人类NY-ESO-1基因编码在肝癌中的表达

目的 研究NY-ESO-1在肝细胞肝癌中的表达情况并探索其表达与肝癌预后的相关性.方法 我们收集了124例肝癌患者的肝癌组织和相应的癌旁组织,37例肝硬化患者的肝组织,以及43例非肝硬化的肝组织.应用实时荧光定量聚合酶链技术(RT-PCR)检测了上述组织中NY-ESO-1基因的表达水平,并利用DNA免疫杂交技术和测序技术检测RT-PCR产物.收集健康志愿者外周血基因组DNA作为正常对照.结果 在124例肝癌组织中,56例(45.2％)检测到有NY-ESO-1基因的表达,而在癌旁组织中未检测到表达.NY-ESO-1基因的RT-PCR产物长度为329 bp,利用测序方法检测NY-ESO-1基因突变.在56例表达NY-ESO-1的肝癌组织中,有4例检测到位点2的突变.该突变导致一个氨基酸的变异,这种氨基酸的变异对蛋白结构和功能具有决定性的影响.NY-ESO-1基因的表达与临床特征如肿瘤标志物(甲胎蛋白,半乳糖酸苷酶)、转移、复发和肿瘤的大小无显著关联性.结论 NY-ESO-1在肝癌组织中呈高表达,但是与预后无相关性.NY-ESO-1蛋白能否作为肝癌治疗的候选疫苗有待进一步研究.     

干扰Gnb211对节律基因mPer1表达的影响

目的 研究干扰Gnb211表达对节律基因mPer1表达的影响.方法 采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(Phorbol 12-Myristate 13-acetate,PMA)诱导NIH3T3细胞,使其节律基因稳定表达,然后用脂质体介导法将pGenesil1/Gnb211质粒(实验组)及pGenesil-1/veetor质粒(对照组)分别转染入NIH3T3细胞中,采用RT-PCR半定量技术检测不同时间点NTH3T3细胞中Gnb211及mPer1 mRNA的表达水平的变化情况.结果实验组比对照组的Gnb211以及mPer1 mRNA的表达量均明显降低(P<0.05),但经余弦分析比较两组的mPer1表达周期无明显改变.结论 干扰Gnb211使节律基因mPer1表达量降低.     

NET—1基因在人体组织中的表达

目的 为研究NET—1基因在人体组织中的表达，确定该基因是否可作为恶性肿瘤的特异性的标记。方法 用系统性RT—PCR方法在53种不同人体组织和肿瘤组织(包括30例正常成人组织和细胞、7例胎儿组织和16例肿瘤组织与细胞)中筛检NET—1基因表达。结果：NET—1基因在正常成人胰、肝、心、骨髓、造血细胞组织和细胞中阴性表达。NET—1在正常胎儿肝组织中阴性表达。恶性肿瘤组织和细胞中，除了造血系统恶性肿瘤(淋巴瘤和白血病)外，其他组织均为NET—1阳性表达(胰腺癌中呈微弱阳性表达)。结论 本首次发现NET—1基因不同的表达于人体正常与肿瘤组织和细胞中，特别是在正常成人和胎儿肝组织中NET—1基因表达阴性，而在肝癌中呈阳性表达。提示：NET—1基因有可能是肝癌临床诊断的一个新的组织学标记。     

WT1基因在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨WT1基因在多发性骨髓瘤(MM)中的表达情况及临床意义.方法 用RT-PCR检测25例MM患者和10例正常对照骨髓或外周血细胞的WT1基因的表达情况,用Tanon GIS2010系统分析PCR产物,并对其表达量进行统计学分析.结果 10例正常对照骨髓或外周血未检出WT1基因表达,25例MM中WT1的阳性率为36％,按Durie-Salmon分期后,其中Ⅰ期阳性率为0,Ⅱ期阳性率为24％,Ⅲ期阳性率为63.64％,治疗无效组中的阳性率为57.14％,WT1基因表达在MM的DS分期中呈现明显的阶段性.WT1基因的相对表达量与β2-微球蛋白水平分别在MM的DS分期中每两组进行比较均有统计学意义(P＜0.05),经相关性分析MM患者WT1基因相对表达量与β2-微球蛋白水平呈正相关,且均与分期进展有关.动态观察2例MM的Ⅲ期患者,WT1基因与患者的分期不良预后有关.结论 WT1基因可以作为MM的另一个评估指标,预测病情进展及预后.     

干扰Gnb21l对节律基因mPer1表达的影响

目的研究干扰Gnb211表达对节律基因mPer1表达的影响。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（Phorbol 12-Myristate 13-acetate,PMA）诱导NIH3T3细胞,使其节律基因稳定表达,然后用脂质体介导法将pGenesil-1／Gnb211质粒（实验组）及pGenesil-1／vector质粒（对照组）分别转染入NIH3T3细胞中,采用RT—PCR半定量技术检测不同时间点NTH3T3细胞中Gnb2l1及mPerl mRNA的表达水平的变化情况。结果实验组比对照组的白6221以及roPer1 mRNA的表达量均明显降低（P〈0．05）,但经余弦分析比较两组的mPer1表达周期无明显改变。结论干扰Gnb2l1使节律基因mPer1表达量降低。     

Quox-1基因在人类白血病骨髓细胞中的表达

Ｑｕｏｘ－１是从５ｄ胚龄鹌鹑的ｃＤＮＡ文库中克隆的同源盒基因,属于ＣｌａｓｓⅠＨｏｘ基因家族的特别成员,至今未分离出其人类同源基因。用免疫细胞化学技术（ＳＰ法）检测了４２例人白血病患者骨髓细胞的Ｑｕｏｘ－１表达。结果发现１０例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）全部阳性,染色部位在细胞核,而在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）、慢性淋巴细胞性白血病（ＣＬＬ）、急性髓细胞白血病（ＡＭＬ,包括Ｍ１～Ｍ７）中表达低甚至不表达,这为进一步从相应肿瘤中筛选、克隆Ｑｕｏｘ－１的人类同源基因提供了可能的肿瘤模型,并为临床诊断ＡＬＬ提供了一种参考指标。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TNIP1基因表达

目的 探讨TNIP1 基因在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中的表达情况,以及与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、单核苷酸多态性(SNP)位点rs10036748的相关性.方法 收集61例SLE患者和66例正常对照的临床资料及血样,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中TNIP1 mRNA表达量;应用Sequenom MassArray技术对所有病例对照SNP rs10036748位点进行基因分型.结果 SLE患者TNIP1基因 mRNA表达低于正常对照组(P=0.000 4);TNIP1基因 mRNA表达水平与SLEDAI和SNP rs10036748基因型之间无相关性.结论 TNIP1基因在SLE发生中可能起着某种作用.     

微小RNA对胚胎细胞BUB1基因的表达抑制

目的:探讨微小RNA对胚胎细胞BUB1基因表达的调控.方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因BUB1 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Bub1蛋白的表达水平.结果:对照组的BUB1基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1960±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1968±0.0689和0.1962±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性BUB1基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而蛋白水平在转染后均有明显降低.结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础.     

hMLH1基因在维吾尔族食管癌中表达的研究

目的 探讨hMLH1基因在新疆维吾尔族食管癌组织中的表达及其在食管癌发生、发展中的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应技术检测hMLH1基因在20例食管癌癌组织及其相应癌旁组织中的表达情况,并与临床病理资料结合分析其意义.结果 hMLH1在食管癌组织中表达阳性率为55%(11/20),癌旁组织中表达阳性率为90%(18/20),癌旁组织hMLH1表达明显高于癌组织有10例.其中有淋巴结转移的癌组织中hMLH1的表达缺失率为40%(4/10),无淋巴结转移的为50%(5/10);肿瘤浸润至外膜层的表达缺失率为40%(4/10).结论 hMLH1基因在转录水平有异常表达,提示其在维吾尔族食管癌的发生、发展过程中起一定的作用.     

WT1基因在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

目的研究WT1基因在急性白血病（AL）患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR方法动态检测92例初治AL患者WT1基因的表达。结果初治AML各亚型中M5基因表达阳性率最高,为91.7%,其WT1基因中位表达水平最高,达1308.6,显著高于其他亚型,差异有统计学意义（P〈0.05）;初治ALL各亚型（L1,L2,L3）之间WT1基因表达阳性率及中位表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）;AL患者中,WT1基因表达阳性组CR率显著低于阴性组,阳性组缓解后半年内复发率显著高于阴性组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;初治组、复发组及未缓解组AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平明显高于完全缓解组和对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞中表达水平可作为临床评估疾病的发生发展、判断预后及检测微小残留病（MRD）的指标。     

生物钟PER1基因在口腔鳞癌中的昼夜节律变化及与体内肿瘤生长的关系

目的探讨生物钟PER1基因在口腔鳞癌中的昼夜节律变化情况和与肿瘤体内生长的关系。方法 60只裸鼠置于12 h光照和12 h黑暗交替环境中饲养3周后,将人颊鳞癌BcaCD885细胞接种于裸鼠颊部,建立口腔颊鳞癌模型。3周成瘤后,在24 h内按灯亮后4、10、16、22 h(4 HALO、10 HALO、16 HALO、22 HALO)的4个时间点分别处死15只裸鼠,取出肿瘤,称量,常规切片在HE染色下计算各时间点肿瘤的有丝分裂指数(MI);分别用S-P免疫组化、Western blot和Real-time RT-PCR检测各时间点癌细胞中PER1蛋白和mRNA的表达;分别用方差分析和余弦分析检验各指标在4个时间点的差异性和是否具有昼夜节律性。结果颊鳞癌细胞PER1蛋白、PER1 mRNA、肿瘤MI和肿瘤质量在昼夜不同时间点具有显著性差异(P<0.01),其变化波动具有昼夜节律性特征(P<0.05);肿瘤MI和肿瘤质量与PER1的表达水平呈反比关系,PER1 mRNA表达的峰值与肿瘤MI和质量的谷值均位于活动相的中期,而PER1 mRNA表达的谷值与肿瘤MI和质量的峰值均位于休息相中期。结论口腔鳞癌中PER1的表达、肿瘤MI和质量在昼夜不同时间点的波动具有24 h昼夜节律性规律,PER1在口腔鳞癌中为抑癌基因。     

荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者外周血WT1基因的表达

目的　了解急性白血病患者外周血WT1基因的表达水平。方法　建立荧光定量RT -PCR方法 ,用PEABI 770 0PCR仪检测 114例急性白血病患者、2 6例非白血病患者和3 6例正常人外周血中WT1基因的表达水平。结果　 2 2例急性髓系白血病 (AML)和 15例急性淋巴细胞白血病 (ALL)初发患者WT1基因的表达量为 10 5～ 10 6拷贝 / μgRNA ,取得部分缓解的 2 6例AML和 19例ALL患者的表达水平为 10 2～ 10 4拷贝 / μgRNA ,而取得完全缓解的 17例AML和 13例ALL患者的表达水平为 0～ 10 2拷贝 / μgRNA。 结论　WT1基因在白血病外周血中有高水平的表达 ,可作为急性白血病疗效考核及监测微残留病的指标。     

2型糖尿病伴周围神经病变患者外周血单个核细胞中醛糖还原酶mRNA水平测定

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中醛糖还原酶(AR)mRNA水平与2型糖尿病并发周围神经病变的关系.方法用RT-PCR法检测32例2型糖尿病患者及35名正常对照者PBMC中ARmRNA水平,用肌电图检测腓神经传导速度,根据神经传导速度有无减慢将糖尿病患者分为普通糖尿病组和糖尿病神经病变组.结果2型糖尿病患者PBMC中AR mRNA的表达量(0.59±0.56)高于正常对照组[(0.30±0.1l),P=0.003];糖尿病是否伴神经病变患者之间AR mRNA的表达量无差别.结论2型糖尿病患者PBMC中AR mRNA表达水平增高与是否伴神经病变无关.     

人akt1基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建带有flag标签的人akt1及豆蔻酰化akt1真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达及对细胞周期的影响.方法:应用RT-PCR的方法从人牙髓组织mRNA中扩增出akt1和myr-akt1基因,并在其C-末端带上含24bp的flag标签,克隆到pMD-18T载体并测序,再亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1( ),酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染COS-7细胞,Western blot检测flag-akt1及flag-myr-akt1在细胞中的表达,同时流式细胞术观察细胞周期.结果:测序证实从人牙髓组织mRNA中扩增出的flag-akt1及flag-myr-akt1融合基因的序列以及读框全部正确;脂质体法转染COS-7后检测到预期目的蛋白的表达.流式细胞术的结果显示当AKT1过度表达以及过度活化时对COS-7细胞周期未产生明显影响.结论:成功构建了C-末端带flag标签的akt1及豆蔻酰化akt1真核表达载体,并使其在真核细胞COS-7中表达.但是AKT1对细胞周期的调控有待进一步研究.     

OGGl基因表达的半定量RT-PCR检测方法的建立

目的培养的犬肾细胞（MDCK）内8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGGl）基因表达的半定量RT-PCR检测体系的建立。方法培养MDCK细胞后提取总RNA,经优化进行RT-PCR反应,检测细胞内OGGl基因的表达。扩增产物经测序同GenBank中OGGl基因序列比对验证产物的准确性,条带经ImageJ软件分析并与内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）相比,对体系的重复性进行分析。结果扩增产物证实与GenBank中该细胞的OGGl基因序列一致;重复性测定发现,MDCK细胞OGGl与GAPDH灰度值比值的均值为（0．84±0．025）,CV值为2．99％。结论本方法的准确性、重复性均较好,可用于半定量检测培养细胞尤其是MDCK细胞内OGGlmRNA的表达量。     

竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达

目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ,但在长度上要比靶cDNA少 2 0个碱基。把该竞争性cD NA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT PCR的内标准 ,与白血病细胞株K5 6 2细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增 ,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开 ,然后对电泳图像进行光密度扫描 ,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI PLDmRNA的量 ,从而得到GPI PLD基因的绝对表达量。结果 :构建和制备了长度为 198bp的GPI PLD竞争性RNA模板 ,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT PCR反应 ;测得K5 6 2细胞GPI PLD基因的表达水平为每纳克 (44 0± 2 0 )拷贝。结论 :成功地建立了一种定量检测GPI PLD基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,该方法具有灵敏、准确等优点。     

乳腺癌KAI1基因表达及其临床病理意义

目的 :探讨乳腺癌KAI1表达及其临床病理意义。方法 :采用免疫组织化学和半定量逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)。检测 83例乳腺癌标本中KAI1蛋白和mRNA的表达并与临床病理资料比较分析。结果 :免疫组化的阳性率 4 8.19% (40 83)和阴性率 5 1.81% (43 83) ,RT -PCR的阳性率4 1.17% (35 83)和阴性率 5 7.83% (48 83)。结论 :免疫组化和RT -PCR的结果基本一致 (P >0 .0 5 )。并与乳腺癌的转移呈负相关。在Ⅲ、Ⅳ期以及发生淋巴结等转移的病人中 ,KAI1的表达明显下调 (P <0 .0 1)。     

机械通气所致大鼠急性肺损伤对核内激素受体表达的影响

目的研究机械通气所致急性肺损伤对大鼠肺组织中核内激素受体（Nr1d1）表达的影响,探讨其在机械通气肺损伤中可能
的作用机制。方法72只大鼠分成4个时间点（1:00AM,7:00AM,1:00 PM,7:00 PM）,每个时间点随机分成3组（FB组、LV组、HV
组）,通气3 h 后,提取肺组织RNA,应用大鼠全基因组芯片和荧光定量实时PCR检测机械通气对Nr1d1 表达的影响。结果
基因芯片结果显示HV组Nr1d1表达下调,荧光定量实时PCR结果与芯片结果吻合;余弦分析Nr1d1基因在FB组具有节律性
（P<0.05）,余未见明显节律性。结论Nr1d1表达随潮气量的增大而节律消失;Nr1d1表达下降与机械通气所致急性肺损伤密切
相关。