银杏叶提取物对黄曲霉毒素B1所致大鼠肝癌相关蛋白表达影响的研究

目的:探讨银杏叶提取物(extract761 from Ginkgo giloba,EGb761)对黄曲霉毒素B1(aflatox B1,AFB1)致大鼠肝癌后相关蛋白表达的影响。方法:71只大鼠随机分为AFB1组(28只),AFB1+EGb761组(29只),空白对照组(14只)。第64周观察大鼠肝癌发生率,应用免疫组化法检测硫酸乙酰肝素类蛋白聚糖(MXR7)、环氧化酶(COX-2)以及细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制蛋白(p16)的表达情况。结果:AFB1组肝癌发生率明显高于AFB1+EGb761组(76%vs28%),χ2=10.602,P<0.05,对照组无肿瘤发生。AFB1+EGb761组MXR7蛋白含量明显低于AFB1组〔(1.488±1.178)vs(5.133±2.725)〕,F=18.638,P<0.001;AFB1+EGb761组p16蛋白含量明显高于AFB1组〔(2.456±1.014)vs(1.533±0.856)〕,F=24.091,P=0.03,AFB1组COX-2蛋白含量为3.305±0.566;AFB1+EGb761组为2.704±0.431,F=9.352,P=0.783。结论...     

银杏叶提取物对AFB1所致大鼠肝癌基因P16Ink4a mRNA及蛋白表达的影响

  目的  动态观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract, EGb761)在抑制黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发大鼠肝癌过程中对肝组织相关基因P161nk4a mRNA表达水平的影响, 进一步从分子生物学水平揭示银杏叶提取物抗癌的机制及其效果。  方法  将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为3组: AFB1组(25只), AFB1+EGb761组(25只)及对照组(20只)。在诱发肝癌过程中, 分别于第13、33及53周对大鼠进行肝组织活检; 至第73周处死全部动物取肝组织。应用实时荧光定量PCR和Westernblot技术动态检测肝组织中P16Ink4a mRNA及相应蛋白的表达情况。  结果  AFB1组原发性肝癌发生率为58.8%(10/17);AFB1+EGb761组为29.4%(5/17);对照组为0(0/16) AFB1+EGb761组肝癌发生率显著低于AFB1组(P < 0.05)。AFB1+EGb761组的肝组织P16Ink4amRNA及相应蛋白表达水平在第53周及第73周时均明显高于AFB1组, 差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  银杏叶提取物(EGb761)具有抑制AFB1致大鼠肝癌的作用。其机制可能与调控肝细胞抑癌基因P16Ink4a mRNA表达水平有关。      

银杏叶对黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌IGF-Ⅱ mRNA及蛋白表达影响的观察

目的:动态观察银杏叶提取物(EGb761)在抑制黄曲霉毒素B1 (AFB1)诱发大鼠肝癌(HCC)过程中对肝组织相关基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平的影响,从分子生物学水平揭示银杏叶抗癌的机制及其效果.方法:将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为AFB1组(25只)、AFB1+ EGb761组(25只)及对照组(20只).在诱发大鼠HCC过程中,分别于第13周、33周及53周对大鼠进行肝组织活检；实验至第73用处死全部动物取肝组织.利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法动态检测肝组织中IGF-ⅡmRNA及相应蛋白的表达情况.结果:AFB1组原发性HCC发生率为58.8％(10/17)；AFB1+EGb761组发生率为29.4％(5/17)；对照组为0(0/16).AFB1+EGb761组HCC发生率显著低于AFB1组(P＜0.05).AFB1+ EGb761组肝组织IGF-2 mRNA及相应蛋白表达水平在第53周及73周较AFB1组均显著下降,差异有统计学意义,P＜o.05.结论:银杏叶提取物(EGb761)具有抑制AFB1致大鼠HCC的作用.其机制可能与调控肝细胞增殖基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平有关.     

银杏叶对黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌IGF-ⅡmRNA及蛋白表达影响的观察

目的：动态观察银杏叶提取物（EGb761）在抑制黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发大鼠肝癌（HCO）过程中对肝组织相关基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平的影响,从分子生物学水平揭示银杏叶抗癌的机制及其效果。方法：将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为AFB1组（25只）、AFB1＋EGb761组（25只）及对照组（20只）。在诱发大鼠HCC过程中,分别于第13周、33周及53周对大鼠进行肝组织活检;实验至第73周处死全部动物取肝组织。利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法动态检测肝组织中IGF-ⅡmRNA及相应蛋白的表达情况。结果：AFB1组原发性HCC发生率为58．8％（10／17）;AFB1＋EGb761组发生率为29．4％（5／17）;对照组为0（o／16）。AFBl＋EGb761组HCC发生率显著低于AFB1组（P〈0．05）。AFBl＋EGb761组肝组织IGF_2mRNA及相应蛋白表达扮平在第53周及73周较AFB1组均显著下降,差异有统计学意义,P％0．05。结论：银杏叶提取物（EGb761）具有抑制AFBl致大鼠HCC的作用。其机制可能与调控肝细胞增殖基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平有关。     

银杏叶提取物对诱发性大鼠肝癌前病变的影响

目的：探讨银杏叶提取物对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发的大鼠肝癌前病变的影响。方法：71只大鼠随机分为3组：AFB1组、银杏叶提取物干预组、正常对照组。前2组予AFB1造模,银杏叶提取物干预组在造模的期间给予银杏叶提取物喂食大鼠。于实验第14、28、42及55周给予留取静脉血并予肝活检并于第64周全部处死大鼠,观察大鼠AFP的变化及肝脏γ-GT灶发生情况。结果：银杏叶提取物干预组大鼠血清AFP以及肝组织γ-GT灶的数量和大小均显著低于AFB1模型组（P=0.000）。结论：银杏叶提取物可减少AFB1诱发大鼠肝脏γ-GT灶的数量和大小以及延缓延缓血清AFP的升高,具有明显抑制AFB1诱发大鼠肝癌前病变的作用。     

茯苓对AFB1致突变的抑制作用

本文以小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和染色体畸变为指标，检测了中药茯苓对黄曲霉毒素Ｂ１致突变作用的影响，结果表明，茯苓煎剂对显著地抑制ＡＦＢ１的致突变作用（Ｐ〈０．０５）并呈量效关系。     

银杏叶提取物对黄曲霉毒素B_1诱发大鼠肝癌过程中生物标志物的影响

目的:探讨银杏叶提取物(extract 761 from Ginkgo biloba,EGb761)对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)在大鼠体内代谢的影响.方法:经AFB_1和EGb761不同处理,获得AFB_1组、AFB_1+EGb761组和空白对照组3组大鼠,分别于实验第14、28及42周给予抽血及肝活检,并于第64周全部处死.观察大鼠肝癌发生率,用分光光度法检测肝组织Ⅰ相酶CYP450和Ⅱ相酶GST活性,用高效液相色谱法检测血清AFB_1-赖氨酸加合物水平,以及应用免疫组织化学法检测8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)蛋白表达情况.结果:肝癌诱发率在AFB_1+EGb761组明显低于AFB_1组(P<0.001),而对照组无肿瘤发生;EGb761对Ⅰ相代谢酶CYP450及Ⅱ相代谢酶GST活性无明显影响.血清AFB_1-赖氨酸加合物的最高水平(4 356.01 pg/mg albumin)发生于实验第14周的AFB_1组.在实验第14、42周时EGB761显著抑制了血清AFB_1-赖氨酸加合物的形成,抑制率分别为13.07% (P＝0.033)、73.63% (P＝0.002).在各检测点的8-OHdG蛋白表达强度显示,AFB_1+Egb 761组均显著低于AFB_1组(P<0.05).结论:EGb761阻断AFB_1致肝癌发生的主要机制可能不完全是通过影响肝脏Ⅰ、Ⅱ相代谢酶活性的途径实现的.EGb761能够抑制AFB_1-赖氨酸加合物的形成,降低8-OHdG蛋白的表达,减轻DNA的氧化损伤,这可能是其最终抑制或延缓AFB_1诱发肝癌发生、发展的机制之一.     

红景天提取物对顺铂致肾细胞毒性的保护作用

目的：研究红景天提取物（RE）对顺铂（DDP）诱导人胚肾细胞（HEK293）氧化损伤的保护作用。方法：体外培养HEK293细胞,将细胞分为对照组、不同浓度（0、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128 mg/L）DDP组、不同浓度（0、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64 mg/L）RE组和（2~16 mg/L）RE+20 mg/L DDP组。CCK-8法测定RE和DDP分别对HEK293细胞生长的影响,以及RE对DDP诱导细胞毒性的保护作用。二硫代二硝基苯甲酸法测定还原型谷胱甘肽（GSH）含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果：与对照组比较,1~128 mg/L DDP导致细胞存活率显著降低（P < 0.01）,且存在剂量-效应关系（r=0.85,P=0.002）;RE浓度在0.5~16 mg/L范围内细胞存活率逐渐升高（P < 0.01）,但当RE浓度为64 mg/L时,可显著抑制HEK293细胞的生长（P < 0.01）;6~16 mg/L RE预处理后,对20 mg/L DDP所致细胞存活率的抑制有显著保护作用（与DDP组比较,P < 0.01）。与DDP组比较,RE能显著抑制DDP所致细胞内MDA含量的升高以及SOD活力和GSH含量的下降（P均 < 0.01）。结论：RE能提高HEK293细胞活力,并能拮抗DDP所致细胞氧化损伤,对DDP致肾细胞毒性具有明显的保护作用。     

托盘根乙醇提取物的抗癌作用研究

目的　观察托盘根乙醇提取物 ( ERC)对肿瘤生长的影响。方法　用 MTT法观察 ERC体外对人肿瘤SPC- A- 1细胞的影响 ,体内抑瘤实验观察 ERC对 L ewis肺癌的作用。结果　 ERC体外明显抑制 SPC- A- 1细胞的生长 ,体内明显抑制 L ewis癌块增大 ,减少 L ewis肺转移结节数。结论　 ERC对肺癌细胞系有明显抗肿瘤作用     

银杏叶提取物对肾脏疾病的保护作用

据《本草纲目》记载，银杏叶入肾、肺二经。银杏叶提取物（extract of Ginkgo biloba，EGB）是从银杏叶中提取的天然活性物质。主要有效成分为黄酮类和萜类内酯化合物。国内外研究表明EGB具有抗血小板活化因子（PAF）、抗脑缺血缺氧、降血脂、清除自由基、抗炎和增强神经系统活性等药理作用，且不良反应较少，临床上已广泛用于心脑血管疾病、高脂血症、神经系统疾病等的治疗，并已取得良好效果。近年来一些研究发现EGB对多种肾脏疾病有保护作用，现对有关进展综述如下。[第一段]     

银杏叶提取物（EGb761）对乙型肝炎病毒抗原分泌的抑制作用

目的探讨银杏叶提取物对乙型肝炎病毒分泌抗原的抑制作用。方法用不同浓度的银杏叶提取物作用于HepG2.2.15细胞。期间分不同的时间段用MTT法检测银杏叶提取物对HepG2.2.15细胞的毒性作用并收集细胞上清,用酶联免疫吸附法定量检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）及乙肝e抗原（HBeAg）。结果银杏叶提取物对HepG2.2.15细胞没有明显的毒性作用;经银杏叶提取物作用过的细胞,其培养上清中的乙肝表面抗原及乙肝e抗原明显少于未加该药作用者。结论银杏叶提取物可以抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg,且对细胞没有明显的毒性作用。     

银杏叶提取物(EGb761)对乙型肝炎病毒抗原分泌的抑制作用

目的 探讨银杏叶提取物对乙型肝炎病毒分泌抗原的抑制作用.方法 用不同浓度的银杏叶提取物作用于HepG2.2.15细胞.期间分不同的时间段用MTT法检测银杏叶提取物对HepG2.2.15细胞的毒性作用并收集细胞上清,用酶联免疫吸附法定量检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)及乙肝e抗原(HBeAg).结果 银杏叶提取物对HepG2.2.15细胞没有明显的毒性作用;经银杏叶提取物作用过的细胞,其培养上清中的乙肝表面抗原及乙肝e抗原明显少于未加该药作用者.结论 银杏叶提取物可以抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg,且对细胞没有明显的毒性作用.     

Effects of Ginkgo biloba extract on expression of biomarkers during aflatoxin B1-induced hepatocarcinogenesis in Wistar rats

Objective

The aim of this study was to study the effect of Ginkgo biloba extract (EGb761) on metabolism of aflatoxin B₁ (AFB₁) in Wistar rats.

Methods

Seventy one Wistar rats were assigned at random to groups A, B and C. Rats in groups A, B were injected with AFB₁ (intraperitoneal, 100–200 μg/kg body weight, 1–3 times/week). Group C was normal control. Rats in group B were fed in food with EGb761, while rats in groups A, C were given normal food. Blood samples were collected and liver biopsies were performed on the 14th, 28th and 42nd week. All the rats were sacrificed on the 64th week. The incidence of hepatocarcinoma was investigated. The hepatic phase I drug-metabolizing enzyme Cytochrome-P450 (CYP450) and phase II metabolizing enzyme glutathione S-transferase (GST) were analyzed with spectrometry. Serum AFB₁-lysine adduct levels were assessed with high performance liquid chromatography (HPLC). The expression of 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) was measured with immunohistochemistry.

Results

The incidence of hepatocellular carcinoma (HCC) in group B was significantly lower than that in group A (26.92% vs 76.00%, P < 0.001). No HCC developed in group C. EGb761 showed no effects on the activities of CYP450 and GST in rat liver tissues. The level of AFB1-lysine adduct reached the peak (4356.01 pg/mg albumin) at the 14th week in group A. EGb761 significantly inhibited the formation of AFB1-lysine adduct in serum by 13.07% at the 14th week (P = 0.033), and 73.63% at the 42nd week (P = 0.002). The expression of 8-OHdG protein in rat liver tissues in group B was significantly lower than that in group A at the 28th, 42nd, and 64th week (P < 0.05).

Conclusion

The main mechanism underlying the effect of EGb761 in blocking hepatocarcinogenesis induced by AFB1 may not be fully attributable to its influence on the activity of liver phase I and phase II metabolizing enzymes. EGb761 inhibits the production of AFB₁-lysine adducts, decreases the expression of 8-OHdG protein, and finally alleviates the DNA oxidative injury, which may be one of the mechanisms for the effects of EGb761 in inhibiting or delaying AFB1-induced hepatocarcinogenesis.     

大黄素抑制PDGF诱导的肝癌细胞增殖

目的观察大黄素（Emodin,EM）对血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）诱导的人肝癌HepG2细胞体外增殖的影响并探讨其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,经一定量的PDGF或PDGF与EM共同作用后,以MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;免疫细胞化学法检测细胞NF-κB及PDGF的表达。结果在2.5～5.0ng/mL浓度范围内,外源性PDGF可明显促进HepG2细胞增殖,抑制细胞凋亡,影响细胞周期,使G0/G1期比例降低,S期比例增高。并能增强NF-κB的表达,PDGF各处理组与对照组相比,P〈0.05。而EM可明显抑制PDGF的上述作用,EM处理组与PDGF处理组相比,细胞增殖数、细胞凋亡率、细胞周期分布、NF-κB的表达差异均有统计学意义,P〈0.05。且EM可直接抑制PDGF的表达。结论EM对PDGF诱导的人肝癌HepG2细胞增殖有显著抑制效应,其机制可能与直接减弱PDGF的效应有关。     

银杏叶提取物对三氯乙烯诱导人角质形成细胞线粒体损伤的保护作用

背景与目的： 研究三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)对人角质形成细胞(keratinocytes,KC)线粒体的损伤以及银杏叶提取物(ginkgo biloba extract ,EGb)对其损伤的保护作用,为防治三氯乙烯药疹样皮炎提供基础资料和理论依据。 材料与方法： 分离制备体外培养KC,接种于培养板/皿中,分成TCE染毒组、EGb保护组,溶剂对照组和空白对照组,TCE染毒组以不同浓度TCE(0、0.125、0.5和2.0 mmoL/L)及不同时间(0、4、8、12和24 h)处理体外培养的KC,EGb保护组则以不同浓度EGb(0、10、50、100和150 mg/L)预处理 2 h后再用2.0 mmoL/L TCE进行染毒, 溶剂对照组和空白对照不加入TCE和EGb,以使用含1％丙酮(体积分数)的培养基为溶剂对照组,以新鲜培养基作为空白对照组。采用MTT法观察细胞活力和线粒体酶抑制率变化,检测ATP酶活力,间接反映线粒体能量变化情况,通过流式细胞术结合罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)双染法检测线粒体膜电位的改变情况。 结果： 随着TCE浓度的升高和作用时间的延长,细胞活力、ATP酶活性和线粒体膜电位下降,线粒体酶抑制率升高,当TCE浓度超过0.5 mmol/L,作用时间大于8 h时,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05); EGb保护组在EGb浓度为10 mg/L时即可起到保护作用(与2.0 mmol/L TCE染毒组比较,P<0.01),当EGb浓度增加到150 mg/L时线粒体功能状态接近正常对照组水平(与溶剂对照组比较,P>0.05)。 结论： TCE可引起人KC线粒体损伤,EGb对这种损害具有保护作用。     

Protective effect of dehydroepiandrosterone against aflatoxin B1-and 7,12-dimethylbenz(a)anthracene-induced cytotoxicity and transformation in cultured cells.

Dehydroepiandrosterone, an adrenal steroid that has been reported to be produced in subnormal amounts and found in lower plasma concentrations in women with benign and malignant breast tumors, protects cultured rat liver epithelial-like cells against aflatoxin B1-induced cytotoxicity and protects hamster embryonic fibroblasts against aflatoxin B1- and 7,12-dimethylbenz(a)anthracene-induced transformation. Related androgenic steroids show significantly less protective effect. Dehydroepiandrosterone also inhibits the rate of conversion of [3H]-7,12-dimethylbenz(a)anthracene to water-soluble metabolites by rat liver epithelial-like cells, suggesting that the steroid probably exerts its protective effect by inhibiting carcinogen activation.     

线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥诱导BEAS-2B细胞损伤的影响

目的: 探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥(HN2)诱导人支气管上皮细胞系BEAS-2B的影响。方法: BEAS-2B细胞分为正常对照组、Mito-TEMPO对照组、HN2染毒组和Mito-TEMPO干预组,其中正常对照组和Mito-TEMPO对照组分别给予含DMSO(体积分数为0.1%)和Mito-TEMPO(100μmol/L)的无血清培养基处理26 h,HN2染毒组给予含DMSO的无血清培养基预处理2 h,然后给予HN2(8μmol/L)染毒24 h,Mito-TEMPO干预组给予Mito-TEMPO(100μmol/L)预处理2 h,然后HN2(8μmol/L)和Mito-TEMPO(100μmol/L)共处理24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活性,速率法检测细胞培养基上清乳酸脱氢酶(LDH)活性,倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI探针法流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1探针法检测线粒体膜电位,紫外分光光度法检测细胞匀浆ATP含量,MitoSOX、DCFH-DA、DHE探针法分别检测细胞内线粒体ROS、H2O2及总ROS水平,实时荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。结果: 与HN2染毒组相比,Mito-TEMPO干预组细胞活性降低了约42.6%(P<0.05),细胞上清LDH水平显著增加(P<0.05),同时伴有异常形态细胞增多,Mito-TEMPO干预组细胞线粒体ROS水平降低了53.6%(P<0.05),细胞内H2O2水平及总ROS水平分别升高了171%和43.4%(均为P<0.05)。Mito-TEMPO干预对HN2染毒导致的细胞凋亡比例、线粒体膜电位、ATP含量、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平等指标改变均无显著影响(P>0.05)。结论: 100μmol/L的Mito-TEMPO干预在HN2染毒BEAS-2B细胞模型中促进了细胞损伤,其机制可能与提高细胞内H₂O₂水平及总ROS水平有关。     

三氧化二砷诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的线粒体机制

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡效应及其对线粒体膜电位的影响。方法比色法观察As2O3对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响;AnnexinⅤ荧光探针和流式细胞仪检测早期凋亡细胞;罗丹明123(Rhodamine123)荧光探针染色后,荧光显微镜下观察活细胞线粒体改变,并经流式细胞仪分析线粒体膜电位变化。结果As2O3明显抑制SK-N-SH细胞的增殖;As2O3诱导SK-N-SH细胞早期凋亡时线粒体膜电位降低。结论降低线粒体膜电位可能是As2O3诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的机制之一。