灵芝孢子油对MPTP处理小鼠行为学及黑质区病理变化的影响

OBJECTIVE: To investigate the oil from the spores of ganoderma lucidum, a rare Chinese herb, on the behaviors and pathological changes in the substantia nigra pars compacta (SNpc) in mouse models of Parkinson's disease (PD) induced by MPTP. METHODS: C57BL mice were divided into 3 groups, and the ganoderma spores oil + MPTP group were treated with ganoderma spores oil for 8 days, together with subcutaneous injection of MPTP (30 mg/kg) starting on the third day for 6 days; MPTP group were pretreated with normal saline before subcutaneous MPTP injection, and the normal control group received pretreatment with normal saline before subcutaneous normal saline injection. The behavioral changes of the mice in different groups were observed by pole test, dopamine and its metabolic products in the striatum determined by HPLC, tyrosine hydroxylase (TH) positive cells detected by immunofluorescence method, and expression of TH protein by Western blotting. RESULTS: The mice in the ganoderma spores oil + MPTP group presented significantly less involuntary movement of the limbs in the pole test than the mice in MPTP group. The levels of dopamine and DOPAC in the striatum of ganoderma spores oil-treated mice were increased as compared with those in MPTP group. The number of surviving TH-positive neurons in SNpc of mice in ganoderma spores oil + MPTP group was significantly greater than that in MPTP group, with also significantly increased TH protein expression. CONCLUSION: Ganoderma spores oil has neuroprotective effect for preventing doparminergic neuron from impairment by MPTP.     

灵芝孢子油对MPTP处理小鼠行为学及黑质区病理变化的影响

目的 研究灵芝孢子油对MPTP帕金森病(PD)小鼠模型行为学及病理改变的影响,探讨灵芝孢子油治疗帕金森病的可能性。方法 C57BL小鼠分为正常对照组、MPTP组、灵芝孢子油+MPTP组。MPTP组皮下注射MPTP(30mg/kg×6d)及喂食生理盐水,灵芝孢子油+MPTP组在注射MPTP前2d开始鼻饲灵芝孢子油1.5g/kg·d,连续8d。2周后用高效液相色谱法检测小鼠纹状体多巴胺(DA)及其代谢物含量,免疫组织化学法检测SNpc酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,Westernblot法对中脑TH蛋白进行半定量测定。结果 (1)爬杆实验中肢体出现刻板抖动行为的小鼠数目比例灵芝孢子油+MPTP组较MPTP组显著减少(12.5% vs 68.7%)。(2)DA及其代谢物含量在两组间有差异,灵芝孢子油+MPTP组各项指标均高于MPTP组。(3)灵芝孢子油+MPTP组小鼠在SNpc的TH阳性细胞、中脑TH蛋白含量均较MPTP组明显增多。结论 灵芝孢子油能明显改善MPTP小鼠模型行为学,增加纹状体DA及其代谢物含量,减少黑质DA能神经元的损伤,提示灵芝孢子油可能具有减缓PD病变进程的神经保护作用。     

6-羟基多巴胺对帕金森病大鼠GDNF表达影响的实验研究

目的 :研究 6 -羟基多巴胺 (6 - OHDA)诱发的大鼠帕金森 (PD)模型 GNDF表达。方法 :通过脑内立体定向术注射 6 -羟基多巴胺建立大鼠 PD模型。采用免疫组化的方法观察损伤侧脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)表达。结果 :6 - OHDA诱发的 PD鼠 GDNF蛋白表达减低 (P <0 . 0 5 )。结论 :神经营养因子表达减少可能是 6 - OHDA诱发的 PD大鼠发病机制之一     

灵芝孢子油体内抗 Friend 鼠白血病病毒的实验研究

目的 探讨灵芝孢子油体内抗 Friend 鼠白血病病毒 (Friend murine leukemia virus, Fr.MuLV) 感染的疗效和作用机制。方法 用 Fr.MuLV 感染 BALB/C 雌性小鼠,造模小鼠 ig 给药 21 d,比较各组动物的体质量、脾指数、胸腺指数,CD4+、CD8+、CD4、+/CD8+ 等指标变化情况。结果 小鼠感染 Fr.MuLV 后体质量严重减轻,脾明显肿大,胸腺萎缩,CD4+、CD8+、CD4+/CD8+值均显著降低。灵芝孢子油 50、100、200 mg/kg 剂量均可显著改善体质量增长抑制、脾肿大及胸腺萎缩 (P＜0.01),100、200 mg/kg 剂量组 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+ 值均有明显升高(P＜0.01、0.05)。结论 灵芝孢子油对 Fr.MuLV 感染小鼠有保护作用,能够改善体质量增长抑制,抑制脾肿大及胸腺萎缩,升高感染小鼠的 T 淋巴细胞。     

单点注射6-羟基多巴胺成功建立帕金森病大鼠模型的实验研究

目的 探讨成功建立帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）大鼠模型的快速有效方法.方法 将Wistar大鼠92只,随机分为实验组（80只）及对照组（12只）,采用脑立体定向术,实验组在大鼠右侧中脑腹侧被盖区（ventral tegmental area,VTA）注入6-OHDA,经阿朴吗啡（Apomorphine,APO）诱导表现为恒定左侧旋转且旋转圈数﹥210 r/30 min的视为成功PD大鼠模型,对照组则在脑部相应位置注入生理盐水.免疫组化法观察成功模型毁损侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元的形态及数量变化.结果 （1）行为学检测：模型组与对照组手术后分别死亡2只及1只,实验组78只大鼠中36只左侧恒定旋转圈数﹥210 r/30 min,造模成功率为46.2%,并且维持时间长.（2）免疫组化：成功大鼠模型毁损侧黑质区TH阳性的神经元较对侧及对照组明显减少（P＆lt;0.01）.结论 大鼠中脑VTA单点注射6-OHDA制作PD大鼠模型,易于定位,操作简单,动物死亡率低,模型成功率较高,成本较低,是较快建立稳定PD大鼠模型的可行方法.     

基于文献数据库的6-OHDA帕金森病大鼠模型特点分析及在中药研究中的应用

目的 分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况,以期为6-OHDA模型在帕金森研究中的应用提供参考。方法 查阅近20年来中国知网(CNKI)和PubMed中应用6-OHDA建立PD大鼠模型的相关文献,分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况。结果 6-OHDA诱导的大鼠PD模型多选用雄性SD或Wistar大鼠,造模时注射部位多为单侧黑质、内侧前脑束或纹状体,多在造模4周后检测阿扑吗啡诱导旋转实验、脑组织形态学、分子生物学、生化指标以判断模型成功率及防治PD药物的有效性。结论 本文通过对6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况进行分析,为PD模型的造模和应用提供参考。     

6-OHDA致大鼠不同程度黑质损伤与黑质感觉门控P50关系的研究（摘要）

目的观察帕金森病进程中不同程度黑质损伤时黑质感觉门控P50和黑质内DA神经元的变化,研究黑质感觉门控P50和不同程度黑质损伤的关系·方法给予大鼠6-OHDA药物毁损单侧黑质,根据给药时间的不同将其分为五组,D7、D11、D17、D22组和D30组,即分别于给药后第7、11、17、22天和30 d测定6-OHDA毁损大鼠和正常对照组大鼠感觉门控P50(sensory gating,SG P50)以及用APO诱发行为学变化·根据行为学的变化将每组大鼠继续分组:0 r/m in组,1~3 r/m in组,4~6 r/m in组和≥7 r/m in组·之后取大鼠黑质作免疫组化对黑质内DA神经元进行检测·结果(1…     

6-羟多巴胺脑内注射制备帕金森病大鼠模型的研究

目的　通过向大鼠脑内单侧、双点、间隔注射 6 OHDA ,建立PD动物模型。方法　取SD大鼠 4 0只 ,随机分为实验组 35只和对照组 5只。实验组大鼠右侧黑质致密部和内侧前脑束注射 6 OHDA ,两次注射间隔一周 ,对照组大鼠注射人工脑脊液 ,观察经阿朴吗啡诱导后大鼠的行为及黑质DA神经元形态学变化。结果　①实验组有 2 3只恒定左转鼠且旋转圈数 >2 10r 30min ,被认为是成功的PD模型 ,占 6 7 7% ;有 1只动物死亡 ,占 2 9%。②对PD大鼠模型的免疫组化研究发现 ,注射侧黑质区多巴胺神经元较健侧和对照组显著减少。结论　利用向脑内单侧、双点、间隔注射 6 OHDA制备PD大鼠模型 ,结果稳定可靠 ,动物死亡率低 ,为PD动物模型的建立提供了新方法。     

6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型的建立与评价

目的 探讨提高6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法 ,并从行为学、黑质多巴胺神经元形态学角度对模型进行评价.方法 取SD大鼠90只,将6-羟基多巴胺立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路,观察大鼠的行为及黑质细胞形态学变化.结果 ①90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只(占71.1%)恒定转向右侧且结果 稳定,旋转圈数>210r/30min,被认为是成功的帕金森病大鼠模型;②除旋转行为外,部分大鼠还出现震颤、活动迟缓、嗅探、觅食、竖尾等异常表现;③随机选取10只不同时期的成功帕金森病大鼠模型,免疫组化下观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少(P＜0.001),电镜观察发现大鼠中脑黑质神经细胞普遍存在变性坏死及不同阶段的凋亡样改变.结论 用6-羟基多巴胺选择性损毁黑质多巴胺能神经元可较快建立稳定的成功率较高的类似于人类中晚期帕金森病行为和病理的大鼠模型,但在病程和行为学等方面同帕金森病人仍有许多差异.     

?Effect and mechanism of homocysteine on Parkinson’s disease induced by 6-OHDA

Objective： To study the effects and mechanism of homocysteine（Hcy） on Parkinson＇ s disease（PD） induced by 6-hydroxydopamine （6-OHDA） in vivo. Methods：Forty rats were divided into 4 groups. 6-OHDA or the solvent of 6-OHDA was focally administrated to induce PD, 2 h later Hcy or 0.9% sodium chloride was administrated in the ipsolateral substantial nigra（SN）. We Used behavioral testing, Immolunohistochemical techniques, biochemistry techniques to detect the injury of SN. Results：The rotary turns of PD rats induced by 6-OHDA showed significant increase after treatment with Hcy compared with the controls（P 〈 0.05）. Also the numbers of tyrosine hydroxylase（TH）-stained neurons were decreased, and dendrites were fragmented and truncated. Free radicals were increased and antioxidaat enzymes decreased. Conclusion：Focal infusion of Hcy into the SN increased the vulnerability of the doparninergic neurons to 6-OHDA-induced degeneration, it seems that the endangering effect of Hcy is due to exacerbating oxidative stress.     

灵芝孢子粉对帕金森病黑质神经递质影响的实验研究

目的研究灵芝孢子对帕金森病(PD)动物模型黑质、纹状体神经递质的影响,以探讨灵芝孢子对帕金森病的脑保护作用。方法120只SD大鼠随机分为3组,PD组:立体定向注入6-羟多巴,术后1周腹腔注入阿朴吗啡观察30min大鼠旋转的次数,连续至第4周每分钟大于6次者为成功的帕金森氏病模型;灵芝孢子组:先用灵芝孢子粉灌胃3d,立体定向注入6-羟多巴,继续灌胃4周,直至处死。正常对照组:立体定向注入黑质抗坏血酸生理盐水。处死后快速取术侧中脑、纹状体,匀浆,高效液相色谱仪检测中脑黑质、纹状体神经递质多巴胺(DA)、3,4-双羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HAV)、5羟色胺(5-TH)、去甲肾上腺素(NE)含量等的变化。结果高效液相色谱仪结果显示PD组黑质、纹状体的DA、DOPAC、HAV、5-TH、NE含量较正常对照组明显降低,灵芝组术侧黑质、纹状体DA、DOPAC、HAV、5-TH、NE含量较PD组明显增高。结论灵芝孢子能够逆转PD组DA、DOPAC、HAV、5-TH、NE含量的下降,对PD有脑保护作用。     

超高压撞击流技术制备破壁灵芝孢子的数值模拟

通过有限元方法分析灵芝孢子的撞击过程.按照灵芝孢子的结构,建立了计算模型,得到结构在高速撞击时的应力分布.结果显示:高速射流引起撞击粉碎时,孢壁的破坏不仅和冲击速度有关,还和接触角有关.冲击速度越大,孢壁中产生应力值越大,越易破碎.当接触角分别为10°和80°时,孢壁破坏程度最大.研究结果可为工艺参数的优化提供重要依据.     

灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胰岛损伤的保护作用

目的观察灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胰岛损伤的保护作用。方法建立高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素所诱发的2型糖尿病大鼠模型,应用灵芝多糖灌胃治疗10周后,检测大鼠空腹血糖和胰腺中NO、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。通过胰腺HE染色和胰岛素免疫组化分析胰岛的病理变化。结果灵芝多糖能降低糖尿病大鼠的空腹血糖,提高胰岛素敏感性,提高血清和胰腺中GSH-Px、SOD和CAT的活性,显著降低NO和MDA含量（均P〈0.05或0.01）;HE染色等形态学检测显示能减轻大鼠胰岛萎缩,增加胰岛B细胞的数目。结论灵芝多糖能减轻2型糖尿病大鼠的胰岛损伤,可能是通过减轻氧化应激水平发挥保护作用的。     

Effect of PD Ⅰ Administration on Dopamine Receptors mRNAs Expression in the Lesioned Striatum of PD Rat Model

To study the effect of PD Ⅰ administration on dopamine receptors （DR, , DRz ） mRNAs expression in the lesioned striatum of the PD rat model and confirm if PDⅠ has the effect of dopamine receptor agonist. The PD rats with unilateral 6-hydroxydopamine lesioned were administrated with PD Ⅰ , L-dopa methyl/benserazide, L-dopa methyl/benserazide/ PD Ⅰ , normal saline respectively for 4 weeks and their behavioral changes were observed. Then the rats were sacrificed and RT-PCR technique was used to detect changes of dopamine receptors （DR1, DR2） mRNAs expression in the ipsilateral striatum 1 day after the last treatment. The results showed that treatment with PD Ⅰ plus L-dopa resulted in a stable contralateral rotation behavior; treatment with L-dopa resulted in a progressively increased contralateral rotation behavior. Rotation behavior induced by anhydromorphine decreased with PD Ⅰ or PD Ⅰ plus L-dopa treatment. Treatment With L-dopa or PD Ⅰ plus L-dopa, up-regulation of DR, mRNA and down-regulation of DR2 mRNA were observed in the ipsilateral striatum which were more obvious than that treated with PD Ⅰ or vehicle （P〈0. 05）. It was concluded that long-term treatment with PD Ⅰ could alleviate the behavior of PD rats. PD Ⅰ had no apparent effect on the dopamine receptors （DRI , DRz ） mRNAs expression in the ipsilateral striatum and the PD Ⅰ has no agonist effect on dopamine receptors.     

声明

介绍了超高压超临界撞击流技术制备破壁灵芝孢子粉的方法及基本原理，对制备工艺进行了研究。加载压力、系统加热温度、保压时间及撞击靶距是影响灵芝孢子粉破壁率的因素，通过正交试验及对加热温度和撞击靶距所做的后续试验，确定了采用自行研制开发的试验系统进行灵芝孢子粉破壁的最佳工艺条件是：加载压力300MPa，系统加热温度250℃，保压时间1h，撞击靶距10mm。在此工艺条件下，灵芝孢子粉的破壁率为88．48％。     

超高压超临界撞击流方法制备破壁灵芝孢子粉的机理分析

从灵芝孢子粉破壁的过程出发，结合灵芝孢子粉的结构，分析了采用超高压超临界撞击流方法制备破壁灵芝孢子粉的机理。分析结果表明：高速射流引起的撞击是造成灵芝孢子破壁的最主要原因。     

药物干预对6-羟基多巴胺处理后大鼠多巴胺神经元、多巴胺及其代谢产物的影响

目的:研究古拉定、川芎嗪、丹参对6-羟基多巴胺(OHDA)处理后大鼠的黑质多巴胺(DA)神经元及纹状体细胞外液DA的影响。方法;将6-OHDA注射入大鼠黑质,饲养2周后用阿朴吗啡(APO)诱发其旋转行为并计数,饲养2个月时利用微透析法采集大鼠纹状体细胞外液,然后大鼠灌注取脑,酪氨酸羟化酶(TH)单抗染色,观察正常对照组、单纯手术组、古拉定治疗组(古拉定12mg/kg腹腔注射每天1次,共14天)、川芎嗪治疗组(川芎嗪50mg/kg腹腔注射每天1次,共14天)、丹参治疗组(丹参2.5ml/kg腹腔注射每天1次,共14天)的黑质DA神经元的变化,用高效液相色谱电化学法检测细胞外液的DA及代谢产物的含量变化。结果:TH单抗免疫组化染色可见4个手术组的黑质DA神经元计数明显低于正常对照组,差异有极显著性(P<0.001),而4组组间无统计差异;4个手术组纹状体DA的含量低于对照组,差异有显著性(P<0.001),4组的二羟苯乙酸(DOPAC)/DA低于对照组(P<0.001),4组组间均无差异。结论:古拉定、川芎嗪、丹参不能阻止6-OHDA对黑质DA神经元的毒性作用,亦不能增加损伤侧纹状体的DA含量。     

灵芝多糖对癫痫大鼠大脑皮质和海马MAPK14、CaN和GSH-Px表达的影响

目的:观察灵芝多糖对癫痫大鼠大脑皮质和海马区丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、钙调神经磷酸酶(Ca N)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响,进一步研究癫痫的发病机制及灵芝多糖的作用机制。方法:SD大鼠32只,随机分为正常对照组、模型组、灵芝多糖组和卡马西平组,每组8只。除正常对照组(用生理盐水腹腔注射)外,均采用戊四氮(PTZ)腹腔注射制作慢性点燃癫痫模型。在造模同时予以相应灌胃干预,灵芝多糖组予灵芝多糖150 mg/kg,1次/d,卡马西平组予卡马西平15 mg/kg的混悬液,2次/d,持续28 d;模型组和正常对照组予生理盐水灌胃。实验结束后断头取脑,采用免疫组化和比色法检测大鼠皮质和海马区MAPK14、Ca N和GSH-Px的表达。结果:模型组皮质和海马区MAPK14的表达较正常对照组明显增加,而Ca N和GSH-Px的活力明显低于正常对照组(P0.01);灵芝多糖组和卡马西平组皮质和海马区MAPK14的表达较模型组明显降低,Ca N和GSH-Px的活力较模型组组明显增强(P0.01)。结论:灵芝多糖能够降低癫痫大鼠脑中MAPK14的表达、增强Ca N和GSH-Px的活力,可能具有减轻癫痫发作、保护神经元的作用。     

灵芝孢子粉对四氯化碳致大鼠肝硬化的干预作用

目的：观察灵芝孢子粉对肝硬化大鼠脏器指数及肝组织形态的影响。方法：80只健康SD大鼠被随机均分为4组．即空白对照组、模型组、灵芝孢子粉低剂量组、灵芝孢子粉高剂量组。除空白对照组不做处理外,其他各组采用四氯化碳菜籽油溶液复制模型,模型复制同时灌胃给予灵芝孢子粉混悬液,连续8周后测量肝脾湿质量,取肝左叶制备切片用于苏木精-伊红染色。结果：①与空白对照组比较,模型组体质量显著降低（P〈0．05）,肝湿质量、肝指数、脾指数显著增加（P〈0．05）;与模型组比较,灵芝孢子粉低、高剂量组肝指数显著降低（P〈0．05）。②与模型组比较,灵芝孢子粉低、高剂量组肝脏汇管区有少量纤维组织增生,但未见假小叶结构。结论：灵芝孢子粉可以抑制四氯化碳对大鼠肝纤维化的作用。