泛素连接酶hrd1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究泛素连接酶hrd1(hydroxymethylglutaryl reductase degradation 1,hrd1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,以此探讨hrd1在胃癌发生发展中的意义。方法:收集临床胃癌组织及距癌灶边缘5cm以上胃壁组织,应用免疫组织化学SP法研究63例胃癌(实验组)及其癌旁正常组织(对照组)中hrd1蛋白的表达水平,应用荧光定量PCR(Q-PCR)方法分别检测实验组及对照组hrd1基因表达水平,并用统计学方法分析hrd1表达水平与胃癌临床病理参数之间的关系。结果:免疫组化及Q-PCR结果均显示,胃癌组织中hrd1表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。hrd1在癌灶≥5cm的胃癌组织中表达水平高于癌灶<5cm的胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中hrd1的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结有无转移和临床分期均无关(P>0.05)。结论:泛素连接酶hrd1在胃癌组织中表达明显高于癌旁正常组织,提示hrd1可能与胃癌的发生有关。     

抗肿瘤新靶点USP7及其抑制剂的研究进展

泛素-蛋白酶体系统（UPS）的失控与肿瘤、神经退行性疾病、病毒感染等疾病密切相关,以该系统为导向的药物研发已逐渐引发关注,其中蛋白酶体抑制剂硼替佐米（万珂）作为抗肿瘤药物已成功上市。泛素特异性蛋白酶7（USP7）是UPS中的一种关键性酶,作为去泛素化酶参与细胞内肿瘤抑制、DNA修复及免疫应答等过程中诸多重要蛋白的活性调控。本文介绍泛素特异性蛋白酶7及其抑制剂,强调泛素特异性蛋白酶7抑制剂在抗肿瘤治疗中的潜在应用价值。     

线性泛素连接酶复合体与去线性泛素化酶在肿瘤中的研究进展

线性泛素化修饰是近年来发现的一种重要的翻译后修饰。线性泛素链由一分子泛素的甘氨酸与另一分子泛素的甲硫氨酸连接而形成。线性泛素化修饰过程由线性泛素连接酶复合体（LUBAC）与去线性泛素化酶（OTULIN）共同调控，广泛参与机体免疫、炎症反应、细胞凋亡等过程。近年来的研究表明，线性泛素化修饰能够影响NF-κB、Wnt/β-catenin等信号通路，并与肿瘤的发生、发展和耐药密切相关。本文将对LUBAC与OTULIN在肿瘤中的研究进展进行综述。     

泛素特异性蛋白酶7对乙肝细胞中凋亡因子的调控作用研究

目的 研究泛素特异性蛋白酶7（USP7）在肝细胞中对凋亡因子的调控作用。方法 将HepG2.2.15细胞随机分为3组：对照组,转染组和阴性对照组。对照组为常规培养的细胞;转染组转染si-USP7,阴性对照组使用10%siRNA-mate转染试剂进行处理,各组均处理72 h。实时荧光定量聚合酶链反应（Q-PCR）检测USP7、P53、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）的mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测USP7、P53蛋白的表达情况;酶联免疫法检测谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、乙型肝炎病毒（HBV） DNA、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎核心e抗原（HBeAg）的表达量。结果 对照组、转染组、阴性对照组USP7 mRNA表达水平分别为1.74±0.01,1.00±0.06和1.73±0.01;P53 mRNA表达水平分别为1.94±0.01,0.81±0.03和1.92±0.01;Bax mRNA表达水平分别为6.28±0.04,1.81±0.16,6.26±0.04;蛋白结果的趋势与基因一致。以上3组的HBV-DNA表达量分别为（1032.68±2.96）,（...     

去泛素化酶小分子抑制剂抗肿瘤作用研究:新进展和新思路

泛素-蛋白酶体通路异常是导致蛋白质内稳态失控的重要因素。而在该过程中,负责移除蛋白底物泛素链的去泛素化酶至关重要,其活性或表达异常可造成关键致癌/抑癌蛋白的功能变化,直接或间接导致肿瘤发生发展和恶性演进。基于此,靶向去泛素化酶的小分子抑制剂发现及研究已经成为抗肿瘤候选药物的热点领域之一。本综述将重点介绍泛素-蛋白酶体通路、尤其是去泛素化酶对肿瘤的调控作用和机制,介绍去泛素化酶小分子抑制剂在肿瘤治疗研究中的应用,并针对小分子抑制剂的研究现状和最新进展展开讨论,为基于去泛素化酶的抗肿瘤新策略研究提供思路。     

泛素化/去泛素化系统介导的蛋白质降解与肿瘤关系的研究

<正>"泛素"(ubiquitin,Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的小分子蛋白,最早是在1975年从小牛的胰脏中分离出来的,后来发现其广泛分布于各种真核生物体细胞内而得名。泛素     

泛素-蛋白酶体抑制剂对大鼠肺纤维化的影响

目的:探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肺纤维化的影响。方法:45只SD大鼠随机分成对照组、模型组、干预组和治疗组。模型组和干预、治疗组大鼠气管内滴入博来霉素(5mg.kg-1)建立肺纤维化动物模型,对照组以等量生理盐水气管内滴入。干预组于第造模后第1天起给予MG-132腹腔内注射(0.1mg.kg-1.d-1),模型组和对照组注射等量生理盐水;治疗组于造模后第28天起给予MG-132(0.1mg.kg-1.d-1)腹腔内注射。于不同时间点测肺系数、肺组织行病理学检查及肺组织羟脯氨酸(HYP)含量测定。结果:干预组及治疗组肺系数及肺组织HYP含量各时间点均低于模型组(P<0.01,P<0.05),肺泡炎的程度也轻于模型组;虽然干预组和治疗组肺纤维化程度均明显重于对照组,但干预组28d和治疗组肺纤维化较模型组轻。结论:泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肺纤维化有一定的干预、治疗作用。     

蛋白质小泛素相关修饰物与肿瘤的研究进展

小泛素相关修饰物(SUMO)是类泛素蛋白家族的重要成员之一,可与多种蛋白结合发挥不同的功能。其分子结构及反应过程都与泛素类似,但两者发挥的生物学功能完全不同。泛素的作用是介导蛋白到蛋白酶体降解,SUMO修饰发挥着更为广泛的功能。SUMO化是由SUMO与靶蛋白共价结合的翻译后修饰,去SUMO化是SUMO与靶蛋白分离的过程。本文就SUMO与肿瘤的最新研究进展作一综述。     

阿托伐他汀对人血管内皮细胞E3RSI κB酶mRNA与UBC5酶mRNA表达的影响

目的通过研究阿托伐他汀对人血管内皮细胞泛素系统中E3RSIκB酶mRNA及UBC5酶mRNA表达的影响,探讨其抗炎机制。方法采用逆转录聚合酶链反应方法观察人ECV304细胞泛素蛋白连接酶家族中的E3RSIκB酶及泛素缀合酶中的UBC5酶的mRNA表达情况。结果阿托伐他汀能剂量依赖地抑制脂多糖诱导的人ECV304细胞E3RSIκB酶及UBC5酶的mRNA表达增加,脂多糖组E3RSIκB酶及UBC5酶的mRNA相对表达量分别为4.535±0.779、1.426±0.062;阿托伐他汀0.1μmol.L-1、1μmol.L-1、10μmol.L-1组的E3RSIκB酶及UBC5酶的mRNA相对表达量分别为2.907±0.103、1.726±0.058、0.723±0.079和1.208±0.062、1.103±0.125、0.414±0.039。结论阿托伐他汀能够减轻脂多糖诱导的ECV304细胞E3RSIκB酶及UBC5酶的mRNA表达增加,说明其能通过减少核因子κB抑制因子α的降解抑制核因子κB的活性进而达到抗炎效果。     

干扰素调节因子4在风湿性心脏病中去泛素化作用的研究

目的 探究风湿性心脏病病人干扰素调节因子4(IRF4)去泛素化与去泛素化酶USP4互相作用的分子机制,为风湿性心脏病提供新的治疗策略。方法 来自安徽医科大学第一附属医院2015年7月至2016年1月20例风湿性心脏病病人,均行体外循环下瓣膜置换手术,均顺利出院。10例健康对照来自于健康志愿者。分别抽取以上参与实验人员5 mL的外周血,经过细胞培养与转染;通过免疫共沉淀实验观察IRF4的DNA结合结构域以及和配体结合结构域是否可以和USP4互相结合;通过NI-NTA镍螯合树脂纯化实验观察IRF4蛋白针对48位和63位赖氨酸相关的去泛素化是否可以被USP4介导;应用荧光素酶检测技术观察白细胞介素(IL)-4是否可以在IRF4、活化T细胞核因子(NFATC2)和USP4共同促进下表达;利用基因沉默方法在人源Th2细胞中下调USP4。结果 下调USP4后Th2细胞相关细胞因子的转录水平也明显减少;利用流式细胞术检测经USP4抑制剂处理后的Th2细胞表达的IRF4和IL-4均减少;以流式细胞技术测得风湿性心脏病中IL-4表达增高,IRF4表达也增高。结论 风湿性心脏病病人血中IRF4的蛋白稳定表达可以通过USP4去泛素化的作用而实现;IL-4在IRF4表达增加协同NFATC2的情况下可增加表达。     

泛素-蛋白酶体途径在病毒感染中的作用研究进展

泛素-蛋白酶体途径是真核生物中非溶酶体蛋白降解的主要系统,主要包括泛素,26S蛋白酶体和酶系统E1、E2、E3。泛素-蛋白酶体参与调节细胞周期进程、抗原递呈、转录和信号转导等多种细胞生理过程。研究发现,病毒可以利用泛素系统调控病毒的基因转录、抑制细胞凋亡、降解抗病毒蛋白、促使病毒出芽和释放等逃避宿主的免疫监视。深入理解泛素-蛋白酶体在病毒感染中的作用可以为抗病毒治疗提供新思路。     

Elafin在肿瘤坏死因子-α诱导的炎性反应中的抗炎机制

目的探讨Elafin的抗炎机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE细胞,将已构建好的pEG-FP-N1-Elafin载体转染到细胞中,并以空质粒载体作其对照,以外源性肿瘤坏死因子(TNF)-α作为刺激物共同孵育。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性,ELISA检测细胞上清液中炎性介质(选取IL-1β、IL-8作为代表)的含量,免疫共沉淀法结合Western blot检测小泛素样修饰蛋白(SU-MO)-1-p-IκBα含量。结果重组质粒组的细胞中NF-κB的活性和IL-1β、IL-8的生成量与空质粒载体组细胞相比明显降低,而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著升高(P<0.01)。结论Elafin能够通过促进IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,下调前炎性介质的生成,从而发挥其抗炎作用。     

泛素-蛋白酶体通路:从理论到临床

真核细胞内大多数蛋白质降解过程的调控是通过泛素-蛋白酶体通路(UPP)进行的。该过程分为两个步骤:①蛋白质的泛素化:一个或多个泛素分子通过共价键连接在目标蛋白质上;②多泛素化的蛋白质被26S蛋白酶体降解成寡肽。26S蛋白酶体是一个多亚单位的蛋白酶复合体,它可分为一个19S具     

泛素-蛋白酶体抑制剂用于肿瘤治疗

目的:综述近几年国内外有关蛋白酶体抑制剂的研究进展。方法:查阅相关文献,并进行分析、归纳、综述。结果:蛋白酶体抑制剂已成为肿瘤治疗的一个新靶点,在临床前期及临床试验中已显示出了抗肿瘤疗效。结论:泛素-蛋白酶体抑制剂有望成为抗肿瘤、抗炎、抗病毒以及神经系统疾病治疗的有效药物。     

泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素表达的影响

目的:研究泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素(survivin)表达的影响。方法:将泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132加入食管癌细胞Eca9706中,采用MTT法测定细胞生长抑制率,经流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测survivin的表达。结果:MG-132对食管癌细胞生长具有显著抑制作用,作用24、48、72、96h后的IC50分别为120.2、18.1、—12.2、—16.9μmol/L;5.0μmol/L的MG-132作用于食管癌细胞24、48、72、96h后,细胞凋亡率分别为(3.1±0.4)%、(31.7±3.5)%、(50.4±4.8)%、(66.6±6.2)%;Survivin在食管癌细胞中呈高表达,经MG-132作用后,表达明显降低。结论:MG-132能显著抑制食管癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin表达有关。     

泛素-蛋白酶体抑制剂对血管平滑肌细胞凋亡的影响

血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle,VSMC)是构成血管壁的重要成分。在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)病变中,VSMC在病理状态下凋亡失平衡引起血管重塑,导致动脉粥样硬化的发生。目前研究发现,细胞凋亡在动脉粥样硬化形成的发病和治疗中具有重要意义,而泛素-蛋白酶体抑制剂(The ubiquitinproteasome inhibitor,UPI)能够促进VSM C凋亡进而影响动脉粥样硬化。本文对泛素-蛋白酶体抑制剂影响VSM C凋亡的机制进行了综述。     

蛋白水解靶向嵌合分子的小分子抗肿瘤药物的研究进展

近年来蛋白靶向降解(PROTAC)技术作为一种新的治疗手段在抗肿瘤药物领域中得到了广泛的研究。PROTAC是一种双功能的小分子化合物,可以将靶蛋白与E3泛素连接酶连接形成三元复合物,通过泛素–蛋白酶体系降解靶蛋白。雌激素(ER)、雄激素(AR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、溴结构域蛋白4(BRD4)和细胞周期蛋白依赖激酶8(CDK8)等多种蛋白已经被选为靶蛋白进行了研究。对PROTAC的小分子抗肿瘤药物的研究进展进行综述。     

E3泛素连接酶HECTD3真核表达质粒的构建

目的：克隆E3泛素连接酶（homologous to the E6-associated protein carboxyl terminus domain containing 3, HECTD3）基因及构建真核表达质粒。方法提取人卵巢癌细胞SKOV-3细胞RNA,并逆转录为cDNA,以此作为模板PCR法扩增HECTD3基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1（＋）,测序验证构建质粒中包含HECTD3基因。结论 HECTD3基因克隆及真核表达质粒构建成功,可以用于后续卵巢癌发生发展的分子生物学研究。