伴侣素包含T复合蛋白1ε亚基(CCT5)是与人γδT细胞相关的自身抗原

目的探讨CCT5与γδT细胞及自身免疫病的关系。方法 PCR扩增人CCT5的基因,表达并纯化CCT5重组蛋白;用3条CCT5蛋白的肽段免疫小鼠,制备并筛选抗CCT5的单克隆抗体;固相化CCT5重组蛋白,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞;用制备的单抗通过ELISA检测正常人、类风湿性关节炎(RA)及系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆中CCT5蛋白的含量;用流式细胞技术分析不同亚型γδT细胞的比例,并与血浆CCT5含量做相关性分析。结果 PCR扩增获得CCT5基因,目的片段长度为1 750 bp;经SDS-PAGE分析可见重组CCT5蛋白分子质量约为65 ku,并获得了纯化。通过筛选,获得两株抗CCT5单克隆抗体对。重组CCT5蛋白能在体外扩增外周血γδT细胞;而血浆CCT5浓度与Vγ9和Vδ2 T细胞的比例呈显著正相关。在RA及SLE患者血浆中,可溶性CCT5的浓度显著低于正常对照(P0.05)。结论 CCT5是与人Vγ9δ2γδT细胞识别的相关自身抗原,有助于我们深入了解Vγ9δ2γδT细胞在自身免疫病中的作用。     

分子伴侣功能的研究进展

分子伴侣是一类能够协助其他多肽进行正常折叠、组装、转运、降解的蛋白 ,并在 DNA的复制、转录、细胞骨架功能、细胞内的信号转导等广泛的领域都发挥着重要的生理作用 ,其功能异常会导致多种相关的疾病     

应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统高效表达家蝇天蚕素

目的应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统中高效表达家蝇天蚕素,研究伴侣分子对家蝇天蚕素基因在大肠杆菌中表达的影响。方法RT—PCR克隆家蝇的天蚕素成熟肽（mature cecropin,MC）与泛素（ubiquitin,UBI）基因,利用生物信息学方法分析硫氧还蛋白（thioredoxin,Trx）-MC和MC分子结构及Trx-MC分子和Trx-UBI—MC两种融合蛋白mRNA 5’端的二级结构的异同。分别构建pET32a-MC和pET32a—UBI—MC两种重组质粒,转化人大肠杆菌（E.coli）BL21（DE3）中。检测Trx-MC融合蛋白的表达和pET32a—MC和pET32a-UBI—MC在相同诱导时间及诱导剂浓度的条件下,融合蛋白表达量的差异。结果生物信息学分析结果显示MC分子被Trx分子包裹在其内部,MC分子的细胞毒性被去除,使其可以在大肠杆菌中正常表达。分子生物学实验结果进一步验证了生物信息学分析结果的正确性。同时,也显示UBI分子的加入,未影响融合蛋白质Trx-UBI-MC与Trx—MC的mRNA5’端二级结构。并且Trx-UBI-MC融合蛋白在全菌蛋白中的含量明显高于Trx—MC。结论Trx作为伴侣分子包裹了MC的天然结构,使其对宿主菌无毒性。UBI作为伴侣分子,在相同转录水平、翻译水平条件下,明显提高了蛋白的表达量。     

微管蛋白的甘氨酸化修饰及功能研究进展

微管是真核细胞骨架的基本成分,由alpha/beta 微管蛋白二聚体组成。其二聚体的结构在进化上高度保守, 却可承担多种功能,主要原因是其结构和性质可以受多种机制的调控,特别是微管蛋白翻译后修饰。目前已发现 多种微管蛋白翻译后修饰,其中甘氨酸化是一种重要的修饰方式,它与谷氨酸化修饰的位点均为微管蛋白的C端 谷氨酸残基。但与谷氨酸化不同的是,甘氨酸是中性氨基酸,不会增加微管蛋白C末端的净负电荷。这种修饰主 要由微管蛋白酪氨酸连接酶类似酶系（TTLL）催化,其中在甘氨酸化起始过程中发挥重要作用的酶为TTLL3和 TTLL8,延伸过程中起重要作用的酶是TTLL10。这种翻译后修饰可通过改变微管蛋白C端的空间构像,进而改 变C端的旋转半径和结合结构,提高微管的稳定性,从而维持纤毛的结构稳定和功能正常。在中枢神经中,甘氨 酸化对谷氨酸化有竞争抑制作用,可能是神经退行性改变的保护机制之一;在视网膜中,抑制小鼠微管蛋白甘氨 酸化,导致连接纤毛的数量下降,导致视网膜退行性改变;在结直肠癌的发生发展中,抑制甘氨酸化会增加结直 肠癌的发病风险;在精子中,抑制甘氨酸化会阻碍精子的直线游动,导致雄性不育。在其他微管蛋白翻译后修饰 丰富的组织或生命活动中,如血小板、肌细胞、细胞有丝分裂等,微管蛋白甘氨酸化的功能及其调控机制还有待 深入研究。     

微管相关蛋白1B在神经发育中的作用

微管相关蛋白1B(microtubule associated protein 1B,MAP1B)是神经细胞骨架蛋白的重要成分,广泛表达于中枢及外周神经系统,分布于神经元胞体、轴突、树突和突触部位,可以调节微管动力学状态并促进微管聚合成束,对轴突导向、延长及突触发育起重要作用。本文对MAP1B的基因、生物化学特性、磷酸化调节、轴突导向作用、突触塑型作用及其与神经系统疾病的关系进行综述。     

热休克蛋白47：一种胶原特异性分子伴侣

热休克蛋白 47是一种胶原特异性分子伴侣 ,存在于内质网内 ,与前胶原肽链特异性结合 ,参与前胶原在内质网内的折叠、装配、修饰、转运等过程 ,在胶原代谢及纤维化病理过程中发挥着重要作用。     

革兰阴性菌中分子伴侣在双组分蛋白分泌至周质空间过程中的作用

目的探究革兰阴性菌中分子伴侣在双组分蛋白跨细菌内膜及周质空间中的作用。方法以具有代表性的双组分蛋白FhaB*/FhaC系统为例,使用不同分子伴侣蛋白的敲除菌株,制备成原生质球后,研究不同的分子伴侣对底物蛋白FhaB*分泌至周质空间的影响。结果与野生型相比,分子伴侣蛋白Skp、DegP、PpiD、YfgM单独和PpiD/YfgM同时敲除后,对双组分蛋白FhaB*蛋白的分泌基本无影响;而单独敲除分子伴侣蛋白SurA或双敲除Skp/DegP则显著影响了FhaB*蛋白跨内膜分泌至周质空间的过程。结论革兰阴性菌中可能存在由SurA蛋白介导或由Skp和DegP蛋白共同介导的两个分子伴侣途径,以介导双组分蛋白分泌系统的底物蛋白跨内膜分泌至周质空间。     

阿尔茨海默病与血管性痴呆基底细胞微管蛋白变化研究

目的：研究阿尔茨海默病与血管性痴呆皮肤基底细胞内微管蛋白的数量变化特点以及这些特点作为早期诊断Alzheimer病生物学指标的意义。方法：使用免疫组化LSAB法对Alzheimer病和血管性痴呆患者皮肤基底细胞α-微管蛋白进行检测,用图象分析仪进行定性与吸光度的定量分析。结果：Alzheimer病组的积分吸光度（IA）为261.43±25.21、平均吸光度（AA）为1.89±0.14,分别非常显著地高于血管性痴呆组的IA（120.55±19.71）和AA（0.85±0.14）,P<0.01。结论：提示基底细胞微管蛋白的定性与定量分析,有可能为老年性痴呆的早期诊断提供一种非神经系统的生物学诊断指标。     

灰鼠耳蜗损伤对耳蜗核微管蛋白的影响

研究卡铂损伤灰鼠(Chinchilla)耳蜗内毛细胞(Inner hair cell,IHC)后,耳蜗核(Cochlear Nucleus,CN)神经元出现的变化及可能涉及的环节。采取腹腔内给药,1月后取出用药组、对照组动物耳蜗,观察毛细胞,绘制耳蜗图,对耳蜗核以冠位连续切片(10μm),利用原位杂交的方法,以编码微管蛋白的cDNA片段为探针,进行检测。发现与耳蜗图所示全长内毛细胞破坏对应,伴随耳蜗核神经元体积缩小,耳蜗核内表达微管蛋白的细胞数减少。提示随着耳蜗内毛细胞的损伤、破坏,耳蜗核的传入神经冲动刺激被去除,影响了耳蜗核团细胞的信号系统的某些环节,从而导致细胞体积减少、细胞功能损伤等一系列变化。     

微管相关蛋白2、巢蛋白与人胚胎食管肌层发育的关系

目的: 探讨微管相关蛋白2(MAP-2)和巢蛋白(nestin)与人胚胎食管肌层发育关系。方法: 应用免疫组织化学PV法检测第2、3、4月龄段人胚胎食管组织内MAP-2和nestin的表达分布规律。结果: 第2、3、4月龄段,MAP-2在食管肌层的肌细胞呈阴性表达,肌间神经丛内神经细胞处呈阳性表达;nestin在第2-3月龄食管肌层的肌细胞处呈阳性表达,到第4月龄转阴性表达;而在食管肌间神经丛内大部分神经细胞,第2-4月龄段呈弱阳性或阴性表达。结论: MAP-2和nestin可能参与调节人胚胎食管肌层的形成过程。     

抑郁症大鼠杏仁核微管相关蛋白表达及神经元凋亡

目的 观察抑郁症大鼠杏仁核磷酸化微管相关蛋白-2（pMAP-2）表达和神经元凋亡的变化,探讨抑郁症的发病机制。方法 随机将20只雄性Wistar大鼠分为对照组和模型组,采用慢性不可预见性温和应激（CUMS）方法建立抑郁大鼠模型,采用糖水偏好实验、悬尾实验、Morris水迷宫实验进行行为学检测,免疫印迹方法检测pMAP-2变化,透射电镜观察神经细胞凋亡。结果 模型组体重增长率、糖水偏好百分比低于对照组（ P <0.05）,悬尾不动时间和逃避潜伏期长于对照组（ P <0.05）;模型组pMAP-2蛋白表达高于对照组（ P ＜0.05）;模型组观察到明显的神经细胞凋亡。结论 抑郁症大鼠杏仁核神经细胞凋亡增加,可能与MAP-2磷酸化增高有关。     

SPS模型大鼠前额皮质分子伴侣钙网蛋白的表达变化

目的观察创伤后应激障碍(PTSD)大鼠前额皮质钙网蛋白(calretinculin,CRT)的表达变化,旨在揭示PTSD部分发病机制。方法取健康成年雄性Wistar大鼠75只,随机分为连续单一刺激(singleprolonged stress,SPS)模型1d、4d、7d、14d和正常对照组,用免疫组织化学法、免疫印迹法和RT-PCR法检测PTSD内侧前额皮质(media prefrontal cortex,mPFC)CRT的表达变化。结果在正常大鼠脑mPFC神经细胞中有CRT的表达,与对照组相比SPS刺激后CRT表达有增高趋势,mRNA和蛋白水平从SPS1d开始增多,SPS4d达到高峰,SPS7d组和SPS14d组有降低趋势,但仍高于正常组。结论 CRT在SPS大鼠mPFC过表达提示其可能参与PTSD大鼠记忆情绪改变的病理生理学机制。     

乳腺癌中微管相关蛋白LC3A和LC3B的表达及意义

目的 探讨微管相关蛋白MAP1LC3(LC3A和LC3B)在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生、发展及转移的关系.方法 以8例正常乳腺组织为对照,采用免疫组化SP法和半定量RT-PCR技术检测在乳腺增生性病变(20例),乳腺非浸润性癌(10例)、乳腺浸润性癌(40例)中MAP1LC3A、MAP1LC3B及其mRNA的表达水平.结果 (1)LC3A和LC3B着色强度及着色细胞百分比和不同组织类型有重要关系.(2)LC3A与LC3B mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌4组病例中的表达依次呈递增趋势,差异具有统计学意义(P<0.05).根据不同的组织学分级,LC3A在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的表达呈递增趋势,且差异具有统计学意义(P<0.05).(3)LC3A、LC3B表达与临床分期、患者年龄、淋巴结转移之间差异均无显著性.结论 与正常组织相比,LC3A蛋白在乳腺癌组织中表达更多的强阳性和更高的阳性细胞百分比,并且在WHO分级中从Ⅰ～Ⅲ级,其mRNA表达依次呈递增趋势,由此提示LC3A亚型可能与乳腺癌的发生发展有关.     

心肌收缩蛋白的结构与功能研究进展

心肌收缩蛋白是心肌产生收缩的物质基础。本文介绍了两种主要心肌收缩蛋白：肌凝蛋白和肌动蛋白的结构，尤为详细地讨论了与其功能相关的部分，就正常与异常心脏中两者的改变作一阐述，以期深化心肌肥大和心力衰竭分子水平上的变化认识。     

睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2及神经丝蛋白的表达变化

目的探讨睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2(MAP-2)及神经丝蛋白(NF-200)表达的变化。方法采用改良小平台水环境法制作大鼠睡眠剥夺模型,大鼠随机分为睡眠剥夺组(SD组)、环境对照组(TC组)和空白对照组(CC组)。SD组包括睡眠剥夺6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d共7个时点,每个时间点5只大鼠,CC组5只。免疫组织化学法观察MAP-2和NF-200阳性表达。结果睡眠剥夺5d和7d时,皮质、CA1、CA2、CA3、齿状回和杏仁核MAP-2和NF-200阳性表达减少(P0.05,P0.01)。结论睡眠剥夺可导致脑组织MAP-2和NF-200表达减少。     

激活素结合蛋白在ConA诱导小鼠肝损伤时的表达及作用

目的:探讨激活素结合蛋白(Follistatin,FS)在刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)诱导肝损伤中的表达及作用.方法:尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤,实时定量PCR检测FS mRNA表达,ELISA法检测FS及激活素A(Activin A)蛋白水平.结果:注射ConA后肝脏组织中FS mRNA表达水平在第三天明显下降,FS蛋白水平在第三天也呈下降趋势;而Activin A水平明显增高.注射FS中和内源性激活素 A作用后,肝脏病理损伤程度明显减轻,血清转氨酶水平也显著低于ConA单纯诱导组.结论:在ConA诱导的急性肝损伤过程中激活素A-FS系统失平衡,应用FS阻断内源激活素A可以减轻ConA诱导的肝脏损伤,因此FS有可能成为治疗肝损伤性疾病的有效药物.     

FH蛋白家族成员的结构与功能

FH蛋白家族是包含两个保守 FH1、FH2结构域的一类蛋白 ,广泛存在于各种真核生物细胞中。 FH蛋白能够与 Rho、抑制蛋白等相互作用 ,参与肌动蛋白细胞骨架的构建 ,是细胞极性化、细胞分裂、细胞连接和粘附所必需的。 FH蛋白突变可导致一些人类遗传疾病     

微管相关蛋白2与脊髓发育和损伤的修复

背景：微管相关蛋白2作为神经元特异性标记蛋白之一,其表达活性在一定程度上反映了脊髓神经细胞增殖、分化、迁移的演变规律。 目的：综述微管相关蛋白2的分子结构、生物学功能及其在脊髓发育及损伤修复中的表达分布规律,进而为脊髓损伤后神经干细胞的移植治疗提供前期研究基础。 方法：应用计算机检索1984/2012 维普、万方数据库相关文章,检索词为“脊髓,微管相关蛋白2”。同时计算机检索1984/2012 PubMed和Springer外文电子期刊及电子图书(全文)数据库相关文章,检索词为“spinal cord,Microtubule-associated protein 2(MAP-2)”。共检索到文献325篇,最终纳入符合标准的文献27篇。 结果与结论：微管相关蛋白2不仅是神经细胞的骨架成分,更是一种活跃的功能蛋白,参与神经元的生长和损伤后的修复过程,它的表达强弱可以反映脊髓神经元的发育情况。微管相关蛋白2免疫活性下降在脊髓损伤中的作用日益受到重视,而它的高表达可能在脊髓损伤后突触结构重建及受损神经功能代偿和修复中发挥重要作用。通过检测微管相关蛋白2的含量和定位,可以用来研究人类多种神经干细胞增殖、分化、迁移规律,进而探索脊髓等中枢神经系统的发育和损伤修复状况。     

体外培养心肌细胞代谢和微管蛋白对拉伸应变的响应

探讨不同参数的拉伸应变与体外培养心肌细胞代谢和微管蛋白含量的关系。建立体外细胞基底膜拉伸装置,分析膜上应变分布。分离乳鼠心肌细胞接种在膜上,施加不同大小和频率的周期性应变,观察细胞形态,测定培养液中葡萄糖和乳酸含量,Western Blot法测定细胞内聚合态微管蛋白-βtubulin含量。自行研制的基底膜拉伸装置性能稳定。所得心肌细胞成活率较高,α-横纹肌肌动蛋白和结蛋白免疫细胞化学染色阳性。拉伸后细胞由多角形趋向于杆状,且排列方向改变。固定频率1 Hz时,8%应变组的葡萄糖比消耗速率,乳酸比生成速率和-βtubulin含量均明显高于对照组（P〈0.05）。固定应变8%时,1 Hz的周期性拉伸对细胞代谢的促进作用最为明显（P〈0.01）,频率0.5~2 Hz的拉伸应变均可使-βtubulin含量升高。适当的拉伸应变可促进体外培养心肌细胞的代谢和微管聚合。     

培养的大鼠脊髓神经元中微管相关蛋白5与溶酶体的相关性

目的 探讨微管相关蛋白5(MAP5)与溶酶体之间的相互关系。方法 神经细胞培养、免疫荧光细胞化学方法、激光共聚焦扫描显微镜。结果 在培养脊髓神经元中，MAP5及组织蛋白酶D均分布在胞质及突起中，融合图像中两者分布大致相似。分别使用Nocodazole及PMA处理后MAP5及组织蛋白酶D在培养脊髓神经元的变化具有一致性。结论 提示MAP5和溶酶体的形态及分布依赖于微管的完整性。