胰岛素样生长因子-Ⅰ与胰岛素释放试验在糖尿病中的应用

探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)与胰岛素(INS)释放试验结合应用对于了解不同类型糖尿病(DM)患者降糖功能受损情况及选择治疗方案、调整用药的作用。对67名正常人和217例DM患者行糖耐量试验(OGTT)、INS释放试验和IGF-Ⅰ测定的结果进行比较分析。空腹血糖与IGF-Ⅰ呈明显负相关，空腹INS与IGF-Ⅰ呈明显正相关。结论：对于人体内INS和IGF-Ⅰ两条降糖途径，INS释放试验能很好地反映前者的状况，IGF-Ⅰ能较好地反映后者的状况，两者结合分析对于DM的诊断和治疗有较大的价值。     

外源性胰岛素样生长因子1基因在大鼠骨髓基质细胞中的表达及对其生物学行为的影响

目的：观察人胰岛素样生长因子1（hIGF-1）基因转染大鼠骨髓基质细胞（BMSC）后产物的表达及对BMSC特征的影响.方法：构建hIGF-1逆转录病毒载体并转染BMSC,嘌呤霉素筛选,RT-PCR和ELISA法检测hIGF-1表达,MTT及美蓝、碱性磷酸酶钙钴、苏丹Ⅲ染色观察转染后BMSC增殖、集落形成及分化,并分析药物筛选对其增殖的影响.结果：转染BMSC经筛选后,IGF-1表达的增幅高于未经筛选者（10.7倍：6.7倍）.与空质粒转染组比较,未经筛选的BMSC增殖加快,而经筛选者增殖和集落形成能力降低,向脂肪及成骨细胞分化增强.结论：基因修饰可成功构建高表达IGF-1的BMSC,并促进其增殖和自然分化,但嘌呤霉素筛选对其自我更新能力有负面作用.     

胰岛素样生长因子-1对骨髓间充质干细胞分化类髓核细胞的作用

目的:观察不同浓度胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化成类髓核细胞的作用。方法:应用3月龄新西兰大白兔骨髓和髓核进行BMSCs及髓核细胞的分离培养与鉴定;将第2代BMSCs和原代髓核细胞构建共培养体系,实验组加入不同浓度IGF-1(0、10、50、100、150μg/L)的无血清培养液诱导5、10、15、20、25 d;以10%胎牛血清的培养基单独培养BMSCs作为阴性对照。利用免疫印迹检测各组BMSCsⅡ型胶原及蛋白聚糖的表达情况。结果:100μg/L IGF-1诱导液诱导的BMSCsⅡ型胶原和蛋白聚糖蛋白水平高于对照组和其他实验组。结论:100μg/L IGF-1能提高兔BMSCs体外诱导分化成类髓核细胞的数量。     

胰岛素样生长因子受体-1在糖尿病小鼠脑内的分布

为了观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子受体 -1( IGF-1R)的分布及 APP17肽对其分布的影响 ,本研究用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型 ,并向皮下注射 APP17肽 (β-淀粉样肽前体蛋白 319-335 )给予治疗 ,4周后取脑组织进行 IGF-1R免疫组织化学反应。结果显示 ,糖尿病组 IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位 ,而正常对照组及 APP17肽治疗组仅在皮层、海马可见阳性反应细胞 ,且着色淡。结果表明 ,糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的 IGF -1R阳性神经元 ,而APP17肽能使 IGF -1R阳性反应细胞出现的部位和数量正常化     

胰岛素样生长因子-1基因真核表达载体的构建

目的构建胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因重组逆转录病毒,为将IGF-1基因应用于神经系统疾病的治疗打下基础。方法质粒pcDNA3.1-IGF-1经EcoR I和Xho I双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建成重组逆转录病毒表达载体pLXSN-IGF-1,采用酶切及测序对重组体进行鉴定。而后脂质体转染pLXSN-IGF-1至包装细胞pA317,检测培养上清病毒滴度。结果重组真核基因表达载体pLXSN-IGF-1经EcoR I和Xho I双酶切后,得到了400 bp和6.0 kb两条带;以重组体为模板进行PCR检测,400 bp的目的基因片段呈阳性;重组体测序结果与预期结果完全一致;建立了细胞系PA317-IGF-1,其培养上清平均病毒滴度为6.5×105CFU/ml。结论成功构建了IGF-1基因重组逆转录病毒。     

胰岛素样生长因子-1对雪旺细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对雪旺细胞氧化损伤的保护作用。方法:用体外纯化培养的雪旺细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分成氧化损伤组、IGF-1保护组和正常对照组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的活性,生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量,免疫印迹法检测凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果:与对照组相比,H2O2处理组细胞胞体积缩小、空泡化,细胞活性降低,SOD含量明显减少,Bcl-2表达减弱;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高,SOD含量较损伤组高,Bcl-2表达明显上调。结论:IGF-1对氧化损伤的雪旺细胞有保护作用。     

胰岛素样生长因子-1诱导糖尿病性白内障晶状体上皮细胞表达MCP-1

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱发离体培养的白内障患者晶状体上皮分泌趋化性细胞因子(MCP-1)的作用。方法:将白内障手术中分离糖尿病性白内障患者晶状体上皮和非糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞分别离体培养。加入重组IGF-1作用后,以RT-PCR方法检测MCP-1mRNA,夹心ELISA法检测MCP-1蛋白分泌水平。进行核提取后以Westernblot检测转录因子Sp-1核转移水平。利用Sp-1特异性阻抑剂米拉霉素共同孵育后收集上清观察MCP-1水平。结果:成功建立晶状体上皮细胞体外培养体系。IGF-1诱导伴发糖尿病性白内障患者晶状体上皮分泌MCP-1水平明显高于无糖尿病组。IGF-1作用于晶状体上皮细胞后能够活化Sp-1,Sp-1的特异性抑制能够明显降低MCP-1的表达。结论:IGF-1通过Sp-1途径诱导MCP-1的分泌表达。与非糖尿病性白内障患者相比,糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞产生更多的MCP-1。     

人胰岛素样生长因子-1基因克隆及其真核表达载体的构建

目的:从胎儿肝组织中克隆人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因,并构建真核表达载体pCI-neo/hlGF-1.方法:提取胎儿肝总RNA,RT-PCR法扩增IGF-1 cDNA片段,重组于pUCM-T载体,测序正确后构建表达载体.结果:扩增得到710bp带有Kozak序列的IGF-1 cDNA片段,成功构建了真核表达载体pCI-neo/hlGF-1.结论:通过RT-PCR的方法克隆了人IGF-1 cDNA,并成功构建了真核表达载体pCI-neo/hIGF-1,为IGF-1基因治疗糖尿病创造了条件.     

胰岛素样生长因子-1及其受体和结合蛋白-3与前列腺癌关系的研究进展

前列腺癌是老年男性最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一,在欧美国家发病率占男性肿瘤第一位,死亡病因第二位,发病率随年龄增长而增高,平均每十年发病率增加2倍[1]。在我国,随着生活水平的提高、饮食结构的改变及人口逐渐老龄化,前列腺癌的发病率和死亡率亦在迅速增长。近年来有关胰岛素样生长因子-1及其受体和结合蛋白-3与前列腺癌的关系备受关注。本文就其与前列腺癌关系的研究进展作一综述。     

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达和活性检测

目的 克隆人胰岛素样生长因子Ⅰ型(hIGF-1)，构建真核表达载体并进行表达及活性检测，为IGF-1基因治疗糖尿病奠定基础。方法 提取胎儿肝脏总RNA，RT-PCR法扩增IGF-1cDNA片段，重组于pUCM-T载体，测序正确后构建表达载体，转染猴肾成纤维细胞系COS-7，用原位杂交和免疫组织化学检测表达，收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定。结果 扩增得到710bp带有Kozak序列的IGF-1cDNA片段；成功构建了真核表达载体pCI-neo／hIGF-1；IGF-1在COS-7细胞得到了表达，并具有刺激胰岛素分泌的活性。结论 新构建的载体pCI-neo／hIGF-1能在COS-7细胞中表达、分泌，且所分泌的IGF-1具有生物活性。     

血卟啉衍生物对人胃癌不同周期时相细胞光敏损伤效应的电镜观察

应用细胞同步化和电镜技术,研究了人胃低分化粘液腺癌细胞(MGc80-3)经血卟啉衍生物加红光照射后,其光敏损伤部位与周期时相的关系。结果表明,细胞的超微结构损伤,呈现出明显的周期特异性,其中G_1期细胞的质膜损伤较显著,胞质也有一定损伤;S期和G_2期细胞,以线粒体和其他胞质细胞器损伤最为严重,M期细胞则以胞核损伤显著。本文对上述光敏损伤的机制进行了讨论。     

反义VEGF165基因转染对人神经母细胞瘤生物学行为的影响

目的探讨反义VEGF165基因转染在抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长中的作用。方法构建正义和反义VEGF165真核表达载体,用脂质体转染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,G418筛选稳定表达细胞克隆。应用RT-PCR证实外源性反义VEGF mRNA的表达,免疫细胞化学和EUSA检测VEGF蛋白的表达水平,MTT法检测肿瘤细胞体外生长情况,并接种于裸鼠皮下,观察体内肿瘤增殖能力。结果RT-PCR证实转染反义VEGF的细胞中有外源性反义VEGF mRNA的表达,免疫细胞化学和EUSA显示VEGF蛋白表达明显降低,MTT实验显示转染前后细胞体外生长速度基本一致。而转染反义VEGF的肿瘤细胞裸鼠体内生长速度明显减慢。结论反义VEGF基因转染能够有效抑制SH-SY5Y细胞内源性VEGF蛋白的表达,抑制裸鼠体内肿瘤的生长。     

外源性三磷酸腺苷对人胃腺癌SGC-7901细胞的生物学效应

本文报道外源性三磷酸腺苷(ATP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系增殖的抑制效应。在SGC-7901细胞的培养基质内加入ATP后,细胞生长明显受阻抑,4天以后,抑制率可达80％以上;癌细胞质膜上的3′,5′环腺苷酸磷酸二酯酶(cAMP-PDEase)活性明显下降,而细胞内的cAMP和纤维粘连蛋白的免疫荧光强度却明显增强。癌细胞多呈梭形,微绒毛减少,表面较光滑,呈现癌细胞向正常方向逆转的表型特征。本文还就ATP作用的机理进行了讨论。     

角质细胞生长因子促进大鼠胰腺导管上皮细胞体外增殖

目的 探讨不同浓度的角质细胞生长因子(KGF)对大鼠胰腺导管上皮细胞增殖的影响,寻求最佳浓度.方法 免疫细胞化学染色及RT-PCR方法鉴定SD大鼠胰腺导管上皮细胞;不同浓度的KGF刺激胰腺导管上皮细胞增殖,寻求最佳浓度.结果 大鼠胰腺导管上皮细胞表达Nestin和CK19,不表达Insulin及Glucagon;不同浓度KGF刺激胰腺导管上皮细胞2d后,细胞均有不同程度增殖,20 μg/L KGF作用2d时,细胞数为0.35±0.03,显著高于对照组的0.27±0.02(P ＜0.01).结论 KGF在本实验的剂量范围内可促进胰腺导管上皮细胞增殖,20 μg/L为促进增殖的最佳浓度.     

敌枯双对雄性小鼠生殖细胞分裂比率及精原细胞染色体畸变的影响

本文研究丁敌枯双对BALB/C雄性小鼠生殖细胞分裂比率及精原细胞染色体畸变的影响。将实验小鼠随机分为三组,即实验组(敌枯双组),阳性对照组(环磷酰胺组)和阴性对照组(双蒸水组)。结果发现:敌枯双能明显诱发精原细胞多倍体率和裂隙率增加,抑制终变期/中期Ⅰ和中期Ⅱ细胞的减数分裂比率,促进精原细胞有丝分裂比率。实验结果还提示:在遗传毒理检测中亚急性实验是必要的,并对实验结果进行了初步讨论。     

Apoptosis-inducing factor: a matter of neuron life and death

The mitochondrial flavoprotein apoptosis-inducing factor (AIF) is the main mediator of caspase-independent apoptosis-like programmed cell death. Upon pathological permeabilization of the outer mitochondrial membrane, AIF is translocated to the nucleus, where it participates in chromatin condensation and is associated to large-scale DNA fragmentation. Heavy down-regulation of AIF expression in mutant mice or reduced AIF expression achieved with small interfering RNA (siRNA) provides neuroprotection against acute neurodegenerative insults. Paradoxically, in addition to its pro-apoptotic function, AIF likely plays an anti-apoptotic role by regulating the production of reactive oxygen species (ROS) via its putative oxidoreductase and peroxide scavenging activities. In this review, we discuss accumulating evidence linking AIF to both acute and chronic neurodegenerative processes by emphasising mechanisms underlying the dual roles apparently played by AIF in these processes.