人退变椎间盘组织的基因表达谱

目的：研究人类退变椎间盘的基因表达谱,分析人退变椎间盘基因表达水平的变化。方法：按条件优化的一步法抽提人退变及正常椎间盘组织的总RNA各3例,分别用cy3,cy5荧光标记,获得2组椎间盘cDNA的探针,与含有4096条人类全长基因的cDNA表达谱芯片杂交,扫描芯片荧光信号图像,对所获得的基因进行生物信息学分析。结果：在4096条基因中,有差异表达的基因706条,358条基因表达量明显下降,298条基因表达量明显上升。在有差异表达的基因中,细胞凋亡相关类蛋白8条,其中上皮细胞膜蛋白(EMP-1)基因的表达上调明显。结论：退变椎间盘的基因表达发生变化,细胞凋亡增加可能是椎间盘退变发生和发展的因素之一。     

激素对T淋巴细胞生长激素基因表达调控的影响

目的 :探讨各种激素对T淋巴细胞GH基因表达的影响。方法 :构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒PGL2 GH luc,然后转染入T淋巴细胞系———JurkatE6 1细胞中 ,在培养液中分别加入各种激素。结果 :各浓度的GH、GHRH对Jurkat细胞中荧光素酶的表达有抑制作用 (P <0 0 1) ,而高剂量的TRH( 10、10 0nmol/L)和SS( 10 0nmol/L)对Jurkat细胞中荧光素酶的表达也有抑制作用 ( P<0 0 5 )。结论 :T淋巴细胞中GH基因的表达受下丘脑激素和GH的调节。     

基因表达谱的数据分析

基因表达谱分析是基因芯片技术的一个重要应用。对基因表达谱分析的一般流程,数据的早期处理包括矩阵转换和标准化过程,后期的矩阵数据分析包括无监督分析方法如层次聚类、K-均值聚类和自组织映射,和有监督分析方法如线性判别、决策树和支持向量机等的研究,将为更好的开发运用这种方法提供方向性的指导。     

尿道致病性大肠埃希菌感染对人膀胱上皮细胞基因表达谱的影响

目的 研究尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)菌株132与人膀胱上皮EJ细胞的相互作用,分析该菌株感染对EJ细胞基因表达谱的改变.方法 UPEC132感染EJ细胞,用倒置显微镜观察细菌与细胞的黏附,计算黏附率,并通过激光共聚焦显微镜观察UPEC132对细胞的侵袭.感染UPEC132的EJ细胞与未经细菌感染的细胞提取总RNA,用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片分析差异表达基因,并采用RT-PCR对基因芯片数据进行验证.结果 UPEC132能够黏附于EJ细胞表面,黏附率为(73.20±5.26)%;激光共聚焦显微镜观察发现部分细菌位于细胞内部,证实该菌对EJ细胞具有侵袭性.UPEC132感染后的EJ细胞与未经感染的细胞相比,共有28个基因上调,1个基因下调,主要涉及细胞增殖、炎症反应、细胞凋亡等相关基因.结论 UPEC与尿路上皮细胞的相互作用激活宿主细胞内部多种应答反应与信号转导途径,本研究为深入探索UPEC致病机制奠定基础.     

人骨髓间充质干细胞基因表达谱的芯片分析

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）作为组织工程种子细胞的分子遗传学基础和临床应用价值。方法：通过密度梯度离心法和贴壁筛选法的联合应用，分离人骨髓间充质干细胞，流式细胞仪分析细胞同源性，UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提法获取足量的RNA，用于MSCs基因表达谱的分析研究。结果：流式细胞仪检测表明了所分离hMSCs的高度同源性，基因表达谱芯片分析首次揭示了MSCs表达多种间充质细胞和非间充质细胞的特异性mRNA，如脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、造血支持基质、神经元、神经胶质细胞和上皮／内皮细胞等。结论：hMSCs具有高度可塑性和广泛分化潜能，是以干细胞工程为代表的现代组织工程的重要细胞来源。     

苏丹红Ⅳ和柠檬黄人工抗原的制备与鉴定

目的:制备并鉴定苏丹红Ⅳ和柠檬黄人工抗原.方法:琥珀酸酐法构建苏丹红Ⅳ半抗原;以牛血清蛋白(BSA)为载体,用活性脂法分别与苏丹红Ⅳ半抗原和柠檬黄进行偶联.并用紫外吸收色谱法和电泳凝胶色谱鉴定制备是否成功.结果:经紫外吸收和摩尔吸收系数法估算得到苏丹红Ⅳ与BSA的偶联比31∶1,柠檬黄与BSA的偶联比17∶1.结论:成功制备出苏丹红Ⅳ和柠檬黄的人工抗原.     

人脑胶质瘤基因表达谱芯片的构建和初步验证

目的：构建人脑胶质瘤特异的基因表达谱芯片,促进大规模胶质瘤表达谱的研究。方法：采用389条基因探针,优化基因芯片制作的各个条件：片基、点样液、点样大小、紫外交联、采集信号强度等。使用自制芯片检测20例胶质瘤标本的基因表达谱,并与以前报道的实验结果对比,验证芯片的特异性和灵敏度。结果：构建了针对人脑胶质瘤的基因表达谱芯片,并用于脑胶质瘤的基因表达谱分析,证实本产品可以有效地高通量检测相关基因的表达水平。结论：构建的胶质瘤芯片有望用于胶质瘤基因表达谱分析。     

基因芯片检测人肺鳞癌和肺腺癌基因表达的异同

目的用基因芯片技术检测肺鳞癌和肺腺癌基因表达的异同。方法提取人肺鳞癌和肺腺癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,检测肺鳞癌和肺腺癌组织基因表达的异同。结果肺鳞癌和肺腺癌表达共同上调的基因17条,共同下调的基因19条;肺鳞癌表达显著高于肺腺癌的基因20条,显著低于肺腺癌的基因14条。结论多基因参与肺癌发病,基因芯片技术是肺癌基因表达检测的有效方法。     

通心络对同型半胱氨酸损伤的内皮细胞的基因表达谱的影响

目的: 探讨通心络对同型半胱氨酸(Hcy)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的基因表达谱的影响。方法: 原代培养的HUVECs,随机分为对照组、Hcy组和通心络组,提取总RNA并纯化,反转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针,采用高通量Affymetric人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片(含47 000个基因或基因片段)杂交,杂交信号经扫描和数字化处理,通过生物信息学数据分析推测通心络对同型半胱氨酸损伤的HUVECs细胞功能的影响以及可能的信号通路。结果: 与对照组相比,Hcy组有4 343个基因表达上调,316个基因表达下调;与Hcy组相比,通心络组有3 409个基因表达上调,121个基因表达下调。这些共同的差异基因生物功能涉及转录因子调控、激酶、细胞骨架与蛋白合成、转运功能、细胞因子、细胞-细胞受体相互作用和细胞黏附因子等。参与的信号通路主要是与血管新生、凋亡、氧化应激、凝血纤溶和炎症等相关的信号通路,如mTOR信号通路、MAPK信号通路和Toll样受体信号通路。结论: 通心络能导致同型半胱氨酸损伤内皮细胞基因表达谱的改变,这些基因改变可能参与了细胞凋亡、氧化应激和凝血纤溶等过程。     

表皮生长因子对大鼠血淋巴细胞c—fos基因表达的效应

本研究的目的是探讨表皮生长因子对大鼠血淋巴细胞转化率和ｃ－ｆｏｓ基因表达的效应。结果表明：大鼠血淋巴细胞呈免疫反应性，胞质内可见到ＥＧＦｍＲＮＡ信号；ＥＧＦ瓣育可显著提高大鼠血淋巴细胞的转化率和ｃ－ｆｏｓ基因表达水平，与对照组相比较，Ｐ＜０．００１，而与植物血凝素孵育组无显著性差异，Ｐ＞０．０５。     

基因芯片对大鼠肝移植急性排斥反应T淋巴细胞信号传导基因表达变化的研究

目的：从基因水平研究肝移植急性排斥反应中T淋巴细胞信号传导途径。方法：利用4096条大鼠cDNA克隆的基因芯片对从急性排斥组Wistar→SD(n=5)和对照组SD→SD(n=5)两组肝移植大鼠T细胞中抽提、纯化mRNA，扩增、逆转录成cDNA，荧光标记后与芯片杂交，扫描后筛选出差异表达的基因。结果：在4096个基因中共发现差异表达基因190条，其中ll条与细胞信号传导有关的基因差异表达明显：MHC(3条)、CD3抗原(1条)相关基因；蛋白酶类：蛋白激酶C结合蛋白、蛋白酪氨酸磷酸酯酶D型受体、磷脂酰肌醇二磷酸酶基因各l条；涉及核酸信号传导、激活、转录、翻译的基因3条。结论：T细胞在肝移植术后排斥反应中信号传导机制涉及多个基因，基因芯片技术的大规模筛选为进一步研究T细胞在排斥反应中的信号传导途径提供了客观依据和目标。     

骨关节炎患者外周血淋巴细胞基因表达谱的生物信息学分析

背景:目前没有监测骨关节炎发生或进展的敏感标志物,检测骨关节炎活动期外周血基因表达谱变化,有助于探寻血液中精确的诊疗靶点及阐释发病机制.目的:通过生物信息学方法分析骨关节炎患者与正常人外周血淋巴细胞基因表达谱差异,从分子层面探索血液中骨关节炎的诊疗靶点,为研究骨关节炎提供新思路.方法:从GEO和ArrayExpress...     

油红O及苏丹黑B对重度脂肪肝组织脂质染色效果的比较

目前,脂肪性肝病发病率呈逐年上升趋势,是诱发肝纤维化、硬化的常见原因,已引起医学界的广泛重视,其发病机制及防治策略的研究已成为热点。近年来,本课题组开展了中医药防治非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepa-titis,NASH)的研究工作。研究发现:NASH的病理分级相对较高,通常以大泡性或以大泡为主的混合性肝细胞脂肪变、     

肾移植术后淋巴细胞相关基因表达的差异分析

肾功能衰竭后 ,肾移植是必要的治疗手段 ,然而急性排斥反应严重影响移植器官的功能和长期存活。目前 ,移植排斥反应的发生机制尚不十分明确 ,亦未发现可早期特异诊断免疫排斥反应的指标 ,因而临床尚无早期检测排斥反应的有效方法。移植排斥反应的发生 ,其早期重要的事件是淋巴细胞与异体抗原识别后的活化增殖。本实验利用差异显示ＰＣＲ (ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲ ,ＤＤＲＴ ＰＣＲ)技术 ,对一例肾移植术后患者外周血淋巴细胞基因表达变化进行连续监测 ,为建立早期、无创、特…     

人参总皂甙对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响,探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达早期造血生长因子的影响及其机理。结果：经TSPG诱导制备的胎儿胸腺细胞条件培养液(HTCM)、脾细胞条件培养液(HSCM)对人髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后胎儿胸腺细胞、脾细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论：TSPG可能诱导人淋巴细胞表达早期造血生长因子,从而促进人早期血细胞增殖分化。     

电离辐射影响人成纤维细胞基因表达谱的数据挖掘

目的从基因表达谱水平探讨2株人成纤维细胞和低剂量电离辐射3个时间点的可能交互效应，掘其差异表达基因。方法应用Gene Sifter在线软件和Panther生物学信息数据库，对下载于NCBI的GEO（Gene Expression Omnibus）数据库的12个样品GSM（数据包含2株成纤维细胞和每株细胞3个辐照时间点）．运用混合设计二因子的Two-Way ANOVA方法进行数据挖掘，并对差异表达基因进行聚类、主成分分析、模式分类、功能归类分析，最后用GenCLiP软件进行文献挖掘。结果获得41条交互效应的差异表达基因，主成分分析示每株细胞24h时间点的特征向量明显远离其他向量，差异基因表达可分为3种模式。基因功能归类分析提示，多个生物通路如有丝分裂、细胞周期、细胞结构、细胞凋亡等被显著激活，其中参与有丝分裂和细胞周期的差异表达基因由细胞骨架基因、微管运动基因、蛋白激酶基因等构成，细胞凋亡等效应获得文献支持。结论2株人成纤维细胞和低剂量电离辐射3个时间点有交互效应，存在基因差异表达，这些基因有可能成为鉴定成纤维细胞和辐照时间交互效应的生物标记。     

EF调控老年大鼠淋巴细胞基因表达谱中凋亡相关信号分子表达的研究

目的：揭示EF对老年大鼠淋巴细胞凋亡相关信号分子及通路的调节机制。方法：利用基因芯片技术，并比较老年大鼠、青年大鼠、EF干预后的淋巴细胞基因表达。结果：老年大鼠与青年大鼠比较，促进细胞凋亡作用的基因表达显著上调，具有抗凋亡作用的基因表达显著下调；具有抗增殖作用的基因表达显著上调，具有促进细胞增殖作用的基因表达显著下调；参与淋巴细胞活化增殖及免疫反应等基本信号通路的组成元件中，多个重要信号分子的表达显著下调。EF组抗淋巴细胞凋亡的几个上游因子如CD28、TGFβ及c-Jun、c-Fos、c-Myc等癌基因显著上调；促细胞凋亡基因Caspasel、Caspase2、Caspase3、Caspase6、CalpainⅡ、Cathepsins、Dnaseγ、PKCdelta等表达显著下调；Cathepsin B、Mtal、NF-kappa B、Notch等抗凋亡基因表达显著上调。显著上调促细胞增殖基因PCNA、A-raf、CyclinG-associated kinase等的转录，显著下调抗增殖的Rb等基因的转录。显著上调免疫细胞效应及功能的基本调节因子CD2、CD3、CD5、TCR、IL-2、IL-2R(CD25)、CD28、CTLA4的表达。结论：EF能上调老年大鼠淋巴细胞抗凋亡基因表达的同时，下调抗增殖基因的表达；上调促增殖基因表达的同时，下调抗增殖基因的表达，重塑基因表达良性平衡；还协同调节TCR／CD3、CD28、CTLA4、TGFβ、IL-2R等介导的信号转导通路，发挥抗凋亡效应。     

食管鳞癌家族史患者癌及癌旁组织基因表达谱的初步研究

目的:探讨具家族史食管鳞癌的基因表达谱,寻找在食管鳞癌及癌旁组织中差异表达的基因.方法:分别抽提6例具家族史食管鳞癌及癌旁组织总RNA,将各RNA逆转录合成相应以Cy5和Cy3标记cDNA一链做探针,在含有14000点人类基因组芯片(BiostarH-140s)上进行杂交.用scanarray 4000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用GenePix Pro 3.0软件对扫描图像进行数字化处理和分析.结果:在613个异常表达的基因中,上调基因304个,下调基因309个.除252个为新基因外,在另361个基因中,有291个基因功能明确,其中下调基因142个,上调基因149个,包含各类功能基因.结论:这些异常表达的基因,说明了食管鳞癌发生的复杂性.首次为具家族史食管鳞癌患者癌组织提供了相当数量的与肿瘤发生相关的差异表达基因,为肿瘤早期诊断和治疗提供了线索.     

激素对T淋巴细胞生长激素基因表达调控的影响1

目的探讨各种激素对T淋巴细胞GH基因表达的影响.方法构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒PGL2-GH-luc,然后转染入T淋巴细胞系--JurkatE6-1细胞中,在培养液中分别加入各种激素.结果各浓度的GH、GHRH对Jurkat细胞中荧光素酶的表达有抑制作用(P＜0.01),而高剂量的TRH(10、100nmol/L)和SS(100nmol/L)对Jurkat细胞中荧光素酶的表达也有抑制作用(P＜0.05).结论T淋巴细胞中GH基因的表达受下丘脑激素和GH的调节.