成年糖尿病大鼠睾丸、附睾和前列腺内雄激素受体的表达研究

目的:观察糖尿病大鼠睾丸、附睾和前列腺内是否存在雄激素受体(AR)的异常表达。方法:用链脲菌素(STZ)诱导成年大鼠糖尿病模型,实验分正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)及胰岛素治疗组(ID组),分别以Northern印迹及放射配基法检测睾丸、附睾和前列腺内AR的mRNA及蛋白质水平。结果:D和ID组血清睾酮水平低于C组(P<0.05);附睾内D和ID组AR的mRNA水平低于C组(P<0.05),睾丸和前列腺内D组AR的蛋白质水平低于C组(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠睾丸、附睾和前列腺内AR的表达降低,从而削弱了雄激素的生物利用度,这可能是导致患病大鼠性与生殖功能障碍的原因之一。     

糖尿病雄性大鼠性腺5α-还原酶Ⅱ型活性变化

目的 :探讨大鼠青春期和成年期糖尿病时性腺 5α 还原酶Ⅱ型的活性变化。　方法 :取 4 0d和 90d龄雄性Wistar大鼠各 30只 ,分别分为对照组 (C)、糖尿病组 (D)和胰岛素治疗糖尿病组 (ID)。采用薄层层析法测定各组附睾头、附睾尾、前列腺和睾丸组织内 5α 还原酶 Ⅱ型的活性。　结果 :①青春期大鼠性腺的各部位内 ,5α 还原酶 Ⅱ 型的活性D组均明显低于C组 (P <0 .0 1) ,而ID组明显高于D组 (P <0 .0 1) ;②成年期大鼠性腺的各部位内 ,5α 还原酶 Ⅱ型的活性在C、D和ID组各组间差异无显著性 (P均 >0 .0 5 )。　结论 :青春期大鼠性腺内 5α 还原酶 Ⅱ型的活性更易受代谢环境、激素水平及局部特异性因素的影响 ,而成年期大鼠性腺内 5α 还原酶Ⅱ 型的活性相对稳定     

胃转流术对非肥胖型2型糖尿病大鼠骨骼肌组织中MG53蛋白表达的影响

目的研究胃转流术对非肥胖型2型糖尿病(T2DM)大鼠骨骼肌组织中E3泛素连接酶—mitsugumin53(MG53)蛋白及其mRNA,以及胰岛素受体底物1(IRS-1)mRNA表达的影响,探讨胃转流术改善骨骼肌胰岛素抵抗的可能机制。方法将24只雄性GK大鼠随机分为糖尿病手术组、糖尿病假手术组及糖尿病对照组,每组8只,若大鼠死亡,则重新制备模型补充;另外以8只Wistar大鼠作为正常对照组。应用Westem blot技术检测4组大鼠术后第8周时骨骼肌组织中MG53蛋白的表达水平,应用RT-PCR技术检测4组大鼠术后第8周时骨骼肌组织中IRS-1 mRNA和MG53 mRNA的表达水平。结果①糖尿病假手术组及糖尿病对照组大鼠的MG53 mRNA及其蛋白的表达水平均高于正常对照组和糖尿病手术组(P<0.05),但糖尿病手术组和正常对照组间比较、糖尿病假手术组和糖尿病对照组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。②与正常对照组比较,糖尿病手术组、糖尿病假手术组及糖尿病对照组大鼠的IRS-1 mRNA的表达水平均较低(P<0.05),但糖尿病手术组、糖尿病假手术组及糖尿病对照组大鼠的IRS-1 mRNA的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胃转流术降低了非肥胖型T2DM大鼠骨骼肌组织中IRS-1蛋白的E3泛素连接酶—MG53蛋白的表达水平,减少了IRS-1蛋白的泛素化降解,这可能是骨骼肌胰岛素信号通路中IRS-1蛋白表达上调的主要机制之一,从而改善了骨骼肌的胰岛素抵抗,降低了血糖。     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响

目的:研究银杏叶提取物(EGB)对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机均分成3组:正常对照组、2型糖尿病组、EGB治疗组。用光镜和透射电镜观察EGB对2型糖尿病大鼠睾丸的形态学改变;ELISA法检测血清LH、T水平;半定量RT-PCR检测睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a-羟化酶(P450c17)、3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(3β-HSD1)、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型(17β-HSD3)的mRNA水平。结果:糖尿病组光镜下睾丸间质细胞较正常对照组缩小;透射电镜下见到间质细胞核固缩,胞质内内质网减少。糖尿病组血清LH及T水平显著低于正常对照组(P<0.05);睾丸组织P450scc的mRNA水平显著低于正常对照组(P<0.01),StAR、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平也明显低于正常对照组(P<0.05),P450c17基因表达呈下降趋势(P>0.05);EGB治疗12周与糖尿病组比较睾丸组织病理改变较轻,血清LH、T含量升高(P<0.05),StAR、P450scc的mRNA水平升高(P<0.05),P450c17、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平呈上升趋势(P>0.05)。结论:EGB能减轻糖尿病大鼠睾丸损害并使2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞合成和分泌T能力增强。     

苯丙酸诺龙对烧伤后α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA表达影响的实验研究

目的探讨苯丙酸诺龙对烧伤后成纤维细胞α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA表达的影响及其作用机制. 方法 Wistar 大鼠32只,制成20%TBSA深Ⅱ度烧伤模型,随机分为苯丙酸诺龙治疗(NP)组和对照组,于4、7、14和21天分别取创面肉芽组织,测定其成纤维细胞中雄激素受体及α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA含量,分析比较两组间成纤维细胞雄激素受体和α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA的表达及其相关关系. 结果 NP组在7、14和21天α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA的表达均高于同期对照组,两组间比较有统计学意义(P＜0.05).NP在4、7、14和21天成纤维细胞雄激素受体的表达均明显高于同期对照组,有统计学意义(P＜0.05).雄激素受体的表达与胶原蛋白基因的表达之间有相关关系,且有统计学意义. 结论 NP能促进Ⅰ型前胶原蛋白mRNA和成纤维细胞雄激素受体的表达,二者间存在正相关关系,NP在转录水平促进胶原蛋白的合成,这种作用与改变成纤维细胞雄激素受体的含量有关.     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中神经生长因子的表达及其治疗作用的研究

目的:本研究通过检测糖尿病性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎组织中神经生长因子(NGF)表达,并使用hNGF进行治疗,以探讨糖尿病性ED发病机制及NGF治疗作用的机制。方法:成年雄性SD大鼠60只,随机取50只大鼠用于制作糖尿病模型,饲养8周后,取正常组和糖尿病组大鼠阴茎海绵体组织,采用RT-PCR和W estern印迹法检测NGF的mRNA及蛋白水平。从造模成功的糖尿病大鼠中筛选出有ED大鼠,把所有大鼠分为5组:正常组、糖尿病性ED组、糖尿病性ED单用NGF组(NGF组)、糖尿病性ED单用胰岛素组(R I组)、糖尿病性ED联合应用NGF和胰岛素组(NGF+R I组,胰岛素通过颈部皮下注射给药,NGF通过腹腔内注射给药),8周后测海绵体内压(ICP),并取所有大鼠阴茎海绵体组织用免疫组化法观察nNOS神经纤维的变化。结果:与正常组相比,糖尿病性ED组大鼠阴茎海绵体组织中NGF的mRNA表达增加,蛋白含量增加。与糖尿病性ED组相比,NGF组、R I组、NGF+R I组ICP水平显著升高(P<0.05);NGF组、R I组、NGF+R I组阴茎组织中nNOS神经纤维水平显著升高(P<0.05)。结论:糖尿病晚期勃起神经出现损伤并发生ED,推测可能与NGF分泌增加的幅度小于高血糖状态对勃起神经的损伤程度有关,也可能与NGF与其相应受体结合转运能力损害有关,给予外源性NGF可能有助于糖尿病性ED局部神经病变减轻和勃起功能改善。提示NGF的异常在糖尿病性ED的发病及治疗中可能具有重要作用。     

内皮素受体阻断剂对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ1型受体表达的影响

目的：观察糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ1型（AT1）受体的改变以及内皮素受体阻断剂bosentan对其影响。方法：将SD大鼠建成链脲佐菌素诱导的糖尿病模型,设非治疗组、bosentan治疗组和正常对照组。4周后采用免疫组织化学、Western blot及RT－PCR方法检测肾脏AT1受体基因和蛋白表达。结果：与SD对照组相比,糖尿病大鼠存在明显的蛋白尿和内生肌酐清除率升高,其肾脏AngⅡ水平明显升高,同时伴有AT1受体的mRNA和蛋白表达显著下降。bosentan能显著缓解上述异常。结论：糖尿病大鼠肾脏AngⅡ及AT1受体表达明显异常,bosentan具有治疗作用。     

金钱草提取物对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及对肾组织Akt/GSK-3β信号通路的影响

目的:探讨金钱草提取物经Akt/GSK-3β信号通路对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用。方法:SD大鼠120只,随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、金钱草提取物低、中、高剂量组,每组20只,雌雄各半。构建大鼠糖尿病肾病模型,并给予相应药物。检测大鼠血糖浓度和大鼠肾功能;制作HE切片,观察大鼠肾脏病理改变;检测大鼠肾脏Akt、GSK-3βmRNA表达水平; ELISA法检测大鼠肾脏Akt、GSK-3β蛋白水平表达。结果:正常对照组大鼠肾脏细胞结构完整,染色清晰,肾小管结构完整,模型组大鼠肾脏细胞大量坏死和肾小球出血;给予金钱草提取物和α-硫辛酸干预后,肾脏细胞结构完整,未见肾小球肥大及基底膜增厚。与正常对照组比较,模型组大鼠中期和末期血糖、24 h尿蛋白、肾脏指数、GSK-3βmRNA和蛋白表达水平均显著升高(P 0.05),肌酐清除率、Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P 0.05)。给予金钱草提取物和α-硫辛酸干预后,金钱草提取物各剂量组和阳性对照组大鼠血糖、24 h尿蛋白、肾脏指数、GSK-3βmRNA和蛋白表达水平降低(P 0.05),且高剂量和中剂量组低于低剂量组,高剂量组低于中剂量组(P 0.05),阳性对照组和高剂量组差异无统计学意义(P 0.05);肌酐清除率、Akt mRNA和蛋白表达水平升高(P 0.05),且高剂量和中剂量组高于低剂量组,高剂量组高于中剂量组(P 0.05),阳性对照组和高剂量组差异无统计学意义(P 0.05)。结论:金钱草提取物对糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能是通过抑制GSK-3β、促进Akt蛋白的表达水平,从而扭转糖尿病对大鼠肾脏造成的损伤。     

纳米钙补肾中药对骨质疏松症大鼠肠黏膜中 1，25(OH)2D3受体的mRNA和蛋白表达影响

目的研究骨质疏松症大鼠肠黏膜中维生素1,25(OH)2D3受体的mRNA和蛋白表达,揭示骨质疏松症的发病机制;同时,阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制。方法切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,采用纳米钙组及具有益肾填精、补钙壮骨作用的纳米钙补肾中药(大、中、小)剂量对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、雌二醇(E2)及钙尔奇D600作为阳性对照组,正常大鼠和模型空白组为空白对照组;用PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠肠黏膜中维生素1,25(OH)2D3受体的mRNA和蛋白表达。结果RT-PCR及Western方法检测,正常大鼠肠黏膜中含有维生素1,25(OH)2D3受体的mRNA和蛋白表达;模型空白组大鼠肠黏膜组织中的mRNA和蛋白表达水平有明显的下降。纳米钙、纳米钙补肾中药各剂量组、钙尔奇D600组、骨疏康和雌二醇E2组用药后12周,与模型空白组比较,可不同程度上调肠黏膜组织中的mRNA和蛋白表达水平。但其中各治疗用药组的效果有所不同,一般表现为纳米钙补肾中药剂量组作用较好。结论①正常大鼠肠黏膜组织可以在基因、蛋白水平表达维生素1,25(OH)2D3受体,而且在肠钙吸收中可能起到重要作用。②大鼠骨质疏松症的发生,与肠黏膜组织中维生素1,25(OH)2D3受体的mRNA和蛋白表达的变化有关,从而影响肠钙的吸收。③纳米钙补肾中药通过调控大鼠肠黏膜维生素1,25(OH)2D3受体的mRNA和蛋白表达,促进肠钙的吸收,对于骨质疏松症有一定的防治作用。     

糖尿病大鼠睾丸组织中iNOS及ROS含量的变化

目的 检测糖尿病大鼠睾丸组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及活性氧(ROS)的含量变化.方法 构建雄性糖尿病大鼠模型,成功造模2个月时,取睾丸组织,分别应用实时荧光定量PCR、Western blot检测正常对照组及糖尿病组大鼠睾丸组织内iNOS mRNA和蛋白的表达,用二氢乙啶活性氧探针检测ROS的含量.结果 糖尿病组大鼠睾丸组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及ROS的含量较正常对照组均明显增高(P＜ 0.05).结论 糖尿病组大鼠睾丸组织中iNOS及ROS的含量较正常对照组明显升高,iNOS与ROS可能参与了糖尿病睾丸组织的病理生理改变.     

雄激素受体mRNA在大鼠颌下腺的定位及功能

目的 :探讨大鼠颌下腺雄激素受体 (AR)mRNA的定位 ,并对其潜在的功能作进一步的研究。　方法 :采用原位杂交技术检测ARmRNA在颌下腺的定位 ,并用放射免疫分析技术测定培养细胞上清液中表皮生长因子(EGF)的含量。　结果 :ARmRNA主要分布在颌下腺的分泌管、排泄管及周围的浆液性腺泡上皮细胞内。信号物质均分布在胞质内 ,胞核阴性 ;在实验组加入一定浓度的睾酮后 ,培养细胞的上清液中EGF的浓度与对照组相比显著升高 (P <0 .0 5 )。　结论 :大鼠颌下腺有AR的存在 ,且AR是由颌下腺自身合成的。雄激素作用于培养的颌下腺细胞 ,能引起培养细胞分泌EGF能力的增加 ,说明雄激素与颌下腺上的AR结合后 ,通过特定的生理过程 ,刺激了颌下腺的分泌功能。提示AR基因可能在调节颌下腺功能方面起重要作用。     

糖尿病大鼠骨质疏松发病过程中骨桥蛋白变化的实验研究

目的 研究糖尿病大鼠骨质疏松发病过程中骨桥蛋白的表达。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分成2组，糖尿病大鼠组12只，空白对照组12只，饲养4月后处死动物，检查骨桥蛋白mRNA水平表达。 结果 糖尿病组骨桥蛋白总RNA提取及RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳显示，糖尿病组大鼠在骨质疏松发病过程中，骨桥蛋白在骨组织中高表达，与空白对照组相比，差异具有显著性。 结论 骨桥蛋白在糖尿病大鼠骨组织有显著性改变，推测骨桥蛋白参与调节骨质疏松发病过程。     

Expression of transforming growth factor beta1 gene, basic fibroblast growth factor gene and hydroxyproline in diabetes-induced bladder dysfunction in a rat model

AIMS: To investigate the content of hydroxyproline (Hyp) and the expression of transforming growth factor beta1 (TGF beta1) and basic fibroblast growth factor (bFGF) in the bladder 8 weeks after diabetes induction. METHODS: Thirty wistar rats were divided into three groups: control (n = 10), streptozotocin-induced diabetic group (n = 10), TAD group (n = 10; diabetic rats were fed with Tadenan 100 mg kg(-1) day(-1)). Eight weeks later, the bladders were dissected. RT-PCR, immunohistochemistry, and ELISA were used to detect the expression of TGF beta1 and bFGF in the bladder. Also hydroxyproline (Hyp) was measured using a method based on alkaline hydrolysis. RESULTS: The content of hydroxyproline in the diabetic group was greater than that of control group (P < 0.05); we found significantly increased expression of TGF beta1 mRNA and bFGF mRNA in the bladder from the diabetic group compared with the control group; immunohistochemical and ELISA studies showed a statistically significant increased expression of TGF beta1 protein and bFGF protein in the bladder from the diabetic group compared with the control group (P < 0.05). The content of hydroxyproline in TAD group was less than that of diabetic group (P < 0.05); mRNA expression of TGF beta1 and bFGF greatly decreased in TAD group compared with that of the diabetic group; immunohistochemical and ELISA studies showed decreased levels of TGF beta1 protein and bFGF protein in the bladder from TAD group compared with the diabetic group (P < 0.05). CONCLUSIONS: Rats with streptozoticin-induced diabetes mellitus showed significant increase in hydroxyproline, TGF beta1 and bFGF levels in their bladders, which may be an important mechanism inducing diabetic cystopathy. Tadenan could effectively reduce hydroxyproline, TGF beta1, and bFGF levels.     

Localization and potential function of androgen receptor in rat salivary gland

Aim： To investigate the localization and quantity of androgen receptor （AR） in the salivary glands of rats with further analysis on the effect of castration. Methods： Sixty male Wistar rats, aged 30-60 days, were randomly divided into three groups （castrated, sham-operated and normal controls） with 20 rats in each group. The rats in the castrated group were castrated and the submaxillary glands were removed after 1 week. The salivary glands of the rats in the sham-operated and the normal control groups were also removed. Parts of the salivary glands were fixed for immuohistochemistry and in situ hybridization assays. Other parts were used for Western blot. Results： AR immunoreactivity in the three groups was localized in the glandular epithelial cells of the serous acinus and the glandular duct of the salivary gland, mainly in the nuclei. AR mRNA hybridization signals in the salivary glands of the castrated group were mainly distributed in the epithelial cells of the convoluted and secretary ducts; AR mRNA in the sham-operated and the normal control groups were found in the epithelial cells of the convoluted, the secretary and the excretory ducts. The quantity of AR in the salivary glands was decreased significantly in the castrated rats compared with the sham-operated and the normal controls. Moreover, epidermal growth factor （EGF） secreted by the salivary glands was also decreased in the castrated rats. Conclusion： Castration appears to affect the production of AR in the salivary gland and the distribution of the AR mRNA and could further affect the function of the salivary gland. The changes of AR and the distribution of AR mRNA may play an important role in the interactions between the testes and the salivary gland. （Asian J Androl 2005 Sep; 7： 295-301）