山萘酚通过下调ERRα 抑制非小细胞肺癌A549 细胞的侵袭和迁移

目的:探讨山奈酚（kaempferol）对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC）A549 细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法：A549 细胞培养完成后,CCK-8 法检测不同浓度山奈酚对A549 细胞增殖的影响,Transwell 和划痕实验检测A549 细胞侵袭和迁移能力,Western blotting 检测EMT相关蛋白的表达,qRT-PCR和Western blotting 检测山奈酚对雌激素相关受体α（estrogen related receptor alpha, ERRα）mRNA和蛋白表达的影响。构建ERRα 过表达载体pLV-ERRα 转染A549 细胞后,Transwell实验、划痕愈合实验和Western blotting 检测A549 细胞侵袭、迁移和EMT相关蛋白的表达情况。结果：山奈酚浓度依赖性抑制A549 细胞增殖,选择5、10 和20 μmol/L山奈酚进行后续实验。经山奈酚处理后,A549 细胞侵袭细胞数目显著减少、划痕愈合率显著降低、N-cadherin 和Snail-2 的表达显著下调,E-cadherin 的表达显著上调,ERRa mRNA 和蛋白水平显著降低（均P<0.01）。转染pLV-ERRα 后,过表达ERRα 的A549 细胞的侵袭细胞数、划痕愈合率均显著增加,细胞中N-cadherin、Snail-2 表达上调,而E-cadherin 的表达下调（均P<0.05 或P<0.01）;该细胞再经山奈酚处理后,上述各指标均发生逆转变化（均P<0.05 或P<0.01）。结论：山奈酚通过抑制ERRα 降低NSCLC A549细胞侵袭和迁移能力,并抑制其EMT,为肺癌的临床治疗提供了实验依据。     

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的：探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549 恶性生物学行的影响及其分子机制。方法：常规方法培养A549 细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8 法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell 小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549 细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549 细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549 细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549 细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549 细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;构建A549 细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果：光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）、细胞迁移（P<0.05 或P<0.01）和侵袭能力（P<0.05 或P<0.01）,光甘草定能诱导A549 细胞凋亡（P<0.01）,抑制A549 细胞中N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达,促进E-cadherin 蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达、促进E-cadherin 蛋白的表达。结论：光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究黄连素(BBR)对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响,初步探讨BBR抑制A549细胞转移的机制。方法:用不同浓度的BBR作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平,流式细胞仪检测A549细胞的凋亡,Transwell实验测定A549细胞的迁移和侵袭能力,Westernblot测定A549细胞中与EMT相关的蛋白E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail的表达。结果:BBR以浓度及时间依赖的方式抑制A549细胞的增殖;流式细胞仪检测发现BBR作用于A549细胞后凋亡率呈剂量依赖性增加;Westernblot显示BBR作用A549细胞后,E-cadherin表达升高,Vimentin、Slug、Snail表达降低,Transwell实验显示BBR作用于A549细胞后,能够抑制其迁移和侵袭。结论:BBR能抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,通过促进E-cadherin表达和抑制Vimentin、Slug、Snail的表达来抑制EMT的发生,从而抑制了A549细胞的迁移和侵袭。     

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的：探究microRNA-101 (miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF2）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭的分子机制。方法：采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1,以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞,运用划痕愈合实验和Transwell小室实验,检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blotting（WB）法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果：miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞（均P<0.05）,而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.01）,且使细胞中E-cadherin的表达增多（P<0.05）而Vimentin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）和p-ERK1/2（P<0.05）的表达水平降低。抑制miR-101表达后,可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.05）,引起细胞中E-cadherin表达明显降低而 Vimentin、N-cadherin 和 p-ERK1/2 表达水平增高（均 P<0.05）。采用 WB 法和双荧光素酶报告基因实验验证了 FGF2 是miR-101的直接靶基因,且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）,以及减少细胞中E-cadherin的表达（P<0.01）而增加Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2（P<0.05）表达水平。与单独过表达FGF2组相比,共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱（均P<0.01）,其E-cadherin的表达增多（P<0.01）而Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2表达水平下降（P<0.01）。结论：miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化（EMT）过程及ERK信号通路,进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭和迁移

目的 研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（cystatin C, Cys C）表达对NSCLC A549细胞的生长、侵袭和转移的作用及其潜在的分子机制。方法 采用短发夹RNA（sh-RNA）干扰沉默Cys C表达,构建sh-Cys C载体,并转染人肺腺癌A549细胞中,筛选sh-Cys C稳转子。用CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。此外,还采用Western blot检测侵袭和迁移关键蛋白表达的变化。结果 shRNA干扰Cys C,明显下调Cys C的表达;与对照组相比,发现shRNA介导的Cys C沉默显著抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭。此外,还发现Cys C的下调可以显著抑制基质金属蛋白酶（MMP9、MMP14）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结论 shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,明显下调Cys C的表达,Cys C的下调可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭和迁移。     

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。     

HuR siRNA对肺腺癌A549 细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨HuR siRNA 对人肺腺癌A549 株细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能机制。方法：HuR siRNA 瞬时转染肺腺癌A549 细胞24 h 后,CCK-8 实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,qPCR和Western blotting 检测HuR及基质金属蛋白酶（MMP）-9 基因mRNA和蛋白质表达。结果：HuR siRNA能够抑制人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移及侵袭;HuR siRNA 显著降低A549 细胞HuR、MMP-9 mRNA和蛋白表达（P＜0.01）。结论：下调HuR能抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其机制与下调MMP-9 有关。     

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

[摘要] 目的：探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖及迁移的分子机制。方法：收集2017 年6 月至2018 年6 月承德市中心医院62 例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460 和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p 及高迁移率族蛋白A2（HMGA2）的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18 或pcDNA3.1-HMGA2 转染A549 和NCI-H460 细胞,用CCK-8 法、Transwell 实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2 及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18 对miR-17-5p 或miR-17-5p 对HMGA2 的靶向调控作用。构建敲降HCG18 的A549 细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果：lncRNA HCG18 在NSCLC 组织和细胞中均高表达（均P<0.01）,发生淋巴结转移及晚期NSCLC 患者中HCG18 的表达显著提高,且HCG18 高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低（均P<0.01）。转染Si-HCG18 显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（均P<0.01）,上调上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,小鼠移植瘤体积显著减小（P<0.05）。双荧光素酶报告基因验证了HCG18 与miR-17-5p 靶向结合,以及miR-17-5p 与HMGA2 靶向结合。转染miR-17-5p 后NSCLC 细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制（均P<0.01）,促进上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,而转染miR-17-5p+HCG18 后可抑制miR-17-5p 的作用。结论：HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2 分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。     

miR-103 靶向PTEN并激活PI3K/AKT通路促进肺癌细胞A549 对达沙替尼耐药

[摘要] 目的：探讨miR-103 靶向PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进肺癌细胞对达沙替尼（dasatinib,DASA）耐药的机制。方法：收集2014 年4 月至2018 年1 月昆明医科大学第一附属医院胸外科收治的资料完整的肺癌DASA耐药组织和不耐药组织各35 例。采用qPCR实验检测miR-103 在肺癌DASA耐药组织和细胞中的表达水平,同时,采用CCK-8、Transwell 和Wb实验检测敲降miR-103 对A549/DASA细胞增殖、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-103 与PTEN的靶向关系。进一步采用CCK-8、Transwell 和Wb实验检测miR-103 通过PTEN-PI3K/AKT信号通路对A549/DASA细胞恶性生物学行为的影响。结果：miR-103 在肺癌DASA 耐药组织和A549/DASA 细胞中均高表达（均P<0.01）。敲降miR-103 可显著抑制A549/DASA细胞的增殖、迁移和EMT（P<0.05 或P<0.01）。此外,双荧光素酶报告基因证实miR-103 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。进一步实验显示,过表达miR-103 通过靶向下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路进而显著促进A549/DASA细胞增殖、迁移和EMT（P<0.05 或P<0.01）,从而上调A549/DASA细胞对DASA的耐药性。结论：miR-103/PTEN/PI3K/AKT信号通路与肺癌DASA耐药性存在调控关系,敲降miR-103 可逆转A549/DASA对DASA耐药。     

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的：探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法：通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果：MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达（均P<0.01）,选取表达水平较高的A...     

靶向IRF2的miR-1290对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭的调控作用及其机制研究

背景与目的：miR-1290可以调节干扰素调节因子-2（interferon regulatory factor-2，IRF2）的表达，调节非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的恶性生物学行为，但其具体作用机制目前尚不清楚，因此，探讨miR-1290靶向IRF2对NSCLC细胞增殖、侵袭的调控作用及相关机制。方法：将体外培养的A549细胞分为miR-1290 mimic组、miR-1290 inhibitor组和NC组；实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测各组细胞miR-1290和IRF2的表达，采用荧光素酶实验进一步验证靶向关系。将体外培养的A549细胞分为NC组（转染空白质粒）、miR-1290组（转染miR-1290）、IRF2组（转染IRF2）和miR-1290+IRF2组（转染miR-1290+IRF2）；细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测各组细胞的增殖活性；Transwell实验检测各组细胞的侵袭，划痕实验检测细胞迁移，Western blot检测各组细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、E-钙黏着蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2和Ki-67。结果：miR-1290可以靶向负调控IRF2的表达；与NC组相比，miR-1290组miR-1290的表达明显上调（P<0.05），IRF2的表达明显下调（P<0.05），细胞增殖活性、侵袭力和迁移率明显上调（P<0.05），VEGF、MMP-2和Ki-67明显上调（P<0.05），E-cadherin水平明显下调（P<0.05），IRF2组IRF2的表达明显上调（P<0.05），细胞增殖活性、侵袭力和迁移率明显下调（P<0.05），VEGF、MMP-2和Ki-67明显下调（P<0.05），E-cadherin水平明显上调（P<0.05）；与IRF2组相比，miR-1290+IRF2组miR-1290的表达明显上调（P<0.05），IRF2的表达明显下调（P<0.05），细胞增殖活性、侵袭力和迁移率明显上调（P<0.05），VEGF、MMP-2和Ki-67明显上调（P<0.05），E-cadherin水平明显下调（P<0.05）。结论：miR-1290可能通过靶向负调控IRF2的表达，促进NSCLC细胞的增殖和侵袭。     

miR-374 a对肺腺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的 探究分析miR-374a对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为能力的影响.方法 采用RT-PCR检测miR-374a在正常肺上皮细胞CCD-8L及非小细胞肺癌细胞A549、H1975中的表达情况.采用miR-374a mimic和miR-374a inhibitor转染非小细胞肺癌细胞A549、H1975...     

miR-211通过靶向下调SATB2表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-211及SATB2基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达情况,探究miR-211在NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用及其相关机制.方法:双荧光素酶报告系统验证miR-211和SATB2的相互作用机制;qRT-PCR检测miR-2...     

阿克替苷通过调控ERK1/2信号通路抑制肝癌细胞上皮间质转化

目的探讨阿克替苷(ACT)通过调控ERK1/2通路抑制人肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测肝癌细胞侵袭及迁移能力;实时定量PCR和蛋白质印迹实验检测ACT对ERK1/2信号通路和上皮间质转化相关基因(E-cadherin、N-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果CCK-8法检测结果显示,ACT可降低肝癌HCCLM3细胞的活性,抑制肝癌细胞的增殖能力,并与药物浓度和时间有一定的相关性。划痕实验和Transwell实验结果显示,ACT能抑制肝癌HCCLM3细胞迁移和侵袭能力,并呈浓度依赖性。荧光定量PCR和蛋白质印迹实验表明,ACT可下调ERK1/2信号通路相关基因mRNA和蛋白的表达,上调EMT相关基因E-cadherin mRNA和蛋白的表达,下调N-cadherin mRNA和蛋白的表达。结论ACT可抑制人肝癌HCCLM3细胞EMT、侵袭及迁移,其作用机制与下调ERK1/2信号通路密切相关。     

乳腺癌组织和细胞中低表达的LZTS2 通过PI3K/AKT信号通路抑制癌细胞增殖、迁移和EMT

[摘要] 目的：探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2（leucine zipper tumor suppressor 2, LZTS2）基因在人乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和EMT的影响及其作用机制。方法：收集2016 年1 月至2016 年12 月开封中心医院乳腺外科收治的50 例女性乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本和乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468 以及正常人乳腺上皮细胞株HBL-100,用qPCR 和Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平。构建pcDNA-LZTS2 真核表达载体并采用脂质体转染MCF-7 细胞,同时转染pcDNA3.1 作为阴性对照。用Western blotting 检测转染48~72 h 后MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平;用MTT法、Transwell 小室法检测LZTS2 过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时用Western blotting检测细胞中EMT相关蛋白Cyclin D1、波形蛋白、神经钙黏蛋白、上皮钙黏蛋白以及PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。结果：人乳腺癌组织中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（P<0.05 或P<0.01）;乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-468 细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于乳腺上皮细胞HBL-100（P<0.05 或P<0.01）。与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA-LZTS2 组MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制（P<0.05 或P<0.01）,同时过表达LZTS2 细胞中Cyclin D1、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平均明显降低（P<0.05 或P<0.01）、上皮钙黏蛋白表达水平明显升高（均P<0.01）,显示LZTS2 过表达通过降低p-PI3K和p-AKT 表达而抑制PI3K/AKT信号通路。结论：LZTS2 在乳腺癌中低表达,过表达LZTS2 能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能与抑制细胞EMT过程的PI3K/AKT信号通路有关。     

长链非编码RNA-H19促小细胞肺癌细胞株A549 上皮-间质转化及侵袭

背景与目的：近年来研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)可能在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用,其中H19在膀胱癌、胃癌、肝细胞癌等多种肿瘤中呈现异常过表达,并且能够促进肿瘤增殖,增加肿瘤细胞迁移和侵袭能力等。但H19在非小细胞肺癌中的表达及功能尚不十分清楚。本研究拟观察H19对非小细胞肺癌细胞株A549增殖、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭能力的影响。方法：在A549中通过转染质粒使H19过表达,通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测H19过表达对A549细胞增殖能力的影响,通过Transwell检测其对A549细胞侵袭能力的影响,通过光学显微镜观察细胞的形态学变化,通过蛋白［质］印迹法(Western blot)检测EMT相关蛋白的变化,通过荧光素酶报告基因检测CDH1基因启动子活性的变化。结果：在A549中H19过表达后,细胞增殖能力有所增强(空白对照组D值为1.64±0.02,阴性对照组为1.59±0.04,过表达H19组为1.89±0.02,P<0.05),细胞的侵袭转移能力增强［阴性对照组(30±6)个/视野,过表达H19组(110±7)个/视野,P<0.05)］,细胞发生伪足变长增多、细胞间隙增大等EMT特征的形态学变化,同时蛋白水平CDH1表达降低,而VIM及SNAI2的表达升高,伴有CDH1基因启动子活性下降60%以上(P<0.05)。结论：在非小细胞肺癌细胞株A549中H19过表达可诱使其发生EMT,并促进其增殖及侵袭能力。