活化的肝星状细胞促进调节性T细胞的表达

目的 越来越多的研究证实,活化的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)具有免疫抑制功能.本研究观察了HSCs对T细胞介导的适应性免疫应答的影响及其与调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的关系.方法 分离培养小鼠HSCs,运用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR),体外观察活化的HSCs对T细胞增殖和Treg细胞的影响.结果 活化的HSCs能导致树突状细胞(dendritic cells,DCs)介导的适应性免疫应答中T细胞的低反应性:抑制T细胞的增殖,同时诱导Treg细胞的表达.结论 活化的HSCs能通过促进Treg细胞表达而诱导适应性免疫应答中T细胞的活化无能,促进免疫耐受.     

肝门部胆管癌组织内血管形成与细胞凋亡相关性的研究

目的　研究肝门部胆管癌中细胞凋亡和血管形成的相互关系。方法　采用原位末端标记技术和抗因子Ⅷ的抗体分别检测肝门部胆管癌细胞凋亡指数和瘤内微血管的密度,同时用免疫组化法检测血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ） 和胆管癌细胞凋亡调控基因ｂｃｌ２ 的表达。结果　肝门部胆管癌组织ＶＥＧＦ阳性表达率５５－５６％ （２０／３６）,ＶＥＧＦ阳性表达与ＭＶＤ呈正相关（Ｐ＜ ０－０１） 。高血管组的ｂｃｌ２ 阳性表达明显高于低血管组（ Ｐ＜ ０－０５）,而低血管组的细胞凋亡指数高于高血管组（ Ｐ＜０－０１）。ｂｃｌ２ 表达丰富的区域,ＶＥＧＦ的表达率高。结论　肝门部胆管癌血管形成影响细胞凋亡的敏感性和发生率。     

自发免疫耐受大鼠移植肝内调节性T细胞的生物学特性

目的研究大鼠肝移植后自发免疫耐受的形成与移植肝内CD4~ CD25~ 调节性T细胞(Tr细胞)的关系。方法按供、受者不同将实验分为3组。急性排斥组:DA大鼠为供者,LEW大鼠为受者;自发耐受组:LEW大鼠为供者,DA大鼠为受者;同基因组:供、受者均为DA大鼠。各组均建立大鼠原位肝移植模型。分别在肝移植术后4、7、14、30和90 d时采用密度梯度离心法分离移植肝内淋巴细胞,免疫磁珠分离(MACS)法分选出CD4~ CD25~ Tr细胞;用流式细胞术(FCM)检测细胞纯度,同时分析CD4~ CD25~ Tr细胞比例的变化;体外细胞增殖试验研究CD4~ CD25~ Tr细胞对CD4~ CD25~-T细胞的免疫抑制作用。结果肝移植早期,急性排斥组和自发耐受组移植肝内CD4~ CD25~ Tr细胞比例均明显增加,其中急性排斥组增加更为明显;移植后4 d左右,两组CD4~ CD25~ Tr细胞比例开始下降,急性排斥组的下降幅度较大;移植后30 d,自发耐受组受者的移植肝内CD4~ CD25~ Tr细胞比例达到第2次高峰,约在移植后90 d时下降至正常生理水平。移植后7 d左右,急性排斥组受者均因发生排斥反应而死亡,而自发耐受组受者均存活。此外,CD4~ CD25~ Tr细胞能有效抑制CD4~ CD25~-T细胞的增殖。结论CD4~ CD25~ Tr细胞是一种具有特异免疫调节功能的T细胞亚群,其主动的免疫抑制功能可能是诱导大鼠肝移植自发免疫耐受的机制之一。     

调节性T细胞与移植耐受

在免疫抑制机制的研究中，发现调节性T细胞（Treg细胞）能够抑制那些逃避人工诱导耐受机制的自身反应性T细胞的活性和功能。而非己外来微生物抗原或移植器官免疫耐受的诱导和维持类似于自身抗原的固有耐受，是多机制参与的过程，都主要是由T细胞介导的。现在人们已认识到Treg细胞在抑制非己抗原和同种异基因器官和组织移植后的排斥反应中发挥着重要的作用。     

肝内胆管结石与肝内胆管癌相关性研究进展

肝内胆管结石是指发生于左、右肝管汇合部之上的结石,在我国是一种常见的胆道良性疾病。肝内胆管癌是第二常见的肝脏原发性恶性肿瘤,其发生可能与肝内胆管结石、原发性硬化性胆管炎、先天性胆管囊性扩张症、乙肝与丙肝病毒感染以及胆道寄生虫病等有关。鉴于我国肝内胆管结石具有高发的特点,其在诱发肝内胆管癌中的作用及潜在机制应予高度重视。从病理解剖来看,与肝内胆管结石相关的肝内胆管癌包含了从胆管内乳头状肿瘤（IPNB）、胆管上皮内瘤变（BilIN）到胆管癌不同阶段的特征。从分子层面来看,肝内胆管癌组织中炎症因子的过表达及转录因子、生长因子的功能紊乱,诱导了正常胆管上皮细胞的癌变。同时,肿瘤微环境中免疫细胞分群的变化进一步加重了肿瘤的恶性行为。这些特点提示结石对所在胆管部位的慢性机械及炎症刺激是造成胆管上皮癌变的重要原因。针对肝内胆管癌恶性程度高、治疗效果差的特点,有关肝内胆管结石诱发胆管癌的具体机制需要更多、更深入的研究,以便在早期发现胆管细胞癌变的证据及潜在的药物靶点,做到早期干预,提高这类病人的治疗效果及远期预后。     

调节性T细胞与肾脏疾病动物模型关系的研究进展

调节性T细胞（Treg）是1995年由Sakaguchi报道的以CD4+CD25+为特征的一种具有免疫调节和抑制功能的T细胞。调节性T细胞发挥免疫抑制作用的靶细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、树突状细胞、B细胞、巨噬细胞、成骨细胞、肥大细胞、NK细胞以及NK T细胞等。调节性T细胞的研究范围十分广泛,涉及许多系统的相关疾病。     

c-Met与胆石相关性肝内胆管癌的相关性研究

目的:探讨c-Met的表达与胆石症合并肝内胆管癌患者临床病理特点的相关性。方法:收集甲醛固定、石蜡包埋的35例胆石症合并肝内胆管癌及配对的35例癌旁胆管组织、20例正常肝脏胆管组织,所有病例均经病理证实,同时收集胆石症合并肝内胆管癌患者的临床资料。采用免疫组织化学的方法检测组织中c-Met的表达情况。结果:c-Met阳性表达主要以癌细胞胞膜及胞质呈现棕黄色颗粒状染色。在肝内胆管癌组织、癌旁胆管组织和正常肝内胆管组织中的表达阳性率分别为68.57%(24/35)、77.14%(27/35)、10.00%(2/20),肝内胆管癌组织和癌旁胆管组织的表达均高于正常肝内胆管组织(P<0.05)。c-Met的表达与患者是否存在淋巴结转移和肿瘤分化程度有明显相关性(P<0.05)。结论:c-Met可以用来早期诊断,评估预后,并作为判断胆石相关性肝内胆管癌恶性程度的参考。     

肝内胆管癌分子生物学特性的研究进展

肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)是仅次于肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的第二大肝脏常见恶性肿瘤，在我国约占肝脏恶性肿瘤的2．3％，其恶性程度极高，容易转移，非手术病人的中位生存期一般仅为9个月。相比较HCC而言，以往对ICC发生与发展过程中的多基因变异特征缺乏系统的研究和了解，     

调节性T细胞与胃癌关系的研究进展

调节性T细胞(Tregulatory cells,Tregs)具有抑制其他淋巴细胞及树突细胞(DCs)的能力,其作为免疫系统的重要部分在调控免疫应答、维持免疫自稳方面起关键作用.然而近年研究表明,Tregs在促进肿瘤免疫逃逸方面也同样发挥重要作用,其表达水平的升高将显著降低肿瘤患者的生存率.胃癌是一种不易早期发现的高致死率肿瘤,且中国属胃癌高发地区之一,每年治疗胃癌患者需耗费巨大的医疗资源.本文现对Tregs与胃癌的关系作一综述,旨在了解Tregs在胃癌的发生、发展中的作用,及其对胃癌预后的影响,为探寻肿瘤免疫治疗的新策略提供帮助.     

乙型肝炎肝硬化并发细菌感染患者外周血调节性T细胞动态变化及临床意义

目的探讨乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者调节性T（Treg）细胞比例及活性的变化情况。方法选取2009年1月-2011年12月武汉大学人民医院30例乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者,20例乙型肝炎肝硬化失代偿期无细菌感染患者及10名健康对照者,应用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）。应用流式细胞术检测各组患者PBMC中CD4^＋CD25^＋ CD127^low Treg细胞占CD4^＋细胞的比例。通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）,观察从各组患者PBMC中分离的CD4^＋CD25^＋CD127^low Treg细胞抑制淋巴细胞增殖的能力变化。采用One—way ANOVA及t检验进行统计学分析。结果乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者PBMC中Treg细胞占CD4^＋细胞的比例明显低于乙型肝炎肝硬化失代偿期无细菌感染患者[（4．07±1．18）％w．（9．74±3．00）％,t=9．35,P〈0．01]。加入乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者分离得到的Treg细胞的MLR,Treg细胞抑制同源性PBMC增殖能力被明显削弱,cpm=（22．79±4．94）×10^3,与乙型肝炎肝硬化失代偿期无细菌感染患者以及健康对照者比较差异均有统计学意义[cpm=（6．43±1．19）×10^3和（5．96±1．25）×10^3,t=16．09和16．51,P均〈0．01]。结论乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者存在Treg细胞数量及活性下降。     

胆管癌细胞系QBC939裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型的建立

目的建立胆管癌细胞系QBC939裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型并观察淋巴引流情况。方法应用我们前期建立的肝门部胆管癌细胞系QBC939,行裸鼠背部皮下接种,建立高转移特性胆管癌裸鼠皮下种植瘤模型,然后将高转移性种植瘤组织接种于裸鼠肝门部胆管与门静脉间组织间隙紧贴胆管处,4周及6周后行种植瘤瘤组织解剖学和病理学检查,并观察淋巴管引流情况。结果模型建立过程中,胆管癌细胞系QBC939细胞裸鼠皮下接种成瘤率为100%(10/10);原位种植4周后,肝门部胆管原位种植瘤成瘤率为100%(10/10),原位种植6周后,合并发生肝脏转移及腹腔淋巴结转移为80%(8/10)。结论成功建立了胆管癌细胞系QBC939裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型。     

肝内胆管癌分型分期与治疗

目的 探讨肝内胆管癌(ICC)的分型、分期与治疗结果.方法 回顾性分析2000年1月至2008年12月上海交通大学医学院附属仁济医院收治的60例ICC患者的临床资料.依据日本肝癌研究会(LCSGJ)对患者进行分型、分期.比较肿瘤分型、分期、手术方式与治疗效果的关系,并分析LCSGJ与国际抗癌协会(UICC)分期的关系.采用Log-rank法和X2检验对结果进行分析.结果 60例ICC患者中52例获得有效随访.其1、3、5年的生存率分别为44%(23/52)、19%(10/52)和10%(5/52).30例行根治性切除,10例行肝移植,11例行姑息性手术,9例行剖腹探查+活组织检杳,不同手术方式的中位生存时间分别为13、3、3和1个月.肿块型、胆管周围浸润型、胆管内型和混合型根治性手术切除率分别为23/31、9/15、5/6和3/8.肿瘤分型、分化程度与预后密切相关(χ2=8.308,10.009,P<0.05),且肿瘤分型与淋巴结转移密切相关(χ2=13.261,5.702,P<0.05).不同病理类型的中位生存时间虽差异无统计学意义,但黏液腺癌患者的预后相对较好,中位生存时间为20个月.LCSGJ分期中Ⅳ期患者的中位生存时间为3.0个月,长于UICC分期中Ⅳ期患者的1.2个月(χ2=3.877,P<0.05).LCSGJ的分型和分期密切相关(χ2=8.288,P<0.05).结论 ICC预后不良.LCSCJ的分型、分期方法简明实用,有助于指导治疗和判断预后.对黏液性ICC应采取积极的手术治疗,而肝移植原则上不用于治疗ICC.     

T regulatory cells in xenotransplantation

Abstract: The role of T regulatory cells (Treg) in the induction and maintenance of allograft tolerance is being studied to a great extent. In contrast, little is known on their potential to prevent graft rejection in the field of xenotransplantation, where acute vascular rejection mediated by cellular and humoral mechanisms and thrombotic microangiopathy still prevents long‐term graft survival. In this regard, the induction of donor‐specific tolerance through isolation and expansion of xenoantigen‐specific recipient Treg is currently becoming a focus of interest. This review will summarize the present knowledge concerning Treg and their potential use in xenotransplantation describing in particular CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ T cells, CD8⁺CD28^? Treg, double negative CD4^?CD8^? T cells, and natural killer Treg. Although only studied in vitro so far, human CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg is currently the best characterized subpopulation of regulatory cells in xenotransplantation. CD8⁺CD28^? Treg and double negative CD4^?CD8^? Treg also seem to be implicated in tolerance maintenance of xenografts. Finally, one study revealing a role for natural killer CD4⁺Vα14⁺ Treg in the prolongation of xenograft survival needs further confirmation. To our opinion, CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg are a promising candidate to protect xenografts. In contrast to cadaveric allotransplantation, the donor is known prior to xenotransplantation. This advantage allows the expansion of recipient Treg in a xenoantigen specific manner before transplantation.     

输注调节性T细胞延缓非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的发生

目的 观察过继输注调节性T细胞(Treg)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠自发性糖尿病发生的影响.方法 分选NOD小鼠天然调节性T细胞(nTreg),并诱导Na(i)ve T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(iTreg),分别输注予4周龄的雌性NOD小鼠,观察糖尿病的发生情况,并确定细胞输注后Treg在体内的分布、检测血清中TGF-β1、IL-10及IL-4的表达以探讨Treg的作用机制.结果 对照组小鼠13周龄时即100%自发性发生糖尿病,而输注iTreg和nTreg分别能延缓糖尿病的发生时间至24周龄和25周龄,与对照组比较差异有统计学意义(P＞0.05).Treg细胞输注后主要分布在胸腺,iTreg在体内能促进TGF-β1、IL-10及IL-4表达的上调[血中浓度分别为(543.00±26.51)、(107.67±12.66)、(93.33±12.58)ng/L],与对照组比较差异有统计学意义[(60.67±15.82)、(20.67±6.03)、(30.67±5.51)ng/L,P＜0.05].结论 在体外诱导生成的调节性T细胞可延缓NOD小鼠糖尿病的发生,其机制与上调具有免疫抑制效应的细胞因子相关.     

Deletion of regulatory T cells supports the development of intestinal ischemia-reperfusion injuries

Background

Ischemia-reperfusion injury (IRI) of the intestine is associated with high morbidity and mortality in surgical and trauma patients. T cells participate in the pathogenesis of intestinal IRI, and T-cell depletion has been shown to inhibit inflammatory responses and diminish intestinal damage. However, the mechanism by which T cells contribute to intestinal IRI is not completely understood. Regulatory T cells (Tregs) are a specific subset of T cells that suppress immune responses and protect against tissue injuries. We hypothesized that Tregs might be involved in intestinal IRI.

Materials and methods

We subjected C57/Bl6 mice to 30 min of ischemia by clamping the superior mesenteric artery followed by reperfusion. Animals were pretreated with the anti-CD25 monoclonal antibody or adoptive transfer of Tregs before induction of IRI. The number of inflammatory cells, the level of inflammatory factors, and intestinal permeability were assessed.

Results

Partial depletion of Tregs with an anti-CD25 monoclonal antibody potentiated intestinal permeability induced by IRI. The Treg-depleted mice showed more neutrophils and CD4⁺ T cells. In addition, depletion of Tregs led to enhanced secretion of tumor necrosis factor-α, interferon-gamma, and interleukin (IL)-4 and reduced levels of IL-10. Furthermore, we performed adoptive transfer of Tregs and found that transfer of Tregs significantly inhibited the ischemia-reperfusion–induced increase in intestinal permeability.

Conclusions

Our study indicated that Tregs participate in intestinal inflammatory responses induced by IRI and that targeting Tregs could be a novel therapeutic approach to intestinal IRI.     

Induction of regulatory T cells from mature T cells by allogeneic thymic epithelial cells in vitro

The ability of thymic epithelial cells (TEC) to re‐educate mature T cells to be regulatory T cells has not been addressed. In the present study, this issue was directly investigated by co‐culturing of mature T cells and allo‐TECs. B6 macrophage cell line 1C21‐cultured BALB/c splenocytes responded to B6 antigens in vitro. However, BALB/c splenocytes precultured with B6‐derived TECs 1‐4C18 or 1C6 did not proliferate to B6 antigens, but responded to rat antigens. Exogenous interleukin‐2 (IL‐2) failed to revise the unresponsiveness of these T cells. Allo‐TEC‐cultured T cells predominantly expressed Th2 cytokines (IL‐4 and IL‐10). B6 TEC‐cultured BALB/c splenocytes markedly inhibited the immune responses of naïve BALB/c splenocytes to B6 antigens, but not to rat or the third‐party mouse antigens. BALB/c nude mice that received naïve syngeneic splenocytes rejected B6 or rat skin grafts by 17 days postskin grafting; however, co‐injection of B6 TEC‐cultured BALB/c splenocytes significantly delayed B6 skin graft rejection (P < 0.01), with the unchanged rejection of rat skin grafts. These studies demonstrate that allo‐TECs are able to ‘educate’ mature T cells to be regulatory cells, and suggest that regulatory cells derived from mature T cells by TECs may play an important role in T cell tolerance to allo‐ and auto‐antigens.     

肝移植术后潜在免疫耐受者外周血自然杀伤细胞、调节性T细胞和记忆性T细胞的表达及其临床意义

目的 探讨肝移植术后潜在免疫耐受者免疫状态,为临床指导抗排斥治疗提供依据.方法 纳入1999年1月至2007年12月在本中心行肝移植存活至今潜在免疫耐受者29例,分为3～5年组(3Y组)10例,5～11年组(5Y组)19例,另纳入肝移植术后反复排斥反应者(RJ)10例,年龄匹配健康对照组(HC)17例;流式检测外周血单个核细胞中自然杀伤(NK)细胞、记忆性T细胞、调节性T细胞(Treg)3个亚群的表达.结果 3Y、5Y组CD4+ CD25+T细胞(3Y:27.56±4.63;5Y:30.07±3.91)、静息性Treg占CD4+T细胞比例(3Y:0.22±0.05;5Y:0.17±0.03)比R J组明显升高(CD4+ CD25+ T:11.78±4.28;静息性Treg:0.05±0.02)(P＜0.05);5Y组NK细胞占淋巴细胞比例(29.11±3.31)比RJ组(13.92±3.11)明显升高(P＜0.05);效应性记忆性CD8+T细胞比例3Y组(12.92±2.05)比RJ组(8.74±1.69)明显升高(P＜0.05).结论 肝移植术后潜在免疫耐受者外周血NK细胞、静息性调节性T细胞和效应性记忆性CD8+T细胞比例相对排斥反应者明显升高,可作为潜在的耐受标志物.     

黏蛋白1、Ki67的表达与肝内胆管细胞癌患者临床病理特征及预后的关系

目的:分析黏蛋白1(MUC1)、Ki67在肝内胆管细胞癌(ICC)组织中的表达,探讨MUC1、Ki67的表达与ICC患者临床病理特征及预后的关系。方法:回顾性分析2013年1月至2020年3月在河南省人民医院就诊的398例ICC患者资料。最终104例患者纳入本研究,其中男性67例,女性37例,年龄(56.6±9.3)岁...     

结肠切除吻合术大鼠动物模型的建立

目的:构建结肠切除吻合术大鼠动物模型。方法:2019年9月至2019年12月将12只Sprague-Dawley大鼠通过随机数表随机分为两组：对照组随机取3只,仅做剖腹探查;实验组9只,从结肠无血管区离断肠管并进行缝合。记录手术时间,术后监测体重变化。于术后第7天进行肠道造影观察肠管吻合口愈合情况。于第8天行剖腹探查大...     

大鼠隐匿阴茎动物模型的建立

目的建立大鼠隐匿阴茎动物模型，为进一步研究阴茎包埋对阴茎海绵体结构与功能的影响提供实验模型。方法取2周龄雄性SD大鼠75只，随机分为A、B、C、D、E5组各15只，A、B、C和D组分别用阴茎根部外荷包缝合法、包皮折叠缝合法、包皮切除法和阴茎根部内荷包缝合法包埋阴茎，E组为假手术组。结果术后第1天，A组有1只死于尿潴留，B和D组各有1只死于麻醉。A组手术操作最简单，B、C和D组手术操作相对复杂；A、C和D组包埋效果较B组好；A、B和D组可解除包埋，C组解除包埋困难；由于A、B和C组缝合线外露，易被大鼠撕咬致阴茎外露，而难以建立成功的包埋模型；D组可于术后第2月、第4月和第6月解除阴茎包埋。结论阴茎根部内荷包缝合法可较好地建立2周龄大鼠隐匿阴茎动物模型。