抗人淋巴细胞E受体单克隆抗体的研究

用杂交瘤技术制备了一识别E受体单克隆抗体Tlla(JN 20-5),间接免疫荧光分析表明Tlla(JN20-5)与多种T细胞反应,并识别人外周血全部T细胞。此抗体对E玫瑰花生成有明显阻断作用,其相应抗原又与E受体一样对胰酶消化敏感。经PHA刺激不同时间后Tlla(JN20-5)与另一CP_2抗体一样,同外周血单个核细胞反应百分率无明显增加,但反应强度增加。标准CO_2抗体Leu 5b、Anti-CCT3都有阻断FITC标记Tlla(JN20—5)的作用,说明Tlla(JN20—5)为一识别E玫瑰花受体的单克隆抗体。     

抗人淋巴细胞E受体单克隆抗体的研究

用杂交瘤技术制备了一识别E受体单克隆抗体Tlla(JN20-5),间接免疫荧光分析表明Tlla(JN 20-5)与多种T细胞反应,并识别人外周血全部T细胞。此抗体对E玫瑰花生成有明显阻断作用,其相应抗原又与E受体一样对胰酶消化敏感。外周血单个核细胞经PHA刺激不同时间后与Tlla(JN 20-5)及另一CD_2抗体的反应百分率无明显增加,但反应强度增加。标准CD_2抗体Leu 5b、Anti-CCT_3都有阻断FITC标记Tlla(JN 20-5)的作用,说明Tlla(JN 20-5)为一识别E玫瑰花受体的单克隆抗体。     

用OKT_(11)证明人淋巴细胞45℃孵育上清中存在50KD的抗原

人类T淋巴细胞能与绵羊红细胞(SRBC)形成自然玫瑰花,因此提出在T淋巴细胞表面存在SRBC的受体(即E受体)。Mendes等将人外周血淋巴细胞于45℃保温1小时,经保温后的淋巴细胞形成E玫瑰花的能力大大降低;若将其再置于上清液中温育,其形成E玫瑰花的能力又可得到部分恢复。因此推测,淋巴细胞在45℃孵育后的上清液中可能存在E受体。近年来,运用杂交瘤技术产生抗E;受体的单克隆抗体已经获得成功。OKT_(11)、9.6等抗E受体的单克隆抗体都与T淋巴细胞上50KD的抗原反应。我们利用免疫沉淀技术,将人外周血T淋巴细     

抗人淋巴细胞T8抗原样McAb的研制和初步鉴定

用杂交瘤技术,将经人外周血E花环阳性细胞免疫小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合后,产生一分泌IgG_1亚型McAb杂交瘤株。其所分泌抗体经微量放射免疫测定及间接免疫荧光法分析,表明它只能与T细胞系、76％的胸腺细胞及22％的外周血T淋巴细胞反应,不与其它各种不同细胞反应。将此抗体所识别入外周血T淋巴细胞亚群与抗Leu-2a识别T8~+细胞、抗Leu-3a识别T4~+细胞比较,发现此抗体与抗Leu-2a识别同一群细胞。此抗体能从T细胞表面沉淀出30KD(还原条件)或78KD(非还原条件)分子,并完全阻断FITC标记抗Leu-2a与T细胞的结合,说明此抗体是识别T8抗原样的McAb。     

人淋巴细胞表面抗原的研究——Ⅴ.单克隆抗体anti-CCT1和anti-CCT3所识別的决定簇及其功能

近几年来,已发现抗人T细胞表面TP50蛋白(E受体或与E受体有关)的单克隆抗体(单抗),包括T11A,9.6,35.1,Leu5,D66,LF2,多数能抑制E玫瑰花形成,有的能抑制T细胞多种功能,有的能诱     

人Null细胞的特征

人外周血淋巴细胞大约有10％为无标志细胞。其特点是无B细胞的特异标志(SIg)和T细胞的特异标志(羊红细胞的受体),而有Fc受体。在自然杀伤细胞和抗体依赖细胞溶解试验中,具有溶解能力。从外周血分离人无标志细胞的方法是采用分步除去B细胞和T细胞的程序,用自然E玫瑰花试验除     

人对白细胞间介素-2的反应及其产生的细胞基础 用单克降抗体鉴定的自身玫瑰花形成细胞的作用

作者用自身玫瑰花形成T细胞(Tar)和花生凝集素(PNA)将T细胞亚群(T_4~+与T_8~+)进一步分成不同的组份,分析了这些不同组份产生白细胞间介素-2(IL-2)和对其反应的情况,同时提及了对IL-1的反应。用梯度离心及E玫瑰花法从健康人外周血中分离获取T细胞,以OKT_4和OKT_8单克隆抗体加补体的阴性选择法纯化分离T_4~+和     

CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究

目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能.方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;Protein G亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用.结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56 mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖.结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性.     

Wu T_(11)(CD2)-小鼠抗人绵羊红细胞受体杂交瘤细胞系的建立

本文报道用T细胞系JMN1免疫BALB/c小鼠,然后取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系X 63Ag8.653融合。用扁桃腺冰冻切片免疫酶染色法,筛选出一株稳定分泌IgG1亚类的抗绵羊红细胞受体(ER)单扰(McAb)的杂交瘤—WuT11。通过E玫瑰花结形成抑制试验,膜抗原抽提物对WuT11的间接免疫荧光阻断试验,对外周血单个核细胞(PBMC)及其E~ 、E~-层细胞,T、B和非T非B细胞系的反应特征以及FACS的反应曲线等,证明WuT11与OKT11和anti-CCT3相类似,竞争抑制试验证明WuT11与anti-CCT3识别同一表位。用WuT11进行亲和层析,提取的相应抗原经SDS-PAGE,测得分子量为50KDa的糖蛋白,证明WuT11属CD_2,为识别人ER的单抗。     

武(Wu)T_(11)(CD_2)—小鼠抗人绵羊红细胞受体杂交瘤细胞系的建立

本文报道用T细胞系JMN_1免疫BALB/c小鼠,然后取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系X_(63)Ag8.653融合。用扁桃腺冰冻切片免疫酶染色法,筛选出一株稳定分泌IgG_1亚类的抗绵羊红细胞受体(ER)单抗(McAb)的杂交瘤一武(WuT11)。通过E玫瑰花结形成抑制试验;膜抗原抽提物对WuT11的间接免疫荧光阻断试验;对外周血单个核细胞(PBMC)及其E~+、E~-层细胞、T、B、和非T非B细胞系的反应特征以及FACS的反应曲线等。证明WuT11与OKT11和anti-CC_3相类似:竞争抑制试验证明WuT11与anti-CCT_3识别同一表位。用WuT11进行亲和层析,提取的相应抗原经SDS-PAGE,测得分子量为50KDa的糖蛋白,证明WuT11属CD_2、为识别人ER的单抗。     

E受体亲和力不同的人类T细胞的某些特征

入类T细胞表面具有红细胞(erythr-ocyte,绵羊红细胞和某些动物以及自身红细胞)的受体(recepter)即E受体(ER)。人类E玫瑰花的形成,是人类T细胞表面的E受体与上述的红细胞表面配体(Ligand)的结合。T细胞E受体对红细胞配体的亲和力有高(high)、有低(low),因此有人将人的T细胞分为高亲和力E受体T细胞(T_(ERH))和低亲和力E受体T细胞(T_(ERL))。T_(ERL)是指在“最佳条件”下形成玫瑰花的T细胞;T_(ERH)是指在“次佳条件”下形成玫瑰花的T细胞。“最佳条件”和“次佳条件”的差别,一是玫瑰花形成过程中玫瑰花形成细胞(T细胞)和玫瑰花指示细胞(红细胞)的比例,“最佳     

人特异性T细胞系间接识别猪抗原

SLA (swineleukocyteantigen )特异性CD4+T细胞系和自身APC以及猪PBMC共同孵育时 ,T细胞增殖反应很强 ,而同仅有自身APC或猪PBMC刺激时的T细胞增殖有显著差异。提示抗原特异性CD4+T细胞系以间接途径识别SLA抗原。该识别能被抗人CD4和HLAII类抗体阻断 ,而抗SLAII类抗体阻断作用很弱 ,表明HLAII类分子在间接识别中起重要作用 ,这一结果不同于直接从外周血中分离的未经抗原致敏的T细胞。直接识别猪APC递呈的抗原。有可能异种移植初期以直接识别为主导 ,随着移植物存活时间的延长逐渐转为间接识别     

两株鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

目的　研制鼠抗人GL5 0分子单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。方法　以天然高表达人GL5 0分子的Daudi细胞为免疫原 ,人GL5 0 L92 9转基因细胞为目的单克隆抗体(McAb)的筛选细胞 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得分泌特异性鼠抗人GL5 0分子McAb的杂交瘤细胞株 ;免疫荧光标记和流式细胞术分析McAb识别GL5 0的表达 ;Westernblot检测抗体对特异性细胞膜蛋白的识别 ;台盼蓝 (Trypanblue)染色细胞计数法和MTT法检测McAb对Daudi细胞体外生长的抑制作用 ;3 H TdR法检测抗体对GL5 0 L转基因细胞介导的活化T细胞体外增殖的效应。结果　成功制备 2株分泌特异性抗人GL5 0抗体的杂交瘤细胞株 12B11和 11C4 ;两者皆为IgG2a亚型 ;腹水效价皆在 1∶10 0 0以上 ;12B11、11C4特异性地识别GL5 0分子。 11C4McAb可以明显抑制Daudi细胞在体外的生长 ,并可抑制GL5 0 L转基因细胞介导的活化T淋巴细胞的体外增殖效应。结论　成功获得了 2株特异性鼠抗人GL5 0抗体 ,其中 11C4McAb具有诱导表达GL5 0分子的B淋巴瘤细胞Daudi的体外生长抑制作用 ;在T淋巴细胞体外增殖反应中发挥了重要的调节作用。     

人类T淋巴细胞亚群

在人类免疫生物学,特别是T细胞亚群的研究中,细胞表面标志物的表露及这些标志物在细胞亚群功能性状鉴定中发挥的作用已成为极为热门的研究领域。一般认为T细胞具有绵羊红细胞受体(E受体)。这一表面标志物可用于总T细胞群的鉴定。体外T细胞功能测定中已经证明具有T细胞功能的细胞主要是形成E玫瑰花的细胞群,因此这一标志物是很有实用价值的。但是不能认为T细胞就是具有E受体的细胞。虽然我们知道所有具有T细胞功能的细胞都位于E玫瑰花细胞群中,但这并不意味着每一个E玫瑰花细胞必定是T细胞。目前已知某些T细胞结合E的亲合力大大低于     

C5aR在慢性移植物抗宿主病中的表达及其作用机制

目的:探讨补体5a(C5a)及其受体(C5aR)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中的表达及其作用机制。方法:用流式细胞术检测20例cGVHD患者及9例健康供者外周血淋巴细胞中C5aR的表达及CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tregs)在CD4~+T细胞中的比例,并分析两者的相关性;将体外分离培养小鼠脾细胞分为对照组及重组小鼠C5a蛋白(rmC 5a)刺激组,用流式细胞术检测2组Tregs在CD4~+T细胞中的表达比例;另外,提取患者外周血单个核细胞进行体外培养,分为空白对照组及C5aR拮抗剂(C5aRA)组,用流式细胞术检测2组Tregs在CD4~+T细胞中的表达比例。结果:cGVHD患者外周血淋巴细胞表面C5aR的表达明显增多,而Tregs在CD4~+T细胞中的比例明显减少,两者呈显著负性相关(P0.05);体外培养小鼠脾细胞结果显示C5a下调Tregs在CD4~+T细胞中的比例;而体外培养患者外周血单个核细胞显示阻断C5aR可上调Tregs在CD4~+T细胞中的比例。结论:C5a/C5aR可能通过抑制Tregs的分化来介导cGVHD的发生发展。     

抗人T细胞单克隆抗体的应用及应注意的几个问题

1979年,龚忠恕(P.C.kung)和Golds-tein等首次报道抗人T细胞单克隆抗体(McAb)OKT系列制备成功。其中,OKT3与大约70％正常人外周血单个核细胞(PBM)反应,识别全部T细胞;OKT4与40％～50％正常人PBM反应,识别诱导和辅助T细胞亚群(Ti/h);OKT8与20％～30％正常人PBM反应,识别杀伤抑制性T细胞亚群(Tc,s)。     

E受体研究进展

早在1970年Coombs发现人的部分淋巴细胞在适当条件下能与绵羊红细胞(SRBC)形成玫瑰花结,即E玫瑰花,而且其形成并不依赖于淋巴细胞上的Ig受体。1971年Lay等人鉴定出T淋巴细胞上存在着一种SRBC的受体,即E受体。羊红细胞正是通过E受体吸附到淋巴细胞膜上。由于E受体只存在于T细胞上,故Lay等提出E受体是T细胞的特异性表面标志。从此,E玫瑰花     

羊红细胞与抗体IgG致敏酵母菌混合玫瑰花试验在临床上的初步应用

本文介绍一种新的检测具有IgGFc受体T淋巴细胞的方法—羊红细胞(E)与抗体IgG致敏酵母菌(YC)混合玫瑰花试验(简称E_1 IgG Y混合玫瑰花试验。具体方法:(1)首先制备抗酵母菌IgG。(2)试验程序:(a)IgG致敏酵母制备:酵母菌煮20分钟后,洗1次用定性滤纸过滤,再洗2次,用生理盐水配制5×10~7/毫升悬液,加等量不同浓度的抗酵母抗体IgG使用液,混匀37℃水浴1     

抗人T细胞及其主要功能亚群McAb的产生

本文报道用杂交瘤技术产生了一组抗全部T细胞、T辅助细胞及T抑制杀伤细胞抗体。 经用间接免疫荧光检测,抗体T1b、T1C识别所测试的8个T细胞株;与周血E~+细胞反应达77％,提示其识别全部T细胞;与部分B细胞慢淋的交叉反应性提示其为CD_5(即OKT_1或Lcu-1)类抗体。抗体T8b与部分T细胞反应;与周血E~+细胞为35％,与胸腺细胞为79％,提示其为CD8(OKT8、Leu-2a)类抗体。抗体T4a也与部分T细胞反应;与周血E~+细胞为     

淋巴毒素在ADCC中的作用

人外周血淋巴细胞(PBL)ADCC作用的精确机制尚不清楚。最近有报告,人的K细胞有低亲和力的E-玫瑰花受体,提示人K细胞属于T细胞。作者用兔抗人α-淋巴毒素