二种大鼠供肝原位肝移植术后近期死因的分析

目的　分析大鼠正常心跳供体 (HBD)和心跳停搏供体 (NHBD)原位肝移植术后近期死因的异同。方法　雄性SD大鼠随机分成HBD和NHBD两组 ;NHBD组又分别设心跳停搏 30min(NHBD 30 )和 45min(NHBD 45 )两组。每组各行原位肝移植 5 0、30和 30次。结果　HBD和NHBD组冷缺血、无肝期、IVC阻断、受体手术时间分别为 6 9 76± 1 5 2和 70 32± 1 5 3min、16 46± 0 96和 16 40± 0 73min、2 2 5 6± 1 73和 2 2 75± 1 16min、89 38± 3 75和 90 5 8± 3 76min ;HBD组术后近期 (1周 )共有 5只受体分别死于原发性移植肝无功能 (1)、麻醉过深 (1)、肺部感染 (2 )和SVC吻合口漏 (1) ;而NHBD组术后近期共有 36只受体分别死于原发性移植肝无功能 (17)、麻醉过深 (4)、无肝期较长 (3)和供肝再灌注后渗血 (12 )。结论　二种供体原位肝移植术后的近期死因确实存在着差异。     

大鼠两种不同供肝对原位肝移植术中和术后影响的比较

目的　比较正常 (HB)和心跳停搏 (NHB)供肝对大鼠原位肝移植术中和术后的影响。方法　雄性SD大鼠随机分成HB和NHB两组 ;NHB组又分别设心跳停搏 30min(HNB - 30 )和 4 5min(NHB - 4 5 )两组。每组各行原位肝移植 5 0、30和 30次。结果　HB和NHB组冷缺血、无肝期、肝下下腔静脉 (IVC)阻断、受体手术时间分别为 (6 9.76± 1.5 2 )min和 (70 .32± 1.5 3)min、(16 .4 6± 0 .96 )min和(16 .4 0± 0 .73)min、(2 2 .5 6± 1.73)min和 (2 2 .75± 1.16 )min、(89.38± 3.75 )min和 (90 .5 8± 3.76 )min ;术后受体苏醒和主动饮水时间分别为 (5 .4 3± 3.88)min和 (5 4 .0 6± 5 .99)min、(43.0 4± 10 .19)min和(12 6 .79± 15 .0 2 )min ;受体术后鼻粘膜出血率分别为 4 .17%和 92 .6 8% ;受体第 1周体重下降幅度分别为 (6 .15± 1.92 ) %和 (9.6 2± 1.80 ) % ;第 2周体重增加幅度分别为 (7.4 4± 2 .5 9) %和 (3.16± 1.0 4 ) %。HB组近期死因分别为原发性移植肝无功能 (PGF)、麻醉过深、肺部感染和肝上下腔静脉 (SVC)吻合口漏 ;而NHB组分别为PNF、麻醉过深、无肝期较长 (>17min)和再灌注后供肝渗血 ;HB和NHB - 30、NHB - 4 5组术后 1周存活率分别为 90 %、5 0 %和 30 %。结论　NHB较HB术中操作更复杂 ,更需     

大鼠心脏停搏供体肝移植的实验研究

目的 探讨大鼠原位肝移植过程中,供肝可能耐受心脏停搏热缺血损伤的时间极限,方法 雄性SD大鼠,以供肝获取前供体大鼠经历心脏停搏时间0、15、30、45、60min分为5组（HB组、N-15组、N-30组、N-45组和N-60组）,而后行大鼠原位肝移植,比较各组的术后肝功能、肝脏病理和存活率。结果 HB、N-15、N-30、N-45和N-60的大鼠肝移植术后1周存活率分别为：100%（8/8）、75%（6/8）、62.5%(5/8)、25%（2/8）和0%（0/8）。其中HB、N-15、N-30组和N-45组的大鼠肝移植最长存活时间超过30d。结论 大鼠供肝对于热缺血损伤的时间应越短越好,但耐受30min心脏停搏热缺血损伤时,仍可使1周存活率达62.5%,极限时间为45min。     

肝移植时供肝耐受无心跳热缺血的安全时限实验研究

目的 探讨肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限。方法 建立广西巴马小型猪原位肝移植动物模型并按移植前供肝经历心脏停搏时间0、30、45、60min分为4组，观测肝移植后各组一周存活率、肝功能、肝脏病理和肝脏能量代谢以及术中肝脏复流后微循环改变。结果上述各组术后一周存活率分别为：100％(5／5)、100％(5／5)、60％(3／5)、20％(1／5)。肝脏能量代谢等指标的改变在供肝无心跳热缺血时间30min前是可逆的，随心跳热缺血时间的延长远渐向不可逆演变。结论 在本实验条件下，巴马小型猪心脏停搏供体肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限约为30min。     

外源性三磷酸腺苷-氯化镁预处理对大鼠供肝热缺血损伤的保护作用

目的 观察三磷酸腺苷-氯化镁(ATP-MgCl2)预处理对无心跳大鼠供肝热缺血损伤的保护作用.方法 根据ATP-MgCl2预处理与否及供肝获取前经历的供体心脏停搏时间(即热缺血时间)30min或45min,将实验动物分为4组,即非预处理的30min(N-30min)组和45min(N-45min)组,以及ATP-MgCl2预处理的30min(tN-30min)组和45min(tN-45min)组行原位肝移植,观察存活状况,取材行光学显微镜及电子显微镜检查,移植术后1、3、7d 采集血样检测肝功能.结果 N-30min组和N-45min组的1周存活率分别为50.0%和16.7%,而tN-30min组和tN-45min组的1周存活率分别为83.3%和66.7%,预处理组移植肝脏的病理及肝功能明显好于非预处理组.结论 ATP-MgCl2预处理能够减轻供肝的热缺血损伤,改善肝功能,减轻病理损害,提高大鼠肝移植的存活率.     

阿霉素预处理对大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨阿霉素预处理对无心跳大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用。方法根据阿霉素预处理与否及供肝获取前经历的供体心脏停搏时间30min或45min，将实验动物分为4组，即非预处理的30min（N-30）组和45min（N-45）组，阿霉素预处理的30min（tN-30）组和45min（tN-45）组行原位肝移植，观察存活状况，取材行光学显微镜及电子显微镜检查，移植术后1、3、7d采集血样检测肝功能。结果N-30组和N-45组的1周存活率分别为50．0％和16．7％，而tN-30组和tN-45组的1周存活率分别为83．3％和66．7％，预处理组移植肝脏的病理及肝功能明显好于非预处理组。结论阿霉素预处理能够减轻供肝的热缺血再灌注损伤。改善肝功能，减轻病理损害，提高大鼠肝移植的存活率。     

供肝热缺血与肝移植术后肺损伤关系的实验研究

目的：探讨心脏停搏供体肝移植中，供肝热缺血与肝移植术后肺损伤的关系。方法：实验以供肝获取前经历的心脏停搏时间0、30和60min分为3组，分别为有心跳组（HB组）、心脏停搏30min组（NHBD－30组）和心跳停搏60min组（NHBD－60组），而后行大鼠原位肝移植。比较术后血清中肿瘤坏死因子（TNF）－α细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的变化，并观察肺组织病理和肺组织中ICAM－1免疫组织化学表达。结果：随着供肝热缺血时间的延长，肺组织损害也逐渐回重，术后血清中TNF－α和ICAM－1的值呈上升趋势，各组间差异有显著性。术后6h NHBD-60组出现肺组织中ICAM－1的强表达。结论：在心脏停搏供体肝移植中，TNF－α和ICAM－1的表达上调与术后肺组织损伤有关。     

无心跳供肝大鼠肝移植模型的手术操作技巧探讨

目的建立一个稳定的无心跳供肝大鼠原位肝移植模型。方法在Kamada"二袖套法"的基础上进行改良,根据供肝获取前经历无心跳热缺血时间不同分为10min(R10组)、20min(R20组)和30min(R30组)3组,比较各组术后1周大鼠存活率。结果供体手术时间约30min(不含热缺血时间)。供肝冷保存时间均为1h。肝上下腔静脉吻合时间12～22min(平均15min),门静脉和肝下下腔静脉套管分别约需2min和1min。无肝期时间14～24min(平均19min),受体总手术时间50～65min(平均60min)。大鼠术后24h内死亡视为手术失败,共计12例死亡。R10组、R20组和R30组手术成功率分别为95%(19/20)、80%(16/20)和65%(13/20),术后1周生存率分别为95%(18/19)、81%(13/16)和54%(7/13)。结论在Kamada"二袖套法"基础上进行改良的大鼠无心跳供肝肝移植模型能很好地模拟临床无心跳供肝肝移植。大鼠肝脏能耐受30min以内的热缺血时间,移植术后短期存活结果满意,长期存活率尚需进一步研究。     

改良单人操作大鼠原位肝移植模型的建立

目的探索改良传统手术方法单人操作大鼠原位肝移植模型的建立方法。方法 200只(100对)大鼠建立原位肝移植模型,其中80只(40对)进行正式实验,采用改良的Kamada二袖套法,再对手术中关键步骤进行改良,并对术中及术后恢复情况进行分析。结果本组80只大鼠原位肝移植手术均顺利完成。供体手术时间为(28.5±2.4)min,供肝修整时间为(10.2±1.8)min;肝上下腔静脉吻合时间为(15.3±1.9)min,门静脉吻合时间为(3.4±1.2)min,受体无肝期为(23.8±1.9)min,肝下下腔静脉吻合时间为(5.1±2.1)min,胆道重建时间为(3.1±0.9)min。整个手术过程中供、受体出血量均不足0.5 ml。40只受体大鼠,术后2 d成活率为90.0%(36/40),3只死于肝上下腔静脉缝合处出血,1只死于无肝期过长;术后7 d成活率为82.5%(33/40),3只均死于腹腔内感染。结论在单人操作建立大鼠原位肝移植模型中,通过腹主动脉和下腔静脉整块游离行腹主动脉灌注供肝、精细解剖左隔下静脉三角、术中热凝控制出血等方面的改良可减少手术并发症的发生,保证供肝质量,提高大鼠成活率。     

供肝快速切取法大鼠原位肝移植模型的建立

目的采用供肝快速切取法建立大鼠原位肝移植模型,研究其稳定性及成功率。方法健康雄性SD大鼠2 0 0只,随机分为两组。实验组采取供肝快速切取法原位肝移植,对照组采用传统肝移植方法。比较两组的手术时间,供肝冷、热缺血时间,术后受体肝功能变化及手术成功率。结果对照组供体手术时间(3 3.8±4.2)m in,供肝热缺血时间(3.5±1.2)m in,冷缺血时间(6 2.0±4.2)m in,手术成功率8 0%。实验组供肝切取时间为(1 3.1±2.2)m in,供肝热缺血时间0m in,冷缺血时间(3 8.0±3.1)m in,术后肝功能恢复快,手术成功率9 4%(P<0.0 5)。结论新的建模方法可明显缩短手术时间,改善供肝质量,提高手术成功率。该法为肝移植研究提供了更为科学的模型。     

小型猪非转流原位肝移植的围手术期处理

目的:探讨中国小型猪非转流条件下原位肝移植的围手术期特点，以建立成熟、稳定的移植模型。方法:通过预实验组8例次和实验组18例次非转流条件下中国小型版纳猪原位肝脏移植术，观察围手术期血流动力学及重要代谢指标的变化，改进围手术期处理措施，总结围手术期处理特点。结果:预实验组8例次均在术后当天死亡。实验组18例次无术中死亡，术后7d存活率为88.9%。实验组平均手术时间（179.6±14.3）min，平均无肝期（27.3±3.4）min。无肝期血流动力学及生化代谢波动明显。术后当天麻醉清醒，术后约3～5h开始自行排尿，术后第3天正常进食。结论:手术中无肝期时间的缩短及血流动力学的相对稳定是非转流条件下猪原位肝移植成功的关键。     

小型猪小体积肝移植模型的建立

目的研究构建成熟稳定小型猪小体积肝移植模型的方法。方法选用体重一致的广西巴马小型猪20只,按照随机原则分为供体组和受体组各10只。在获取供肝的过程中即进行减体积操作,切除左半肝并保留肝中静脉主干。受体采用经典原位非静脉-静脉转流法行小体积肝移植。记录受体肝移植的手术时间,供肝热缺血时间、冷缺血时间,受体无肝期时间。观察移植术后2周存活情况及手术相关并发症。结果手术时间5～7h,平均6h;供肝热缺血时间2～3min;冷缺血时间(116±16)min;无肝期时间(35±4)min。术中小型猪均无死亡。10只受体猪中,2只死于手术相关并发症,其中1只于术后10h死于肝断面出血,另1只于术后2d死于切口疝。其余8只受体猪皆存活超过2周,2周存活率达80%,均未发生手术相关并发症。结论在供体手术中切除左半肝并保留肝中静脉主干,受体采用经典原位非静脉-静脉转流法行小型猪小体积肝移植模型构建是可行且稳定的。     

原位肝移植治疗多囊肝病的临床分析

目的 探讨肝移植治疗多囊肝病中的效果和经验.方法 回顾分析我中心2000年1月至2008年12月9例多囊肝行肝移植的病例,对患者术前MELD评分、肝肾功能,术中输血、失血,手术时间、无肝期以及术后并发症、存活时间等方面进行总结.结果 9例患者术前MELD平均(16±9)分,5例同时患有多囊肾,除1例出现肝硬化外其他8例无明显肝功能损害但因明显的压迫症状而严重影响生活质量,3例有肾功能异常需要透析.术中平均输血(1800±1600)ml,失血(3500±2600)ml,平均手术时间(7.2±1.5)h,无肝期(52.7±15.4)min.术后3例分别因腹腔出血、急性排斥反应及循环衰竭导致多器官衰竭而早期死亡;6例患者均存活1年以上,现最长存活时间8年.本组1年和2年存活率分别为77.8%和66.7%.结论 肝移植是治疗多囊肝疾病的有效方法,比较其他的肝移植受者手术时间长,失血量较大,手术难度较高,但预后良好.     

犬辅助性原位肝左叶移植模型的建立

目的建立稳定可靠的辅助性肝移植动物模型。方法杂交犬14条8～25kg随机分两组。供体组肝脏均采用尸体肝左叶；受体组行标准左叶切除，供肝左叶原位移植于受体体内。结果供肝热缺血时间为零，冷缺血时间平均36．3min；灌注液的量平均2．96L，切取修剪肝左叶时间为23～40min。受体手术平均时间5．3h，平均出血量140ml，肝脏血管重建后红润柔软，5～11min内即见胆汁从胆管中溢出。受体组术后全部存活，围手术期未用任何血管活性药物、抗生素及免疫抑制剂。术后存活超过6h者5例．最长存活者达5．7d。结论犬是建立辅助性肝移植模型的理想动物。     

受体血清“封闭”供肝预防异种肝移植超急性排斥反应

目的 探讨受体血清“封闭”供肝对异种肝移植超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)的预防作用.方法 取豚鼠和SD大鼠各20只,分别作为供体和受体,供受体随机配对;移植前采集受体大鼠近交系其他个体血清,45℃水浴灭活补体备用;实验组(n=10)术前用0.1％受体血清(recipient serum,RS)的Ringer液“封闭”供肝,对照组(n=10)仅用Ringer液灌洗供肝;采用改良“双套管法”行豚鼠、SD大鼠原位肝移植,观察供肝植入后形态学改变、受体存活时间、术后1h存活率,HE染色法检测移植肝微血栓、出血和肝细胞水肿等病理损害积分;检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)评价肝功能.结果 两组大鼠供体异种肝移植时间和无肝期比较,差异无统计学意义(P＞0.05);对照组受体大鼠供肝充盈缓慢,灌注不均,实验组供肝充盈迅速,灌注较均匀;实验组受体大鼠术后存活时间和术后1h存活率较对照组均明显增加(P＜0.01),移植肝微血栓、间质出血(积分)较对照组明显减轻(P＜0.01),肝细胞水肿无明显差异(P＞0.05);血清丙氨酸转氨酶(ALT)较对照组明显下降(P＜0.05).结论 受体血清“封闭”供肝对异种肝移植HAR具有一定的抑制作用,是预防器官移植HAR的潜在方法之一.     

缺血后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨在体条件下缺血后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法采用SD大鼠原位肝移植模型,供肝冷保存时间100min,无肝期控制于18min以内,60只雄性健康SD大鼠随机分为3组,对照组12只,缺血再灌注损伤组和后处理组各24只。对照组开腹后仅游离肝周韧带;缺血再灌注损伤组受体大鼠供肝切除前仅以肝素化生理盐水经门静脉灌注;后处理组供肝植入后完全再灌注前,给予多次短暂复灌复停作为缺血后处理。缺血再灌注损伤组、后处理组受体一半（6只）于再灌注后2h留取血液及肝组织,另一半（6只）于再灌注后6h留取肝组织。对照组于关腹后相应时间留取血液及肝组织。各组分别检测肝功能,采用酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子Or．和中性粒细胞弹性蛋白酶。根据酶促反应原理,利用分光光度仪测定肝脏谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛、髓过氧化物酶、超氧化物歧化酶。肝组织HE染色后光镜下观察组织学变化。结果缺血再灌注损伤组和后处理组血清肝功能指标、炎性细胞因子水平及肝组织过氧化物含量均高于对照组（P〈0．05）,而后处理组较缺血再灌注损伤组则明显低（P〈0．05）;缺血再灌注损伤组和后处理组肝组织抗氧化酶活力显著低于对照组（P〈0．05）,而后处理组较缺血再灌注损伤组则明显高（P〈0．05）。结论缺血后处理对大鼠移植肝的缺血再灌注损伤有明显的保护作用。提高组织的抗氧化能力和降低炎性细胞因子水平可能是缺血后处理保护作用的机制之一。     

改良"二袖套法"制备大鼠原位肝移植动物模型

目的：介绍改进的“二袖套法”法大鼠原位肝移植动物模型。方法：采用改进的“二袖套”法进行110只大鼠原位肝移植。结果：切取供肝时间平均37min，修肝时间平均13min，无肝期平均14min，术中和术后4h内死亡8只，手术成功率达93%。术后1周死亡11只，1周存活率为89%，主要死亡原因为感染和胆道梗阻。结论：改进的“二袖套”法大鼠原位肝移植具有无肝期短、手术成功率高，大鼠术后存活时间长的优点，是大鼠原位肝移植的理想术式。