用自身血清抗体筛选的一种新的肝细胞癌表达的抗原

<正> 目的:寻找人肝细胞癌(HCC)特异抗原.方法:应用“重组子表达抗原克隆的血清学鉴定技术(SEREX)”,用病人自身血清从广西肝细胞癌cDNA文库中筛选出编码HCC肿瘤抗原的基因克隆,用肝癌患者及其他人血清检验HCC肿瘤抗原对肝癌的特异性,测定抗原DNA序列并与基因库核对寻找其同源结构.结果:其中一种HCC肿瘤抗原与衰老标记蛋白-30(SMP-30)是同源结构,相应抗体主要只见于HCC病人,在20例其它5种恶性肿瘤和4例肝硬化病人未查到相应抗体,20例慢性肝     

肝癌相关抗原SMP-30羧基端基因的构建、表达及血清学分析

目的：用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌肿瘤相关抗原衰老标记蛋白-30(SMFL30)，检测肝癌、肝硬化及其它肿瘤病人血清中相应抗体的阳性率。方法：PCR方法扩增经SEREX技术筛选出的人肝细胞癌相关抗原SMP-30羧基末端165个氨基酸的DNA序列，构建其表达质粒，经原核表达和亲和层析纯化获得目的蛋白，经N-末端氨基酸序列测序证实为SMP-30蛋白。采用ELISA方法检测肝癌、肝硬化与其他肿瘤患者血清中抗SMP-30抗体的阳性率。结果：以63例正常人血清为对照，肝癌、慢性肝炎、肝硬化和鼻咽癌血清中SMP-30抗体阳性率分别为39．7％(23／58)、21．9％(7／32)、64．7％(11/17)和21．6％(5／23)。7例肺癌和25例胃肠疾病中无一例阳性。Western blot亦显示部分肝癌患者血清存在有SMP-30蛋白抗体。结论：SMP-30蛋白抗体检测可望作为肝癌和肝硬化等疾病的血清学诊断指标之一。     

肝细胞癌中DEK蛋白的表达及其意义

目的 探讨DEK蛋白在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及意义.方法 应用组织芯片技术进行免疫组化染色检测92例HCC和58例癌旁肝组织标本中DEK的表达,结合临床相关因素进行统计分析.结果 组织芯片检测结果中实际有效146个,其中HCC组织88例,癌旁肝组织58例.HCC、癌旁肝组织中DEK阳性表达率分别为39.8%、5.2%,HCC组织中DEK阳性表达率明显高于癌旁肝组织(P=0.000);HCC组织中DEK阳性表达与组织分化程度、是否转移密切相关(P<0.05).结论 HCC组织中DEK蛋白的表达对其诊断及预后有一定参考价值.     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的表达在肝细胞癌诊断中的意义

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3( GPC3)免疫组织化学染色在肝细胞癌病理诊断的应用价值。方法 制作14个含731例肝肿瘤和肿瘤旁肝组织芯片,其中肝细胞癌357例、胆管癌26例、肝细胞癌癌旁肝组织包括肝硬化171例、血管瘤旁肝组织93例、肝转移癌84例。全部病例采用免疫组织化学检测GPC3（1G12克隆）蛋白表达,实验设阳性对照。结果 72.0％的肝细胞癌(257/357)GPC3呈阳性反应,其余374例非肝细胞癌病例均为阴性,包括胆管癌、肝转移癌、肝细胞癌癌旁肝组织（包括肝硬化和血管瘤旁肝组织）。GPC3阳性率在不同的肝细胞癌组织学分级的差异有统计学意义(P＜0.01),阳性率高低排列为Ⅲ级(77.1％,64/83)、Ⅱ级(73.3％,187/255)、Ⅰ级6/12和Ⅳ级(0)为阴性。结论 GPC3免疫组织化学检测是肝细胞癌诊断的良好指标,敏感性达72.0％;也是区别瘤旁肝组织和肝转移癌的鉴别诊断指标,其特异性达100％。     

MDM2和P53蛋白表达与原发性肝细胞肝癌发生的关系

目的:研究MDM2和突变型P53蛋白表达与原发性肝细胞肝癌(HCC)发生的关系。方法: 用免疫组织化学SP法,检测55例HCC癌组织、23例癌旁组织、10例正常肝组织MDM2和突变型P53蛋白表达情况。结果: 55例HCC中MDM2蛋白阳性表达17例(30.9%),突变型P53蛋白阳性表达23例(41.8%),二者均阳性表达11例(20%),MDM2和突变型P53蛋白表达有相关性(r=0.310, P＜0.05)。23例癌旁组织MDM2蛋白阳性1例,突变型P53蛋白阳性表达2例,肝癌组织和癌旁组织MDM2和突变型P53蛋白表达有差异(P＜0.05)。10例正常肝组织无MDM2和突变型P53蛋白表达。结论: 肝细胞癌组织有MDM2和突变型P53过量表达,MDM2蛋白和/或 p53 基因突变使 p53 基因功能失活在HCC发生中可能有重要作用。     

Nucleophosmin/B23在肝细胞癌组织中的高表达

目的探讨Nucleophosmin／B23（B23）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其临床病理意义。方法采用重组蛋白表达和杂交瘤细胞技术制备B23重组蛋白和鼠抗B23单克隆抗体。收集103例HCC组织、12例肝局灶性结节性增生和17例肝血管瘤旁肝组织的临床病理档案资料,10例HCC及癌旁肝新鲜组织,采用免疫组织化学（ABC）方法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫印迹等技术检测B23在这些组织中的表达,并与增殖细胞核抗原（PCNA）的表达相比较。应用统计学方法对结果进行分析。结果RT-PCR及免疫印迹结果显示：在mRNA和蛋白质水平,B23在HCC组织中的表达明显高于对应的癌旁肝组织。免疫组织化学结果显示：B23在4组（HCC组、癌旁肝组织组、肝局灶性结节性增生组、血管瘤旁肝组织组）中的表达差异有统计学意义（P〈0．001）,其中B23在HCC组织中的表达显著高于其他3组（P〈0．01）,PCNA在HCC组织中的表达也显著高于其他3组（P〈0．01）,相关性分析表明B23与PCNA在4组中表达强度及其差异具有相关性（r=0．4767,P〈0．01）。B23在HCC组织中的表达强度与患者血清AFP水平、肿瘤病理分级及是否伴有肝硬化之间的关系有统计学意义（P〈0．05）。结论B23在HCC中呈高表达,且显著高于非癌肝组织;B23可作为HCC细胞增生程度的潜在标记,并在临床病理上具有潜在的应用意义。     

癌症高表达蛋白在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的:研究癌症高表达蛋白(Hec1)在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达和意义。方法:采用免疫组化SP法检测27例正常肝组织、30例癌旁组织及62例HCC组织中Hec1的表达;用Westernblot检测上述组织中Hec1蛋白的表达。结果:在正常肝、癌旁组织及HCC组织中,Hec1蛋白的阳性表达率分别为0%、20.8%、62.9%,各组织中Hec1蛋白的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Hec1蛋白的表达与HCC的Edmondson分级、侵袭转移显著相关。Westernblot结果表明,在正常肝、癌旁组织及HCC组织中,Hec1蛋白的平均表达量的分别为0、0.12±0.03、0.89±0.16,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Hec1蛋白的过度表达可能在HCC的发生和发展中起重要作用。     

肝细胞癌及其癌旁肝组织中MAPK磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系

目的：研究MAPK磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达在HCC发生中的作用。方法：利用S－P免疫组织化学技术检测55例HCC及其癌旁肝组织中p-MAPK,c-fos和c-jun蛋白的表达。结果：p-MAPK蛋白的阴性表达主要位于细胞核;c-fos和c-jun蛋白呈核型和（或）核浆型;HCC中,p-MAPK,c-fos和c-jun蛋白的阳性率和阳性表达强度均高于癌旁肝组织（P＜0．01）,p-MAPK表达与c-fos和c-jun蛋白表达强度呈明显正相关,癌旁肝组织中p-MAPK与c-fos蛋白表达亦呈正相关。结论：MAPK信号传导级联异常可能主要在HCC发生的早期起作用;癌旁呈p-MAPK,c-fos或c-jun蛋白表达的肝细胞可能是一种具有恶性潜能的癌前细胞群。     

肝细胞癌中c-myc和c-fos表达及其意义

目的探讨c-myc和c-fos在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测分析10例正常肝组织及81例HCC癌旁肝组织和癌组织中c-myc和c-fos蛋白的表达。结果 (1)正常肝组织中c-fos和c-myc均无阳性表达;而在癌组织与癌旁组织则出现阳性表达,其中癌组织的阳性表达率分别为41.9%(34/81)和39.5%(32/81),癌旁组织则为14.8%(12/81)和18.5%(15/81),差异具有统计学意义(P0.05)。(2)c-myc和c-fos在癌组织中的表达与肿瘤分级及分化程度相关(P0.05),但与年龄、性别、肿瘤直径、是否伴有肝硬化及HBsAg阳性无关(P0.05)。结论 c-myc和c-fos的阳性表达与HCC的发生相关。     

甲胎蛋白阴性肝细胞癌中埃兹蛋白(ezrin)和SIX1蛋白表达水平的临床病理意义

目的探讨埃兹蛋白(ezrin)和SIX1蛋白过表达在甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞肝癌(HCC)中的临床病理学意义。方法应用免疫组织化学En Vision法检测ezrin和SIX1蛋白在50例AFP阴性的HCC组织及其相应的癌旁肝组织中的表达水平,χ~2检验和Spearman等级相关分析检验两者表达的相关性。结果在50例AFP阴性的HCC组织中,ezrin和SIX1蛋白的阳性率分别为68.0%(34/50)和60.0%(30/50),明显高于癌旁肝组织的阳性率,分别为38.0%(19/50)和26.0%(13/50)。χ~2检验显示ezrin和SIX1蛋白表达与肿瘤的TNM分期以及脉管浸润相关。Spearman等级相关分析显示ezrin和SIX1在AFP阴性HCC组织中的表达呈显著正相关。结论 Ezrin和SIX1蛋白在AFP阴性HCC组织中均高表达,两者的表达与肿瘤的TNM分期以及脉管浸润相关,并且两者在肝癌中的表达具有相关性。     

Expression and Clinical Significance of Livin Protein in Hepatocellular Carcinoma

In this study, the two-step PV method of immunohistochemistry was used to determine livin protein expression in HCC tissues, pericarcinoma tissues, hepatitis/hepatic cirrhosis tissues, and normal hepatic tissues, and livin protein expression was detected in the blood plasma of patients with HCC before and after surgery, subjects with hepatic cirrhosis and hepatitis, and healthy blood donors using ELISA. Livin protein expression was significantly higher in HCC tissues than that in normal hepatic tissues and hepatitis/hepatic cirrhosis tissues, with no significant difference between HCC tissues and pericarcinoma tissues. The HCC patients with positive livin protein expression had a significantly higher survival rate than those with negative livin protein expression. Livin protein expression was significantly higher in the blood plasma of patients with HCC before and after surgery and in patients with hepatic cirrhosis and hepatitis than that in healthy blood donors, whereas livin protein expression in the blood plasma of patients with HCC was not significantly different from that of patients with hepatic cirrhosis and hepatitis. Livin protein expression in HCC tissues did not correlate with that in the blood plasma of the same HCC patients. Livin protein expression may be a potential, effective indicator for assessing prognosis in patients with HCC.     

肝细胞癌中EMS1蛋白的表达

目的 探讨EMS1蛋白表达与肝癌发生、发展及临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化SP法,对78例肝癌组织、其中68例附癌旁肝组织和8例正常肝组织中EMS1蛋白表达进行检测.结果 EMS1蛋白表达定位于细胞的胞质,着色呈黄色至棕黄色.肝癌中阳性表达率89.69%,高于癌旁及正常肝组织30.26%(P＜0.001);无肝硬化肝癌阳性表达率73.91%,低于伴有肝硬化95.56% (P＜0.05);伴静脉内癌栓组94.12%与无静脉内癌栓组70.59%差异有显著性 (P＜0.05);随着组织分级的增高(分化程度的降低),阳性表达率明显增高,其差异有显著性 (P＜0.05);而与性别、年龄、肿瘤大小无关.结论 EMS1蛋白高表达与肝癌发生、肝硬化、静脉内癌栓及组织学分级相关.     

Detection of the hepatitis B virus X protein (HBx) antigen and anti-HBx antibodies in cases of human hepatocellular carcinoma

Hepatitis B virus X protein (HBx) expressed in Escherichia coli DH5alpha by recombinant DNA technology was purified to homogeneity by use of glutathione-Sepharose beads. Immunological characterization of the recombinant HBx protein was performed. Specific binding between the anti-HBx monoclonal antibody and HBx protein showed the specificity of the recombinant HBx protein. The intact HBx protein of the factor Xa-digested glutathione S-transferase-HBx fusion protein was further purified and was used as an antigen for screening the titers of anti-HBx antibodies in sera. Titers of anti-HBx in sera from 20 patients with hepatocellular carcinoma (HCC), 20 patients with chronic hepatitis (CH), and 20 healthy individuals were evaluated by Western blotting and a quantitative enzyme-linked immunosorbent assay. The results indicated that 70% of sera from HCC patients and 5% of sera from CH patients contained antibodies with significant binding to the HBx protein. Western blotting of HBx protein in liver extracts from 20 HCC patients was also performed by using the anti-HBx monoclonal antibody. Results showed that 85% of HCC patients' liver tissues contained a specific HBx protein with the same molecular size as the purified intact HBx. Full correlation was found between anti-HBx antibody positivity in serum and HBx protein positivity in HCC tissues. The data demonstrated that the etiology of HCC is involved with hepatitis B virus (HBV) infection and that HBx in particular plays a role in the development of HBV-related HCC.     

跨种属研究Smad3在肝癌组织中的表达及意义

 目的：研究Smad3在人、大鼠、树鼩等不同种属的肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达和意义,进一步验证跨种属筛选肝癌关键蛋白研究策略的可行性。方法：采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测人、大鼠和树鼩的肝癌及其相应癌旁组织以及正常肝组织中Smad3 mRNA和蛋白表达水平。结果：Smad3 mRNA在人、大鼠和树鼩的肝癌中表达水平均低于其相应的癌旁组织（均P<0.05）;在大鼠肝癌组织中的表达低于正常肝组织（P<0.05）;在树鼩癌旁组织中的表达高于正常肝组织（P<0.05）;其余各组织间mRNA表达水平的差别无统计学意义（均P>0.05）。Smad3蛋白在人和大鼠的肝癌组织中的表达水平均低于其相应的癌旁组织及正常肝组织（均P<0.05）;在树鼩肝癌组织中的表达水平也低于相应的癌旁组织和正常肝组织,但差别无统计学意义（均P>0.05）;3个种属的癌旁组织与正常肝组织比较,差别无统计学意义（均P>0.05）。结论：Smad3在人、大鼠和树鼩3个种属的肝癌组织中的mRNA和蛋白表达水平均下调,提示该蛋白表达水平的改变可能在肝癌发生发展中起重要作用,有可能成为防治肝癌的靶分子。     

人肝细胞癌中整合素α5,β1亚基和纤维连接蛋白mRNAs的表达

目的研究肝细胞癌（ＨＣＣ）中整合素α５、β１亚基和纤维连接蛋白（ＦＮ）ｍＲＮＡｓ表达的生物学意义。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和核酸原位杂交技术，对１５例ＨＣＣ癌组织、５例癌旁肝硬化和３例正常肝组织中整合素α５、β１亚基和ＦＮｍＲＮＡｓ表达作杂交分析。结果高分化ＨＣＣ癌组织中三种ｍＲＮＡｓ表达水平与癌旁及正常肝组织相近，而低、中分化ＨＣＣ癌组织内明显减少，甚至消失（分别Ｐ＜００１）；整合素α５亚基和ＦＮｍＲＮＡｓ主要见于癌细胞胞浆内；ＨＣＣ伴肝内浸润和／或转移组癌组织内三种ｍＲＮＡｓ水平较无浸润转移组显著下降（Ｐ＜００５）；５例伴肝内转移的ＨＣＣ癌组织中ＦＮｍＲＮＡ呈异质性表达。结论ＨＣＣ中整合素α５、β１和ＦＮ蛋白的表达变化系癌细胞基因转录水平下调的结果，可能与ＨＣＣ细胞分化、浸润和转移相关；异质性ＦＮｍＲＮＡ及其编码的ＦＮ蛋白可能在ＨＣＣ转移中有意义。     

Cdc25a在跨种属肝癌组织中的表达及其意义*

 目的：研究细胞周期通路中的细胞分裂周期蛋白25a (Cdc25a)在人、大鼠和树鼩不同种属的肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达和意义,进一步验证跨种属筛选肝癌关键基因研究策略的可行性。方法：采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测人、大鼠和树鼩的肝癌及其相应癌旁组织以及正常肝组织中Cdc25a mRNA和蛋白表达水平。结果：Cdc25a mRNA表达水平在人、大鼠和树鼩的肝癌组织中均高于正常肝组织（均P<0.05）;在人和大鼠肝癌组织中的表达高于其对应的癌旁组织（P<0.05）;其余各组织间mRNA表达水平的差别无统计学意义（均P>0.05）。Cdc25a mRNA在人肝癌组织中的表达水平与病人的临床分期、门脉癌栓及肝外转移明显相关,而与术后复发、肿瘤直径、肿瘤个数、血清甲胎蛋白水平和肿瘤分化无明显关系。Western blotting检测结果显示Cdc25a在人、大鼠和树鼩肝癌组织中的蛋白表达水平均较癌旁和正常肝组织显著上调。结论：Cdc25a有可能是影响肝癌发生和发展的重要分子之一,跨种属筛选肿瘤关键基因策略可能有助于发现肝癌关键基因。     

肥大细胞在慢性肝病发生中的作用

［摘要］ 目的：探讨肥大细胞(mast cell, MC)在慢性肝病中的作用及乙型肝炎病毒（HBV）感染是否引起慢性肝病中MC数量增加。方法：本研究包括正常组(NL)8例、慢性肝炎组(CH)30例、肝硬化组(LC)43例、肝癌组(HCC)49例。采用甲苯胺蓝染色和免疫组织化学染色观察130 例人肝组织中肥大细胞的密度和分布特征。另外，采用免疫组织化学染色定性检测各组HBsAg，HBcAg的表达。结果：各肝病组中（肝炎组、肝硬化组、肝癌组）肥大细胞密度比正常组显著增加 (P<0.05)；肝硬化组、肝癌组中MC密度均比慢性肝炎组显著增加(P<0.05)；但肝硬化组与肝癌组之间差异无统计学意义（P>0.05）。MC分布以结缔组织区域多见。本组病例中肥大细胞密度与HBV感染无关。结论：肥大细胞可能参与慢性肝病发生发展过程并发挥重要作用，但其数量增加可能与HBV感染无直接关系。     

大鼠急性肺栓塞后SMP-30表达下降及其对细胞凋亡的影响

目的：研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中衰老标记蛋白质30(SMP-30)的表达变化及其对Fas诱导的细胞凋亡的影响。方法:建立大鼠急性肺栓塞模型，分别在急性肺栓塞后1、8、24和48 h进行支气管肺泡灌洗，然后开胸取出肺组织。常规提取肺组织的总RNA和总蛋白，以正常组为对照，采取半定量RT-PCR的方法研究SMP-30在mRNA水平表达的变化；采用Western blotting方法进一步验证SMP-30在蛋白水平表达的变化；采用免疫组织化学方法检测大鼠肺组织中SMP-30以及肺泡巨噬细胞中IL-8在肺栓塞前后表达的变化及其组织分布情况；采用TUNEL法研究急性肺栓塞后组织细胞的凋亡情况；最后采用ELISA法检测急性肺栓塞后肺泡灌洗液中sFasL的浓度变化。结果:在大鼠急性肺栓塞后的不同时点，SMP-30的mRNA水平和蛋白水平均逐渐降低，在24和48 h下降最为明显。免疫组化研究表明SMP-30主要分布在支气管黏膜上皮细胞和肺泡上皮细胞，急性肺栓塞后SMP-30在上述细胞内的表达均明显降低。TUNEL染色发现随着SMP-30表达的降低，肺组织内出现明显的细胞凋亡现象，同时肺泡灌洗液中sFasL的浓度升高，肺泡巨噬细胞内IL-8的表达也明显升高。结论:大鼠急性肺栓塞后肺组织内SMP-30的表达明显降低，可能促进Fas－FasL细胞凋亡系统的活化。