞凋亡的影响。结果：与对照组相比,两种检测方法分析均显示了nm-SiO2处理组SK-N-SH细胞凋亡率显著增加(P<0.05),且具有尺寸、剂量依赖性,而微米级SiO2对凋亡的影响不显著(P>0.05)。结论：nm-SiO2能诱导SK-N-SH细胞凋亡。Hoechst33342/PI双染法特异性高,简单易行;TUNEL法灵敏度高,能检测少量的细胞凋亡,但成本较高,两种方法可结合使用以便更加准确的检测神经细胞的凋亡。     

蟾蜍灵对B16细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究中药蟾蜍灵对B16细胞增殖和凋亡的影响,探讨蟾蜍灵对黑色素瘤的抑制作用。方法 采用MTT法测定蟾蜍灵对B16细胞活力的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果 蟾蜍灵对B16细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度和时间的依赖性。蟾蜍灵作用24、48和72 h的IC50值分别为37.80、6.00和9.12 μmol/L。荧光染色显示蟾蜍灵作用于B16细胞24 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,蟾蜍灵处理组S期细胞降低,蟾蜍灵可引B16细胞G0/G1期阻滞,而对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。结论 蟾蜍灵可能通过阻滞B16细胞增殖周期进程而诱导凋亡。     

紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其可能的机制

目的：观察紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探究其作用机制。方法：采用不同浓度的 紫草素（0、 1、 5、 10 μmol/L）处理TE-1细胞,MTT法检测24、 48、 72 h后各组细胞增殖水平;紫草素处理各组TE-1细胞48 h后,采用 Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况,流式细胞术检测细胞的凋亡水平及周期变化,Western blotting检测TRAP1/Akt/ mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果：紫草素呈时间和浓度依赖性抑制TE-1细胞增殖（P<0.05或P<0.01）;与对照组相比, 紫草素能显著促进TE-1细胞凋亡（P<0.01）, 使TE-1细胞周期发生G0/G1期阻滞（P<0.05或P<0.01）,同时降低TRAP1、p-Akt以及 p-mTOR表达水平（P<0.05或P<0.01）,以上作用具有剂量依赖性。结论：紫草素能显著抑制TE-1细胞的增殖,诱导细胞发生G0/ G1期阻滞并促进其凋亡,这可能与其抑制TRAP1/Akt/mTOR信号通路有关。     

姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响

目的： 研究姜黄素对人永生化表皮HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。方法：通过免疫细胞化学法和免疫印迹检测姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。结果：免疫细胞化学染色结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达增强。Western blot检测结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达上调。结论：姜黄素诱导HaCaT细胞凋亡过程中伴随着抑凋亡基因bcl-2表达的抑制和促凋亡基因p53、Bax和Fas基因的激活。由此证明姜黄素通过多种凋亡相关基因的调控,激活凋亡信号传导途径,诱使细胞凋亡。     

人参多糖与他莫昔芬联合对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其机制研究

目的： 探讨人参多糖 (ginseng polysaccharide,GPS)与他莫昔芬 (tamoxifen,TAM)联合对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其机制。方法：以不同浓度 (0、20、40、80和160 μg/mL)GPS作用于人乳腺癌MCF-7细胞株48 h,以MTT法检测细胞增殖抑制情况,以GPS的最小有作用剂量与不同浓度 (0、0.5、1、2和4 μg/mL)TAM联合处理细胞48 h,以金氏公式筛选出协同抑制作用最明显的联合剂量,以该联合剂量处理MCF-7细胞48 h后,用DAPI染色法、流式细胞术检测细胞凋亡情况;用Giemsa染色检测细胞有丝分裂指数;用Western blot检测细胞中Fas、Caspase-9 以及Parp的表达情况。结果：MTT法检测提示GPS在48 h对MCF-7细胞的最小有作用剂量为40 μg/mL,金氏公式计算结果提示40 μg/mL GPS+1 μg/mL TAM联合用药协同抑制细胞增殖作用最强 (q=1.82);与GPS或TAM单独作用相比,DAPI染色发现联合用药组镜下可见大量凋亡小体;流式细胞仪检测发现,联合用药能够协同增加细胞凋亡率 ( q=2.19,P <0.05);Giemsa染色结果显示联合用药能够协同抑制细胞有丝分裂 (均P<0.05);Western blot检测发现,联合用药能增加细胞中Fas表达,促进Caspase-9以及Parp的活化。结论：GPS与TAM联合能够协同通过Fas信号通路促进人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。     

亚砷酸钠对人肺癌Spc—Al细胞Bcl-2、Fas表达的影响

目的：探讨亚砷酸钠对人肺癌细胞株Spc—Al的抗癌机制。方法：用MTT法检测亚砷酸钠对Spc—Al细胞的增殖抑制作用;用Hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学改变;细胞凋亡率及相关蛋白Bcl-2和Fas的表达采用流式细胞仪测定。结果：亚砷酸钠对人肺癌细胞株Spc—A1的增殖具有一定程度的抑制作用。2μg／ml亚砷酸钠干预Spc—Al细胞12h、24h和48h后,在Hoechst荧光染色图片上可见细胞染色质浓缩及细胞核碎裂等典型的凋亡改变。给与1μg/ml、2μg／ml和4μg／ml亚砷酸钠作用Spc—Al细胞24h后,可以见到亚G1期凋亡峰,凋亡率随着药物浓度的增加明显增加。同时,流式细胞仪显示Bcl-2蛋白表达减少,而Fas蛋白表达增加。结论：亚砷酸钠对Spc—Al细胞的生长有明显的抑制作用,并可诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡和坏死。Bcl-2的下调和Fas的上调可能是其中一种作用机制。     

姜黄素诱导低分化鼻咽癌细胞株CNE-2Z的凋亡

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)是我国南方地区的高发肿瘤,发病早期的治疗主要是以放疗为主,而对晚期NPC患者则有必要进行适当的化疗。一些药物可通过诱导肿瘤细胞凋亡来达到治疗肿瘤的目的。本研究拟探讨姜黄素对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z体外增殖抑制作用及凋亡的影响。方法:不同浓度姜黄素处理CNE-2Z细胞,用噻唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率和IC50;用流式细胞术、Hoechest33258/碘化丙啶(PI)双染、琼脂糖电泳法观察细胞凋亡。结果:姜黄素能抑制CNE-2Z细胞的生长,其效果与姜黄素的浓度和作用时间有关,作用24h、48h、72h的IC50值为(24.05±0.47)、(19.20±0.17)、(7.35±0.50)μmol/L;5、10、20μmol/L姜黄素处理细胞24h后,流式细胞术观察到细胞凋亡率分别为(4.9±3.2)%、(10.7±2.7)%和(14.7±0.5)%;10、20μmol/L姜黄素处理细胞24h后,荧光染色可见细胞缩小,染色质固缩,核染色体碎裂等凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带。结论:姜黄素可诱导CNE-2Z细胞凋亡,姜黄素对CNE-2Z细胞具有增殖抑制作用。     

冬凌草甲素对THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法 以不同浓度的冬凌草甲素(16～56 μmol/L)作用于体外培养的THP-1细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,用免疫印迹法(Western Blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose)polymerase)]表达水平的变化.结果 32 μmol/L以上的冬凌草甲素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量效与时效关系,在Hoechst 33258荧光染色后,细胞出现核浓缩及核碎裂等典型的凋亡特征.Western Blotting检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量为20×103的裂解片段,PARP被裂解后出现相对分子质量为89×103的亚单位片段.结论 冬凌草甲素能显著抑制THP-1细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3途径可能是冬凌草甲素诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这为冬凌草甲素用于白血病的辅助治疗提供了有力的实验依据.     

韭籽多糖对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响

目的： 探讨韭籽多糖对人食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。 方法：应用流式细胞仪、Hoechst33258染色、透射电镜、DNA凝胶电泳等技术检测、观察韭籽多糖对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。结果：40 μg/mL的韭籽多糖可明显抑制食管癌EC9706细胞增殖 (P<0.05),作用48 h后,可诱导食管癌EC9706细胞出现明显凋亡特征性的形态结构和DNA条带。结论：韭籽多糖可抑制人食管癌EC9706细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

β-elemene Induces Caspase-dependent Apoptosis in Human Glioma Cells in vitro through the Upregulation of Bax and Fas/ FasL and Downregulation of Bcl-2

Background: β-elemene, extracted from herb medicine Curcuma wenyujin has potent anti-tumor effects invarious cancer cell lines. However, the activity of β-elemene against glioma cells remains unclear. In the presentstudy, we assessed effects of β-elemene on human glioma cells and explored the underlying mechanism. Materialsand Methods: Human glioma U87 cells were used. Cell proliferation was determined with MTT assay andcolony formation assay to detect the effect of β-elemene at different doses and times. Fluorescence microscopywas used to observe cell apoptosis with Hoechst 33258 staining and change of glioma apoptosis and cell cyclingwere analyzed by flow cytometry. Real-time quantitative PCR and Western-blotting assay were performed toinvestigated the influence of β-elemene on expression levels of Fas/FasL, caspase-3, Bcl-2 and Bax. The experimentwas divided into two groups: the blank control group and β-elemne treatment group. Results: With increase inthe concentration of β-elemene, cytotoxic effects were enhanced in the glioma cell line and the concentrationof inhibited cell viability (IC50) was 48.5 μg/mL for 24h. β-elemene could induce cell cycle arrest in the G0/G1phase. With Hoechst 33258 staining, apoptotic nuclear morphological changes were observed. Activation ofcaspase-3,-8 and -9 was increased and the pro-apoptotic factors Fas/FasL and Bax were upregulated, whilethe anti-apoptotic Bcl-2 was downregulated after treatment with β-elemene at both mRNA and protein levels.Furthermore, proliferation and colony formation by U87 cells were inhibited by β-elemene in a time and doesdependentmanner. Conclusions: Our results indicate that β-elemene inhibits growth and induces apoptosis ofhuman glioma cells in vitro. The induction of apoptosis appears to be related with the upregulation of Fas/FasLand Bax, activation of caspase-3,-8 and -9 and downregulation of Bcl-2, which then trigger major apoptoticcascades.     

硼替佐米调控内质网应激诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的机制探讨

目的:探讨硼替佐米对人急性T淋巴细胞白血病（T cell acute lymphoblastic leukemia，T-ALL）细胞株Molt-4细胞凋亡的影响。方法:硼替佐米（0、100、200和400 nmol/L）处理人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞后，运用MTT法测定Molt-4细胞活力；使用Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞形态；采用荧光定量PCR法测定Bax以及Bip mRNA水平；运用Western blot法测定Bax以及Bip蛋白水平。结果:100、200和400 nmol/L的硼替佐米处理Molt-4细胞24 h后，可浓度依赖性地降低细胞活力。100、200和400 nmol/L的硼替佐米作用细胞24 h后，Molt-4细胞核发生固缩或裂解。硼替佐米（100、200和400 nmol/L）处理细胞24 h后，Molt-4细胞的Bax mRNA和蛋白表达水平明显增加且可显著上调Bip mRNA和蛋白表达水平。结论:硼替佐米可诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞凋亡，作用机制可能与它调控内质网应激有关。     

扇贝提取物诱导Hela细胞凋亡的研究

目的探讨扇贝提取物对体外培养Hela细胞有无凋亡诱导作用。方法体外培养的Hela细胞经不同浓度的扇贝提取物处理24h,经Hoechst 33258(8g/L)染色进行形态学观察、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术(FCM)检测细胞。结果加扇贝提取物处理后,荧光显微镜下观察发现培养细胞中出现核固缩、凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳可见DNA ladder条带,流式细胞仪检测有凋亡峰。结论扇贝提取物可诱导体外培养Hela细胞凋亡。