Inhibitory effects of TLR7/8ligand R-848on IgE production of murine in vivo

Objective To investigate whether R-848 could inhibit IgE production of mice immunized with OVA plus ALUM in vivo.Methods BALB/c mice were immunized s.c on the back with PBS,OVA,OVA plus R-848,OVA plus CpG,OVA plus ALUM,and OVA plus ALUM in R-848 or CpG every two weeks for three times.The blood from the mice was harvested after the last immunization,and the concentration of OVA specific or total IgE,IgG1 and IgG2a in the sera was determined;the splenocytes from the immunized mice were harvested and cultured with or without OVA for 3 days,and the concentration of IL-4 and IFNγ in the supernatants was determined.Results Firstly,we investigated that R-848 as Th1 adjuvant could enhance the production of OVA specific IgG2a in mice immunized with OVA.Secondly,further study showed that R-848 could inhibit the production of OVA specific IgE and total IgE,and promote the production of OVA specific IgG2a in the sera of mice immunized with OVA plus ALUM.Moreover,the results of ELISA showed that R-848 inhibiting IgE production was related to its reducing IL-4 production and enhancing IFNγ production.Conclusion R-848 could inhibit IgE production of mice immunized with OVA plus ALUM in vivo.     

VP22增强人巨细胞病毒pp65核酸疫苗在小鼠体内免疫活性的实验研究

目的构建人巨细胞病毒(HCMV)主要被膜磷蛋白pp65(HCMVpp65)基因高表达载体以及VP22.pp65联合表达载体,并评价VP22增强pp65核酸疫苗的体内免疫效果。方法8周龄正常BALB/C雌性小鼠分为pcDNA3.pp65组、pVP22.pp65组、实验对照组,每组7只。利用分子克隆技术构建HCMVpp65表达载体pcDNA3.pp65、VP22与pp65融合基因载体pVP22.pp65,免疫小鼠,四甲基偶氮唑蓝法测定T淋巴细胞增殖反应、白细胞介素(IL)2生物学活性,乳酸脱氢酶释放法测定自然杀伤细胞(NK)活性,酶联免疫吸附实验测定血清HCMVIgM、IgG抗体含量、血清及脾细胞培养液中的IL2、IL4含量。结果小鼠的一般状况始终良好,成功构建了HCMV核酸疫苗载体pcDNA3.pp65、pVP22.pp65;免疫小鼠后,两种疫苗T淋巴细胞增殖反应(8周时刺激指数分别为5.11和5.55)和NK细胞活性(12周分别为8.74%和12.08%)及HCMVIgM(6周时A值分别为1.20和1.58)、IgG抗体(6周时A值分别为1.09和1.78)均高于对照组,且pVP22.pp65组高于pcDNA3.pp65组(P<0.05)。小鼠血清中IL2和IL4含量及IL2的生物学活性较低,各组间差异无统计学意义(均P>0.05);小鼠脾细胞上清中IL2和IL4含量以pVP22.pp65组(411.11pg/ml、76.10pg/ml)最高,IL2生物学活性也以pVP22.pp65组(A值为0.22)最高。结论HCMV核酸疫苗无毒性。pp65     

肿瘤坏死因子对淋巴激活素活化的杀伤细胞抗肿瘤活性的影响

用B_(16)W_(10)黑色素瘤作靶瘤,C_(57)BL/6小鼠为荷瘤动物,小鼠脾细胞经白细胞间介质-2培养3d为效应细胞即LAK细胞,观察了肿瘤坏死因子对LAK细胞抗肿瘤活性的影响。体外实验结果表明:单独肿瘤坏死因子(500U/ml)或低剂量白细胞间介质-2(10U/ml)均不影响LAK细胞的杀瘤活性;肿瘤坏死因子能增强亚适剂量白细胞间介质-2(100U/ml)诱导的LAK细胞活性。而不增强最适剂量白细胞间介质-2(1000U/ml)诱导的LAK细胞活性。体内实验结果表明:对局部肿瘤,瘤内同时注射肿瘤坏死因子和白细胞间介质-2和LAK细胞时,6只荷瘤鼠4只瘤块消失。其中2只存活期超过60d。对全身肺转移癌、肿瘤坏死因子、白细胞间介质-2和LAK细胞联合静脉注射亦显抗瘤作用增强,该组小鼠肺表面瘤结节数和肺结节发生率减少。     

普济消毒饮对小鼠免疫功能的影响

[目的]观察普济消毒饮对小鼠免疫功能的影响。[方法]NIH小鼠30只随机分成正常对照组、普济消毒饮低剂量组 (2.9 g／kg)和普济消毒饮高剂量组(11.6g/kg),各组分别按设计剂量灌胃给药,正常对照组给予等客积生理盐水,连续 7 d后处死,检测小鼠脾细胞白细胞介素2(IL-2)生成能力、自然杀伤(NK)细胞活性和脾细胞增殖能力。[结果]普济消 毒饮能增强NK细胞活性和IL-2生成能力,促进脾淋巴细胞增殖,与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.05或P< 0.01)。[结论]普济消毒饮能提高小鼠机体免疫功能。     

鼠淋巴因子诱导的细胞毒细胞对带瘤宿主的保护作用

用小剂量白细胞介素2(IL 2),加细胞毒细胞分化因子(CCDF),激活淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。结果发现:IL 2与CCDF在诱导LICC中有协同作用,CCDF不同于IL 2、IL 1。LICC对肿瘤细胞的杀伤无主要组织相容性复合体和组织来源的限制性,既能杀伤自然杀伤细胞(NK)敏感的靶细胞,也能杀伤与NK相抵抗的靶细胞,不损伤正常淋巴母细胞。不同NK活性小鼠中诱导的LICC无明显差别。LICC与L_(783)肿瘤细胞混合接种小鼠能明显延长患鼠的生存时间。     

融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗在肝癌特异性免疫治疗中的应用

目的 制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌全细胞瘤苗,探索融合基因GM.CSF/IL-2转基因瘤苗,在肝癌主动免疫治疗中特异性抗肿瘤作用.方法 用含hlL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体在体外转染H22肝癌细胞,制成疫苗,皮下接种Balb/c小鼠,同时建立Balb/c小鼠荷瘤模型,ELISA法检测H22/pcDNA3.1( ).GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(分别接种H22/pcDNA3.1( )瘤苗、H22瘤苗、PBS)血清中IL-10、IFN- γ水平,观察小鼠存活期;同时用51Cγ释放法测定H22/pcDNA3.1( )-GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(单纯荷瘤组、正常组)脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性.结果 成功制备了含有hIL2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗,转基因瘤苗免疫组小鼠的脾细胞在体外对亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对照组小鼠的脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤率(分别为13.6%和7.5%),也高于其对S180细胞的杀伤率(9.1%)(P＜0.05).转基因瘤苗免疫组小鼠血清IFN-γ较对照组明显升高(P＜0.01),血清IL-10较对照组明显降低(P＜0.01).同时,转基因瘤苗免疫组小鼠生存期亦有明显延长.结论 转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠生存期.     

新城疫病毒疫苗和IL-15治疗3AO裸鼠移植瘤实验研究

目的探讨新城疫病毒疫苗（ATV一NDV）和白细胞介素-15（IL一15）对3AO裸鼠皮下移植瘤的治疗作用及其机制。方法建立3AO裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组10只。Ⅰ组注射ATV一NDV0．2ml;Ⅱ组注射IL一151001xg／kg;Ⅲ组注射IL-151001zg／kg加ATV—NDV0．2ml;Ⅳ组为对照组,腹腔注射生理盐水（ATV—NDV右侧下肢皮下注射,IL-15腹腔注射,按每只裸鼠0．2ml配制）;观察各组裸鼠成瘤率、生存期和生存延长率及肿瘤生长曲线。流式细胞术（FCM）观察裸鼠移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,双标记NK细胞群计数;测定裸鼠脾脏重量;移植瘤瘤体及各组裸鼠肝、脾、肾行常规病理学检查。结果实验组与对照组之间,联合治疗组与单独治疗组之间相比：荷瘤裸鼠生存延长率,移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数。裸鼠脾脏重量具有明显差异。病理学检查各治疗组中均可见肿瘤坏死,凋亡细胞,肿瘤细胞周围及肿瘤内有明显的淋巴细胞浸润。ATV—NDV治疗组脾脏有增生,肥大。IL—15治疗组脾脏有充血增生,肝脏有肝细胞水肿,嗜酸性变性,周围有浊肿。对照组裸鼠肝、脾、肾未见明显病理改变。结论ATV—NDV、IL-15对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有明显抑制作用,IL-15对ATV一NDV有协同作用。其机制与ATV—NDV直接、特异地对肿瘤细胞产生细胞毒作用,提高了肿瘤抗原的免疫原性;IL一15增强NK细胞的细胞毒活性,诱导NK细胞及细胞因子产生有关。     

重组Der f1变应原诱导小鼠哮喘模型的建立

目的建立重组粉尘螨Ⅰ类变应原（Der f1）诱导BALB/c小鼠哮喘模型。方法 30只BALB/c小鼠随机分成3组：PBS阴性对照组、卵清蛋白（OVA）阳性对照组、重组Der f1模型组。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IgG1、IgG2α和IgE含量,ELISA法检测脾细胞培养上清液和支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量,计数BALF中细胞总数,同时切取小鼠未灌洗侧肺组织进行病理学观察。结果 OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠血清中IgG1、IgG2a和IgE含量,脾细胞上清液和BALF中IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量与PBS阴性对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞（EOS）计数显著高于PBS组（P〈0.05或P〈0.01）。OVA阳性对照组和重组Der f1模型组小鼠肺部病理改变呈明显的变态反应性炎症。结论用重组Der f1能成功诱导BALB/c小鼠哮喘模型。     

黄龙口服液对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠白介素12水平及自然杀伤细胞活性的影响

目的 :探讨黄龙口服液干预柯萨奇B3 (CVB3 )病毒性心肌炎小鼠动物模型血清IL 12水平和NK细胞活性的影响。方法 :CVB3 诱导Balb/c小鼠心肌炎为研究对象 ,给予黄龙口服液进行干预 ,分别于用药后第 3,7和 14d测定小鼠血清IL 12水平和NK细胞活性。同时测定心脏组织中病毒滴度 ,进行心肌病理学检查。结果 :黄龙组小鼠血清IL 12水平明显升高 ,NK细胞活性增强 ,早期小鼠心脏组织中病毒滴度下降 ,心肌损害较轻。结论 :黄龙口服液干预病毒性心肌炎小鼠在免疫损伤中起到一定的保护作用 ,早期提高宿主对病毒免疫应答能力 ,能有效提高CVB3 感染小鼠血清IL 12水平和提高NK细胞活性 ,从而在早期降低心脏组织中病毒滴度 ,减轻心脏损伤程度 ,有效改善预后。     

运动对慢性疲劳综合症小鼠NK细胞活性和IL-2水平的影响

目的建立慢性疲劳综合症（CFS）小鼠模型，研究运动对C聆小鼠NK细胞活性和IL-2水平的影响。方法选取40只小鼠随机分为4组，每组10只。I组为正常对照组，Ⅱ组为CFS对照组，Ⅲ组为CFS运动1组，Ⅳ组为CFS运动2组。用力竭性游泳试验建立CFS小鼠模型。不同强度运动后，计算脾脏指数，MTT法和ELlSA分别检测小鼠脾脏中NK细胞活性与IL-2含量。结果脾脏指数试验组明显低于CFs对照组（P〈0．05）；每天运动两次可明显升高CFS小鼠NK细胞活性和增加脾脏IL-2诱生量，与CFS对照组比较，差异有显著性（P〈0．05），且随运动量增加可增强NK细胞活性、提高IL-2水平。结论适当运动能提高CFS小鼠的NK细胞活性和IL-2含量。     

康宝饮对小鼠的抑瘤作用

目的：为了研究康宝饮（一种微生态制剂）的抑瘤作用。方法：利用胃内灌注法,观察了植瘤小鼠的瘤体生长情况及其抗肿瘤免疫指标的改变。结果：康宝饮具有明显抑瘤作用,胃内灌注１５d后,抑瘤率达２９．１％,显著增强ＩＬ－２的生物学活性（Ｐ＜０．０１）;胃内灌注３０d后,抑瘤率达６８．３％（Ｐ＜０．０５）,且可以有效增强ＮＫ细胞杀伤活性（Ｐ＜０．０１）,提高腹腔巨噬细胞吞噬能力（Ｐ＜０．０５）,增加ＩＬ－１的生物学活性（Ｐ＜０．０５）和ＩＬ－２的生物活性（Ｐ＜０．０１）。结论：康宝饮对肿瘤的预防和治疗具有重要应用价值,可制成一种微生态保健饮品。     

Biphasic cytokine expression by T cell clones from patients with atopic dermatitis with different incubation periods and strengths of stimuli

It has been proposed that T helper (Th) 2 cells play a key role in the pathogenesis of atopic dermatitis (AD) because of clinical and experimental findings including hyper IgE, eosinophilia and Th2 type cytokine overexpression, etc. In contrast, several observations such as Th1 type cytokine detection in chronic lesions and histological features resembling allergic contact dermatitis suggest that Th1 rather than Th2 cells are important for the pathogenesis of skin lesions. In order to clarify this paradox, we investigated the function of T cell clones established from AD patients. Most T cell clones induced by house dust mite antigen and interleukin (IL)-2 from peripheral blood mononuclear cells of two AD patients exhibited CD4+/ CD8-, CD45RO+/ CD45RA-, and produced high levels of IL-4 and low levels of interferon-gamma (IFN-gamma) after phytohemagglutinin (PHA) (1 microg/ml) stimulation, suggesting a Th2 subtype. When stimulated with a high dose of concanavalin A (conA) (10 microg/ml), however, these clones produced high amounts of IFN-gamma. IL-4 production reached a peak 24 hours after conA (10 ,g/ml) stimulation, whereas IFN-gamma production was increased up to 48 hours after stimulation. The findings of T cell receptor (TCR) stimulation with immobilized anti-CD3 monoclonal antibody (mAb) showed that the suitable strength of TCR stimulation for IFN-y production was higher than for IL-4. Also, in the TCR stimulated condition, the peak of IFN-gamma production was later than that of IL-4. These results indicate that T cell clones which exhibited a Th2 profile under weak stimulation can produce IFN-y in the late phase of stimulation when strong stimuli are used. The results are consistent with the previous observation that IFN-gamma production prominently appears in the chronic and late phase lesions of AD.     

Immunity induced by DNA vaccine of plasmid encoding the rhoptry protein 1 gene combined with the genetic adjuvant of pcIFN-γ against Toxoplasma gondii in mice

Objective To construct the eukaryotic expression recombinant plasmid, pcIFN-γ, as a gene tic adjuvant and observe the immune responses elicited by pcDNA3-rhoptry protei n 1 （pc-ROP1） combined with pcIFN-γ against Toxoplasma gondii (T.go ndii) infection in mice.Methods A fragment of the IFN-γ gene was directly inserted into the pcDNA3 plasmid and identified by two restriction endonucleases digestion.pcIFN and pcROP1 DNA wa s injected into the left leg muscle of mice at a dosage of 100 μg, and a boost er vaccination was given at the same dosage after two weeks.Control groups wer e injected with pcDNA3 blank plasmid or normal saline.At 30, 50 and 70 days af ter booster injection, kinetic tests were carried out: MTT assay for the prolife ration response of T lymphocyte cells and the activity of NK cells, sandwich ABC -ELISA for the determination of IFN-γ, IL-2 and IL-10; a serum enzymetic aa ssay for nitric oxide (NO) in sera and ELISA for the titer of IgG antibody in sera.Results The recombinant plasmid, pcIFN-γ was constructed.The proliferation response of spleen T lymph cells, NK cell killing activity, and serum levels of IFN- γ, IL-2 and NO in mice injected with pcROP1 and pcIFN-γ were higher than in those injected with pcROP1 alone.There was no difference in IgG antibody level s between the two groups. Conclusion The genetic adjuvant, pcIFN-γ, could enhance the cellular immune response indu ced by DNA vaccine of pcROP1 in mice against Toxoplasma gondii infection.     

大鼠肝癌模型脾内转染IL-2和(或)IL-12基因对NK细胞的激活作用

目的 :研究脾内直接注射携带 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的逆转录病毒包装细胞株对血 IL- 2和 IL- 1 2以及 NK细胞活性的影响。方法 :构建携带 h IL- 2和 (或 ) m IL- 1 2基因的逆转录病毒载体。将肝癌细胞 CBRH3注入大鼠腹腔 ,形成肿瘤 ,断颈处死 ,剖腹取出肿瘤组织 ,剪碎后接种于 5 0只 Wistar大鼠肝脏一叶 ,制备肝癌模型。模型大鼠随机分为生理盐水对照组、空载体对照组、IL- 1 2基因治疗组、IL- 2基因治疗组及 IL- 2 / IL- 1 2联合基因治疗组 ,每组 1 0只。含 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的包装细胞于肝癌接种后 1、3、5、7d进行脾内注射转染脾细胞。 EL ISA法检测大鼠血 IL- 2和 IL- 1 2浓度 ,放射性活度测定法检测 NK细胞活性 ,并进行病理学和免疫组化检查。结果 :IL基因治疗后 3d,IL - 2 / IL - 1 2联合基因组血清 h IL - 2与单基因治疗组相比无显著差异。病理示治疗后肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多。 IL治疗组 NK细胞活性较对照组显著增高 (P<0 .0 1 )。治疗后 3d血清 IL达高峰 ,以后逐步下降。 IL - 2 / IL - 1 2联合基因组较 IL单基因组增高 (P<0 .0 5 )。 结论 :脾内直接注射携带 IL -2和 (或 ) IL - 1 2基因的逆转录包装细胞株可明显增强 NK细胞活性 ,IL联合基因治疗优于 IL单基因     

老年小鼠的NK细胞活性及其对细胞因子应答性的观察研究

比较了不同品系青年细胞间NK细胞活性差异，以及细胞因子,r-干扰素和白细胞介素－II对青年鼠NK细胞的激活作用，讨论了衰老与肿瘤发生的免疫学因素，结果表明，在青年C57BL／6，C3H，Swiss,DBA/2及昆明鼠的NK细胞水平无明显差异，而在老年鼠差异非常显著，特别是C3H和C57BL／6老年鼠在1年龄时基本丧失NK细胞活性，病毒感染老年鼠未见象青年鼠那样的NK激活,现象，而老年鼠的NK细胞对细胞因子应答正常，提示老年鼠的免疫调节(细胞（TH细胞）功能低下。     

阳离子脂质体介导IL-2基因治疗SCCⅦ移植瘤的初步研究

目的：探讨多价阳离子脂质体介导的白细胞介素2（IL－2）基因治疗头颈鳞癌的最佳比例和免疫机理。方法：利用SCCⅦ细胞株在C3H／HeJ小鼠口底建立头颈鳞癌荷瘤动物模型。用不同比例的脂质体与DNA混合物及裸DNA进行体内外转染，用ELISA方法检测其转染后IL－2基因的蛋白表达水平，用乳酸脱氢酶（LDH）法检测荷瘤小鼠脾脏的自然杀伤细胞（NK）和细胞毒T淋巴细胞（CTL）活性。结果：最佳IL－2分泌水平在体外细胞株与体内瘤内转染时的脂质混合物比较不一致。与裸DNA和空载体相比，合适比例的脂质混合物转染可增强脾脏NK和CTL的杀伤活性。结论：脂质复合物在瘤内直接基因转染的良好效能取决于其合适的构成比例，体外细胞转染的最佳脂质混和物比例不能作为体内转染的参考；与裸DNA转染相比，多价阳离子脂质体适于作为头颈肿瘤进行直接瘤内基因治疗的非病毒载体。     

新城疫病毒合用中药黄芪诱生内源性干扰素的研究

目的研究新城疫病毒（NDV）合用中药黄芪在小鼠体内诱生内源性干扰素-α及对小鼠的免疫调节作用。方法实验分3部分,实验1：分别以NDV、黄芪及二者合用予小鼠口腔喷洒给药,连续10日后以ELISA法测定小鼠唾液中干扰素-α和SIgA的含量;实验2：分别以NDV、黄芪及二者合用予小鼠腹腔注射给药（黄芪灌胃方式给药）,ELISA法测定给药10日后血清干扰素-α的含量;实验3：分为NDV、黄芪及二者合用的高、中、低三种剂量,给药方法同第二组,6天后MTT法测定脾脏NK细胞的活性。每组分别设置阴性对照。结果NDV和黄芪口腔给药能升高小鼠唾液干扰素-α（35.54±10.20IU/ml,5.69±1.35IU/ml）和SIgA含量（68.88±15.47ng/ml,44.32±9.87ng/ml）,腹腔给药能诱生血清干扰素-α（120.54±29.21IU/ml,10.69±6.35IU/ml）,并能激活NK细胞活性（50.4%,32.1%）。NDV合用黄芪组的诱生效果远高于单独使用组（98.55±16.95IU/ml,101.31±27.59ng/ml,262.55±26.91IU/ml,75.6%）,显示出较强的协同作用。结论NDV合用黄芪能诱生小鼠内源性干扰素,并能发挥对小鼠SIgA和NK细胞的免疫调节作用。