扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的：探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法：本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组（5只）、模型组（18只）和扶正化瘀方组（14只）。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体（TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ）、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）,分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂（SB-431542）组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果：体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论：扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。     

扶正与化瘀影响肝星状细胞活化、胶原生成及肝细胞白蛋白生成的配伍作用研究

为探讨扶正化瘀方中扶正与化瘀抗肝纤维化的配伍作用及意义,将扶正化瘀方按治法拆方为扶正组（虫草菌丝,松黄）和化瘀组（丹参、桃仁）,大鼠经口灌胃给药后分离药物血清,观察各组红物血清对体外传代活化的大鼠肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白（SM actin,SMA)表达,[^3H]TdR及[^3H]Pro掺入,Ⅰ型前胶原mRNA表达,胶原蛋白以及大鼠肝细胞白蛋白生成量的影响。结果：各组HSC的α-SMA表达及细胞内^3H-TdR的掺入原量均显低于对照组,化瘀组尚显低于扶正及全方组,各组HSC的Ⅰ型前胶原mRNA的表达及胶原蛋白生成量均显降低,扶正组又显低于化瘀组和全方组,全方可显提高肝细胞A1b的生成量,而扶正或化瘀组则无明显影响。结论为扶正化瘀方中化瘀药抑HSC活化的作用突出,扶正药抑制Ⅰ型前胶原nRNA的表达及Ⅰ型胶原生成量的作用显,全方既保留了扶正与化瘀的上述作用,又呈现出促进细胞蛋白合成、尤其是肝细胞白蛋白生成量的效果,显示出扶正化瘀在抗肝纤维化方面的综合优势。     

扶正化瘀方对大鼠中毒性肾间质纤维化的作用

目的:观察扶正化瘀方对大鼠中毒性肾间质纤维化的作用.方法:Wistar大鼠40只,分为正常组、模型组、扶正化瘀方药物组.采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射4周和含汞等重金属的饲料喂饲造模8周,制备大鼠肝纤维化-肾间质纤维化模型.药物组以扶正化瘀方自第5周起灌胃,1次/d,共4周.肾组织HE染色及六胺银(periodic acidsilvermetheramine,PASM)染色,观察肾组织炎症与胶原纤维沉积变化;试剂盒方法检测血清尿素氮与肌酐含量,观察肾功能变化;盐酸水解法测定肾组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,观察胶原生成变化.结果:模型大鼠肾小管上皮细胞浊肿、坏死与脱落,炎性细胞浸润;肾间质增宽,大量胶原沉积;肾小管基底膜增厚,出现皱褶;血清尿素氮与肌酐含量上升,肾组织Hyp含量显著增加.扶正化瘀方药物组明显减轻模型大鼠肾小管炎症坏死与肾间质胶原沉积,减轻肾组织Hyp含量,降低异常增高的血清尿素氮与肌酐水平.结论:DMN腹腔注射与汞等重金属饲料口服可造成大鼠肾间质纤维化,扶正化瘀方可明显改善大鼠肾功能,有抗肾间质纤维化的作用.     

MMP-1,TIMP-1在丰宫并殖吸虫所致的大鼠肝纤维化中的表达

目的观察丰宫并殖吸虫所致的大鼠肝脏损伤时MMP-1及其抑制剂TIMP-1在肝纤维形成过程中的动态表达,从而反映其在肝纤维化中的作用机理.方法 SD大鼠25只,随机分为2组.即正常对照组5只和感染组20只.感染组按感染时间长短分为4组,每组5只(感染3周组、感染5周组、感染7周组、感染9周组).感染组每只大鼠腹腔注射8条丰宫并殖吸虫后尾蚴建立动物模型,对照组每只大鼠腹腔注射等量的生理盐水.按感染时间处死各组大鼠.通过ELISA法检测大鼠血清中的MMP-1,TIMP-1含量.同时取肝组织行HE染色判断肝组织发炎程度及肝纤维化程度,行免疫组化染色测MMP-1,TIMP-1在肝组织的表达水平.结果 HE染色肝组织病理形态学结果显示:随着感染时间的延长,肝部炎症逐渐加重,以感染后5周最为明显,之后肝细胞变性坏死逐渐增多.免疫组织化学显示:随病情进展,MMP-1、TIMP-1的表达都是持续上升的.ELISA法所检测的血清中的MMP-1呈现上升的趋势,TIMP-1含量是持续上升的.结论丰宫并殖吸虫感染大鼠可引起肝脏纤维化病变,MMP-1和TIMP-1在此病变过程中的表达有所差异.肝脏病变的严重程度与感染时间、MMP-1和TIMP-1的表达有关.提示MMP-1和TIMP-1在丰宫并殖吸虫感染大鼠致肝纤维化的形成机制中起作用.     

一贯煎对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响

目的:探讨一贯煎对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝脏胶原代谢的影响.方法:腹腔注射CCl4 9周制备大鼠肝纤维化模型,于造模第3周、第6周末各处死6只大鼠作动态观察,自第7周起将模型大鼠随机分为模型对照组和干预组.干预组于继续造模的同时给予一贯煎灌胃3周,正常组与模型对照组大鼠给予同体积蒸馏水灌胃.第9周末处死全部大鼠,采集肝组织标本,检测肝组织组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhmitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、-2,基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、-14,α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),I型胶原(collagen type I,Col I)等的蛋白表达以及MMP-2、-9的活性.结果:与正常大鼠比较,造模第3、6和9周时肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维增生程度增加,肝组织α-SMA、ColI、TIMP-1、TIMP-2、MMP-13、MMP-14蛋白表达和MMP-2、MMP-9活性逐渐升高(P<0.05或P<0.01);与9周模型组比较,一贯煎组大鼠胶原纤维增生程度显著减轻(P<0.05),肝组织α-SMA、Col I、TIMP-1、TIMP-2、MMP-13和MMP-14蛋白表达及MMP-2、MMP-9活性显著降低(P<0.01).结论:一贯煎可以抑制肝星状细胞活化,抑制胶原的合成,促进过度增生的胶原纤维的降解,从而抑制CCl4诱导大鼠肝硬化的形成.     

荔枝核总黄酮预防大鼠肝纤维化的初步研究

目的观察荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi chinensis Sonn,TFL)预防大鼠肝纤维化作用及活化肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的变化,从细胞凋亡角度研究二者之间的关系。方法以二甲基亚硝胺腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型,同时以秋水仙碱为阳性对照,TFL[100、200 mg/(kg.d)]灌胃给药,6周后处死大鼠,放射免疫法(RIA)检测大鼠血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)蛋白水平,取肝脏同一部位行HE、Masson染色观察大鼠肝纤维化程度,采用α-SMA及TUNEL免疫组化双重染色标记活化HSC凋亡。结果 TFL高剂量组和秋水仙碱组血清肝纤维化指标(HA、LN、PCⅢ)均明显低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,TFL高剂量组可明显增加活化的HSC凋亡指数,改善大鼠肝纤维化程度(P<0.05)。结论荔枝核总黄酮可抑制肝纤维化大鼠HA、LN、PCⅢ表达,诱导HSC凋亡并改善二甲基亚硝胺所致肝纤维化程度,且具有一定量效关系。     

MMP-1, TIMP-1 在丰宫并殖吸虫所致的大鼠肝纤维化中的表达

［摘要］目的　观察丰宫并殖吸虫所致的大鼠肝脏损伤时MMP-1及其抑制剂TIMP-1在肝纤维形成过程中的动态表达,从而反映其在肝纤维化中的作用机理．方法　SD大鼠25只,随机分为2组．即正常对照组5只和感染组20只．感染组按感染时间长短分为4组,每组5只（感染3周组、感染5周组、感染7周组、感染9周组）．感染组每只大鼠腹腔注射8条丰宫并殖吸虫后尾蚴建立动物模型,对照组每只大鼠腹腔注射等量的生理盐水．按感染时间处死各组大鼠．通过ELISA法检测大鼠血清中的MMP-1,TIMP-1含量. 同时取肝组织行HE染色判断肝组织发炎程度及肝纤维化程度,行免疫组化染色测MMP-1, TIMP-1在肝组织的表达水平．结果　HE染色肝组织病理形态学结果显示:随着感染时间的延长,肝部炎症逐渐加重,以感染后5周最为明显,之后肝细胞变性坏死逐渐增多．免疫组织化学显示:随病情进展,MMP-1、TIMP-1的表达都是持续上升的．ELISA法所检测的血清中的MMP-1呈现上升的趋势,TIMP-1含量是持续上升的．结论　丰宫并殖吸虫感染大鼠可引起肝脏纤维化病变,MMP-1和TIMP-1在此病变过程中的表达有所差异．肝脏病变的严重程度与感染时间、MMP-1和TIMP-1的表达有关．提示MMP-1和TIMP-1在丰宫并殖吸虫感染大鼠致肝纤维化的形成机制中起作用     

糖尿病对大鼠肝纤维化组织TIMP-1/MMP-1表达的影响

目的探讨糖尿病对大鼠肝纤维化组织金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)/金属基质蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法 40只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病组、肝纤维化组、糖尿病肝纤维化组(双模型组),各10只。糖尿病组和双模型组大鼠腹腔注射链尿佐菌素(STZ)制作糖尿病模型;肝纤维化组和双模型组大鼠皮下注射40%的四氯化碳花生油溶液建立肝纤维化模型。四氯化碳最后一次注射后48h处死大鼠,心脏采血,自动生化检测仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血浆清蛋白(ALB)和清蛋白/球蛋白(A/G);化学发光法检测肝纤维化指标透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(PⅢNP)和Ⅳ型胶原(C-Ⅳ);VG染色观察大鼠肝组织变性坏死和纤维化的程度;RT-PCR检测肝脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、MMP-1和TIMP-1基因表达水平。结果与正常对照组和糖尿病组比较,肝纤维化组和双模型组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PⅢNP和C-Ⅳ浓度升高以及ALB、A/G下降,α-SMA、TIMP-1/MMP-1、TIMP-1基因表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);与肝纤维化组比较,双模型组大鼠血清ALT、AST、HA、C-Ⅳ浓度和肝脏纤维化计分升高,α-SMA、TIMP-1、TIMP-1/MMP-1基因表达增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高血糖促进了肝纤维化的发展,TIMP-1/MMP-1表达失衡加剧了肝细胞外基质(ECM)的沉积。     

通阳药葱白提取物对肝窦毛细血管化大鼠肝组织MMP-2,TIMP-2蛋白及mRNA表达影响的研究

目的：观察通阳药物葱白提取物对肝窦毛细血管化（HSC）模型大鼠肝组织基质金属蛋白酶及其抑制因子MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达的影响,并初步探讨其作用机理。方法：SD大鼠经酒脂混合物灌胃111天后,用40%CCl40.3 mL/100 g连续4周皮下注射造成HSC模型。皮下注射的同时予葱白提取物治疗19周。采用Western-Blotting方法和RT-PCR方法检测各组大鼠肝组织MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA的表达。结果：（1）葱白提取物组大鼠肝组织MMP-2、TIMP-2蛋白的表达量较模型组有均显著降低（P〈0.01）。（2）葱白提取物组大鼠肝组织MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA的表达量较模型组均有显著降低（P〈0.01）。结论：通阳药物葱白提取物通过促进MMP-2/TIMP-2的表达平衡而起到促进阳气条达的作用。     

抗纤抑癌方对肝癌前病变大鼠Ras/Erk信号通路的调控作用研究

目的观察抗纤抑癌方对肝癌前病变大鼠Ras/Erk信号通路的调控作用,探讨抗纤抑癌方防治肝癌前病变的作用机制。方法雄性Wistar大鼠55只,随机分为正常组10只,模型组、扶正化瘀组及抗纤抑癌组各15只。模型组、扶正化瘀组及抗纤抑癌组均以二乙基亚硝胺(50 mg/kg)腹腔注射诱导肝癌前病变形成,每周1次,持续14周。正常组予生理盐水腹腔注射作为对照。同时,连续给予相应药物灌胃干预,1次/d,在第14周末取材。采用HE和Masson染色以观察大鼠肝癌前病变情况及纤维化程度;采用Western-Blot方法检测大鼠肝脏中Ras、Erk及p-Erk蛋白的表达情况。结果 HE和Masson染色显示模型组肝脏细胞异常增生明显,纤维化程度较重。与模型组比较,抗纤抑癌组和扶正化瘀组肝脏纤维堆积及肝细胞异常增生情况明显减轻,尤其以抗纤抑癌组作用明显。Western-Blot结果显示,p-Erk在模型组中高表达,与正常组比较,两者之间差异有统计学意义(P 0. 05);抗纤抑癌组p-Erk表达低于模型组、扶正化瘀组,分别与之比较,差异均具有统计学意义(P 0. 05);扶正化瘀组与模型组之间比较差异无统计学意义(P 0. 05)。Erk表达在各组间差异无统计学意义(P 0. 05)。Erk磷酸化率(p-Erk/Erk)在模型组中最高,与正常组比较,两者之间差异有统计学意义(P 0. 05);抗纤抑癌组p-Erk/Erk低于模型组、扶正化瘀组,分别与之比较,差异均具有统计学意义(P 0. 05);扶正化瘀组与模型组之间差异比较无统计学意义(P 0. 05)。Ras表达在各组间比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论抗纤抑癌方具有抗纤维化、阻断肝癌前病变的作用,并能抑制肝癌前病变大鼠Ras/Erk信号通路的激活,这可能是其防治肝癌前病变的作用机制之一。     

一贯煎对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响

目的：探讨一贯煎对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的肝纤维化大鼠肝脏胶原代谢的影响。方法：腹腔注射CCl49周制备大鼠肝纤维化模型,于造模第3周、第6周末各处死6只大鼠作动态观察,自第7周起将模型大鼠随机分为模型对照组和干预组。干预组于继续造模的同时给予一贯煎灌胃3周,正常组与模型对照组大鼠给予同体积蒸馏水灌胃。第9周末处死全部大鼠,采集肝组织标本,检测肝组织组织金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1,TI MP-1）、-2,基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）、-14,α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）,Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ,ColⅠ）等的蛋白表达以及MMP-2、-9的活性。结果：与正常大鼠比较,造模第3、6和9周时肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维增生程度增加,肝组织α-SMA、ColⅠ、TI MP-1、TI MP-2、MMP-13、MMP-14蛋白表达和MMP-2、MMP-9活性逐渐升高（P〈0.05或P〈0.01）;与9周模型组比较,一贯煎组大鼠胶原纤维增生程度显著减轻（P〈0.05）,肝组织α-SMA、ColⅠ、TI MP-1、TI MP-2、MMP-13和MMP-14蛋白表达及MMP-2、MMP-9活性显著降低（P〈0.01）。结论：一贯煎可以抑制肝星状细胞活化,抑制胶原的合成,促进过度增生的胶原纤维的降解,从而抑制CCl4诱导大鼠肝硬化的形成。     

肝心宁对大鼠肝纤维化α-SMA,MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响

目的研究肝心宁对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）蛋白表达的影响。方法将68只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组。采用四氯化碳皮下注射并饲以高脂低蛋白饲料和30%酒精诱导大鼠肝纤维化模型。各组分别处理,6周末用免疫组织化学染色法检测肝组织中α-SMA,MMP-13及TIMP-1蛋白表达情况。结果肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组和秋水仙碱组与模型组相比,α-SMA及TIMP-1均明显降低,P〈0.05;肝心宁高剂量组与肝心宁低剂量组和秋水仙碱组相比,α-SMA及TIMP-1均明显降低,P〈0.05;肝心宁高剂量组、肝心宁低剂量组和秋水仙碱组与模型组相比,MMP-13显著升高,P〈0.05;肝心宁高剂量组与肝心宁低剂量组和秋水仙碱组相比,MMP-13显著升高,P〈0.05。结论肝心宁抑制大鼠肝脏纤维组织的形成可能与其降低α-SMA,TIMP-1蛋白表达并增强MMP-13蛋白表达有关。     

三甲益肝冲剂和螺内酯对大鼠肝纤维化预防作用

目的探讨复方中药三甲益肝冲剂(S-JG)联合螺内酯对肝纤维化的预防机制和效果。方法雄性SD大鼠50只,随机分为模型组(A组),螺内酯组(B组),S-JG组(C组),S-JG联合螺内酯组(D组)和正常对照组(E组)各10只。A、B、C、D各组均以二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型;A组造模同时给予生理盐水灌胃,B组和C组造模同时分别给予螺内酯和S-JG灌胃;D组造模同时给予S-JG和螺内酯灌胃;E组腹腔注射等量生理盐水并用自来水灌胃,共4周。4周后取肝组织标本,行HE和Masson染色,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)。结果(1)肝脏病理学改变:A组可见较粗的纤维间隔向肝小叶伸展;B、C组可见稍细的纤维间隔;D组可见更细的纤维间隔从汇管区向肝小叶伸展。(2)Masson染色胶原纤维面积比较:A、B、C、D组胶原面积比E组显著增加(P<0.01),应用药物组胶原面积较A组均减轻(P<0.01),以联合用药组最明显,B组与C组比较P>0.05,余组间比较P<0.01;(3)-αSMA、MMP-2和TIMP-1免疫组化检测结果:A组均为强阳性表达,B组和C组表达少于A组,D组表达很少,比较有显著差异(P<0.01)。结论S-JG和螺内酯可能通过部分抑制肝星状细胞的活化从而抑制MMP-2和TIMP-1的表达发挥抗肝纤维化作用,两者效果相似,但联合用药效果更好。     

下瘀血汤全药与组分处方对免疫性肝纤维化大鼠肝组织COL-Iα1、TIMP-1 mRNA表达影响的比较研究

目的:比较下瘀血汤全药与组分处方对免疫性肝纤维化大鼠肝组织I型胶原α1多肽链(COL-Iα1)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)表达的作用差异,探讨下瘀血汤全药与组分处方抗肝纤维化的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、造模组。造模组大鼠腹腔注射猪血清复制肝纤维化模型,每次0.5 ml/只,每周2次,共12周。造模成功后造模组大鼠随机分为模型组、下瘀血汤组、组分处方组,第8周开始下瘀血汤组、组分处方组大鼠造模同时灌胃给药,按每千克体质量10 ml的容积,下瘀血汤组每日2.34 g/kg,组分处方组每日0.648 g/kg,连续4周。正常组、模型组大鼠给予同体积0.9%NaCl溶液。12周末,处死动物,获取标本,实时荧光定量PCR检测肝组织COL-Iα1、TIMP-1 mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组COL-Iα1、TIMP-1mRNA的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,下瘀血汤组、组分处方组COL-Iα1、TIMP-1mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与组分处方组比较,下瘀血汤组COL-Iα1、TIMP-1mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);相关性分析表明COL-Iα1、TIMP-1 mRNA的表达呈显著正相关。结论:下瘀血汤全药与组分处方可通过抑制TIMP-1 mRNA和COL-Iα1表达而发挥抗肝纤维化作用,且下瘀血汤全药处方作用优于组分处方。     

血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠MMP-9及TIMP-1的影响

目的研究血府逐瘀汤对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠动脉斑块基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织抑制物1（TIMP-1）的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、血府逐瘀汤组,对照组给予正常饲料,模型组给予高脂饲料,血府逐瘀汤组给予高脂饮食同时给予该药干预。12周后,处死大鼠,取主动脉免疫组化法观察主动脉斑块内MMP-9和TIMP-1的表达水平。结果血府逐瘀汤组MMP-9的表达较模型组明显减少（P〈0.05）,TIMP-1表达明显升高（P〈0.05）。结论血府逐瘀汤可以通过下调动脉粥样硬化大鼠动脉斑块内MMP-9的表达,升高TIMP-1表达,起到防治动脉粥样硬化和稳定斑块的作用。     

MMP-2/9活性与TIMP-1/2蛋白表达在大鼠肺纤维化形成中的变化特点

目的观察大鼠肺纤维化形成过程中基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)-2/9的活性及其活性抑制物——基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinase,TIMP)-1/2蛋白表达的动态变化,探讨肺纤维化形成过程中细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)降解的调控规律。方法SD大鼠48只,随机分为模型组(30只)与正常对照组(18只)。模型组大鼠予以1次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型,正常对照组大鼠于气管内注入等量生理盐水。每组再各设1d、3d和1、2、3、4周共6个时间观察点,动态观察大鼠肺系数的变化。HE染色观察大鼠肺组织病理学的改变;Masson染色观察大鼠肺组织胶原沉积情况;Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)的含量;Western印迹法分析肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达变化;明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性。结果与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠染毒后2周其肺组织发生局灶性病变,肺泡壁与间隔增厚,肺泡腔与间质内有大量炎细胞浸润,伴有少量成纤维细胞;肺系数明显增高;肺组织内Hyp含量稍升高;MMP-2/9蛋白的表达与活性增加,以活化型MMP-2增加更为明显;TIMP-1/2蛋白的表达则逐渐增加。模型组大鼠染毒后3~4周时,肺泡结构遭到破坏,部分肺泡腔塌陷消失,由胶原纤维和成纤维细胞占据,肺泡壁与间隔进一步增厚,形成严重的肺纤维化;肺系数较2周时有所下降,肺组织Hyp含量和TIMP-1/2蛋白的表达明显增加,至染毒后4周时最为明显;MMP-2/9活性较2周时有所下降,尤以活化型MMP-2的活性下降较为明显。结论博来霉素诱导肺纤维化形成过程中,早期肺组织的病理学变化以肺泡炎症为主,肺组织内MMP-2/9活性增高;后期以纤维化为主,肺组织TIMP-1/2表达明显增加,MMP-2/9活性则有所下降。     

柔肝化纤颗粒对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠肝脏MMP-2、TIMP-2的影响

目的探讨柔肝化纤颗粒对CCI_4诱导的肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-2抑制剂(TIMP-2)的影响。方法选取健康清洁SPF级大鼠78只,随机分为正常对照组(A组)、病理模型组(B组)、柔肝化纤颗粒组(C组)、大黄(?)虫丸组(D组)及秋水仙碱对照组(E组),后4组均建立CCI_4诱导的肝纤维化大鼠模型,而后分别给予生理盐水、柔肝化纤颗粒、大黄(?)虫丸、秋水仙碱灌胃,治疗5周、10周后分别取大鼠肝组织,采用免疫组织化学染色及计算机图像分析技术检测MMP-2及,TIM P-2。结果治疗5周、10周时与A组比较,B组肝组织炎性反应活动度计分、肝纤维化程度计分均明显升高(P<0.05),C、D、E组均较B组明显降低(P<0.05),其中C组下降较D、E组明显(P<0.05),而D、E组间差异无统计学意义(P>0.05);与A组比较,B组MMP-2、TIMP-2、MMP-2/TIMP-2均明显增高(P<0.05);与B组比较,C、D、E组MMP-2、TIMP-2表达、MMP-2/TIMP-2明显降低(P均<0.05),C组下降较D、E组更明显(P<0.05),而D、E组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论柔肝化纤颗粒能通过调节TIMP-2/MMP-2比例发挥对肝纤维化的防治作用。     

血府逐瘀方对动脉粥样硬化大鼠MMP-2及TIMP-2的影响

目的：通过研究血府逐瘀方对动脉粥样硬化大鼠动脉斑块组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）及基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）表达的影响,探讨血府逐瘀方抗动脉粥样硬化作用的可能机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、血府逐瘀方组。对照组给予正常饲料,采用腹腔注射维生素D3及饲喂高脂饲料的方法建立大鼠动脉粥样硬化模型。实验结束后,取大鼠主动脉粥样硬化组织检测MMP-2和的TIMP-2的表达水平。结果HE染色光镜下显示,对照组动脉壁形态结构完整,模型组动脉内膜粗糙,中膜平滑肌增生排列紊乱,血府逐瘀方组形态介于二者之间;免疫组化观察,与对照组相比,模型组和血府逐瘀方组MMP-2的表达显著升高,TIMP-2的表达显著下降;血府逐瘀方组与模型组相比,MMP-2表达显著降低,TIMP-2表达显著升高。结论血府逐瘀方能抑制动脉粥样硬化的形成,其机制可能与其能下调动脉粥样硬化大鼠动脉粥样硬化组织内的MMP-2的表达及升高TIMP-2表达有关。     

五味子乙素对染矽尘大鼠肺组织MMP-9和TIMP-1 mRNA表达的影响

目的观察五味子乙素（schisandrin B,Sch-B）对染矽尘大鼠肺组织基质金属蛋白酶（MMP-9）及其组织抑制剂（TIMP-1）mRNA表达的影响,探索其防治矽肺纤维化的作用机制。方法将48只大鼠随机分为对照组、染矽尘组和Sch-B干预组,每组16只,采用暴露式气管内注入法给染矽尘组和Sch-B干预组大鼠一次性染矽尘（50mg／只）,同法对照组大鼠给予生理盐水（1ml／只）。染尘后第1d开始灌胃给药,Sch-B干预组给予Sch-B（80mg·kg^-1d^-1）,其他组给予等体积的橄榄油。不同处理7d和28d后,各组分别取8只大鼠处死,取其肺组织用逆转录聚合酶链式反应（RT-RCR）方法测定大鼠肺组织MMP-9及TIMP-1基因的表达。结果大鼠染矽尘后,MMP-9mRNA表达升高,在两个时间点,与相应的对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）;TIMP-1mRNA表达仅在第7d时有所升高（P〈O．05）。五味子组与染矽尘组相比,MMP-9mRNA表达仅在第7d时有所下降（P〈0．05）,TIMP-1mRNA表达则无明显变化。结论Sch-B对染矽尘大鼠肺纤维化的抑制作用可能与早期降低MMP-9mRNA的表达和各个时段在一定程度上对MMP9和TIMP-1 mRNA的表达量进行调整,从而使MMP-9／TIMP-1趋于平衡有关。     

参龙煎剂对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织基质金属蛋白酶2与金属蛋白酶组织抑制剂1表达的影响

目的：观察博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中基质金属蛋白酶2（matrixmetalloproteinase-2,MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制剂1（tissue inhibitor of metallo proteinase-1,TIMP-1）mRNA的表达,探讨中药复方参龙煎剂防治大鼠肺纤维化的作用机制。方法：230只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松组和参龙煎剂低、中、高剂量组,采用气管内注入博来霉素的方法建立Wistar大鼠肺纤维化模型。正常对照组和模型组大鼠第2日起每日予生理盐水灌胃,其余各组大鼠按配好的参龙煎剂以等容药品灌胃。苏木素-伊红染色和Masson染色观察不同时间点大鼠肺组织病理变化,以评价模型是否成功。逆转录聚合酶链反应检测大鼠肺组织MMP-2和TIMP-1mRNA的表达水平。结果：各组大鼠肺组织在各个时间点均有MMP-2和TIMP-1mRNA表达。与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠在第7天时MMP-2和TIMP-1mRNA基因转录水平均显著增高,尤以MMP-2mRNA增加明显,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;在第14天时,MMP-2和TIMP-1mRNA的基因转录表达继续增高,但TIMP-1mRNA增加更显著,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;第28天时,MMP-2已有所下降,但TIMP-1mRNA表达仍持续性增高,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。与模型组大鼠比较,治疗组大鼠第7天MMP-2和TIMP-1mRNA基因转录水平降低,尤其是MMP-2的表达降低更明显,第28天时这种降低作用仍持续存在,以参龙煎剂中剂量组大鼠表现最明显,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：参龙煎剂可能是通过上调TIMP-1mRNA的表达来抑制MMP-2mRNA表达水平,从而起到延缓肺纤维化的作用。