越婢汤和固精方对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠肾小球足细胞损伤的影响

目的探讨发汗解表法(越婢汤)与补肾固精法(固精方)治疗肾病综合征的疗效及可能机制。方法 40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、越婢汤组、固精方组,每组10只。除正常组外其余各组大鼠采用单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷9 mg/100 g建立肾小球足细胞损伤大鼠模型。造模后第2天开始越婢汤组每天灌胃给予含生药越婢汤2.1 g/100 g,固精方组每天给予含生药固精方7.5 g/100 g,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水,连续2周。检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮、尿酸、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯,尿蛋白定量和尿肌酐,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达,观察肾小球病理改变及足细胞超微结构。结果与正常组比较,模型组大鼠尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯上升,血清白蛋白水平降低,尿蛋白肌酐比增加,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,越婢汤及固精方组血清尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、尿蛋白肌酐比下降,白蛋白上升,肾组织TRPC5、TRPC6 mRNA亦降低(P<0.05)。越婢汤组血清白蛋白、尿酸水平、肾组织TRPC5 mRNA表达低于固精方组,而TRPC6 mRNA高于固精方组(P<0.05)。结论越婢汤、固精方可能通过调控肾组织TRPC5及TRPC6表达,减轻足细胞损伤,从而改善肾病综合征的低蛋白、高血脂表现。     

糖肾合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、podocin表达的影响

目的:探讨糖肾合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin的调节作用及其对肾脏的保护机制。方法:22只SD大鼠采用高糖高脂饲料联合1%链脲佐菌素以35mg/kg腹腔注射的方法复制糖尿病大鼠模型,17只造模成功的大鼠随机为模型组8只,糖肾组9只,另取8只大鼠作为正常组。予药物干预8周后检测大鼠体重、24小时尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮及血浆白蛋白等生化指标。肾脏做病理切片观察结构改变。用Western blotting法和PCR法测定肾组织中Nephrin、podocin蛋白及NephrinmRNA、podocinmRNA的表达水平。结果:糖肾合剂干预后大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮明显降低(P0.05),血浆白蛋白显著升高(P0.05);病理减轻;Nephrin、Podocin蛋白及NephrinRNA、PodocinmRNA表达升高(P0.05)。结论:糖肾合剂保护肾脏的机制可能与上调肾脏足细胞上的Nephrin、podocin的表达有关。     

淫羊藿苷对局灶节段性肾小球硬化模型大鼠泼尼松抵抗的影响

目的观察淫羊藿苷对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)模型大鼠泼尼松抵抗的影响,探讨其可能的作用机制。方法 48只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(10只)和造模组(38只),大鼠尾静脉注射阿霉素(6.0mg/kg)制备FSGS模型,大鼠尿蛋白100mg/24h并随机选取2只造模大鼠的肾组织病理为FSGS提示造模成功,其余36只大鼠随机分为模型组(10只)、泼尼松组(10只)、淫羊藿苷组(8只)、泼尼松联合淫羊藿苷组(联合组,8只),给予相应药物灌胃干预6周,称重,检测24 h尿蛋白(24 h-UTP)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、胆固醇(CHOL)、三酰甘油(TG)、皮质醇(COR)、尿17-羟皮质醇(U17-OHCS)水平,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,Western blot和RT-PCR分别检测Nephrin、Podocin蛋白和m RNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量降低,出现大量蛋白尿,肾功能损害严重,伴低蛋白血症及高脂血症,血COR、U17-OHCS含量明显降低(P0.01),病理显示肾小球出现硬化灶并缩小,部分肾小管内可见蛋白管型,Nephrin、Podocin蛋白和m RNA表达明显降低(P0.01);与模型组比较,泼尼松组和淫羊藿苷组大鼠上述异常无明显改善,联合组低体质量、蛋白尿、肾功能及代谢异常明显改善,病理损伤改善,血COR、U17-OHCS含量明显升高(P0.05,P0.01),Nephrin、Podocin蛋白和m RNA相对表达量明显升高(P0.05)。结论淫羊藿苷可改善FSGS模型大鼠对泼尼松的抵抗性,其机制可能与保护足细胞相关。     

消渴汤对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响

目的:探究消渴汤对糖尿病肾病大鼠的肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响。方法:选取4周龄健康雄性Wistar大鼠45只,采用随机数字表法分为:正常组、对照组和实验组,每组各15只;对照组和实验组大鼠采用一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)55mg/kg方法制作糖尿病肾病(DN)模型;各组大鼠分别于完成造模后第0、2、4周采用自动生化分析仪检测大鼠血肌酐、尿素氮、血糖和24 h尿蛋白含量水平;采用Western blotting检测各组大鼠肾皮质中Nephrin和Podocin蛋白表达情况;使用HE染色观察大鼠肾小球结构。结果:实验前,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验2周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组及对照组相比各项指标均无差异(Ρ0.05);实验4周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组与对照组相比各项指标均有下降(P0.05);相比正常组实验组及对照组大鼠肾组织nephrin和podocin蛋白表达显著降低(P0.05);实验组Nephrin和Podocin蛋白水平高于对照组(P0.05)。HE染色结果显示,使用消渴汤治疗后大鼠肾小球体积相对对照组减小,肾小管间质病变减轻,纤维化和炎细胞浸润显著改善。结论:消渴汤可以通过抑制炎症、调节糖代谢并增加大鼠足细胞数目来实现治疗糖尿病肾病。     

益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达TRPC6的影响

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达TRPC6的影响,探讨不同类中药的作用强度。方法:应用PAN(50μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6 mRNA及蛋白的影响。结果:(1)RT-PCR结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6mRNA表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,化瘀组、清热组、复方组表达TRPC6mRNA明显低于对照组(P0.01)和益气组(P0.05),而3组之间无显著差异(P0.05),益气组与对照组也无显著差异(P0.05)。含药血清作用48 h后,益气组、化瘀组、清热组及复方组表达TRPC6mRNA均显著低于对照组(P0.05),且4组之间无明显差别(P0.05)。(2)Wersten印迹结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6蛋白表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,益气组、化瘀组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.05),清热组、复方组与对照组相比无显著差异(P0.05),且4组间差异不明显(P0.05)。各含药血清作用48 h后,益气组、清热组、复方组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.01),化瘀组与对照组相比无差别(P0.05);复方组、益气组、清热组3者在TRPC6蛋白表达上无差别(P0.05);化瘀组TRPC6表达水平高于复方组(P=0.0080.01),而与益气组、清热组相比无显著差异(P0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方均能抑制造模足细胞TRPC6mRNA和蛋白的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,抑制TRPC6表达的作用强度不同。     

益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达Podocalyxin及Podocin的影响

目的观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达Podocalyxin及Podocin的影响。探讨不同类中药治疗肾病的作用强度。方法应用PAN(50μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组血清对小鼠足细胞表达Podocalyxin、Podocin的影响。结果益气化瘀清热方及其拆方均能影响造模足细胞Podocalyxin及Podocin的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,其对Podocalyxin及Podocin表达的作用强度不同。结论益气化瘀清热方及其拆方可能通过提高造模足细胞Podocalyxin及Podocin的表达而发挥治疗作用。     

益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠肾组织TRPC6、RhoA表达的影响

目的:探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TRPC6、RhoA表达的影响。方法:大鼠喂养1周后分为3组:空白组、模型组、中药组。建立DN大鼠模型,造模成功后空白组和模型组灌服生理盐水,中药组灌服益气养阴活血方颗粒,8周后生化检测24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、谷丙转氨酶(ALT)、血脂(TC、TG)、空腹血糖(FBG)等;测量肾小球直径,称取左肾重量、计算肥大指数;PAS染色观察大鼠肾脏病理;免疫组化检测肾组织TRPC6、RhoA表达。结果:益气养阴活血方能够降低实验大鼠肾组织TRPC6、RhoA的表达,减少24 h尿蛋白,升高ALB,缩小肾小球直径,改善大鼠体质量及肾脏病理,保护足细胞,降低肥大指数及血脂、血糖。结论:益气养阴活血方可能通过影响DN大鼠肾组织TRPC6、RhoA的表达,而改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害,并对肝、肾功能未见明显损害。     

右归丸对激素抵抗型肾病综合征大鼠模型及SD蛋白的影响

目的观察右归丸对激素抵抗型肾病综合征(steroid-resistant nephrotic syndrome,SRNS)大鼠24 h尿蛋白定量、肾脏功能及足细胞裂孔隔膜(SD)相关蛋白的影响。方法 60只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(50只)。造模组大鼠采用一次性尾静脉注射阿霉素(6 mg/kg),正常组大鼠尾静脉一次性注射等剂量的生理盐水,造模成功2周后,采用随机数字表法分为模型组、激素组、激素联合中药高、中、低组。正常组、模型组等体积生理盐水、激素组泼尼松片混悬液、激素联合中药组右归丸与泼尼松混悬液,连续灌胃干预6周。治疗期间观察大鼠的一般情况,检测各组大鼠24 h尿蛋白定量;给药结束后,应用生化分析仪检测大鼠血生化指标,采集肾组织,采用免疫组织化学检测大鼠肾小球中Nephrin、Podocin变化和分布情况。结果与空白组比较,其它各组尿蛋白、总胆固醇、三酰甘油、肌酐与尿素氮明显增加升高(P 0. 05);血白蛋白含量降低明显(P 0. 05);与模型组相比,各治疗组尿蛋白、血脂、肾功指数下降明显(P 0. 05);血白蛋白含量升高(P 0. 05)。与正常组相比,其它各组Nephrin、Podocin表达量有所减少(P 0. 05);与模型组相比,各治疗组除激素组外其它各组Nephrin、Podocin表达量均有上调(P 0. 05);与正常组比较,Nephrin、Podocin沿肾小球毛细血管袢呈片状、不连续型颗粒布散;与模型组比较,各治疗组Nephrin、Podocin蛋白分布无统计学意义(P 0. 05)。结论右归丸对激素有增敏作用,可明显减少24 h尿蛋白量,降血脂、提高血清蛋白,保护肾功能,有效恢复足细胞SD相关蛋白的表达量,进而延缓SRNS的进展。     

糖肾宁对糖尿病肾病大鼠肾组织nephrin、desmin表达的影响

目的探讨糖肾宁对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾小球足细胞损伤的影响。方法8周龄SPF级雄性SD大鼠46只,随机选择10只为对照组,其余大鼠予大剂量STZ腹腔注射建立糖尿病模型。其中34只大鼠血糖≥16.7 mmol/L视为糖尿病模型建立成功,随机分为模型组、缬沙坦组、糖肾宁组,予糖肾宁及缬沙坦干预12周,测定空腹血糖、血清尿素氮、血清肌酐、24小时尿蛋白,足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin、骨架蛋白desmin的蛋白或基因表达。结果与对照组比较,模型组大鼠空腹血糖、血清尿素氮、血清肌酐、24小时尿蛋白均明显升高(P0.05),desmin蛋白、基因表达上调(P0.05)、nephrin mRNA表达下调(P0.05);与模型组比较,糖肾宁、缬沙坦干预后,desmin蛋白、基因表达下调(P0.05)、nephrin mRNA表达上调(P0.05),血清尿素氮、血清肌酐、24小时尿蛋白显著降低(P0.05),但血糖无明显变化。结论糖肾宁干预链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠可减少肾小球足细胞损伤,降低蛋白尿、保护肾功能。     

苁归益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏Nephrin蛋白和Podocin蛋白表达的影响

目的探讨苁归益肾胶囊(由肉苁蓉、当归、山茱萸、桂枝、泽泻和丹皮组成)对高糖高脂饲料喂养加链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病肾脏足细胞裂孔隔膜蛋白相关分子(肾病蛋白Nephrin和肾小球足细胞裂隙膜蛋白Podocin)表达的影响,探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的机制。方法随机抽取大鼠10只作为正常组,并将90只成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、苁归治疗组(苁归益肾胶囊高、中、低剂量组)。治疗10周后,收集大鼠尿液测定24 h尿蛋白定量,肾脏HE染色观察病理损伤,检测各组大鼠肾功能,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾组织Nephrin和Podocin蛋白的表达。结果苁归益肾胶囊可改善糖尿病肾病大鼠肾组织病理损伤,降低糖尿病肾病大鼠24 h尿蛋白定量血肌酐和血尿素,并能增加肾组织中Nephrin和Podocin蛋白的表达。各治疗组肾组织病理改变较模型组均有不同程度的改善。结论苁归益肾胶囊对糖尿病肾病模型大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与上调Podocin和Nephrin表达有关。     

复方积雪草对局灶节段性硬化大鼠E-钙粘素表达的影响

目的:观察复方积雪草对局灶节段硬化性(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)模型大鼠E-钙粘素(E-Cadherin,E-cad)表达的影响,探讨其防治肾纤维化的作用及机制。方法:建立局灶节段硬化性FSGS大鼠模型,分为正常组、模型组、复方积雪草组和苯那普利对照组。采用定量PCR和免疫组化法分别测定肾组织E-cad的基因和蛋白的表达。结果:模型组大鼠出现局灶节段性肾小球硬化,肾间质纤维化程度也较为明显,肾组织中的E-cad基因表达和肾小球足细胞、肾小管上皮细胞E-cad蛋白表达均明显降低,经复方积雪草干预后肾组织病变程度减轻,肾小球足细胞、肾小管上皮细胞E-cad基因和蛋白表达均有所升高,疗效与苯那普利相似。结论:复方积雪草可上调FSGS大鼠肾组织E-cad基因和蛋白表达,从而保护肾小球足细胞及抑制肾小管上皮细胞转分化,可能是防治肾纤维化程度的重要机制之一。     

肾苏Ⅱ对局灶节段性肾小球硬化的保护作用

目的:以局灶节段性肾小球硬化为研究对象,观察辛通畅络、益气和血中药复方肾苏Ⅱ对肾脏功能学指标的影响,探讨中医药防治疑难疾病的有效途径。方法:采用阿霉素注射法诱发大鼠局灶节段性肾小球硬化型阿霉素肾病动物模型。将实验动物随机分为对照组、模型组、西药组和中药组。检测尿微量蛋白定量;血清总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白,观察指标变化。结果:肾苏Ⅱ可减少FSGS大鼠尿蛋白排泄量,改善TP、ALB减低,抑制BUN、Scr升高,调节脂质代谢。其中,在减少蛋白尿排泄方面,肾苏Ⅱ优于贝那普利。结论:肾苏Ⅱ对阿霉素注射法诱发大鼠局灶节段性肾小球硬化型阿霉素肾病模型具有保护作用,通过改善肾脏功能学指标,达到阻抑或减缓局灶节段性肾小球硬化进展的效果。     

益气活血化瘀汤对膜性肾病大鼠肾脏组织Nephrin mRNA 和Podocin mRNA表达的影响

目的观察益气活血化瘀汤对膜性肾病大鼠肾脏组织Nephrin mRNA、Podocin mRNA表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组和造模组,其中造模组采用抗近端小管刷状缘抗原(抗Fx1A)血清一次性尾静脉注射诱导被动型海曼(Heymann)肾炎模型,造模成功后将造模组随机分为模型组、洛丁新组及益气活血化瘀汤低、中、高剂量组,每组6只。每组按相应剂量灌胃4周,每周收取大鼠24 h尿量,检测24 h尿蛋白定量(UTP)。4周末处死大鼠,心脏取血,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-c)、三酰甘油(TG)水平,取肾脏行Masson、PASM染色观测肾脏组织病理改变,免疫荧光法观察Ig G、C3改变,实时荧光PCR检测Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表达。结果与正常对照组比较,其余5组UTP均升高(P0.05),Nephrin mRNA、Podocin mRNA表达量均减少(P0.01);与模型组比较,给药组UTP均减少(P0.05),Nephrin和Podocin mRNA表达量均增加(P0.01),TP、ALB有所升高但差异无统计学意义(P0.05),Scr、BUN、TC、HDL-c、TG差异无统计学意义(P0.05);与洛丁新组比较,益气活血化瘀汤低、中、高剂量组UTP有所减少,但差异无统计学意义(P0.05),各生化指标差异无统计学意义(P0.05),益气活血化瘀汤低、中、高剂量组肾脏组织Nephrin mRNA、Podocin mRNA表达均有所增加,但差异无统计学意义(P0.05);益气活血化瘀汤各组之间各指标差异无统计学意义(P0.05)。结论益气活血化瘀汤可明显减少膜性肾病大鼠的尿蛋白程度,减少肾脏病理损伤,上调肾脏组织Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表达,延缓膜性肾病的进展。     

不同取穴不同灸时温和灸对局灶硬化性肾炎大鼠肾功能的影响

目的:观察不同取穴不同灸时温和灸对局灶硬化性肾炎大鼠尿系列微量蛋白及肾组织病理变化的影响,探讨艾灸治疗局灶硬化性肾炎的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、氯沙坦组、肾俞灸法(短时、中时、长时)组和膈俞灸法(短时、中时、长时)组,通过单肾切除加尾静脉重复注射阿霉素复制局灶硬化性肾炎大鼠模型。氯沙坦组给予氯沙坦(50mg/kg)灌胃,每日1次;肾俞灸法组和膈俞灸法组按短时(10min)、中时(20min)、长时(30min),分别予温和灸大鼠"肾俞"(双)和"膈俞"(双),隔日1次,均干预12周。酶联免疫法检测各组大鼠尿系列微量蛋白(尿α1微球蛋白、尿微量白蛋白、尿转铁蛋白、尿IgG),全自动生化分析仪测定肾功能(血清肌酐、尿素氮、尿酸),PAS染色法观察肾组织病理学改变。结果:模型组尿系列微量蛋白、血清肌酐、尿素氮、尿酸明显高于假手术组及正常组(P0.01);与模型组比较,氯沙坦组、肾俞长时组、膈俞中时组、膈俞长时组尿系列微量蛋白和血肌酐、尿素氮、尿酸均显著降低(P0.05,P0.01),肾俞中时组的尿α1微球蛋白、尿微量白蛋白、尿IgG、血肌酐、尿素氮降低(P0.05,P0.01)。不同灸时之间比较,肾俞长时组的尿系列微量蛋白及膈俞长时组的尿α1微球蛋白、尿转铁蛋白、尿IgG较同一穴位短时组明显下降(P0.05,P0.01)。模型组可见肾小球系膜细胞增生,大量胶原蛋白沉积,间质纤维化明显;肾俞长时组、膈俞长时组及氯沙坦组可明显改善病理变化。结论:艾灸"肾俞"穴、"膈俞"穴可以改善局灶硬化性肾炎模型大鼠的蛋白尿及肾功能,从而延缓病程进展,适当地延长艾灸时间保证灸量,治疗效果更佳。     

丹蛭降糖胶囊通过mTOR/S6K1信号通路对糖尿病肾病大鼠的干预作用研究

目的研究丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠的肾脏病理改变和足细胞自噬水平的影响,初步探讨其相应的作用机制。方法选取GK大鼠40只,采用醋酸脱氧皮质酮-盐皮下注射联合高脂饲料喂养诱导糖尿病肾病模型。造模成功后随机分为模型组、丹蛭降糖胶囊低剂量组[0.54 g/(kg·d)]、高剂量组[1.08 g/(kg·d)]、缬沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组10只。另选取10只同周龄正常Wistar大鼠作为正常组。模型组和正常组给予等容积生理盐水。连续灌胃10周后检测空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和尿微量蛋白(U-mAlb)。Western Blot检测肾小球p-mTOR、p-S6K1、Beclin-1、LC3和Nephrin蛋白的表达,HE染色和PAS染色后于光镜下观察肾脏病理变化,电镜下观察各组亚细胞形态结构变化。结果与正常组比较,模型组FBG、SCr、BUN、U-mAlb水平升高(P<0.01);与模型组比较,丹蛭降糖胶囊低、高剂量组和缬沙坦组U-mAlb水平降低(P<0.01)。模型组可见肾小球基底膜增厚,系膜基质沉积,足细胞损伤,各用药组均有不同程度改善,丹蛭降糖胶囊高剂量组足细胞内有较多自噬体形成。与正常组比较,模型组p-mTOR、p-S6K1的表达增高,Nephrin、Beclin-1和LC3的表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,各用药组p-mTOR、p-S6K1的表达下降,Nephrin、Beclin-1和LC3的表达增高(P<0.01)。丹蛭降糖胶囊高剂量组和缬沙坦组Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平较丹蛭降糖胶囊低剂量组升高(P<0.05)。结论丹蛭降糖胶囊具有减轻糖尿病肾病大鼠U-mAIb、足细胞损伤及相关肾脏病理改变的作用,其机制可能与抑制mTOR/S6K1信号通路进而提高足细胞的自噬活性有关。     

雷公藤甲素对糖尿病肾病小鼠肾足细胞自噬及调亡的影响

目的:探讨雷公藤甲素对糖尿病肾病(DN)小鼠肾足细胞自噬及调亡的影响。方法:选择小鼠60只,随机分为DN组和雷公藤甲素组各30只,光镜下观察各组肾组织病理学改变情况,观察肾功能变化情况,对其行行威廉姆斯肿瘤蛋白1(WT-1)免疫组化染色,观察足细胞情况,透射电镜观察足细胞自噬情况,采用Western blot法检测肾组织中Podocin、Lc3、Bax及Caspase-3的表达情况。结果:PAS染色结果显示,DN组小鼠系膜基质明显增多,雷公藤甲素组小鼠系膜基质明显减少。WT-1免疫组织化学染色显示,雷公藤甲素组肾足细胞数量比DN组明显增多。Western Blot结果显示,与DN组小鼠比较,雷公藤甲素组Podocin表达明显增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显上升,凋亡相关蛋白Bax及Caspase-3表达明显减少(P 0.05)。结论:雷公藤甲素可减轻足细胞损伤延缓DN的进展,可DN的治疗起到参考价值。     

嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用

目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系;阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制.方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL·kg-1·d-1)、雷公藤多苷组(D,10mL·kg-1 ·d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL· kg-1·d-1)组.除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg·kg-1)而建立PAN肾病模型.造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d.造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro).造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达;同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证mo-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量.结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合;在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达;上调rno-miR-23a,mo-miR-300-3p表达,下调mo-miR-24,rno-miR-30c表达;差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等.雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合;还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达;减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等.结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿;雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能.     

诱导HEK293细胞增殖中钙离子及TRPC6的变化及意义

目的建立AngⅡ诱导人胚肾细胞增殖模型,探讨增殖效果与Ca2+变化及TRPC6表达的关系。方法用不同浓度AngⅡ诱导细胞,在不同时间(0,6,12,24,48 h),予LOS干预24 h后用激光扫描共聚焦显微镜测Ca2+变化,RT-PCR、Western Blot检测TRPC6表达情况。采用MTT法及台盼蓝法检测细胞增殖及活性,确定最适浓度及时间构建增殖模型。结果 AngⅡ10-6mol/L诱导HEK293 24 h后细胞增殖及Ca2+升高明显,LOS干预后细胞增殖及Ca2+明显下降。TRPC6表达(+/-),胞膜、胞质定位不清。结论 HEK293细胞自身无明显表达TRPC6,可利用此表达系统进一步研究外源性TRPC6与Ca2+变化的关系。AngⅡ诱导HEK293细胞增殖与Ca2+升高有关,具有一定的时间和剂量依赖性。     

复方广金钱草合剂改善肾草酸钙结石大鼠肾功能的效果及其机制

目的:探讨复方广金钱草合剂改善肾草酸钙结石大鼠肾功能的效果及其机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠40只随机分为观察组和对照组,每组20只。观察组采用L-羟脯氨酸注射法诱导创立肾草酸钙结石大鼠模型,并以复方广金钱草合剂灌胃干预28 d。分别于对照组入组后和观察组建模前、建模后1 d、建模后28 d收集尿液标本,进行尿量、尿蛋白、尿肌酐、尿钙等肾功能相关指标的检测。并在收集尿液标本的同时取2组尾静脉血2 mL,进行血肌酐、血尿素氮等肾功能指标的检测。观察组干预28 d均双肾标本,其中左肾制成10%匀浆进行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平检测,右肾组织切片并通过免疫组织化学检测骨桥蛋白(OPN)和转化生长因子-β(TGF-β)等炎性相关蛋白表达情况。结果:与对照组比较,观察组建模后1 d尿量降低,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组建模前比较,观察组建模后1 d尿量降低,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组建模后1 d比较,观察组建模后28 d尿量升高,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,观察组肾组织MDA水平以及OPN、TGF-β阳性表达率升高,SOD、GSH-Px水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复方广金钱草合剂可改善肾草酸钙结石大鼠肾功能,而改善氧化应激和炎性反应可能为其作用机制。     

六味地黄加味胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏蛋白激酶C活性及结缔组织生长因子的影响

目的观察六味地黄加味胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的保护作用,对肾脏蛋白激酶C(PKC)活性及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法ip链脲佐菌素(STZ)建立大鼠DN模型,模型成功后随机分为5组:对照组、模型组、洛汀新组、六味地黄加味胶囊组、洛汀新与六味地黄加味胶囊合用组,药物干预12周后,透射电镜观察各组大鼠肾脏超微结构,免疫组织化学法检查肾皮质CTGF表达,检测相对肾质量、血糖、尿白蛋白排泄率(UPER)、血肌酐(SCr)、尿肌酐(UCr)、内生肌酐清除率(CCr)、肾脏PKC活性等。结果DN大鼠肾脏胶原沉积明显,相对肾质量、血糖、UPER、CCr、肾脏PKC活性、肾皮质CTGF表达等显著升高,洛汀新、六味地黄加味胶囊及两药合用均可降低肾脏PKC活性和肾皮质CTGF的表达,改善DN大鼠蛋白尿、肾功能,减轻肾脏胶原沉积,两药合用能更显著降低肾脏PKC活性、肾皮质CTGF的表达,降低蛋白尿和改善肾功能作用更强。结论洛汀新、六味地黄加味胶囊及两药合用均能保护DN大鼠肾脏,且两药合用较单用洛汀新作用更强。