实时荧光定量PCR检测白血病患者WT1基因表达及临床意义

目的 研究白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.方法 建立实时荧光定量PCR检测WT1基因表达技术,并分析65例白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.结果 建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数＞0.99.急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者WT1基因表达水平较正常对照组均显著升高(P=0.001).慢性髓性白血病(CML)急变期患者WT1基因表达水平显著高于慢性期.WT1表达量与急性白血病发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无明显相关关系.AML和ALL患者中WT1基因高表达患者与低表达病例CR率差异无显著性.急性白血病患者治疗缓解后WT1的表达量较治疗前显著下降(P=0.032).随访显示WT1持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发.结论 实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者WT1基因表达量可预测难治复发及用于MRD的检测.     

初诊急性白血病患者化疗前后血浆可溶性血管内皮细胞蛋白C受体、血管性血友病因子、P-选择素水平的变化

目的探讨初诊急性白血病(AL)患者化疗前后血浆可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(s EPCR)、血管性血友病因子(v WF)、P-选择素(P-selectin)含量变化的临床价值。方法选取105例初诊AL患者以及120例健康体检者作为研究对象,再根据疾病类型将入组的初诊AL患者分为急性淋巴细胞白血病(ALL,35例)、急性早幼粒细胞白血病(APL,37例)、不包括APL的急性粒细胞白血病(non-APL AML,33例)。ALL组患者采用VDLP方案诱导化疗,APL组患者采用全反式维甲酸、三氧化二砷、柔红霉素方案诱导化疗,non-APL AML组患者采用DA方案或IA方案诱导化疗。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测初诊AL患者化疗前后以及健康体检者的血浆s EPCR、v WF、P-selectin水平。结果 1初诊AL患者化疗前血浆s EPCR、v WF、P-selectin水平显著高于健康体检组(P0.05)。初诊AL患者化疗完全缓解后血浆s EPCR、v WF、P-selectin水平显著低于化疗前(P0.05),但是血浆s EPCR、v WF水平仍然显著高于健康体检组(P0.05),而血浆P-selectin水平与健康体检组相比差异无显著性(P0.05)。2不同类型初诊AL患者化疗前血浆s EPCR、v WF、P-selectin水平相比差异有显著性(P0.05),APL患者血浆s EPCR、v WF、P-selectin水平显著高于ALL患者、non-APL AML患者(P0.05),ALL患者与non-APL AML患者之间血浆s EPCR、v WF、P-selectin水平相比差异无显著性(P0.05)。结论初诊AL患者在治疗前往往伴随有血管内皮细胞损伤、血小板活化以及血液高凝状态,这种情况以APL表现更为显著。     

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因启动子的甲基化

目的 研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化和基因表达在初治急性白血病患者中的临床意义.方法 采用MSP方法和RT-PCR方法分别检测60例急性髓系白血病患者、55例急性淋巴细胞白血病患者和17例正常人DAPK基因的甲基化状态及其mRNA的表达,统计学分析各组之间的表达差异.结果 急性淋巴细胞白血病组的DAPK甲基化阳性率(29.1％)高于急性髓细胞白血病组(5％)和正常组(0％)(P＜0.0l25),但甲基化与急性淋巴细胞白血病组患者临床特征无关(P＞0.05).DAPK基因mRNA的表达水平以正常组最高,急性髓细胞白血病组次之,急性淋巴细胞白血病组最低(P=0.000).急性淋巴细胞白血病组患者DAPK mRNA表达与其启动子甲基化呈显著负相关(P＜0.05).结论 DAPK基因启动子在初治急性淋巴细胞白血病患者中甲基化率高于初治急性髓细胞白血病患者和正常人,但与患者临床特征无关.急性淋巴细胞白血病患者DAPK基因表达水平低或不表达可能与其甲基化有关.     

Clinical variations of serum levels of ferritin, folic acid and vitamin B12 in acute leukemia patients

Acute leukemia is one of the most common hematologic malignancies and its exact mechanism of development is unknown yet.In clinical,acute leukemia always accompany with abnormal iron balance.Ferritin.folic acid and vitamin B 12 arc important components of blood cells.In this study,we measured variations of serum levels of ferritin (SF),folic acid and vitamin B12 in the acute leukemia patients under different disease stages including first diagnosed stage,complete remission (CR) stage and not remission (NR) or relapse stage.It demonstrated that serum SF levels in patients at the first diagnosed stage and NR or relapse slage were significantly higher than the CR stage in acute myelocytic leukemia (AML) patients and acute lymphoblastic leukemia (ALL) patients (P＜0.05).The serum rolic acid levels in patients at the first diagnosed stage and NR or relapse stage were significantly lower than the CR stage in AML patients and ALL patients (P＜0.001).Whereas.serum vitamin B12 levels in AML patients were significantly higher at the first diagnosed stage and NR or relapse stage than the CR stage (P＜0.001 ).And it was significantly higher in ALL patients at the NR or relapse stage than at thc first diagnosed stage and CR stage (P＜0.05).There are obvious variations of serum levels of SF,folio acid and vitamin B12 in acute leukemia patients under different stages Increased serum levels of SF and vitamin B12 and decreased levels of folic acid may correlate to the active degree of acute leukemia as well as tumor load.     

Apollon和COX-2基因在急性白血病患者中的表达及意义

目的通过半定量逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）对急性白血病（acute leukemia,AL）患者及健康人群Apollon和COX-2这2种mRNA表达水平进行检测,探讨两者在AL诊断中的临床意义及在AL发生中的作用关系。方法常规收集40例新诊断的AL患者及20例健康人骨髓液或外周血标本,提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术,内参照物选择β-actin,半定量检测靶mRNA的表达水平。结果新诊断的AL患者组Apollon mRNA表达水平为0.332±0.296,高于正常对照组表达水平0.026±0.018,差异有统计学意义（P〈0.05）;COX-2mRNA表达水平为0.916±0.154,高于正常对照组表达水平0.554±0.131,差异有统计学意义（P〈0.05）;两者的表达呈正相关（r=0.406,P〈0.05）。结论 Apollon、COX-2mRNA在新诊断的AL患者中异常过度表达,并且呈正相关关系,两者的表达水平及相互作用可能是导致AL发生、发展的重要因素。     

癌—睾丸抗原SSX-2基因在儿童急性淋巴细胞性白血病外周血单个核细胞中的表达

目的：探讨癌—睾丸抗原SSX-2基因在儿童急性淋巴细胞性白血病（ALL）外周血单个核细胞中的表达,为判断ALL预后提供理论依据。方法：采用逆转录—聚合酶链反应,对51例ALL患儿外周血单个核细胞进行SSX-2mRNA检测,并进行SSX-2基因表达与临床特征的相关性分析;以30例非肿瘤患儿为对照组。结果：ALL初治患儿SSX-2 mRNA表达率为34.78%,对照组无一例表达。ALL初治组表达率明显高于对照组（P〈0.05）,ALL初治组表达率高于ALL完全缓解组表达率7.14%（P〈0.05）。SSX-2基因的表达与儿童ALL性别、年龄、初诊时外周血白细胞数、免疫分型以及临床危险分级无关（P〉0.05）。结论：儿童ALL患者SSX-2mRNA表达率较高,SSX-2mRNA表达可能与儿童ALL的发生、发展有关;SSX-2基因检测对儿童ALL近期疗效的评估、指导临床治疗有一定意义。     

急性淋巴细胞白血病患儿血清铁调素水平及临床意义

目的 探索急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患儿血清铁调素(Hepcidin)水平及其临床意义.方法 选择ALL患儿30例为研究对象,随访时间截止到2020年2月,应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检...     

儿童急性白血病survivin,bcl-2,mdr1的表达及意义

目的：探讨急性白血病患儿survivin、bcl-2、mdr1 mRNA表达及临床意义.方法：用RT-PCR的方法检测患儿骨髓survivin、bcl-2和mdr1的mRNA.结果：初诊患儿survivin、bcl-2和mdr1的阳性表达率高于对照组.初诊急性淋巴细胞性白血病和急性髓细胞性白血病survivin、bcl-2、mdr1阳性表达率无显著性差异.完全缓解期患儿survivin和bcl-2阳性表达明显低于初诊白血病患儿.复发组survivin、bcl-2、mdr1三者阳性率明显高于缓解组.survivin阳性和阴性表达者外周血白细胞总数无显著性差异（P＞0.05）.结论：survivin和bcl-2在急性白血病患儿表达增高,其表达与急性白血病的类型和外周血白细胞总数无关.survivin、bcl-2和mdr1在儿童白血病的共表达可能提示预后不良.     

GSTT1、GSTM1、MDR1基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病易感性及化疗反应的关系

目的：研究谷胱甘肽硫转移酶基因GSTTl、GSTMl以及多药耐药基因MDRl多态性与儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）化疗反应的关系。方法：筛选ALL患者100例,采用多重PCR技术分析GSTTl、GSTMl以及MDRl基因型,比较不同基因型患者化疗反应的差异。结果：GSTTl、GSTMl以及MDRl3种基因非缺失型个体发生ALL的风险明显高于GSTTl、GSTMl以及MDRl任一基因缺失型,GSTTl、GSTMl以及MDRl3种基因缺失型患者CR率较GSTTl、GSTMl以及MDRl基因非缺失型患者低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：GSTTl、GSTMl以及MDRl基因缺失型个体对ALL的易感性升高,化疗完全缓解率显著降低。GSTTl、GSTMl以及MDRl基因型检查有助于指导ALL儿童患者个体化治疗方案的制定。     

白血病患者WT1基因的表达及临床意义

目的：检测白血病患者WT1基因的表达水平，并探讨其与临床的关系。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术，检测58例初治急性白血病（AL）、20例慢性粒细胞白血病（CM）和10例非血液病患者WT1基因的表达。结果：10例非血液病患者WT1基因的表达均呈阴性。58例AL患者44例检测有WT1基因的表达，阳性率为75．9％，其中急性髓性白血病（AML）阳性率为86．4％，急性淋巴细胞白血病（ALL）为42．9％，两者差异有显著性（P＜0．01）；AML治疗前WT1的表达水平与完全缓解（CR）率无相关（P＞0．05），但倾向于WT1基因低表达者有更高的CT率（低表达组CR率为75．0％，高表达组率为34．8％）。CML慢性期WT1的表达水平极低，随临床分期进展水平增高，高表达者预示急变。结论：AL和CML急变期患者WT1基因过度表达，初治AML治疗前WT1的表达水平与疗效无相关，但低表达组CR为75％，高表达组CR为34．8％。     

B-ALL患儿外周血髓源性抑制细胞的变化及临床意义

目的通过研究急性B淋巴细胞白血病(acute B lymphoblastic leukemia,B-ALL)患儿外周血中髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)数目、亚群比例、主要功能物质变化,探讨MDSC在儿童B-ALL发病中的作用。方法 28例初诊治疗前和完全缓解后B-ALL患儿作为试验组,按照危险度分为高危组、中危组及标危组,15例健康儿童作为正常对照组,采用流式细胞术(flow cytometric method,FCM)检测各组外周血中MDSC(CD11b~+CD33~+)的数量变化;检测单核细胞样MDSC(CD14~+CD11b~+CD33~+)和粒细胞样MDSC(CD15~+CD11b~+CD33~+)两种不同亚群的比例及其变化情况;检测MDSC主要功能物质精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)和活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)的表达情况。结果治疗前B-ALL患儿外周血中MDSC数量比例(2.41%±0.45%)高于完全缓解后(1.56%±0.44%)及正常对照组(0.68%±0.16%)(P0.01);且MDSC数量比例与不同危险度分层呈正相关(r_s=0.680,P0.01),不同危险度分层间MDSC的数量比例差异也具有统计学意义(P0.01);治疗前B-ALL外周血MDSC亚群以粒细胞样MDSC(granulocyte-MDSC,G-MDSC)为主,完全缓解后B-ALL患儿与正常对照外周血中MDSC亚群组成差异无统计学意义(P0.05),且均以单核细胞样MDSC(monocytoid-MDSC,M-MDSC)为主。外周血MDSC中Arg-1和ROS在治疗前B-ALL患儿表达最高(41.00%±9.34%,3 004.26±611.05),完全缓解后次之(24.13%±5.49%,2 031.75±294.01),正常对照组表达最低(10.72%±4.37%,811.33±195.12)(P0.01);Arg-1的表达随ALL危险度分层升高有上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05);不同危险度分层中ROS表达差异有统计学意义(P0.01),其中高危组表达高于中危组和标危组,中危和标危组的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 B-ALL患儿外周血中MDSC数量随危险度分层的升高而增加,MDSC可能通过其代谢产物Arg-1及ROS的表达而抑制机体免疫功能,参与儿童B-ALL的发病。     

急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达

目的：检测GLIPR1基因在急性髓系白血病（AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。 方法：以5株白血病细胞株, 以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞胞白血病（ALL）患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1 mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR（MS-PCR）方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1 mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。 结果：GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平（0.38±0.20）明显低于ALL骨髓（0.76±0.18）、CML骨髓（0.80±0.14）和对照骨髓（0.85±0.12）,在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓（0.78±0.13 vs. 0.36±0.20）;而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓（37.5%)、CML骨髓（27.5%)和对照骨髓（14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5% vs. 75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论：GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。     

异基因造血干细胞移植治疗急性髓系白血病单中心临床疗效分析

目的 总结并分析异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗急性髓系白血病(AML)临床疗效.方法 回顾性分析2008年1月至2015年6月于该院接受allo-HSCT的87例AML患者临床资料,分析移植后患者总生存率(OS)、无白血病生存率(LFS)和复发率(RR)、移植相关死亡率(TRM),并对人类白细胞抗原(HLA)全相合(亲缘和非血缘)与半相合移植疗效进行比较,同时分析不同移植前白血病缓解状态对移植疗效的影响.结果 87例患者移植后的2年OS为(73.6±4.7)％,2年LFS为(62.1±5.8)％.随访期中有27例(31.3％)复发,23例(26.4％)死亡.HLA全相合(亲缘和非血缘)与HLA半相合移植后的2年OS分别为(76.3±5.3)％、(68.5±7.2)％(P＜0.05),2年LFS分别为(60.2±4.8)％、(56.3±5.7)％(P＞0.05).HLA半相合移植急性移植物抗宿主病(aGVHD)和感染发生率明显高于HLA全相合(亲缘和非血缘)移植,但两者RR相似分别为26.9％、29.2％(P＞0.05).不同白血病缓解状态的移植疗效分析显示移植前未达到完全缓解(CR)、达到CR但微小残留(MRD)阳性和MRD阴性3组RR分别为68.7％、34.7％、16.6％,2年LFS分别为(18.7±5.2)％、(56.5±6.3)％、(79.2±5.7)％(P＜0.05);2年OS分别为(31.2±5.3)％、(69.6±7.2)％、(89.6±5.3)％(P＜0.05).结论 异基因造血干细胞移植是治疗AML的有效方法,复发是移植治疗后失败的主要原因.     

长期无病生存白血病儿童情绪、自我意识及个性特征的对照研究

目的 探讨长期无病生存白血病儿童的情绪、自我意识及个性特征.方法 选用儿童焦虑性情绪障碍筛查表、儿童抑郁障碍自评量表、Piers-Harris儿童自我意识量表和儿童版艾森克个性问卷分别对19例长期无病生存白血病、20例初发白血病和40例正常对照儿童进行评定.结果 长期无病生存组患儿在焦虑总分以及躯体化/惊恐、广泛性焦虑和社交恐怖分量表评分[分别为(25.72±14.72)分,(6.11±4.36)分,(5.72±4.56)分和(7.67±4.19)分]高于对照组[分别为(16.11±11.81)分,(3.82±1.69)分,(2.84±1.92)分和(3.95±2.85)分],差异具有显著性(均P＜0.01或P＜0.05).2组白血病患儿自我意识总分[分别为(60.06±8.07)分和(58.25±6.54)分]均低于正常对照组(均P＜0.01或P＜0.05),其中长期无病生存组在焦虑和合群分量表得分明显低于正常对照组(均P＜0.01或P＜0.05),而初发白血病组患儿在行为、智力与学校情况、焦虑分量表得分显著低于正常对照组(均P＜0.01或P＜0.05).长期无病生存组与初发白血病组患儿及正常对照组比较,性格普遍偏于内向.结论 长期无病生存白血病儿童较正常儿童有更多的焦虑情绪、较低的自我意识和内向性格特征.     

Detection of lymphocyte subsets and regulatory T cells in peripheral blood of patients with acute leukemia and its clinical significance

Objective To study the changes of lymphocyte subsets and regulatory T cells in peripheral blood of patients with acute leukemia (AL) and its clinical significance.Methods The different levels of periph...     

荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者外周血WT1基因的表达

目的　了解急性白血病患者外周血WT1基因的表达水平。方法　建立荧光定量RT -PCR方法 ,用PEABI 770 0PCR仪检测 114例急性白血病患者、2 6例非白血病患者和3 6例正常人外周血中WT1基因的表达水平。结果　 2 2例急性髓系白血病 (AML)和 15例急性淋巴细胞白血病 (ALL)初发患者WT1基因的表达量为 10 5～ 10 6拷贝 / μgRNA ,取得部分缓解的 2 6例AML和 19例ALL患者的表达水平为 10 2～ 10 4拷贝 / μgRNA ,而取得完全缓解的 17例AML和 13例ALL患者的表达水平为 0～ 10 2拷贝 / μgRNA。 结论　WT1基因在白血病外周血中有高水平的表达 ,可作为急性白血病疗效考核及监测微残留病的指标。     

ICAM-3在急性白血病中的表达及临床意义

目的探讨细胞间粘附分子-3(inter cellular adhesion molecule-3，ICAM-3)在急性白血病（acute leukemia,AL）中的表达及其在临床疗效、髓外浸润中的意义。方法采用骨髓涂片免疫组织化学法检测了33例急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphoblstic leukemia，ANLL）、21例急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）患者治疗前后及10例正常对照骨髓单个核细胞ICAM 3的表达率。结果化疗前AL组ICAM-3表达率均显著高于正常对照组，ANLL组与ALL组比较ICAM-3表达率差异无统计学意义(P＞0.05)，且T-ALL组与B-ALL组ICAM-3表达率差异无统计学意义(P＞0.05)；ICAM 3的表达与患者发病年龄、性别、就诊时血红蛋白（Hb）、血小板（BPC）等因素无关，与骨髓原始细胞比例呈正相关(r=0.467,P＜0.01)；外周血白细胞（WBC）≥100×109患者ICAM 3的表达率比WBC＜100×109组高(P＜0.05)；所有AL患者经过一个疗程化疗后ANLL、ALL未缓解组的ICAM-3表达率明显高于缓解组(P＜0.01)，但缓解组与对照组之间ICAM-3表达率差异无统计学意义(P＞0.05)；组织浸润组骨髓AL细胞ICAM-3表达率高于无组织浸润组(P＜0.01)。结论ICAM-3在AL中的表达明显高于正常对照组，其表达水平的高低可作为AL观察临床疗效及判断预后的指标之一。同时，AL的组织浸润机制可能与细胞间粘附分子表达升高有关。     

急性淋巴细胞白血病患儿体内细胞因子变化的意义研究

目的 :探讨IL 12在儿童急性淋巴细胞白血病 (acutelymphocyticleukemia ,ALL)发病机制中的作用及临床意义。方法 :采用ELISA法检测 47例初治ALL及 2 0例完全缓解患儿血清中IL 12的水平。结果 :①MIC分型 47例ALL患儿中B ALL 3 9例 ,T ALL 8例。②ALL患儿血清中IL 12浓度较对照组和完全缓解组显著降低 (P <0 0 5 )。B ALL和T ALL ,正常对照和完全缓解组之间差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :ALL患儿体内可能存在TH1/TH 2样细胞因子产生的失平衡状态 ,这可能是ALL发病中的重要机制之一。     

哮喘大鼠肺组织白血病抑制因子的表达及地塞米松干预研究

目的探讨哮喘大鼠肺组织中白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的表达及其意义.方法制作卵蛋白致敏大鼠哮喘模型,采用RT-PCR和Western-blot方法观察LIF在致敏大鼠肺组织中的表达.结果LIF蛋白表达量在哮喘组为(40832±12964),均较地塞米松组(16160±2108)和对照组(23110±8018)升高,差异有显著性(P＜0.01),地塞米松组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).LIFmRNA的相对表达量哮喘组为(0.51±0.13),均较地塞米松组(0.18±0.05)和对照组(0.24±0.02)明显增高,差异有显.著性(P＜0.01),地塞米松组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).结论LIF在致敏哮喘大鼠模型肺组织中表达显著增高,LIF作为神经免疫调节因子,可能参与了哮喘的发病机制.