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利用丙型肝炎病毒(HCV)5’-端序列合成两对引物,建立了灵敏、特异的HCVRNA双扩增聚合酶链反应检测方法。用此方法及第二代Abbott酶联抗-HCV检测试剂盒,检测了44例非甲非乙型肝炎患者血清及10名抗-HCV阴性健康人。在44例患者中,41例(93%)HCVRNA阳性,36例(82%)抗-HCV阳性,33例(75%)HCVRNA、抗-HCV全部阳性。3例HCVRNA阴性,但抗-HCV阳性,另外,有8例抗-HCV阴性,HCVRNA阳性。10名健康人HCVRNA均为阴性。结果表明,大部分(92%)抗-HCV阳性患者带有HCV,但为了检测所有病毒血症患者,抗-HCV检测是不够的,利用双扩增PCR方法检测HCVRNA对于抗-HCV阴性患者的诊断是非常有用的。 相似文献
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丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立 总被引:15,自引:0,他引:15
目的以特异性单克隆抗体为基础建立丙型肝炎病毒(HCV)抗原检测的酶联免疫吸附(ELISA)法,探索从血浆或血清中检测HCV抗原的可能性.方法利用我们制备的抗-HCV核心及NS3区单克隆抗体(McAbs),进行多种交叉组合模式的分析,确立实验室模式,并测定348份义务献血员血样,确定此方法的Cutofff值,并分析146份抗-HCV阳性及225份抗-HCV阴性血浆,阳性结果用套式PCR试剂盒确证.结果构建了以抗-HCV核心区单抗C39及NS3区单抗C7-6为包被抗体,以C39及NS3区C7-57为标记抗体的夹心ELISA检测模型,以C7为抗原,其检出灵敏度为5ng/ml,其Cutoff值为阴性对照均值±0.25.146份抗-HCV阳性样本中,11份为抗原反应阳性,225份抗-HCV阴性样本中,16份为抗原阳性,这些阳性样本经PCR检测后,23份为HCVRNA阳性.结论用单抗构建的HCV抗原检测方法分别从抗-HCV阳性及阴性样本中检测出HCV抗原反应阳性样本,并经PCR确证,表明直接从血浆样本中检测HCV抗原是可能的,这将对于HCV和基础研究及控制HCV的传播有重要意义. 相似文献
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HCV RNA的PCR检测研究与分析 总被引:1,自引:0,他引:1
应用PCR技术检测HCV RNA,输血后肝炎且抗-C100-3阳性者阳性率为95%(19/20);输血后肝炎而抗-C100-3阴性者阳性率为86.7%(13/15);非输血后肝炎而抗-C100-3阳性者阳性率仅20%(1/5);非输血后肝炎而抗-C100-3阴性者阳性率仅18.2%(2/11)。对克隆的5'-NC端片段的核苷酸序列分析显示,中国株与已公布的美、日、台湾等序列的同源性都很高,可达98 相似文献
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血清中丙型肝炎NS3抗原ELISA检测方法的建立和初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 评价血清中丙型肝炎病毒(HCV)游离NS3抗原的酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的特异性和灵敏度,初步探讨该方法在临床应用中的意义.方法 对77例正常人血清标本,173例抗-HCV阳性标本和3708例抗-HCV阴性的其他类型肝炎血清标本检测HCV游离NS3抗原;对部分HCV NS3抗原阳性标本进行验证,包括HCV RNA测定、中和试验和免疫斑点试验;对11例患者的25份系列血清标本进行了HCV游离NS3抗原、HCV RNA和HCV抗体的联合检测,并结合临床资料综合分析.结果 3708例抗-HCV阴性的其他类型肝炎血清标本中有48例为HCV NS3抗原阳性,其中3030例单纯乙型肝炎和445例其他类型肝炎血清标本中分别有44例和4例为HCV NS3抗原阳性;173例HCV抗体阳性标本中有42例为HCV NS3抗原阳性;77例正常人血清标本的HCV NS3抗原检测结果均为阴性;15例HCV NS3抗原阳性标本中有9例为HCV RNA阳性;23例HCV NS3抗原阳性标本的中和率和免疫斑点试验的阳性率分别为87.0%和69.6%;25份系列血清标本的检测结果显示其HCV NS3抗原的吸光度值与时间呈负相关,并有2例HCV NS3抗原阳性标本随着血清中HCV NS3抗原的吸光度值下降,其HCV抗体转阳.结论 血清中HCV游离NS3抗原的ELISA检测方法有较好的特异性和敏感度,在发展中国家应用此方法进行HCV感染的早期诊断有一定的临床意义和推广价值. 相似文献
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逆转录—巢式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒RNA方法… 总被引:2,自引:0,他引:2
庚型肝炎病毒基因组为单链,正肌RNA,全长9392bp。根据5‘-非编码区基因序列设计合成两对引物。随机选取酶联抗-HGV阳性病人血清3份,阴性病人血清6份,应用逆转录-巢式聚合酶链反应进行检测。结果2份抗-HGV阳性血清可见较强的特异扩增带,1份抗-HGV阳性血清可见较弱的特异扩增带,其余6份抗-HGV阴性血清均无特异性扩增带。 相似文献
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广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
目的了解庚型肝炎病毒(HGV)感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对721例肝炎患者血清进行了HGVRNA检测。结果发现80例HGVRNA阳性,以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高;慢性丙型肝炎(HCV)和慢性乙型混合丙型肝炎(HBV+HCV)次之;在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行 相似文献
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目的 了解广州地区肝炎患者中庚型肝炎病毒(HGV)的感染情况及基因型特点。方法 采用逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested PCR)方法检测出肝炎患者血清中HGV RNA,引物位于HGV基因组的非编码区,并对扩增产物进行直接测序。结果 251例急慢性肝炎血清中共检出25例HGV RNA阳性,总阳性率为9.96%,其中56例非甲-戊型肝炎中要出4例阳性(7.14%),77例乙型肝炎(HB)中检出8例阳性(10.39%),118例丙型肝炎(HC)中检出13例阳性(11.17%);2株HGV广州核苷酸之间的同源性为98.0%,与非洲洲的同源性分别为81.7%和84.2%,与美国株的同源性均为91.1%。结论 广州地区肝炎患者中存在HGV感染,2株HGV广州株可能为同一基因型,且与HGV美国株具有较高的同源性。 相似文献
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采用聚合酶链反应技术(PCR)检测了36例重型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的复制状况,发现较普遍存在HBV复制,阳性率高达78%;HCV复制亦较活跃,为61%。提示病毒因素仍然是引起肝衰竭的重要原因。临床资料表明,同时感染两种病毒的重肝患者(41%)预后较差,HBV引起的肝坏死较HCV引起的更为严重,两者在体内复制有互相抑制作用,但合并感染可造成肝脏的持续损伤。 相似文献
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用抗人μ链单克隆抗体建立的ELISA法检测152例肝病患者IgM类抗HCV独特型抗体,甲肝阳性率0%(0/15),乙肝8.5%(4/47),丙肝32.1%(26/81),丙肝合并乙肝者22.2%(2/9)。丙肝组内频率为急肝0%(0/17),慢性迁延性肝炎38.1%(8/21),慢性活动性肝炎43.8%(14/32),肝炎肝硬化36.4%(4/11)。本法重复性好,批内变异系数4.6%,批间变异系数8.5%。用纯化人抗HCV抗体进行阻断,阻断率>85%,丙肝组与乙肝组有显著性差异(P<0.01),与各种自身免疫性疾病无交叉,有较好的特异性和精密度,且与血清中IgM抗HCV关系密切,提示丙型肝炎IgM类抗HCV-Ab2具有模拟抗原的作用,是慢性丙型肝炎的重要检测指标并与丙肝慢性化有关。 相似文献
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慢性肝炎和肝癌病人血清中乙型肝炎病毒DNA的检测 总被引:5,自引:0,他引:5
为了了解慢性肝炎和肝癌病人患者体内乙型肝炎病毒(HBV)复制与HBV血清标志之间的关系,用酶联免疫吸附实验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)及斑点杂交方法对61例慢性肝炎和47例肝癌患者的HBV表面抗原(HBsAg)、相关e抗原(HBeAg)、表面抗体(抗-HBs)、核心抗体(抗-HBc)、相关e抗体(抗-HBe)进行了检测。结果表明:HBVDNA在HBsAg、HBeAg、/抗-HBc阳性的慢性肝炎和肝癌患者血清中的检出率分别为90.50%和50.00%;在HBsAg/抗-HBe、抗-HBc阳性者的检出率分别为45.40%和7.14%;在HBsAg阳性、HBeAg阴性/抗-HBe阴性者中的检出率分别为60.00%和40.00%;HBsAg阴性、/抗-HBc阳性或/抗-HBe阳性或/抗-HBs阳性者中的检出率分别为20.00%和22.22%;在血清学指标全阴性时,慢性肝炎和肝癌患者血清中HBVDNA的检出率均为0。实验提示:无论是肝炎或肝癌,在HBsAg、HBeAg同时阳性时,HBV复制最为活跃;在单独HBsAg阳性时,HBV有一定程度的复制;HBV复制在肝癌细胞中受到一定程度的抑制。 相似文献
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目的 建立基于酶联免疫吸附试验(ELISA)的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)确认方法,避免错误诊断。方法收集ELISA检测HBsAb〉15COI的血清,取HBsAb阳性;HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;HBsAb、HBcAb阳性三种模式的血清各20份混合,与HBsAgELISA结果浓度〉20COI的血清中和以确认HBsAb的中和活性,制成确认试剂。确认试剂与30例HBsAg弱阳性阳性患者血清中和,HBsAgCOI下降率〉50%判定为阳性,其结果与罗氏确认试剂盒进行比对。结果确认试剂可以很好的中和HBsAg,对30例HBsAg弱阳性标本的判定结果为24例阳性,6例阴性,与罗氏确认试剂盒结果完全一致。结论成功建立HBsAg确认方法,适用于对HBsAg弱阳性样本进行确认,并且简单经济。 相似文献
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丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探索丙型肝炎病毒(HCV)C33抗原在正常人群及各类临床病人血清及肝组织中分布状况。方法用人工合成的HCV核心抗原C33肽(含33个氨基酸)与小鼠血清白蛋白,经异型双功能交联剂SPDP连接后免疫Balb/C小鼠,制成2株C33肽单克隆抗体(McAb),分别用作包被抗体和酶标抗体,建立检测血清中C33肽抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA),共检测了1236例各类病人。并用免疫荧光及固相免疫酶法检测肝活检组织中的HCVC33肽抗原。结果急性丙型肝炎(HC)患者,C33肽的阳性检出率为14.0%(6/43);仅抗-HCVIgG阳性患者C33肽的阳性检出率为8.8%(35/396);慢性丙型肝炎患者为6.5%(4/62);白血病患者为4.3%(1/23);血透病人为3.3%(19/576);普通住院病人为1.5%(2/136);正常供血员为1.4%(6/438)。肝活检免疫荧光、固相免疫酶检测显示HCVC33肽在细胞核、细胞质、细胞膜上均有表达,在胞质中或集中于全胞质一侧或弥散分布于胞质中。结论HCVC33抗原测定,可以作为HCV感染的标志物之一。 相似文献
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自庚型肝炎病毒(HGV)被报道以来,许多国家、地区相继分离出该病毒的基因序列,并发现HGV基因序列存在一定变异,HGV不同基因区以5′非编码区(5′-uTR)变异较小,有学者根据该区序列的变异,认为HGV至少存在三种基因型,以最初报道的美国株HGV(... 相似文献
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庚型肝炎病毒IgM抗体检测方法的建立及其临床意义 总被引:3,自引:0,他引:3
目的建立一种早期、快速诊断庚型肝炎的血清学检测方法。方法以辣根过氧化物酶标记庚型肝炎病毒(HGV)多肽NS3,NS5区段抗原,建立了捕获酶联免疫吸附试验(ELISA),用于检测血清中HGVIgM抗体。结果本法不受特异性IgG的竞争和类风湿因子的干扰;与其它致肝炎的病毒(HAV、HBV、HCV、HEV、CMV、EBV)无交叉反应。检测46例非甲、乙、丙、戊型肝炎患者血清,抗-HGVIgM阳性14例,阳性率30.43%,其中,6例同时为HGVRNA阳性,阳性符合率为42.86%(6/14),检测12例庚型肝炎病人双份血清,其中,急性期血HGVIgM抗体均为阳性。结论该法检测HGVIgM抗体特异性强,敏感性高,且简便快速,适用于临床对庚型肝炎新近感染的早期诊断,有推广应用价值。 相似文献
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一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录-巢式聚合酶链反应方法 总被引:1,自引:0,他引:1
目的庚型肝炎病毒(HGV)与丙型肝炎病毒(HCV)同属黄病毒科,且传播途径相似,重叠感染率高,本研究旨在建立一种同时检测HGV与HCV感染的方法。方法根据HCV与HGV的基因序列分别选取5’-UTR(HCV)与NS3(HGV)的两套引物,在同一管内进行逆转录-巢式聚合酶链反应,并初步应用于153例标本。结果该方法能同时检出HGV与HCV感染,扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异,适用于临床检测 相似文献
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目的采用间接竞争ELISA法对进出口植物产品中对硫磷残留量进行快速筛选。方法将对硫磷还原成氨基对硫磷,利用适当的方法将其与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,制备免疫原免疫家兔并获得特异性抗体。结果采用传统的盐析法提取特异性免疫球蛋白(IgG)并建立了对硫磷间接竞争ELISA快速检测方法。抑制试验表明其检测范围在(100.0±1.56)ng/mL之间,可用于进出口植物产品中对硫磷的定量检测。该方法与气相色谱检测符合率为96%。样品的平均回收率为103%。交叉反应显示该抗体仅与对硫磷、氨基对硫磷反应,而与甲基对硫磷、马拉硫磷、杀螟硫磷、乐果等结构类似物几乎无交叉反应。结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点。 相似文献