miR-141-3p通过调节Keap1-NRF2/ARE信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的影响

目的 探讨miR-141-3p对急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠肺纤维化的影响及作用机制。方法 将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、agomir-NC组、miR-141-3p agomir组,每组10只;除对照组外,其余大鼠采用脂多糖（LPS）滴注法构建ARDS模型;将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN细胞分为NC组、LPS组、miR-NC组、miR-141-3p mimics组、miR-141-3p mimics+pcDNA组、miR-141-3p mimics+NRF2与Kelch样环相关蛋白1(Keap1)组,除NC组外,其余各组建立LPS细胞模型;qPCR检测肺组织和细胞中miR-141-3p、Keap1 mRNA表达;Western blot检测肺组织和细胞上皮型钙黏附素（E-cadherin）、神经型钙黏附素（N-cadherin）、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、自噬相关基因Beclin-1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、Keap1、核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素氧合酶1(HO-1)表达;HE和Masson染色观察肺组织病理变化...     

Notch信号通路在脑缺血损伤中的作用机制研究进展

Notch受体通过与不同的配体相互作用,调节细胞的增殖、分化、突触可塑性与神经元衰老,在细胞的生长、发育过程中发挥着重要的作用。脑缺血损伤会激活Notch信号通路,活化的Notch信号通路通过调节神经细胞的凋亡、免疫细胞的炎症反应、以及血管生成和神经发生,对缺血后的损伤修复起着重要作用。本文以Notch信号通路为核心,详细探究其在脑缺血损伤中的作用机制,为脑缺血损伤的修复和治疗打下基础。     

萝卜硫素对结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成及miR-34a/Notch1信号通路的影响

摘要：目的:探讨萝卜硫素对结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成及miR-34a/Notch1信号通路的影响。方法:设结肠癌HT-29细胞组、氟尿嘧啶组(20.0μg·ml-1)、萝卜硫素低(100.0μg·ml-1)、高(1 000.0μg·ml-1)剂量组,置于37℃、5%CO2的环境中培养72 h,培养结束后,细胞计数试剂盒-8测定法测定细胞增殖能力,Giemsa溶液染色细胞计算集落总数,BD Matrigel基质培养测定结肠癌HT-29细胞相对总血管长度、相对总血管数目,流式细胞仪测定凋亡率,RT-PCR法及Western blot测定miR-34a、Notch1 mRNA及Notch1蛋白水平。结果:与结肠癌HT-29细胞组比较,氟尿嘧啶组、萝卜硫素低、高剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）;随着萝卜硫素剂量的增加,萝卜硫素各剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）;与氟尿嘧啶组比较,萝卜硫素各剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著升高（P<0.05）,凋亡率显著降低（P<0.05）。结论:萝卜硫素能抑制结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成,并能促进HT-29细胞凋亡,其机制与萝卜硫素抑制miR-34a、Notch1基因和蛋白的表达有关。     

神经干细胞增殖分化的JAK/STAT与Notch信号通路串话机制

JAK／STAT通路参与细胞的增殖、分化和凋亡等过程,近年来的研究显示,其在胚胎发育、成年个体脑肿瘤、脑缺血及损伤后脑内神经干细胞增殖过程中发挥重要作用。Notch介导的信号通路广泛存在于所有已知动物细胞中,是调控神经干细胞增殖、分化的经典信号通路。两条通路形成一个整体网络调控着神经干细胞增殖分化,本文综述Notch通路与JAIL／STAT通路在神经干细胞增殖过程中各组分的相互联系,旨在从网络药理学角度为脑缺血后神经保护及调控神经干细胞增殖药物的开发提供基础理论支持。     

外源性bFGF、VEGF对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖分化影响的实验研究

目的制备大鼠脊髓损伤模型,研究外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)联合移植对内源性神经干细胞(ENSCs)是否具有促增殖分化作用。方法成年Wistar大鼠56只,随机分成四组:A组为生理盐水组(n=14);B组为bFGF组(n=14);C组为VEGF组(n=14);D组为bFGF、VEGF组(n=14)。用Allen法在T10节段制备大鼠脊髓损伤模型,损伤后立即分别给予生理盐水、bFGF、VEGF、bFGF和VEGF。术后各时间点BBB评分系统监测大鼠运动功能的恢复,并在术后21d取材,处死前24h腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu),取损伤部位近远端各5mm脊髓组织,行HE染色,免疫组织化学法检测Brdu、巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况。结果 (1)损伤后21d,bFGF、VEGF合用治疗组BBB高于其它三组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)损伤后21d时,bFGF、VEGF治疗组组织形态学基本接近正常脊髓组织。(3)免疫组织化学结果:损伤后21d时,bFGF、VEGF治疗组,神经干细胞数量和神经元数量明显高于其它组(P<0.05)。结论联合移植外源性bFGF、VEGF对ENSCs增殖和向神经元方向分化具有促进作用,且二者具有协同作用。     

骨髓间充质干细胞经 Nrf2/HO?1信号通路对创伤性脊髓损伤大鼠神经的保护作用

目的 分析骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植通过因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路对脊髓损伤(SCI)大鼠神经保护作用影响.方法 选取无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠,分为假手术组、模型组和实验组,模型组和实验组大鼠制备SCI模型,成功造模后实验组大鼠将0.5 mL的BMSCs细胞悬液(1×107/mL)经尾静脉注射,模型组与假手术组大鼠注射等剂量PBS溶液.观察BMSCs细胞培养状况,各组大鼠BBB评分、受损脊髓组织病理形态、免疫荧光染色追踪移植细胞及受损组织内Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白、凋亡相关蛋白等表达.结果 脊髓受损后7、14、21、28 d时实验组大鼠BBB评分分别为(6.27±1.44)分、(11.15±1.53)分、(14.02±1.50)分、(15.14±1.60)分,均高于模型组的(4.73±1.35)分、(8.52±1.49)分、(9.95±1.62)分、(11.67±1.65)分(P<0.05);模型组大鼠受损脊髓组织内IL-6、TNF-α蛋白表达较假手术组升高,实验组大鼠受损脊髓组织内IL-6、TNF-α蛋白表达较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠受损脊髓组织内Nfr2、NQO1、HO-1蛋白表达较假手术组升高,实验组大鼠受损脊髓组织内Nfr2、NQO1、HO-1蛋白表达较模型组组升高,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠受损脊髓组织内GFAP蛋白表达较假手术组升高,NeuN蛋白表达较假手术组降低;实验组大鼠GFAP蛋白表达比模型组下降,NeuN蛋白表达比模型组上升,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BMSCs移植可抑制SCI大鼠星形胶质细胞活化和神经细胞凋亡,减轻炎症反应,加速恢复运动神经功能,其作用机制可能和Nrf2/HO-1信号通路激活有关.     

基于MAPK/ERK信号通路探讨当归多糖对脑缺血再灌注损伤大鼠的影响

目的 探讨当归多糖对脑缺血再灌注损伤大鼠丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响.方法 选SPF级健康雄性SD大鼠65只,随机分为对照组12只和造模组53只.造模采用大脑中动脉阻塞法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,对照组大鼠给予假手术.将造模成功的大鼠随机分为模型组、西药组及当归多糖低、...     

miR-185与Apba-1在大鼠脑缺血再灌注损伤的表达变化及调控关系

目的：探讨miR-185与Apba-1在脑缺血再灌注损伤的表达差异及调控关系。方法将雄性SD大鼠60只随机选择10只为假手术组,其余大鼠给予线栓法构建大脑中动脉梗死再灌注模型,将存活并且按Garcia评分法进行神经功能评分差值≤3分的30只大鼠随机分成3个实验组(术后1 d组、3 d组、7 d组),每组10只。定量反转录酶-聚合酶链反应检测各组大鼠脑组织miR-185和Apba-1 mRNA的表达。蛋白免疫印迹法检测Apba-1蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-185与Apba-1的调控关系。结果与假手术组比较,miR-185 mRNA在各实验组脑组织的表达量明显升高(P <0．05),且表达量随再灌注时间延长在各实验组间呈逐渐上升的趋势(P <0．05);Apba-1 mRNA在各实验组脑组织表达量明显降低(P<0．05,P<0．01);且表达量随再灌注时间延长在各实验组间呈逐渐下降的趋势( P<0．05)。并且miR-185能直接作用于Apba-1的3'非翻译区预计靶位点从而调控Apba-1的表达。结论 miR-185和Apba-1在脑缺血再灌注损伤后均存在表达差异,且miR-185可负性调控Apba-1的表达。     

注射用丹参多酚酸对MCAO/R大鼠Nrf2/Keap1/HO-1信号通路的影响

目的 采用大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（MCAO/R）模型考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠核因子E2相关因子2（Nrf2）/Kelch样ECH相关蛋白（Keap1）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路的影响。方法 线栓法构建大鼠MCAO/R模型,于术后24 h进行神经功能评分,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞（5 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.76、11.51、23.02 mg·kg^-1）组,尾iv给药,连续14 d。考察给药后各组大鼠神经功能缺损评分;ELISA法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脑源性神经营养因子（BDNF）水平;TTC染色法检测脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理变化;Western blotting法检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,SAFI中、高剂量组和丁苯酞组大鼠的神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05、0.01） ;SAFI各剂量组和丁苯酞组脑梗死体积显著减少（P＜0.01、0.001）,血清BDNF、SOD水平均显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,MDA水平显著降低（P＜0.05、0.01）,脑组织病理变化明显减轻,水肿减轻; SAFI高、中剂量组及丁苯酞组Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,SAFI低剂量组Keap1、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.01、0.001）。结论 SAFI可以减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,可能是通过促进Nrf2/Keap1/HO-1信号通路,抑制氧化损伤实现的。     

神经干细胞中Notch和生长因子/细胞因子信号通路间的相互作用

多能神经干细胞增殖和分化的精确控制对神经系统的正常发育是至关重要的。在哺乳动物中枢神经系统发育过程中，3种主要神经细胞来源于神经干细胞（NSCs）：神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。成纤维细胞生长因子（FGF2）和表皮生长因子（EGF）参与NSCs的调控。在晚期发育中这些生长因子，特别是骨形成蛋白（BMPs）和白介素-6家族细胞因子也调节NSCs对神经胶质原信号的应答。通过Notch跨膜受体的信号则是NSCs另一个重要的调节机制。     

ERK1/2信号通路在角质细胞生长因子-2诱导角膜基质细胞增殖中的作用

目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测磷酸化ERK1/2表达水平。结果 KGF-2在1～100 mg·L-1对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;100 mg·L-1 KGF-2处理角膜基质细胞,5、15、30 min后ERK1/2磷酸化表达水平明显升高,60、90、120、180 min后ERK1/2磷酸化表达水平逐渐减弱;20μmol.L-1 ERK1/2抑制剂PD98059可抑制KGF-2对角膜基质细胞的促增殖作用。结论 KGF-2激活ERK1/2信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;ERK1/2信号通路调控角膜基质细胞的增殖,在角膜基质细胞损伤中发挥作用。     

p53/miR-34a通路介导羽扇豆醇的抑制人膀胱癌T24细胞增殖作用

摘 要 目的：探讨羽扇豆醇对人膀胱癌T24细胞增殖的影响及对p53/miR-34a通路调控机制。方法: 运用CCK-8法检测不同浓度羽扇豆醇（5~120 μmol·L^-1）分别作用24 h和48 h对T24细胞增殖的影响;运用CCK-8法结合Caspase抑制药确证参与羽扇豆醇诱导细胞死亡的Caspase亚型;分别运用荧光定量PCR（qPCR）和蛋白免疫印记评价羽扇豆醇对miR-34a及p53蛋白表达的影响;运用qPCR评价羽扇豆醇对miR-34a下游靶基因Bcl-2、CD44、c-Myc的mRNA表达的影响。结果: T24细胞经羽扇豆醇处理后,其细胞增殖受到明显抑制,且呈一定的剂量依赖性;药物作用24 h和48 h时羽扇豆醇的半抑制浓度（IC₅₀）分别为（77.23±6.78）,（64.58±4.23）μmol·L^-1。与对照组相比,羽扇豆醇能够使T24细胞中p53蛋白表达上调,还能够增加miR-34a表达水平,差异具有统计学意义（P<0.01）;羽扇豆醇处理后细胞内Bcl-2、CD44、c-Myc的mRNA表达量下调,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:羽扇豆醇具有抑制膀胱癌T24细胞增殖能力,其作用机制与调控p53/miR-34a通路有关。     

基于Wnt信号通路的中药治疗脑缺血/再灌注损伤研究进展

Wnt信号通路可以调控神经干细胞增殖与分化、神经细胞生长与发育,与缺血性脑卒中后的脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury, CIRI)治疗机制有着密切联系。研究表明,一些具有补肾滋肝、益气养阴、活血行气、祛瘀化痰等功效的单味中药及中药复方能激活脑内Wnt信号通路发挥治疗CIRI作用,其中医本质是针对CIRI的肝肾阴虚、气血衰少、血瘀痰毒核心病机进行辨证施治。该文总结了枸杞、山茱萸、姜黄、丹参等单味中药及脑络欣通、丹龙醒脑方、益气活血方、补肾生髓方、黄精丸等中药复方通过调控脑内Wnt信号通路治疗CIRI的研究结果,并分析得出中药补肾生髓、益气填精其现代医学实质与激活Wnt信号通路后促进机体脑血管新生与重塑、刺激脑内特定区域神经干细胞增殖分化有着密切相关性,活血祛瘀、化痰清毒则与激活Wnt信号通路后改善脑部血液供应,发挥抗炎、抗自由基、抗氧化等功能有关。     

Ephrinb1-EphB2-Map2信号通路在柚皮素促进脑缺血后海马神经发生中的作用

目的 探讨柚皮素（NAR）对脑缺血小鼠内源性海马神经发生的改善作用及可能机制。方法 双侧颈总动脉夹闭法建立急性脑缺血模型;HE染色检测病理变化;Morris水迷宫评估认知功能;免疫荧光观察神经发生;RT-PCR和Western blot检测海马ephrinb1、EphB2、Map-2表达。结果 与假手术组相比,模型组小鼠脑缺血后海马CA1区锥体神经元明显损伤（P<0.01）,学习记忆功能明显下降（P<0.01）,这些结果提示,小鼠出现了脑缺血损伤。同时,模型组小鼠BrdU、DCX、BrdU/NeuN阳性表达增加（P<0.01）,提示脑缺血后海马区出现神经发生。与模型组相比,NAR治疗后小鼠CA1区病理损伤明显改善,学习记忆能力明显提高,神经发生进一步得到促进。同时,海马ephrinb1、EphB2、Map-2的mRNA和蛋白表达水平分别上调（P<0.05）。结论 NAR可促进脑缺血后海马神经发生,改善认知功能,其机制可能与ephrinb1/EphB2/Map-2通路的激活有关。     

外伤性背侧脊髓损伤对膀胱排尿神经通路的影响

目的采用伪狂犬病毒(PRV)示踪技术观察大鼠背侧胸腰脊髓损伤(SCI)所致的膀胱排尿神经通路改变。方法清洁级雌性SD大鼠24只,采用随机数字表法分为2组:假手术组12只和背侧SCI损伤组12只。使用标准化SCI动物模型实验装置来制备动物模型,损伤部位定于T12～L1水平,假手术组大鼠仅咬除棘突及椎板,不损伤脊髓。SCI由背侧损伤脊髓,模型制备后,即刻对无SCI、SCI大鼠膀胱壁注射PRV,注射后96h直接取材,免疫组织化学方法显示大鼠脊髓切片中PRV阳性神经元。结果 PRV阳性神经元经免疫组织化学显色后呈棕黄色,观察切片SCI平面以上及以下均出现阳性神经元。SCI节段平面以上切片与对照组比较,阳性神经元显著减少;节段平面以下切片与对照组比较,阳性神经元增加。结论 SCI后,损伤导致受伤脊髓节段以上排尿反射通路受阻,进而SCI平面以下膀胱排尿反射通路发生代偿。     

GM-1对新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:观察不同剂量神经节苷脂(GM—1)对神经干细胞增殖和分化的影响。方法:从新生大鼠海马组织分离出神经干细胞,分别培养于基础培养液(阴性对照组) ,加入三种不同剂量GM—1(实验组)及含有b FGF(阳性对照组)的神经干细胞培养液。采用神经干细胞球直接计数法测定细胞的增殖能力,并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果:3个实验组神经干细胞的增殖能力较阳性对照组无明显差异,较阴性对照组差异显著,贴壁培养细胞分化发现3个实验组分化能力明显低于阳性对照组。结论:GM—1对新生鼠神经干细胞的增殖起促进作用,对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

同型半胱氨酸对体外大鼠神经干细胞增殖及Notch信号通路相关基因表达的影响

【摘要】目的 研究同型半胱氨酸（Hcy）对体外大鼠神经干细胞(NSCs)增殖及Notch信号通路相关基因Notch1和Hes1mRNA表达的影响。方法 采用无血清培养原代培养新生大鼠NSCs,细胞分为对照组(Hcy-C)、Hcy低剂量组（Hcy-L）、Hcy中剂量组（Hcy-M）、Hcy高剂量组（Hcy-H）。采用免疫组化法检测Nestin、β-tubulin Ⅲ及GFAP的表达对NSCs进行鉴定,MTT法检测细胞增殖情况,Real-time PCR检测Notch1、Hes1基因mRNA表达。结果 无血清培养条件下,所培养细胞形成大量呈Nestin抗原阳性细胞组成的神经球;诱导分化6d后,形成β-tubulin Ⅲ表达呈阳性的神经元和GFAP表达呈阳性的星形胶质细胞;Hcy干预组细胞活力低于对照组,且有剂量依赖性(P<0.05)。Hcy干预组Hes1mRNA表达低于对照组(P<0.05)。Hcy-H组Notch1mRNA表达低于其他3组(P<0.05);Hcy-M组Notch1mRNA表达低于对照组和低剂量组(P<0.05)。结论 Hcy能抑制大鼠新生鼠NSCs的增殖,可能与下调Notch信号通路中Notch1和Hes1mRNA表达有关