白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织TIMP-1的影响

目的观察白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织TIMP-1表达的影响,提供哮喘防治新途径的可靠实验依据。方法雄性健康豚鼠108只随机分为3组,以卵蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型,给予白三烯受体拮抗剂扎鲁司特(Zafirlukast)治疗。肺组织切片免疫组化标记TIMP-1,图像分析TIMP-1表达水平,光镜观察病理学变化。结果OVA激发后8周,治疗组肺组织中TIMP-1标记阳性细胞明显多于哮喘组和对照组(P<0.05),分别为17.55±7.08,10.20±2.80及7.57±3.39;激发后12周两两比较差异均有显著性,治疗组TIMP-1标记阳性细胞明显多于哮喘组,后者TIMP-1表达水平明显高于对照组(P<0.05)。激发后8周始,治疗组气道炎症、上皮细胞增生和胶原沉积等病理学变化较哮喘组明显减轻。结论白三烯受体拮抗剂可使哮喘豚鼠肺组织TIMP-1表达水平增加,在延缓哮喘气道重塑发生过程中起重要作用。     

高氧、维甲酸对早产鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、-9 及特异性组织抑制物-1、-2表达的影响

目的探讨基质金属原蛋白-2(MMP-2)、MMP-9、基质金属蛋白酶特异性组织抑制物-1(TIMP-1)和TIMP-2在高氧肺损伤中的作用及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法建立高氧(FiO285%)暴露早产SD大鼠肺损伤模型,应用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA表达,采用明胶酶谱检测MMP-2和MMP-9酶原及活酶表达,采用Western blot技术检测TIMP-1和TIMP-2蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4、7、14d,MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达均显著升高(P均<0.01),MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶和TIMP-1蛋白的表达明显上调(P<0.05);RA对空气暴露下它们的表达均无明显影响(P均>0.05),但不同程度下调高氧暴露后MMP-2、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达和MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶的表达,进一步提高TIMP-1蛋白表达;高氧、RA对TIMP-2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响(P均>0.05)。结论高氧暴露明显改变MMPs/TIMPs的表达,在肺泡形成关键时期,MMPs/TIMPs之间平衡关系的破坏是造成肺发育受阻和纤维化的重要因素;通过协调MMPs/TIMPs之间的表达,改善肺泡结构,降低肺纤维化程度,从而逆转高氧所致肺损伤,是RA发挥保护作用的重要机制之一。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在高氧性肺损伤中的变化

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)在高氧性肺损伤中表达及意义。方法 幼年Wistar大鼠32只,随机分为空气组和高氧组,并于高氧暴露3、7、14 d后用免疫组织化学方法(SABC)观察MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在肺组织中的分布,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA在肺组织中表达,此外对支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透系数、肺湿／干重比(W／D)及肺组织病理学改变也进行对比分析。结果 高氧组3 d时肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润,7 d时进一步加重,14 d时间质细胞增生,肺间隔明显增宽,出现肺纤维化倾向。W／D值、肺通透系数和BALF蛋白含量在3、7、14 d均明显高于空气组(P均<0.05)。免疫组化法示MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在正常肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞呈弱阳性表达,高氧组3 d时肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、巨噬细胞、肺泡间质细胞均呈强阳性表达,7、14 d表达更广泛。与空气组相比,高氧3 d时MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平明显增加,7 d时最显著,14 d开始下降(P均<0.05),而TIMP-1、TIMP-2 mRNA表达却持续增加,14 d时仍无明显下降(P均<0.05)。高氧暴露后MMP-2／TIMP-2、MMP-9／TIMP-1比值亦增加,其中7 d时最为显著,14 d开始下降。结     

吸入激素对哮喘大鼠基质金属蛋白酶-9及其抑制剂的表达调控

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP9)及其组织抑制物(TIMP1)在支气管哮喘发病中的作用,评价吸入糖皮质激素对其调节作用。方法建立哮喘大鼠模型,用ELISA、免疫组织化学、westernblot及RTPCR技术,对激素治疗前后哮喘大鼠肺组织中MMP9及TIMP1表达进行研究。结果(1)通过大鼠行为学改变、呼吸功能曲线、IgE水平以及肺组织切片证实哮喘模型成立。(2)哮喘组肺组织细小支气管壁及伴行动脉周围炎性细胞浸润,黏膜断裂,杯状细胞增生,平滑肌增厚;21天组气道壁基膜增厚和平滑肌增生更加明显。(3)大鼠肺组织MMP9mRNA表达:哮喘7天组为(2.71±0.37),21天组为(1.76±0.27),激素治疗组为(0.88±0.18),正常对照组为(0.52±0.10),组间比较差异有统计学意义(F=151.52,P<0.01)。大鼠肺组织TIMP1mRNA表达:哮喘7天组为(1.13±0.19),21天组为(1.55±0.24),激素治疗组为(0.77±0.15),正常对照组为(0.47±0.08),组间比较差异有统计学意义(F=69.46,P<0.01)。(4)免疫组织化学及蛋白质表达结果与RTPCR结果一致。结论从蛋白质水平及mRNA水平证实哮喘大鼠模型肺组织MMP9表达升高,TIMP1表达亦增强;激素下调MMP9及TIMP1表达,可能是其抑制气道炎症和气道重塑的机制之一。     

基质金属蛋白酶-8及其组织抑制因子-1在高氧致新生鼠肺纤维化中的基因表达及其意义

目的：近年来研究发现细胞外基质（ECM）的过度沉积与肺纤维化发生密切相关，而ECM合成与降解在新生儿慢性肺疾病的肺纤维化发生、发展中作用如何尚不清楚。本文着重研究基质金属蛋白酶-8（MMP-8, Ⅰ型胶原的降解酶）及其组织抑制因子-1（TIMP-1）基因在高氧致新生鼠肺损伤中的表达，并探讨其在纤维化中的作用。方法：80只足月新生大鼠依吸氧浓度（FiO2）随机分为高氧组（FiO2＝0.90）和对照组（FiO2＝0.21）,每组均为40只。采用高浓度氧诱导新生鼠肺损伤模型，应用酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，动态研究MMP-8及TIMP-1 mRNA表达，并同时观察肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达强度及其含量变化。结果：实验后14 d 和21 d的高氧组肺组织中，Ⅰ型胶原蛋白表达和Ⅰ型胶原水平均高于对照组， 差异有显著性意义。 而实验后14 d 和21 d，高氧组肺组织MMP-8 mRNA表达降低，TIMP-1 mRNA表达增高，与对照组比较差异有显著性意义。结论：高氧通过下调MMP-8及上调TIMP-1基因表达，导致ECM降解减少，过量ECM沉积于肺组织, 这可能是高氧致肺纤维化的机制之一。［中国当代儿科杂志，2007，9（1）：1-5］     

高体积分数氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶-13和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的意义

目的 观察高体积分数氧(高氧)致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶.13(MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的动态变化,探讨CLD发病与MMPs的关系.方法 将新生大鼠于出生24 h内随机分为高氧组和对照组,每组各40只;于出生第1、3、7、14、21天处死,留取其肺组织,苏木素-伊红(HE)、Masson染色,酶联免疫吸附法检测其Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达;免疫组织化学法检测其肺组织MMP-13和TIMP-1的表达.结果 随高氧暴露时间的延长,新生大鼠肺组织光镜下表现为次级隔数目和肺泡数目减少,终末气腔扩张,肺泡间隔增宽.随高氧暴露时间的延长,肺组织Col Ⅰ型胶原蛋白沉积在第14天较对照组显著增加(p<0.01),第21天差异更为显著(P<0.001).MMP-13和TIMP-1 主要在上皮细胞、内皮细胞、间质细胞、肺泡巨噬细胞等细胞胞质中表达;第21天高氧组肺组织MMP-13表达与对照组比较明显下降(P<0.05),其余时间点二组比较无明显差异(Pa>0.05),TIMP-1 表达随高氧暴露时间延长逐渐增加,高氧组第14、21天较对照组表达均显著增加(Pa<0.01).结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织存在MMP-13/TIMP-1表达失衡,是高氧后期以Col I为代表细胞外基质异常沉积的关键.     

维甲酸治疗新生大鼠高氧肺发育受抑对肺组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响

目的 观察维甲酸(RA)对高氧抑制肺发育的影响,初步探讨其作用机制。方法 新生SD大鼠生后d2随机分为I空气+生理盐水组,Ⅱ高氧+生理盐水组,Ⅲ空气+RA组,Ⅳ高氧+RA组。Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85％氧气中,Ⅲ、Ⅳ组每日腹腔注射RA500μg/kg。生后14d行肺组织病理学检查,辐射状肺泡计数(RAC)和免疫组化法检测基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及其组织抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)的表达。结果Ⅱ、Ⅳ组肺组织显示肺泡生成受抑,RAC分别较I、Ⅲ组显著减少(P<0.01),但Ⅳ组RAC(8.3±0.8)较Ⅱ组(7.2±0.9)明显增加(P<0.01)。Ⅱ、Ⅳ组MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的表达较I、Ⅲ组明显增强(P<0.01),但Ⅳ组MMP-2、MMP-9的表达(2.70±0.65,2.64±0.48)较Ⅱ组(3.36±0.59,3.04±0.72)减弱(P<0.05),而TIMP-1的表达(3.68±0.51)较Ⅱ组(3.32±0.63)增强(P<0.05),TIMP-2的表达无统计学差异。结论 RA可部分阻止高氧引起的肺发育进程阻滞,可能是通过纠正MMPs/TIMPs的失衡而发挥作用的。     

Changes of serum levels of matrix metalloproteinase-9 and its inhibitor in newborns with intracranial hemorrhage

目的 探讨颅内出血足月新生儿血清基质金属蛋白酶(MMP).9、基质金属蛋白酶组织因子(TIMP).1水平动态变化及其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)分别测定30例颅内出血患儿在生后1d内,3、7、15天血清MMP-9、TIMP-1水平及其两者比值,并与30例健康足月新生儿进行对照比较.结果 颅内出血足月新生儿血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平明显高于对照组(P<0.01),以出生后3 d内MMP-9、TIMP-1水平及MMP-9/TIMP-1最高,7 d后开始下降,随病情恢复其水平缓慢下降,15 d部分患儿恢复正常,但与对照组比较差异仍有统计学意义(P<0.05).小、中、大量出血患儿血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);三组间比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 颅内出血足月新生儿血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平均明显增高,可作为判定病情和评估预后的参考指标.     

基质金属蛋白酶及其抑制物在容量过负荷致慢性心力衰竭大鼠血浆及心肌组织中的变化及意义

目的 观察容量过负荷致慢性心力衰竭大鼠血浆及心肌组织基质金属蛋白酶-8(MMP-8)及其抑制物-1(TIMP-1)的表达变化,探讨其在慢性心力衰竭发病中的病理生理作用.方法 雄性SD大鼠17只,随机分为分流组(n=9)和对照组(n=8).分流组通过腹主动脉下腔静脉穿刺术建立容量过负荷致慢性充血性心力衰竭动物模型,对照组大鼠除不做穿刺外,余操作过程同分流组.分别测定2组大鼠心功能及血流动力学指标,检测血浆MMP-8及TIMP-1水平,实时荧光定量PCR测定大鼠左心室、右心室MMP-8 mRNA、TIMP-1 mRNA的表达.结果 术后8周,分流组大鼠左心室收缩压、左心室舒张压、左心室内压差、左心室内压最大上升速率及最大下降速率较对照组明显降低(Pa＜0.05,0.01);左心室舒张末压较对照组明显升高(P＜0.05).分流组大鼠血浆MMP-8、TIMP-1水平均较对照组明显升高(Pa＜0.05).与对照组相比,分流组大鼠左心室心肌组织MMP-8 mRNA及左、右心室心肌组织TIMP-1 mRNA水平均有升高趋势,右心室MMP-8 mRNA水平有下降趋势,但2组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05);左心室和右心室心肌组织中MMP-8/TIMP-1明显降低,右心室较左心室下降更明显.结论 MMP-8与TIMP-1通过影响胶原代谢,参与容量过负荷致慢性充血性心力衰竭的病理生理过程.     

SDF-1 在哮喘大鼠肺组织中的表达及 AMD3100 的干预作用

目的：探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）在哮喘大鼠肺组织中的表达及其拮抗剂AMD3100的干预作用。方法：30 只雌性 Sprague-Dawley 大鼠随机分为对照组、哮喘组、干预组,以卵白蛋白激发制备哮喘模型;干预组于激发前 30 min给予 AMD3100 (50 μg, 隔日 1 次,共 10 次)。光镜下观察各组气道炎症及气道壁结构的情况;酶联免疫吸附法测定肺组织匀浆中 IL-4、IL-5 的水平;RT-PCR 检测 SDF-1 mRNA 在肺组织中的表达。结果哮喘组气道壁厚度较对照组及干预组显著增厚（P<0.05）;干预组IL-4、IL-5 的水平明显低于哮喘组（P<0.05）;哮喘组中SDF-1 mRNA 明显高于对照组及干预组(P<0.05)。结论：SDF-1可能参与哮喘大鼠气道炎症反应和气道重塑过程;AMD3100 能够改善哮喘大鼠的气道炎症和气道重塑,可能与拮抗 SDF-1 的生物活性有关。     

基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶组织抑制物-1在心内膜弹力纤维增生症患儿心室重构中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)在心内膜弹力纤维增生症(EFE)患儿心室重构发病中的作用.方法　选择2007年3月-2008年5月首都医科大学附属北京儿童医院心脏中心收治的20例EFE患儿(EFE组),同期选择门诊26例健康体检婴幼儿作为健康对照组.根据预后将EFE患儿分组,死亡及病情无缓解者为危重组(n=5),病情缓解者为普通组(n=15).采用ELISA法测量各组血清MMP-9及TIMP-1水平.应用SPSS 11.5软件对数据进行统计学分析.结果　EFE组和健康对照组年龄、性别构成比较差异均无统计学意义,体质量比较差异有统计学意义[(9.00±2.27) kg vs (10.03±1.92) kg,P＜0.01].EFE组与健康对照组血清MMP-9[(568.1±349.2) μg·L-1 vs (446.4±239.8) μg·L-1]、TIMP-1[(342.6±114.2) μg·L-1 vs (313.3±60.5) μg·L-1]水平及MMP-9/TIMP-1比值[(1.8±1.3) vs (1.5±0.8)]比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).健康对照组、普通组和危重组MMP-9[(446.40±239.80) μg·L-1 vs (552.11±404.12) μg·L-1 vs (559.59±205.35) μg·L-1]、TIMP-1[(313.30±60.50) μg·L-1 vs (323.30±118.37) μg·L-1 vs (381.87±121.06) μg·L-1]水平及MMP-9/TIMP-1比值[(1.5±0.8) vs (1.9±1.5) vs (1.5±0.3)]比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论　MMP-9/TIMP-1在EFE心室重构的发病机制中可能无明显作用.     

Levels of matrix metalloproteinase-9 and its inhibitor in guinea pig asthma model following ovalbumin challenge

Our objective was to investigate the role of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) and their cellular sources in guinea pig asthma model following ovalbumin (OA) challenge. Twenty guinea pigs were divided into 2 groups: OA-challenged group were sensitized by intraperitoneal injection with OA and exposed to OA while the control group used saline in a similar manner. The positive level index (PLI), defined as the percentage of positive-stained cells × average optical density, was used to assess the expressing levels of MMP-9 and TIMP-1. The levels of MMP-9 from OA-challenged group were significantly higher than those of controls. However, no significant difference of the TIMP-1 levels between the OA-challenged group and controls were found. MMP-9 was expressed strongly in both inflammatory and structural cells while TIMP-1 was expressed weakly in inflammatory cells and structural cells. Our results implied that MMP-9 may contribute to tissue remodeling in asthma and both structural and inflammatory cells within lung tissue are the main cellular sources of MMP-9. Excessive expression of MMP-9 in the early or acute stage of asthma may be associated with the initiation of bronchial injury and inflammatory cells accumulation.     

Levels of matrix metalloproteinase-9 and its inhibitor in bronchoalveolar lavage cells of asthmatic children

Our objective was to investigate the role of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) and their cellular sources in childhood asthma. We used 12 controls and 16 asthmatic children. The levels of MMP-9 and TIMP-1 in bronchoalveolar lavage (BAL) cells of asthmatic children were measured immunocytochemically. The positive level index, defined as the percentage of positive-stained cells × average optical density, was used to assess the expressing levels of MMP-9 and TIMP-1. The percentages of eosinophils and mast cells in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) of asthmatic children were increased. Levels of MMP-9 and TIMP-1 in BAL cell of asthmatic children were increased significantly at about 30- and 35-fold relative to the controls, respectively. These results suggest that both MMP-9 and TIMP-1 contribute to tissue remodeling. MMP-9, which mediates the degradation of extracellular matrix (ECM), is increased significantly in the early or acute stage and may play a role in ECM degeneration. Excessive TIMP-1 may be synthesized following MMP-9 production when the body tries to repair the damage, which results in excessive deposition of ECM component.     

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目的以肺泡灌洗液(BALF)中羟脯氨酸(HYP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其抑制物(TIMP-1)为观察指标,了解呼吸道异物吸入对气道损害、重建的影响。方法对2002年6月至2003年3月在浙江大学儿童医院住院的46例呼吸道异物患儿,按异物滞留体内时间分为3组(A组:<7d,B组:~30d,C组:>30d),对3组患儿的BALF进行细胞学分析,并对其中的HYP、MMP-9细胞阳性率和TIMP-1质量浓度进行测定。对照组为12例有异物吸入可疑病史,但最后排除的儿童。结果对照组与患儿组间细胞学计数差异无显著性(P>0.05),但肥大细胞仅在患儿BALF中发现。对照组及各组患儿的MMP-9细胞阳性率分别为33.3%、62.5%、80.0%和93.3%,TIMP-1细胞阳性率分别为16.3%、50.0%、80.0%和93.3%,总体差异均有显著性意义(P=0.006和P<0.001);各组间HYP差异有显著性意义(P<0.001)。结论气道异物促进MMP-9、TIMP-1及HYP的表达和分泌,提示气道异物可导致支气管肺组织破坏和重建,其程度与异物滞留时间有关。     

基质金属蛋白酶对新生鼠窒息后心肌重塑的影响

目的探讨新生鼠窒息后心肌组织基质金属蛋白酶(MMPs)表达对心肌重塑的影响。方法将7~10日龄Wistar小鼠60只,随机分成窒息A、B、C 3组(分别为窒息复氧后1、7、14 d,各组15只)、对照组(D组,n=15)。模拟新生鼠常压窒息模型。免疫组织化学法测定心肌组织MMP-3、MMP-9活性;氯胺T法测定心肌胶原水平。结果心肌组织MMP-3活性为一过性增高,以B组最高(P<0.05),且MMP-3活性表达早于MMP-9;MMP-9活性窒息后逐渐增高(P<0.05);心肌胶原水平窒息后逐渐增高,d14时最高;MMP-3、MMP-9与胶原水平呈正相关(r=0.482,0.679 P均<0.05)。结论新生鼠窒息后心肌MMP-3、MMP-9激活,继发胶原水平增高,可能是导致心肌间质重塑的因素之一。     

Suppression of plasma matrix metalloproteinase-9 following montelukast treatment in childhood asthma

BACKGROUND: Montelukast and ketotifen are commonly prescribed anti-inflammatory medications used in the treatment of childhood asthma. METHODS: To investigate the modulation effect of montelukast and ketotifen, the levels of exhaled nitric oxide (eNO) and plasma matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) were analyzed in a group of 30 children with mild persistent asthma. RESULTS: Patients on montelukast therapy for 8 weeks had significantly decreased levels of eNO and plasma MMP-9, which were associated with improved symptoms and enhanced peak expiratory flow but not significantly associated with increased level of tissue inhibitor metalloproteinase-1 (TIMP-1). In contrast, treatment with ketotifen produced no significant changes in these parameters until 4-6 weeks into the therapy and no effect on plasma MMP-9. CONCLUSION: Leukotriene antagonists, such as montelukast, may be better non-steroidal anti-inflammatory drugs for preventing airway inflammation in mild childhood asthma.     

小青龙汤和人参五味子汤二步序贯治疗对哮喘小鼠呼吸道炎症与重塑的影响

目的 探讨小青龙汤和人参五味子汤二步序治疗贯治疗对哮喘小鼠呼吸道炎症与重塑的影响.方法 健康雌性昆明系小鼠40只,随机分为4组(每组10只):正常对照组、哮喘组、布地奈德组和二步序贯治疗组.采用卵清蛋白建立小鼠哮喘模型;在致敏阶段,二步序贯治疗组小鼠胃饲人参五味子汤;在激发阶段,布地奈德组小鼠在激发前雾化吸入布地奈德,二步序贯治疗组予以小青龙汤胃饲.采用普通光镜观察哮喘小鼠呼吸道组织病理变化确定呼吸道炎症;免疫组织化学法测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白组织酶抑制剂-1(TIMP-1)水平,确定呼吸道重塑程度.结果 正常对照组小鼠呼吸道组织颜色呈粉红色,其余各组小鼠呼吸道组织较正常对照组略苍白,以哮喘组较明显,部分出现黑色斑点或纹理,体积增大.布地奈德组和二步序贯治疗组呼吸道组织炎症改变均较哮喘组明显减轻,差异有统计学意义(Pa<0.01);但二组较正常对照组明显加重,差异有统计学意义(Pa<0.01);布地奈德组与二步序贯治疗组呼吸道炎症改变比较差异无统计学意义(P>0.05).布地奈德组和二步序贯治疗组呼吸道MMP-9、TIMP-1表达水平和MMP-9/TIMP-1明显低于哮喘组,差异有统计学意义(Pa<0.01);但二组与正常对照组比较,呼吸道MMP-9和MMP-9/TIMP-1明显增高,差异均有统计学意义(Pa<0.01);布地奈德组与二步序贯治疗组各指标差异均无统计学意义(Pa>0.05).结论 二步序贯治疗对哮喘小鼠具有抑制呼吸道炎症和重塑的作用,在一定程度上可以替代布地奈德吸入治疗.     

基质金属蛋白酶-9、白细胞介素-1β和金属蛋白酶组织抑制因子-1在新生乳鼠脑缺氧缺血损伤中的动态表达及内在联系

目的探讨新生乳鼠脑缺氧缺血(hypoxic ischemic,HI)后24 h内基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的变化规律及关系。方法7日龄SD乳鼠随机分为HI组(n=40)和假手术组(sham组,n=40)。建立HI模型,按术后5个时间点(0、4、8、12、24 h)分为5个亚组取脑组织,每组8例。HE染色观察大脑皮质病理变化,Western blot和RT-PCR法检测MMP-9、IL-1β和TIMP-1的表达。此外,制作小鼠海马神经元HT22细胞缺氧模型,加入MMP-9抑制剂和MMP-9激动剂,进一步证实MMP-9、IL-1β和TIMP-1的关系。结果HI后4 h大脑皮质出现轻微的核异常和胞体肿胀,12 h神经元嗜酸性改变最为明显。与8 h、12 h比较,HI后24 h MMP-9和IL-1β蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.01)。HT22细胞缺氧4 h加入MMP-9抑制剂,IL-1βmRNA表达下调。结论新生乳鼠HI早期MMP-9、IL-1β和TIMP-1表达呈时间依赖性,抑制MMP-9表达可降低IL-1β水平。     

应用RNA干扰技术抑制骨肉瘤细胞中基质金属蛋白酶-1基因表达的研究

目的构建针对人基质金属蛋白酶-1（MMP-1）基因的特异性短发卡RNA（shRNA）真核表达载体，并观察其在人骨肉瘤细胞MG63中对MMP-1基因表达的抑制作用。方法培养骨肉瘤细胞MG63，根据MMP-1基因cDNA编码序列，设计并合成针对MMP-1基因的特异性RNA干扰片断，将其克隆入pSilencer 3．0-H1 neo质粒，构建MMP-1基因shRNA真核表达载体siRNA MMP-1。与阴性对照质粒分别转染MG63细胞，G418筛选稳定转染的细胞系。采用RT—PCR、Western blot检测MMP-1 mRNA和蛋白的表达水平，同时进行体外侵袭试验。结果成功构建了MMP-1基因shRNA真核表达载体siRNA MMP-1。获得了稳定转染siRNA MMP-1载体和阴性对照载体siRNA neg的细胞系，并发现MG63／siRNA MMP-1细胞MMP-1 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制，细胞侵袭能力也显著下降。结论特异性shRNA能够明显抑制MMP-1基因在MG63细胞中的表达，这为进一步研究MMP-1在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。