抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的 :探讨ＮＦκＢ以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对ＴＮＦ α加ＬＰＳ诱导的ｉＮＯＳ基因表达的作用及其机制。方法 :通过免疫组化染色ＡＢＣ法用抗内皮细胞抗体ＣＤ31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定。Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映ＮＯ的生成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结合ＲＴ ＰＣＲ分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平。ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦκＢ的结合活性。结果 :ＴＮＦα(10 0Ｕ/ｍｌ)加ＬＰＳ(1ｕｇ/ｍｌ)处理内皮细胞 2ｈ后ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平明显上升 (Ｐ <0 .0 5 ) ,2 4ｈ后能明显增加…     

羚蝎胶囊治疗中小量急性脑出血的临床研究

目的 :观察羚蝎胶囊治疗中小量急性脑出血的临床疗效。方法 :纳入研究范围的患者共有 60例 ,随机分成羚蝎胶囊组、清开灵注射液组各 30例。治疗前两组患者在性别、年龄、出血部位、出血量、病情程度、发病时间、既往史积分、伴发病积分、中风病中医起始积分、神经功能缺损程度起始积分等方面经统计学处理无显著差异 (Ｐ >0 0 5)。通过治疗前后神经功能缺损积分、中风病中医积分、血肿大小、血肿吸收率观察羚蝎胶囊对急性脑出血的临床疗效。结果 :( 1 )治疗前后神经功能缺损程度积分 :羚蝎胶囊组分别为 2 6 82± 7 95、1 6 3± 1 0 8;清开…     

Cl~-通道阻断剂DIDS抑制T淋巴细胞活化增殖机制的研究

目的 :探讨Ｃｌ- 通道开放在Ｃａ2 依赖性Ｔ淋巴细胞活化增殖信号转导中的作用。方法 :采用ＣｏｎＡ诱导的成人外周血Ｔ细胞活化增殖模型 ,应用Ｆｕｒａ - 2 /ＡＭ荧光探针 ,观察Ｃｌ- 通道阻断剂ＤＩＤＳ以及Ｃａ2 通道阻断剂ＳＫ＆Ｆ 96365对活化Ｔ淋巴细胞Ｃａ2 调控的影响 ,并加以比较 ;应用核酸酶保护分析法 (ＲＰＡ)测定以上药物对人白细胞介素 2 (ｈＩＬ - 2 )ｍＲＮＡ表达的影响。结果 :ＤＩＤＳ( 0 5,1 ,2 μｍｏｌ·Ｌ- 1 )浓度依赖性地抑制活化Ｔ细胞引起的持续性Ｃａ2 内流 ,抑制率分别为 1 8 4%± 6 0 % ,2 5 1 %± 1 0 …     

尼莫地平对大鼠原代神经细胞缺血再灌损伤的保护作用

目的 :脑缺血再灌后海马ＣＡ 1区神经细胞发生迟发性神经元死亡 (ＤＮＤ) ,与兴奋性神经毒有关。本文观察尼莫地平对原代神经细胞缺血再灌的变化影响。方法 :采用新生正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,原代神经细胞培养。用缺氧缺糖并复氧复糖模拟缺血再灌模型。实验分组 :正常组、缺血组、缺血再灌组、ＮＩＭ1组 (缺血 ＮＩＭ)、ＮＩＭ2组 (缺血再灌 ＮＩＭ) ,ＮＩＭ浓度为 1 0 μｍｏｌ/Ｌ。观察指标 :1 倒置相差显微镜、ＨＥ染色。2 扫描电镜。 3 ＡＯ染色。 4 ＭＴＴ法神经细胞活性的测定。 6 测定神经细胞培养液中的ＬＤＨ。表明 :1 正常原…     

bcl-2在鸡马立克氏病肿瘤中的表达

目的 :从ｍＲＮＡ水平测定ｂｃｌ- 2在鸡马立克氏病ＭＤ肿瘤中的表达 ,阐明ｂｃｌ- 2与ＭＤ淋巴瘤形成的关系。方法 :用来克亨ＳＰＦ鸡复制ＭＤ肿瘤模型 ,取肿瘤和相应正常组织 ,液氮保存 ,用ＡＧＰＣ(ＡｃｉｄＧｕａｎｉｄｉｎｉｕｎＴｈｉｏｃｙａｎａｔｅ -Ｐｈｅｎｏｌ-Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ,一步法 )法提取组织总ＲＮＡ(ＴＲＮＡ) ,紫外测定其浓度 ,甲醛变性胶电泳观测其纯度。一个含鸡ｂｃｌ- 2 1 .2ｋｂ片段的质粒 (ｐＴＴＣＢ1 ) ,经转化扩增 ,提取质粒ＤＮＡ ,并用限制性内切酶 (ＲＥ)消化 ,回收纯化ｂｃｌ- 2片段 ,放射性 [α - …     

缺氧大鼠脑线粒体能量代谢的研究

目的 :观察急、慢性缺氧时大鼠脑线粒体能量代谢的特点 ,并初步探讨其分子机制。方法 :将雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为 3组 :急性缺氧组 (ＡＨ)、慢性缺氧组 (ＣＨ)和对照组 (Ｃ)。急、慢性缺氧组大鼠分别连续置模拟海拔 40 0 0ｍ高原 3ｄ(ＡＨ)和 40ｄ(ＣＨ) ,2 3ｈ/ｄ ,对照组在平原同时喂养。急、慢性缺氧组在模拟海拔 40 0 0ｍ高原、对照组在平原分离脑线粒体 ,用Ｃｌａｒｋ氧电极法测定线粒体呼吸功能 ,高压液相法测定线粒体内腺苷酸池含量和ＡＴＰ生成能力 ,寡酶素抑制法测定Ｆ0 Ｆ1 -ＡＴＰ酶活性 ,并用 [3Ｈ]-ＵＴＰ掺入法测定线粒…     

筛选转化生长因子诱导血管外膜成纤维细胞表型转化的差异片段

目的 :血管外膜参与血管重塑的病变基础是细胞表型转化 ,其显著特征之一是外膜成纤维细胞 (ＡＦ)被迅速激活并转化为肌成纤维细胞 (ＭＦ) ,后者兼有ＡＦ及平滑肌细胞的双重功能特性 ,增生并迁移至中膜及内膜。本研究应用差别显示聚合酶链反应 (ＤＤ -ＰＣＲ)技术筛选 2种表型细胞间差别表达基因。方法 :1 采用传统贴片法体外培养ＷＫＹ大鼠胸主动脉外膜获ＡＦ ,再用ＴＧＦβ1 ( 2 0ｎｇ/ｍＬ)处理ＡＦ2 4ｈ获ＭＦ。 2 .用免疫细胞化学分别检测ＡＦ及ＭＦ 2种表型细胞内α-ＳＭ肌动蛋白 (αＳＭ -ａｃｔｉｎ)含量。 3.用透射电镜分别观察Ａ…     

创伤性休克大鼠外周血白细胞表面LFA—1、ICAM—1表达的研究

自 198 1年发现ＣＤ11ａ/ＣＤ18,1986年发现不同于ＬＦＡ 1的细胞间粘附分子 (ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ ,ＩＣＡＭ 1,亦名ＣＤ54,是ＬＦＡ 1的一种可诱导的细胞表面配基 )以来。人们对ＬＦＡ 1、ＩＣＡＭ 1的了解日益增多 ,并发现它们在细胞粘附中作用特别活跃。而有关创伤性休克时白细胞表面ＬＦＡ 1、Ｉ ＣＡＭ 1表达情况少见报道 ,故我们设计此实验以探讨创伤性休克时白细胞表面ＩＦＡ 1、ＩＣＡＭ 1的表达变化。1　材料与方法1 1　材料　取雄性ＳＤ大鼠 8只 ,体重 2 10～ 2 50ｇ ,随机分为 2组 :正…     

氧氟沙星、叠氮胸苷单独及与干扰素合用对黄病毒增殖的影响

选用氧氟沙星 (ＯＦＬＸ)和叠氮胸苷(ＡＺＴ)单独投入及与ＩＦＮ并用 ,观察其抗病毒活性结果如下 :1　材料和方法1 1　病毒和细胞　所用黄病毒为乙型脑炎病毒ＪＥＶ的ＪａＧＡｒ - 0 1株。细胞是人肝癌细胞株ＨｅｐＧ2。细胞培养所用培养液为ＤＭＥＭ加 10 %胎牛血清 (ＦＣＳ)。1 2　感染病毒　病毒感染剂量为 10ｍ .ｏ.ｉ(ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ) ,37℃吸附 6 0ｍｉｎ ,在 5 %ＣＯ2 孵箱中培养。将各种浓度的药物添加至含病毒的细胞培养液中 ,2 4ｈ后采取培养上清液 ,测定病毒的含量。1 3　病毒滴定　用空斑形成…     

血管平滑肌细胞增殖与迁移的机制研究

目的 :血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣｓ)增殖与迁移在动脉粥样硬化 (ＡＳ)的早期、中期或ＡＳ进展期或血管事件的发病机制中起着关键性作用。方法 :采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测ＶＳＭＣｓ的迁移效应 ;以ＭＴＴ法、[3Ｈ]-Ｔｄｒ掺入法、[3Ｈ]-脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应 ;将培养的ＶＳＭＣｓ分为 5组 ;2 %胎牛血清 ( 2 %ＦＣＳ)组、ＡｎｇⅡ组 (其浓度为 1 0 - 1 0 ～ 1 0 - 6ｍｏｌ/Ｌ)、Ｌｏｓａｒｔａｎ组 (其浓度为 1 0 - 7～ 1 0 - 5ｍｏｌ/Ｌ)、ＭＣＰ - 1ｍｃＡｂ组 (终浓度为 1 0 μｇ/ｍＬ)和阳性对照…     

MIP-3α吸引树突状细胞向肿瘤趋化并抑制其生长

树突状细胞 (ＤＣ)是激活Ｔ细胞的最主要抗原递呈细胞。在体外ＭＩＰ 3α基因转染对ＤＣ有趋化现象。因此 ,文章作者推测 :腺病毒介导的ＭＩＰ 3α基因转染物 (ＡｄＭＩＰ 3α)可以吸引内源性ＤＣ在肿瘤组织堆积 ,并可能能够抑制其生长。方法 :①ＤＣ的分离及体外培养 :取自小鼠股骨的骨髓细胞去除红细胞后 ,在 1 0 0Ｕ/ｍｌ重组鼠ＧＭ ＣＳＦ和 2 0ｎｇ/ｍｌ重组鼠ＩＬ 4的条件培养液内培养出有典型形态特征的ＤＣ。②体外ＭＩＰ 3α的表达及功能测定 :ＡｄＭＩＰ 3α在Ａ54 9肺癌细胞中ｍＲＮＡ和蛋白的表达分别采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交…     

多巴胺自身受体调控大鼠纹状体酪氨酸羟化酶活性的机制

应用ＨＰＬＣ－ＥＣＤ法测定大鼠纹状体突触体ＴＨ的活性，研究ＤＡ自身受体介导的ＤＡ生物合成负反馈调控的机理。发现腺苷环化酶（ＡＣ）激活剂ＦＳＫ和ＰＫＡ激活剂ｄｂｃＡＭＰ均以浓度依赖的方式激活大鼠纹体突触体ＴＨ的活性，增加１－ｄｏｐａ的生成。ＤＡ自身受体激动剂ＬＹ１７１５５５能抑制ＦＳＫ对ＴＨ的激活效应，但不影响ｄｂｃＡＭＰ对ＴＨ的激活。结果表明，ＤＡ自身受体介质的负反馈调控的机理是通过抑制依赖ｃＡＭ     

一氧化氮和Ca~(2+)含量对缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的:通过观察脑缺血再灌注时脑组织一氧化氮(NO)和Ca2+含量及脑细胞凋亡的变化,探讨NO、钙对脑细胞凋亡的作用。方法:本实验在建立大鼠急性全脑缺血再灌注损伤模型的基础上,用Green法测定脑组织NO的含量,用原子分光光度仪测定脑组织Ca2+含量,用流式细胞仪检测脑凋亡细胞。结果:脑缺血再灌注12h、24h,NO含量及Ca2+含量均较假手术组增加(P<0.05,P<0.01),脑细胞凋亡数亦增加(P<0.01),且随时间延长进一步增加(P<0.05)。脑缺血再灌注12h、24h时,脑组织Ca2+含量与脑细胞凋亡数呈正相关(P<0.05)。结论:全脑缺血再灌注损伤时发生脑细胞凋亡与脑组织NO、Ca2+含量增高有关。     

IFN-αAd3病毒诱导抗病毒蛋白MxA表达的研究

ＭｘＡ蛋白是一种干扰素 (ＩＦＮ)诱导的新型蛋白。本研究拟以不同诱导物诱导、从不同浓度、不同时间来探讨ＭｘＡ蛋白的表达。1　材料和方法1 1　材料　人胚肺ＷＩ 38细胞为本院基因室保存 ;ＰＢＭＣ来自苏州市中心血站健康成年人外周血 ;腺病毒 3型(Ａｄ3)为我院基因室保存 ,ＴＣＩＤ50 为 10 -5/ｍｌ;ＩＦＮ α 2ｂ为安徽安科生物高技术公司生产的安达芬 (10 0万ＩＵ/ｍｌ) ,批号 :980 918;山羊抗人ＭｘＡ蛋白多抗由Ｄｒ ＭＡ Ｈｏｒｉｓｂｅｒｇｅｒ(ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｏｒｅＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ…     

血管细胞粘附分子在急性缺血冠脉综合征中的变化及其意义

目的 :探讨急性心肌梗塞 (ＡＭＩ)和不稳定性心绞痛 (ＵＡＰ)发病过程中血清可溶性血管细胞粘附分子(ｓＶＣＡＭ - 1 )浓度的变化及其意义。方法 :选择急性心肌梗塞患者 1 2例 ,不稳定心绞痛患者 1 6例 ,健康对照者 1 0例 ,用ＥＬＩＳＡ法测定其发病 2 4ｈ内及发病后 1周血清中可溶性血管细胞粘附分子的含量。结果 :急性心肌梗塞和不稳定性心绞痛患者发病 2 4ｈ内血清ｓＶＣＡＭ - 1显著高于健康对照组 (Ｐ <0 0 1 ) ,发病后 1周ｓＶＣＡＭ - 1含量虽较前下降 ,但仍高于对照组 (Ｐ <0 0 5) ;而急性心肌梗塞与不稳定性心绞痛患者之间无显著…     

DCM大鼠心室肌组织肌浆网钙泵与IP3受体表达的变化

目的 :心肌病心室再构 (ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ)与细胞内钙失调控密切相关 ,本研究在ＤＣＭ大鼠模型的基础上观察了ＳＥＲＣＡ活性、ＳＥＲＣＡ2和ＩＰ3-Ｉ受体表达的变化与ＤＣＭ早期心肌再构的关系 ,并对ＡＣＥＩ和β-受体阻滞剂对以上两种受体基因表达的影响及可能机制做一分析。方法 :高血压、糖尿病合并心肌病大鼠动物模型制备 ,采用本实验室改良的ｐ -ＮＰＰ法测定ＳＥＲＣＡ活力。半定量ＲＴ -ＰＣＲ结合放射自显影测定ＳＥＲＣＡ2、ＩＰ3-ＩｍＲＮＡ水平。结果 :模型组心脏指数 (ＬＶ/ＢＷ)显著高于正常对照组 ,提示有心肌肥厚形成 ,…     

实验性RDS时PaO2下降与脑组织脂质过氧化、中分子物质和NO及ET动态变化关系探讨

目的 :探讨油酸 (ＯＡ)肺损伤ＲＤＳ时进行性氧分压下降与脑组织脂质过氧化、中分子物质 (ＭＭＳ)和一氧化氮 (ＮＯ)及内皮素 (ＥＴ)动态变化之间的关系 ,为单纯性肺损伤对其它脏器的影响提供实验依据。方法 :30只家兔静脉注射油酸 0 1ｍＬ/ｋｇ体重造成ＲＤＳ模型 ,并分为 30ｍｉｎ、60ｍｉｎ、90ｍｉｎ和 1 2 0ｍｉｎ 4组 ,检测平均动脉血压 (ＭＡＢＰ)、血气和血浆及脑组织ＧＳＨ -Ｐｘ、ＭＤＡ、ＭＭＳ、ＮＯ和ＥＴ含量的动态变化。结果 :实验组随着ＰａＯ2 的进行性下降ＭＡＢＰ也进行性下降 ,两者呈正相关 (ｒ=0 88,Ｐ <0 0 1 )。…     

甲基汞透过胎盘对大鼠遗传物质损伤作用

目的和方法 :采用动物体内甲基汞 (ＭｅＨｇ)不同剂量染毒 ,以染色体畸变 (ＣＡ)和微核 (ＭＮ)率为指标 ,研究了ＭｅＨｇ对大鼠胎儿及母鼠ＣＡ率和胎儿及母鼠ＭＮ的损伤。结果 :胎肝细胞ＣＡ率、母鼠骨髓细胞ＣＡ率均随ＭｅＨｇ剂量增加而升高 ,且呈直接上升 ,其回归方程ｙ =1 0 .30 2 .54Ｄ(ｒ=0 .9573,Ｐ <0 0 1 )和母鼠ｙ =2 .34 0 .71Ｄ(ｒ=0 .9782 ,Ｐ <0 .0 1 )。胎肝血细胞ＭＮ率和母鼠骨髓细胞ＭＮ率与ＣＡ率一致 ,也随ＭｅＨｇ剂量增加而升高 ,其回归方程为ｙ =1 1 .80 7.0 2Ｄ(ｒ=0 .91 55,Ｐ <0 .0 5) ,母鼠的ｙ =1 0 37 …     

糖尿病大鼠红细胞对脑组织损伤的影响

研究糖尿病时红细胞的变化对脑组织损伤的影响。方法：用链脲佐菌素（ＳＴＺ,５０ｍｇ／ｋｇ）诱发大鼠糖尿病,分离红细胞,输注给正常大鼠（８×１０９个红细胞／只）,测定脑组织ＭＤＡ和亚硝酸盐含量,同时将分离红细胞在体外用异硫氰酸荧光黄（ＦＩＴＣ）标记,荧光显微镜观察输入的红细胞在脑微血管中的流动。结果：ＳＴＺ大鼠血糖持续高于正常,病程达一年的大鼠糖基化血红蛋白（％）明显高于正常大鼠（Ｐ<０．０１）。将糖尿病１年大鼠红细胞输给正常大鼠,４ｈ后,糖尿病红细胞组大鼠脑组织ＭＤＡ和亚硝酸盐含量明显高于对照红细胞组（ＭＤＡＰ＝０．０３２;亚硝酸盐Ｐ＝０．０２７）。软脑膜微循环的活体观察发现有ＦＩＴＣ标记的糖尿病红细胞粘附于微血管壁。结论：糖尿病的红细胞可以直接引起正常脑组织自由基代谢产物的变化,其作用可能与红细胞对内皮细胞的粘附有关。     

部分去背根猫脊髓Ⅱ板层GDNF的免疫组织化学研究

目的和方法 :为探讨胶质源性神经营养因子与脊髓Ⅱ板层可塑性的关系 ,将成年雄猫 5只行单侧部份背根切断术 (切除一侧的Ｌ1 -Ｌ5,Ｌ7-Ｓ2 ＤＲＧ ,保留Ｌ6ＤＲＧ为备用根 )。手术后动物存活 1 0ｄ。取Ｌ3脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻切片。用ＧＤＮＦ抗体 ( 1∶1 50 0 )按常规ＡＢＣ法染片 ,ＤＡＢ棕色反应显色。观察ＧＤＮＦ样免疫反应在脊髓的分布 ,计数Ⅱ板层ＧＤＮＦ阳性神经膨体密度。测定Ⅱ板层ＧＤＮＦ的平均灰度值以间接反映其相对含量 (灰度值越大 ,含量越少 )。结果用ｔ检验进行统计分析。结果 :正常组 ,ＧＤＮＦ的免疫阳性反应物主要…