β-丙内酯对流感病毒鸡胚高产母本株灭活条件的研究

目的 流感病毒鸡胚高产母本株A/PR8/34株和X-157株灭活条件的研究.方法 应用改良后的β-丙内酯灭活法对流感病毒鸡胚高产母本株进行灭活.经试验证明,0.5‰β-丙内酯在37℃水浴,pH值范围在7.4-8.0之间条件下作用2h.补加0.5‰β-丙内酯,pH值为9,温度为4℃条件下过夜,能彻底灭活且保证流感病毒表面主要抗原的完整性.结果 采用改良后的β-丙内酯灭活法对流感病毒鸡胚高产母本株A/PR8/34株和X-157株灭活效果良好,鸡胚3代安检合格.灭活前后病毒血凝滴度不变.结论 改良后的β-丙内酯灭活法可用于流感病毒鸡胚高产母本株的灭活.     

正常人血清免疫球蛋白对埃希氏大肠杆菌Ferrienterochelin摄取的特异性抑制作用

某些致病菌如埃希氏大肠杆菌、鼠伤寒杆菌可产生Enterochelin,此物质在体外可激活相应的细菌生长并增加细菌的毒力。近来研究发现在正常人血清中存在对Enterochelin的特异性抗体,此抗体对产生Enterochelin的致病菌具有特异的抑制作用。体外培养证明,上述细菌培养既使在含有加热灭活的正常人血清的培养基中也难以生长,主要因为血清中含有Enterochelin的特异性抗体。据推测这种抗体可与血清中的运铁蛋白作用,阻碍致病菌与铁的同化作用,因此无法合成含铁的细菌,使细菌生长受阻碍。     

血清白细胞介素2活性的检测

准确测定血清中IL 2活性对评价用重组IL-2进行全身治疗的作用和毒性很重要。以前观察者们采用两种方法确定人重组IL-2治疗性注射后的血清IL-2水平。一种方法是将血清标本在56℃孵育30分钟(加热灭活)以便消除天然存在于人血清中的IL-2抑制因子活性;另一种方法是将血清进行系列稀释使其天然IL-2抑制因子活性在用生物方法测定IL-2活性时不起作用。作者在文中比较了这两种方法以便更准确地测定血清中IL-2水平。作者自病人或健康供血者获得血清标本,健康人血清在体外加入重组IL-2,在生物活性测定之前取相同的标本分别在56℃     

利巴韦林注射液在细胞水平上抑制EV71病毒复制的初步研究

目的 通过体外实验,观察利巴韦林注射液对肠道病毒71型(EV71)病毒在横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)复制的抑制作用和体外灭活作用.方法 使用在2008年4月安徽阜阳疫情中分离到的EV71病毒,通过三种体外细胞实验:药物在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定实验;药物对细胞的保护作用实验;药物体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定实验.观察利巴韦林注射液对EV71病毒感染横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)中所起的作用.结果 在利巴韦林注射液在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定实验中,1:640利巴韦林注射液稀释度组较病毒对照组延迟病变出现2 d,细胞生长未受到影响.在药物对细胞的保护作用实验中,1:8利巴韦林稀释度组较病毒对照组延迟病变出现4 d.在利巴韦林注射液药物体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定研究中,1:40稀释度组较病毒对照组延迟病变出现2 d,而细胞生长未受到影响.结论 利巴韦林注射液在体外有抑制EV71病毒复制和部分灭活病毒的作用;并有一定的保护细胞抑制EV71病毒感染的作用.本研究对于临床上EV71感染的早期预防和治疗具有一定的指导意义.     

Comparison of gene expressions in the 2-cell embryos produced in vitro from blocking and non-blocking strain mice

目的:检测阻滞品系昆明小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠体外发育2-细胞胚内基因表达水平的差异,探讨昆明小鼠植入前胚体外发育阻滞与哪些基因表达调控有关.方法:分别收集昆明小鼠和B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚,运用基因芯片分析和Real-time PCR验证.结果:基因芯片检测共筛出差异表达基因303个,其中昆明小鼠2-细胞胚表达上调基因有168个；下调基因有135个.昆明小鼠2细胞胚表达上调的基因以信号转导、细胞周期、细胞结构和运动、细胞增殖和分化以及发育进程等为主；而下调基因与电子转移、蛋白质代谢和修饰、氨基酸代谢以及蛋白质靶向运输和定位等相关.结论:胚内能量供应不足和蛋白质合成障碍可能是昆明小鼠植入前胚体外发育出现2-细胞阻滞的重要原因.     

EB病毒对人胚鼻咽上皮细胞的转化

为观察EBV和／或促癌物四癸酸佛波醇二酯（TPA）对其的转化作用，以人胚鼻咽上皮作体外原代组织培养，采用自B95－8细胞分离的EB病毒直接感染或结合TPA处理体外培养的人胚鼻咽上皮细胞，着重观察感染细胞在半固体培养基中的集落形成率；并采用PCR扩增法探讨EB病毒是否直接进入鼻咽上皮细胞。结果显示：单独EB病毒或灭活（56℃，30分钟）EB病毒加TPA感染时，病毒不能进入细胞导致表型改变；活性EB病毒结合TPA同时处理或先用EB病毒后用TPA处理时，EB病毒能直接进入细胞并导致细胞集落形成率明显增高（P＜0．05）。从而表明EB病毒体外能部分转化人胚鼻咽上皮细胞，其转化作用依赖于TPA的存在和病毒基因组的完整。     

蛭丹化瘀口服液体外抑制RSV作用机制的研究

目的 研究蛭丹化瘀口服液体外抗呼吸道合胞病毒作用环节.方法 观察该药在不同浓度和不同的作用环节下RSV对Hep-2细胞的致病作用.结果 蛭丹化瘀口服液对细胞无毒浓度为5.5 mg/ml,并在此浓度中未能阻断RSV对细胞的吸附,细胞产生了完全病变.蛭丹化瘀口服液在2.75～5.50 mg/ml浓度中,药物直接灭活病毒组和先感染细胞再加入药物的治疗组均未产生细胞病变.结论 蛭丹化瘀口服液体外实验无预防RSV感染作用,有直接灭活RSV作用,并对进入细胞内的RSV有抑制作用.     

几种防治组织培养中支原体污染方法的探索

本文报告了对几种防治组织培养中的支原体污染的方法的研究结果。试用各种滤器过滤血清和56℃灭活方法,以去除小牛血清中污染的支原体。采用半固体培基方法鉴定支原体结果证明,0.22u微孔滤膜和EKS蔡氏滤板可以去除小牛血清中污染的支原体。但G6玻璃滤器和0.3μ微孔滤膜过滤不能清除血清中的支原体,56℃加热30分钟,重复三次不能使血清中的支原体灭活。对于已经污染有支原体的传代细胞株,使用各种抗生素或在培养物中加入小鼠腹腔饲养细胞都不能去除支原体。但是将污染细胞接种于小鼠腹腔,经过一定时间再取腹水或实体瘤细胞培养,鉴定结果表明,通过小鼠腹腔内培养的NS-1细胞,不仅清除了污染的支原体,用于融合也获得满意效果。     

白细胞介素-1β体外诱导小鼠中脑神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化

目的: 探讨白细胞介素-1β(IL-1β)体外诱导中脑神经干细胞(M-NSCs)向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化情况,为帕金森病的转基因移植治疗在体外获得足够的多巴胺能神经元提供实验依据.方法:在有血清条件下体外培养鼠胚M-NSCs,予以IL-1β作诱导分化.酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学鉴定,流式细胞术检测TH阳性神经元的百分率.结果:实验组促进M-NSCs分化为TH阳性神经元的比例为9.54%,而对照组仅3.46%,差异有统计学意义.结论:IL-1β可明显促进中脑神经干细胞分化成多巴胺能神经元.     

影响体外抗体形成细胞测定的几个因素

<正> 体外测定抗体形成细胞(PFC)的影响因素极多,本文主要比较不同批号胎牛血清和绵羊红细胞、血清灭活与否、培养基种类以及培基中是否加入α-巯基乙醇及 HEPES 等对 PFC 测定结果的影响。材料和方法取体重     

补体系统的测定方法

补体是存在于人和动物血清中具有酶活性的一个复杂的限制性蛋白水解(Limited Proteolysis)系统,它是由20余种血浆蛋白构成,约占血清球蛋白总量的10％,不耐热,加热56℃30分即被灭活,补体经抗原抗体复合物或各种机制激活后,可发生一系列变化,最终导致细胞溶解及炎症反应。补体系统的激活途径有两条:经典途径和旁路途径。     

清开灵注射液对登革病毒Ⅱ型的抗病毒作用研究

目的 检测清开灵注射液在细胞模型上抗登革病毒Ⅱ型(DENV-Ⅱ型)作用.方法 本实验以白纹伊蚊C6/36细胞为宿主细胞,阿昔洛韦(ACV)为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT法检测细胞存活率来测定药物的细胞毒性、药物对DENV-Ⅱ的直接灭活作用、以及药物抗DENV-Ⅱ对细胞的吸附和对DENV-Ⅱ在细胞内复制的抑制作用.结果 该药在体外对DENV-Ⅱ无直接灭活作用,也不能阻止其对细胞的吸附,但对病毒在细胞内的增殖有明显的抑制作用,且呈一定的剂量效应依赖性.结论 该药在体外有一定的抗DENV-Ⅱ感染作用.     

白细胞介素-1β和胶质源性神经营养因子体外诱导鼠胚中脑神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化

目的:以白细胞介素1β(IL-1β)和胶质源性神经营养因子(GDNF)为诱导剂,探索小鼠胚胎中脑神经干细胞(M-NSCs)向多巴胺能神经元的的分化.为M-NSCs移植治疗帕金森病(PD)提供实验依据.方法: 在有血清条件下体外培养鼠胚M-NSCs,予以IL-1β和GDNF作诱导分化.酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学鉴定...     

非肾性泌尿系恶性肿瘤的肿瘤浸润性淋巴细胞

本研究中所用的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)是从20个外科手术标本中分离的,其中有15个标本的TIL 在体外得到了扩增。这些标本包括膀胱过渡型细胞癌、前列腺癌、睾丸癌、维尔姆斯瘤和肾上腺癌。TIL(5×10~5活细胞/ml)分别置于4种不同的培养条件下扩增培养(均含重组白细胞介素21000单位/毫升):①RPMI1640+10%灭活人血清;②RPMI1640+10%灭活人血清+20%LAK 细胞培养上清液;③AIM V;④AIM V+20%LAK 细胞培养上清液。作者     

巴斯德消毒法可否影响血红蛋白理化性质及生物学功能?

背景:巴斯德消毒法对白蛋白的病毒灭活条件已很完善,可不要求进行病毒灭活验证,但将其应用于血红蛋白类血液代用品病毒灭活的研究在国内外尚未见有系统报道。目的:探讨巴斯德消毒法对血红蛋白类血液代用品理化性质及生物学功能的影响。方法:取适量脐血,经离心、洗血、破膜、添加稳定剂处理后,对照组于55℃水浴加热,待血红蛋白溶液温度达到(55±1)℃开始计时,2 h后加热处理完成;巴氏消毒组于60℃水浴加热,待血红蛋白溶液温度达到(60±1)℃开始计时,10 h后加热处理完成,该过程持续通氮保护。然后置冰浴冷却到4℃以下,低温高速离心,微孔滤膜过滤,得到纯化及病毒灭活的脐血血红蛋白。结果与结论:巴氏消毒组与对照组制品外观都为红色澄明液体;在得率、高铁血红蛋白含量、氧结合量方面两组差异无显著性意义;两组的纯度都在98%以上;两种纯化方法并没有对血红蛋白携氧功能造成影响。因此,可以用巴斯德病毒灭活的方法来代替一直在使用的55℃,2 h的热敏法纯化方式。这样不仅能保证血红蛋白的理化性质、生物学性质,还能同时达到病毒灭活的目的。     

体外诱导人骨髓间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化

背景：Ⅱ型肺泡上皮细胞被证明在大鼠肺纤维化模型中直接参与肺的修复并可以减轻肺纤维化的程度。胚胎干细胞可以在体外诱导分化Ⅱ型肺泡上皮细胞,但是其应用受到多方面的限制。 目的：探讨体外诱导骨髓间充质干细胞为Ⅱ型肺泡上皮细胞的方法及转化率。 方法：取人胸骨骨髓细胞,体外分离培养骨髓间充质干细胞。采用无血清小气道生长液和改良无血清小气道生长液作为培养液,将骨髓间充质干细胞与人胚肺间质细胞共培养。观察骨髓间充质干细胞形态并用反转录PCR检测表面活性蛋白C的mRNA以及免疫荧光检测表面活性蛋白C表达。 结果与结论：骨髓间充质干细胞与人胚肺间质细胞共培养10 d后开始出现部分骨髓间充质干细胞由原先的长梭形变成和上皮细胞相似的形态。15 d后开始检测到表面活性蛋白C mRNA,但未随共培养时间延长而有所增加。改良无血清小气道生长液与无血清小气道生长液相比能增加表面活性蛋白C mRNA表达(P < 0.05)。说明采用无血清小气道生长液或改良无血清小气道生长液,并与胚肺间质细胞共培养可以将骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞,但其转化率较低,表面活性蛋白C的阳性率仅为(3.15±0.69)%。     

黏液瘤病毒体外对胶质瘤细胞杀灭作用的研究

目的 了解C6细胞在体外对黏液瘤病毒的易感性,并测定黏液瘤病毒对体外C6胶质瘤细胞的杀灭作用.方法 以黏液瘤病毒感染体外培养的C6胶质瘤细胞,以灭活病毒作为阴性对照,5-FU作为阳性对照,DEMD液做空白对照,应用Western-Blot法、倒置显微镜及MTT法观察各组细胞的形态、成活率.结果 病毒感染组及5-FU组24 h后细胞成活率明显低于空白对照组及阴性对照组,同时病毒感染组细胞出现明显细胞病变.结论 C6胶质瘤细胞在体外对黏液瘤病毒易感,黏液瘤病毒在体外对C6胶质瘤细胞有杀灭作用.     

抗金葡菌肽聚糖模拟肽抗血清的被动保护作用

目的探讨针对金葡菌肽聚糖(PGN)模拟序列抗血清的被动保护作用。方法应用在线软件(http://www.ddg-pharmfac.net/mhcpred/MHCPred)和T细胞表位分析软件DNAstar对模拟PGN表位的SP31(ATWSHHLSSAGL)进行分析,改造SP31序列后合成四分枝多价抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP)MAP-P31.1,以MAP-P31.1免疫小鼠和家兔,体外鉴定抗MAP-P31.1血清对MRSA/MSSA杀菌作用,体内观察饱和硫酸铵纯化免疫兔血清对金葡菌攻击动物的保护作用。结果将原始SP31序列改造为ATWSHHLSSAGLGGAS序列。2种抗MAP-P31.1血清均可结合PGN。用热灭活S.aureus再次加强免疫,抗血清的效价可有10倍以上升高(P0.05)。抗MAP-P31.1血清在有补体或无补体作用下均有显著抑菌/杀菌作用(P0.01),且显著优于抗金葡菌免疫的全菌血清及抗MAP-P31血清(P0.001)。抗MAP-P31.1血清显著增强小鼠巨噬细胞对MRSA与MSSA的吞噬作用,过继转移后可保护小鼠抵御金葡菌致死性攻击(P0.05),小鼠肾脏、脾脏中荷菌量显著降低(P0.05)。结论模拟肽MAP-P31.1作为免疫原所诱导的抗血清具备了体外对MRSA的杀菌/抑制作用,但体内对MRSA的保护作用并不显著。     

组织胚胎学

神经肽对体外培养脾细胞和肠系膜淋巴结细胞中T细胞CD分子表达的影响李成仁，第三军医大学组织胚胚学教研室，重庆400038蔡文琴，第三军医大学组织胚胚学教研室，重庆400038杨忠，第三军医大学组织胚胚学教研室，重庆400038肖茂磊，第三军医大学组织胚胚学教研室，重庆400038T细胞表面的CD3、CD4以及CDS分子都是T细胞识别抗原、传递活化信号以及发挥杀伤靶细胞效应时所不可缺少的分子。本实验的目的是观察神经肽对体外培养的脾细胞和肠系膜淋巴结细胞中T细胞的CD分子表达的影响。方法：体外培养脾细胞和肠系膜淋巴结细胞中加人神经肽…     

六神丸在细胞水平上抗腺病毒的初步研究

目的 建立腺病毒3型（HAdV-3）感染HEp-2细胞模型,评价六神丸混悬液对腺病毒感染HEp-2细胞病变的抑制作用,并进一步探讨六神丸在体外抗腺病毒的量效关系.方法 用乙醇回流法处理制备六神丸液.以MTT法计算药物的半数中毒剂量（TC50）.通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,观察六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 六神丸液TC50值为40.48 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染HEp-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度（IC50）分别为28.91μg/m1、19.28 μg/m1、8.61 μg/ml,治疗指数（TI）分别为1.4、2.1和4.7,六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞CPE的抑制作用存在着一定的量效关系.结论 在预防、治疗及直接灭活给药方式下,六神丸均有一定的抗HAdv-3的作用,但直接灭活效果更明显.