甲基汞诱导海马神经细胞凋亡及其机制研究

目的 研究甲基汞对海马神经元的损伤及致凋亡作用,并初步探讨甲基汞神经毒性的机制.方法 以5 d内新生SD大鼠海马神经元为实验对象,用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测甲基汞对培养的海马神经细胞活性的影响,原位末端标记(TUNEL)法和流式Annexin V-FITC-PI法检测甲基汞诱导海马细胞凋亡细胞数和凋亡百分率,并用激光共聚焦技术,从单个细胞水平检测甲基汞对胞内游离Ca2 瞬间动态变化的影响.结果 MMT法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h对培养的海马神经细胞杀伤率为(22.90±2.77)%(n=7).TUNEL法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h组海马神经元凋亡指数[(34.45±1.30)%,n=10]高于溶剂对照组[(6.01±0.64)%,n=10],差异有统计学意义(P＜0.01).流式Annexin V-FITC-PI法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h诱导海马神经细胞凋亡率为(51.20±4.98)%(n=5).即时染毒0.01、0.1、1 μmol/L甲基汞,使海马神经元细胞内游离钙离子浓度分别增加(5.58±2.37)%(n=5),(82.71±20.42)%(n=4)和(246.38±64.77)%(n=4).预孵育硝苯的平可延缓甲基汞升钙作用的起效时间并降低胞内钙离子浓度增加的幅值.结论 甲基汞对培养的海马神经细胞的急剧升钙作用可能参与了甲基汞的致细胞损伤和诱导凋亡作用,并且可能与细胞膜上的电压门控钙通道有关.     

甲基汞对大脑皮层神经细胞内游离钙的影响

目的　研究甲基汞对急性分离的大脑皮层神经细胞内游离Ca2 水平的影响。方法　采用钙离子指示剂Fura 2双波长荧光检测技术。结果　 (0 10～ 5 0 0 )× 10 -6mol/L甲基汞可使大脑皮层神经细胞内游离Ca2 水平显著升高 ,且有剂量 效应关系。甲基汞升高神经细胞内游离Ca2 的作用与胞外Ca2 大量内流和胞内储Ca2 释放有关 ,且以胞外Ca2 内流为主。胞外Ca2 内流与N 甲基 D 天冬氨酸受体门控Ca2 通道以及电压门控Ca2 通道有关 ,而与电压依赖性Na 通道无关。结论　甲基汞可使神经细胞内游离Ca2 浓度异常升高 ,且与Ca2 通道有密切关系。     

甲基汞对急性分离小脑神经细胞内游离钙水平的影响

研究甲基汞对急性分离的小脑神经细胞「Ｃａ＾２＋」ｉ水平的影响及其机理。「方法」利用Ｆｕｒａ－２双波长荧光检测技术。「结果」１＊１０＾－７－５＊１０－６ｍｏｌ／Ｌ甲基汞可使大鼠小脑神经细胞「Ｃａ＾２＋」ｉ水平显著升高。具有良好的剂量－效应关系。     

甲基汞对脑发育的影响及机制研究进展

甲基汞具有很强的神经毒性，可引起中枢神经系统不可逆改变，发育中的脑对甲基汞尤为敏感。本文就胎儿期、哺乳期低剂量甲基汞暴露对脑发育的影响及其性别差异，甲基汞的神经毒性机制等方面进行综述。     

锰对神经细胞内质网应激信号分子的影响

目的 观察锰对大鼠脑片神经细胞内质网应激信号分子的影响及其与细胞凋亡的关系. 方法 以胎大鼠脑片为模型,用400μmo/L锰分别处理脑片612、18、24 h后,检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放量,神经细胞凋亡率以及脑片中GRP78、CHOP及caspase 12的表达. 结果 随着锰处理时间的增加,脑片细胞损伤明显,LDH释放量,细胞凋亡率和GRP78、CHOP及caspase 12的表达均逐渐上升. 结论 锰可以时间依赖性地活化内质网应激信号分子,促使细胞凋亡.     

甲基汞对大鼠脂质过氧化及信使分子一氧化氮的影响

研究了氯化甲基汞(MeHgCl)对大鼠脑不同区域(大脑皮层、小脑、海巴和/或纹状体)、肝脏及肾脏中脂质过氧化产物(LPO)、信使分子一氧化氮(NO)及其效应分子环磷鸟苷(cGMP)的影响。结果表明:试验组与对照组相比,小脑、肝脏、肾脏中3个指标均显著升高;大脑中LPO升高,而NO和cGMP变化没有显著性意义;纹状体中cGMP显著升高;海巴中NO和cGMP均无显著性变化。本研究提示;甲基汞(MeHg)对大鼠不同组织中LPO、NO及cGMP的不同影响,可能与各脏器对MeHg的敏感性不同和/或与一氧化氮合成酶(NOS)阳性神经元分布不均一有关。     

钙对母鼠氟暴露致仔鼠海马神经细胞凋亡的影响及分子机制

目的探讨不同饲料钙水平对母鼠氟暴露致仔鼠海马神经细胞凋亡的影响及分子机制。方法选用SD大鼠100只,75只雌鼠随机分为对照组(Con)、高氟组(F)、低钙组(LCa)、高氟低钙组(F+LCa)和高氟高钙组(F+HCa),饲养3月后,雌雄鼠合笼交配产仔鼠,取14、28日龄仔鼠2批,以海马CA3区神经细胞凋亡及凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Caspase12和JNK表达水平为观测指标。结果母鼠氟暴露后,28日龄雌雄海马细胞凋亡指数显著(P0.05)升高;14、28日龄雌雄仔鼠海马凋亡信号通路中Bcl-2蛋白表达均呈现极显著(P0.01)下调,而14日龄雄仔鼠和28日龄雌仔鼠的Caspase12、14和28日龄雌雄仔鼠JNK蛋白表达水平均呈极显著(P0.01)上调,14日龄雌仔鼠和28日龄雄仔鼠的Caspase12仅呈显著(P0.05)上调;饲料低钙加剧母鼠氟暴露后仔鼠海马神经细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达水平进一步下降,Caspase12和JNK蛋白表达水平进一步上升;而饲料高钙能够缓解母鼠氟暴露致仔鼠海马神经细胞的凋亡,逆转上述3者的蛋白表达水平;所检测的上述3个凋亡相关蛋白中,只有Caspase12表达水平呈性别和日龄差异,饲料钙对母鼠氟暴露致14日龄雄仔鼠和28日龄雌仔鼠Caspase12表达水平变化分别较同一日龄另一性别仔鼠的影响更大。结论海马凋亡信号通路中Bcl-2、Caspase12和JNK蛋白表达水平的变化可能是钙对母鼠氟暴露致子代大鼠大脑神经细胞凋亡影响的分子机制之一。饲料钙对母鼠氟暴露致14、28日龄仔鼠海马凋亡信号通路Caspase12表达水平变化的影响呈一定的性别差异,其机制有待于进一步阐明。     

环境神经毒物(锰)对神经细胞毒作用的分子机制

机体接触过量的环境神经毒物(如锰粉尘)能产生慢性神经毒性(锰中毒)。环境神经毒物引起神经细胞的毒作用机制受到国内外学者广泛关注。锰中毒是一种常见的职业病,其临床表现类似巴金森病的症状。长期研究观察发现, 锰暴露人群锰中毒的发病存在明显的个体差异,因此锰中毒发生的机制还与遗传易感性有关。     

甲基汞对神经递质的影响

甲基汞是环境中重要的污染物之一，其毒作用机制尚不十分清楚，本文仅就其对胆碱类，单胺类，氨基酸类，一氧化氮等神经递质的影响进行了综述。     

低剂量铅对海马神经元神经细胞黏附分子表达的影响

目的研究低剂量铅对原代培养的海马神经元神经细胞黏附分子(NCAM)表达的影响。方法将孕18dWistar大鼠麻醉后剖腹取出胎鼠,建立原代培养的海马神经元,与不同剂量的氯化铅(PbCl2)共孵育后,应用免疫印迹法技术检测培养第1至7天海马神经元NCAM的表达。结果正常条件下培养的海马神经元,第1天NCAM的表达极其微弱,积分吸光度值为14,NCAM表达的高峰时间在培养第3～5天,积分吸光度值为2542～2580;随培养时间的延长,NCAM表达逐渐降低。在铅的作用下,NCAM的表达在培养早期(第2～4天)受到抑制,且呈现明显的剂量效应关系,随时间延长,抑制程度逐渐减弱;培养至第5天,铅的抑制作用消失,10-2、10-3及10-4mmol/LPbCl2剂量组NCAM的表达甚至超出了对照组;此后,所有组的NCAM表达出现下降趋势,铅对NCAM表达的抑制又表现出剂量效应关系。结论低剂量铅暴露显著抑制了原代培养的大鼠海马神经元NCAM的表达,并造成了海马神经元NCAM表达时程上的延迟。     

硒对甲基汞中毒的影响

Ganther等人发现硒能保护日本的鹌鹑及大鼠免受甲基汞的毒害。本文作者证实了这个结果,提出硒是如何影响甲基汞在大鼠体内的蓄积及贮留的。     

影响甲基汞胎盘转移的因素

本文对影响甲基汞(MeHg)胎盘转移的因素,从血液学方面作了更进一步的阐明。作者于1982年12月至1982年11月间,从住院分娩的新生儿脐带和他们的母亲采集成对的血样。在分娩后24小时内,     

甲基汞对大鼠早期胚胎致畸作用的分子机理研究

为探讨氯化甲基汞（ｍｅｔｈｙｌｍｅｒｃｕｒｙｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＭＭＣ）致畸作用的分子机理，本实验应用非放射性原位杂交和免疫组化半定量分析等方法研究了ＭＭＣ对９．５天龄大鼠胚胎５种基因及编码产物的影响。结果显示：染ＭＭＣ各组（０、０．２、０．４、０．８、１．６和３．２ｍｇ／ｋｇ）均未见母鼠有明显的中毒症状和死亡。随着染毒剂量的增加，胚胎形态总得分逐渐降低，畸胎率和发育迟缓率不断增高，最高分别达３４％和７６％；诱生型一氧化氮合成酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ及其编码蛋白和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增强，ＮＴｍＲＮＡ及其编码蛋白表达水平下降，均呈明显剂量—反应关系。此外，ＭＭＣ还抑制ＴＧＦβｍＲＮＡ的表达，但对Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ及其编码蛋白表达的影响不明显。基于胚胎形态、基因和蛋白质表达的结果大体一致，相互佐证，提示在转录水平上多种基因表达异常可能与ＭＭＣ诱导大鼠畸胎发生之间存在密切关联     

甲基汞对神经系统蛋白质合成的影响

甲基汞系剧毒、高蓄积性环境污染物。它对神经系统的毒性作用,已被人群中几次甲基汞中毒的流行和动物实验所肯定。但迄今,在分子水平上,甲基汞神经毒作用机理仍不十分清楚。水俣事件后的近半个世纪,许多学者从形态学、生理学和生物化学等方面,对甲基汞神经毒作用机理进行了大量的研究工作。相继提出些学说。目前,甲基汞干扰     

甲基汞对子代小鼠生长发育的影响

甲基汞影响染毒雄鼠与正常雌鼠所产子代小鼠的生长发育。其影响程度与甲基汞染毒剂量有关。高剂量染毒组子代小鼠窝平均活胎数及子鼠出生时体重、身长和尾长明显低于阴性对照组（Ｐ＜０．０１）。子代小鼠生长发育缓慢，到性成熟后甲基汞对其生长发育影响更为明显，染毒各组子鼠体重均明显低于阴性对照组（Ｐ＜０．０２）。子代小鼠初级精母细胞染色体分析未见明显改变。     

甲基汞对小鼠ATP酶活性的影响

甲基汞对小鼠ＡＴＰ酶活性的影响牟颖，袁兰，李艳华，林秀武甲基汞（ＭｅＨｇ）是一种严重危害人体健康的环境污染物。为进一步探讨甲基汞毒作用机理及早期发现、早期诊断和预防，我们对生物膜上ＡＴＰ酶活性的变化进行了测定。１材料和方法１．１动物染毒及分组２０～２...     

甲基汞对小鼠精原细胞SCE的影响

本文采用雄性昆明小鼠甲基汞亚急性染毒,针剂型活性炭作为Brdu载体,在活体条件下,研究不同剂量水平甲基汞对小鼠精原细胞SCE的影响。实验结果发现:甲基汞使小鼠精原细胞SCE频率增高,诱发SCE弱阳性反应。染毒各剂量组与阴性对照组相比SCE频率具有高度显著性差异(P<0.001),随着染毒剂量加大SCE频率也增高,在本实验剂量范围内二者呈明显的正相关关系(r=0.96,p<0.01)。     

甲基汞对小鼠睾丸功能的影响

The results showed that the amount of methylmercury (MeHg) in testis correlated positively with exposure doses (r = 0.99 P less than 0.01). MeHg affected the process of spermatogenesis, causing decrease of sperm count and increase of sperm abnormalities. Pathological and electron microscopic examinations indicated that spermatogenic cells were damaged by MeHg especially spermatogonium and spermatocyte. Changes of microstructure were mainly degeneration, fragmentation vacuolation and large lipid drop formation of spermatogenic cells. The acrosome of many spermatids showed obvious changes. Destruction of blood-testis barrier was observed in 1/10 LD50 group. Quantitative histological examination also confirmed that MeHg resulted in lessening of its area of seminiferous tubules and reduction of germ cells. The contents of testosterone were not decreased in the treated groups other than the 1/10 LD50 group.     

程序性坏死阻断剂对铝致神经细胞凋亡的影响及其机制

目的 了解程序性坏死阻断剂necrostatin(Nee-1)对铝诱导的神经细胞凋亡的影响,并探讨Nec-1对Caspases凋亡通路的作用机制.方法 用4 mmol/L铝染毒神经母细胞瘤细胞株(SH-SYSY)制备铝致神经细胞死亡模型,在不同浓度铝和(或)Nec-1作用下检测细胞活力的变化,用Heochst 33342/碘丙啶(PI)双染法观察细胞的凋亡和坏死现象,Annexin V/PI双染法定量细胞的凋亡率和坏死率.用Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶活力的变化检测凋亡通路,用免疫细胞化学法检测核转录因子(NF-κB)和细胞色素c(Cyt-c)蛋白表达的变化.结果 随着铝染毒剂量的加大,细胞活力明显下降;但加入60 μmol/L Nec-1后,细胞活力明显增强.差异有统计学意义(P<0.05). Nec-1浓度的提高使细胞活力明显上升,表现了明显的促进神经细胞生长、抑制细胞死亡的作用.凋亡和坏死的荧光显微镜观察及流式细胞术定量检测结果 表明,随着铝染毒剂量的增加,神经细胞的凋亡率与坏死率明显上升,但在0～90μmol/L Nec-1作用下,Nec-1浓度越高,细胞的坏死率降低越明显,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).同时,虽然Nec-1是程序性坏死的阻断剂,但其对凋亡率也有明显的影响,可以使染铝细胞的凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).对Nec-1作用后细胞的凋亡相关酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活力变化检测结果 表明,Nec-1对Caspase-9活力的影响不明显,且对线粒体通路的凋亡诱导分子Cry-c的作用也不明显;但对Caspase-8活力的影响明显,表现在可以明显降低各染铝细胞的Caspase-8活力,提高NF-κB蛋白表达量和在高剂量染铝细胞中降低Caspase-3的活力.结论 Nec-1可以降低铝诱导的神经细胞凋亡,并通过死亡受体通路Caspase-8上调NF-κB表达,降低细胞凋亡率.