GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症患者间质细胞 分泌VEGF作用的比较

目的：测定GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症（EMs）患者离体培养子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨GnRH II对EMs患者可能的作用。方法：给予原代培养的EMs患者在位及异位子宫内膜间质细胞不同浓度的GnRH II,GnRH I类似物（戈舍瑞林,goserelin）处理,同时设对照组（不加GnRH）,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中VEGF浓度,并进行比较。结果：EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞经48 h培养,能分泌VEGF,分泌量与在位子宫内膜间质细胞的相近,两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）,且较GnRH I类似物（戈舍瑞林）的作用更强（P＜0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF分泌的抑制作用明显强于在位（P＜0.05）。结论：EMs患者的异位子宫内膜间质细胞具有分泌VEGF的功能,分泌量与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH II呈剂量依赖性地抑制异位内膜间质细胞分泌VEGF,其抑制作用明显强于在位,且GnRH II明显强于GnRH I,为寻找EMs抗血管形成方面的新药治疗提供了新的依据。     

GnRH Ⅱ与GnRH Ⅰ对子宫内膜异位症患者间质细胞分泌VEGF作用的比较

目的:测定GnRH Ⅱ与GnRH Ⅰ对子宫内膜异位症(Ems)患者离体培养子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨GnRH Ⅱ对Ems患者可能的作用.方法:给予原代培养的Ems患者在位及异位子宫内膜间质细胞不同浓度的GnRH Ⅱ,GnRH Ⅰ类似物(戈舍瑞林,goserelin)处理,同时设对照组(不加GnRH),采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中VEGF浓度,并进行比较.结果:Ems患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞经48 h培养,能分泌VEGF,分泌量与在位子宫内膜间质细胞的相近,两者比较差异无统计学意义(P＞0.05).不同浓度的GnRH Ⅱ对Ems患者离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,呈剂量依赖性(P＜0.05),且较GnRH Ⅰ类似物(戈舍瑞林)的作用更强(P＜0.05).不同浓度的GnRH Ⅱ对Ems患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF分泌的抑制作用明显强于在位(P＜0.05).结论:Ems患者的异位子宫内膜间质细胞具有分泌VEGF的功能,分泌量与在位子宫内膜的相近,这对Ems的形成和发展可能起重要作用.GnRH Ⅱ呈剂量依赖性地抑制异位内膜间质细胞分泌VEGF,其抑制作用明显强于在位,且GnRH Ⅱ明显强于GnRH Ⅰ,为寻找Ems抗血管形成方面的新药治疗提供了新的依据.     

GnRHⅡ与GnRH Ⅰa对子宫内膜异位症患者离体间质细胞增殖抑制的影响

目的:探讨Ⅱ型促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormoneⅡ,GnRHⅡ)与Ⅰ型促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin-releasing hormoneⅠagonist,GnRH Ⅰa)对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者离体培养的子宫内膜间质细胞增殖抑制的影响.方法:将不同浓度的GnRHⅡ或GnRH Ⅰa加入在位及异位离体培养内膜间质细胞培养液中培养24,48及72 h,用MTT法测定间质细胞的存活情况,计算抑制率并进行比较.结果:GnRHⅡ或GnRH Ⅰa对离体培养的子宫内膜间质细胞的细胞增殖抑制率呈剂量和时间依赖性,差异均有统计学意义(P＜0.05);且对异位子宫内膜间质细胞的增殖抑制率高于在位,差异有统计学意义(P＜0.05).GnRHⅡ对离体间质细胞的抑制作用强于GnRH Ⅰa,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:GnRHⅡ对EMs患者离体培养子宫内膜间质细胞,尤其对异位子宫内膜间质细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性;且抑制作用明显强于GnRH Ⅰa,提示GnRHⅡ有望成为治疗子宫内膜异位症更有效的新药.     

GnRHa对离体培养异位、在位内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响

目的 研究GnRHa对子宫内膜异位症(简称内异症)患者离体培养异住、在位子宫内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响.方法 体外原代培养人内异症异位、在位子宫内膜间质细胞,用10-10M、10-8和10-6M的GnRHa分别干预,用MTT法测定内膜间质细胞的生长增殖情况;用ELISA法测定其分泌的血管内皮生长因子(VEGF)浓度的变化.结果 GnRHa可抑制内异症异位及在位内膜间质细胞的生长增殖,呈剂量和时间依赖性(P<0.05).且对异位内膜问质细胞生长的抑制率明显高于在位(P<0.05);GnRHa可降低异位及在位内膜间质细胞分泌的VEGF的浓度,呈剂量依赖性(P<0.05),且高浓度(10-6M)对异位强于在位(P<0.05).结论 GnRHa可明显抑制子宫内膜异位症患者异住、在位子宫内膜间质细胞的生长,降低其分泌VEGF的浓度.     

孕酮对异位子宫内膜间质细胞MMP-2和MMP-9表达的影响

目的：研究孕酮对体外培养异位内膜间质细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响。方法：采用明胶酶谱分析法测定17例卵巢内异症患者异位内膜、12例内异症患者在位内膜和14例正常对照组在位内膜体外培养的间质细胞上清中MMP-2,MMP-9的水平,并予不同浓度的孕酮对15例异位内膜细胞进行干预,测定干预后的MMP-2,MMP-9水平。结果：异位内膜间质细胞分泌的MMP-2,MMP-9高于子宫内膜异位症在位内膜间质细胞和对照组间质细胞（分别P<0.01,P<0.05）。浓度为10-9mol/L孕酮可以明显抑制异位内膜间质细胞MMP-2和MMP-9的分泌。大于10-7mol/L浓度孕酮几乎可以完全抑制异位内膜间质细胞分泌MMP-9,但不能完全抑制MMP-2的分泌。结论：孕激素可以抑制异位内膜间质细胞MMP-2,MMP-9的分泌,尤其是抑制MMP-9的作用较强。     

孕酮对离体在位及异位子宫内膜细胞巨噬细胞移动抑制因子分泌的影响

目的:探讨孕酮对离体在位及异位子宫内膜细胞巨噬细胞移动抑制因子(MIF)分泌的影响。方法:采用 ELISA方法,检测10μmol/L、0.1μmol/L孕酮作用24h后,体外培养的在位及异位子宫内膜细胞上清液中MIF水 平。结果:与空白组比较,高、低浓度孕酮作用24h后的在位及异位子宫内膜细胞MIF分泌量减少;异位内膜组的 下降程度大于在位内膜组(P<0.01);高浓度孕酮作用强于低浓度孕酮组(P<0.05)。结论:孕酮对子宫内膜细胞 分泌MIF具有明显抑制作用,对异位内膜分泌能力的抑制作用更为显著。     

尿激酶型纤溶酶原激活物在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）在子宫内膜异位症（EMs）组织中的表达及意义。方法分别采用免疫组织化学 SP 法及 RT‐PCR 法检测正常子宫内膜组织30例,EMs 的在位内膜35例,EMs 的异位内膜35例,uPA 蛋白及 mRNA的表达。结果 uPA 蛋白主要定位于子宫内膜腺上皮细胞与间质细胞的细胞质中,极少数表达于血管内皮细胞中,在 EMs 异位内膜中的表达强于在位内膜、正常内膜,在 EMs 在位内膜中的表达强于正常内膜（P ＜0．05）。 uPA 蛋白在3组内膜的增生期与分泌期中的表达差异无统计学意义（P＞0．05）。 uPA mRNA 在 EMs 患者异位内膜中的相对表达量高于在位内膜和正常内膜,在内异症在位内膜中的表达高于正常内膜（P＜0．05）。结论 uPA 可能在 EMs 异位内膜的黏附、生长等方面起一定作用。     

米非司酮和利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞VEGF和PDGF的表达和体外增殖的影响

目的:探讨不同浓度的米非司酮和利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞血小板衍生生长因子(PDGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达和体外增殖的影响?方法:应用免疫组织化学法检测异位间质细胞PDGF表达?应用ELISA检测间质细胞培养基上清液中VEGF浓度?应用RT-PCR方法检测异位间质细胞PDGF?VEGF的表达?结果:米非司酮组0?1×10-6?1×10-5mol/L 浓度段,PDGF阳性率分别为65%?48%?34%(P<0.05);VEGF量分别为(561.8±22.4)?(417.4±24.8)?(319.4±24.9) ng/L (P<0.01)?利洛司酮组0?1×10-6?1×10-5mol/L 浓度段,PDGF阳性率分别为65%?45%?31%(P<0.05);VEGF量分别为(561.8±22.4)?(327.8±24.7)?(251.0±18.8) ng/L (P<0.01)?PDGF和VEGF蛋白和mRNA表达,米非司酮组高于利洛司酮组,对照组依次高于抗孕激素1×10-6和1×10-5 mol/L组?结论:米非司酮及利洛司酮以剂量依赖性方式抑制异位子宫内膜间质细胞的体外增殖, 其作用与降调细胞生长因子PDGF和VEGF的表达有关?     

人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞分离与培养

目的：建立子宫内膜异位症（EMs）异位、在位内膜间质细胞的体外细胞模型,实时观察间质细胞形态变化。方法胶原酶消化异位、在位内膜组织,二次筛网过滤结合低速离心法分离纯化间质细胞,应用免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,并进行传代培养,观察细胞生长状况及细胞形态差异。结果培养成功率91．3％,间质细胞纯度达95％;异位间质细胞9代内、在位及对照组间质细胞11代内,细胞形态及活性并无明显改变。结论子宫内膜间质细胞可为子宫内膜异位症研究提供较好的细胞模型。     

血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的表达

目的探讨血管内皮生长因子（vescular　endothelial　growth　facror，VEGF）在子宫内膜异住症发生发展中的作用。方法SP法检测子宫内膜异位症76例异位内膜、64例在位内膜和72例正常子宫内膜组织中VEGF的表迭。结果VEGF蛋白在异住内膜组、在位内膜纽和对照纽表达强度依次减弱；增生期VEGF表迭异位内膜强于在位和对照组内膜，而分泌期异位和在位内膜强于对照组；异位内膜组和在位内膜组分泌期VEGF表迭强于增生期，差异有统计学意义，对照组增生期和分泌期表达强度均较弱，差异无统计学意义。结论VEGF在子宫内膜异位症发生发展中发挥重要作用。     

子宫内膜异位症患者血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EM)发生发展中的作用及其临床意义。方法用SP法检测EM患者36例异位内膜、32例在位内膜和22例正常子宫内膜组织中VEGF的表达情况。结果(1)VEGF蛋白在正常内膜、异位内膜和在位内膜组织中阳性表达率依次升高。(2)异位内膜组和在位内膜组分泌期VEGF表达强于增生期,差异有统计学意义(P<0.05),对照组增生期和分泌期表达强度均较弱,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)分泌期VEGF表达,在位和异位内膜强于对照组,在位和异位内膜之间差异无统计学意义(P>0.05);增生期VEGF表达,三组内膜之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF的表达异常与EM的发病有关。     

瘦素和VEGF的阳性细胞在卵巢子宫内膜异位症中的病理学研究

【目的】探讨瘦素和血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EMs）发病机制中的作用。【方法】应用免疫组织化学法检测瘦素和血管内皮生长因子在28例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的异位内膜、在位子宫内膜及20例正常子宫内膜中的表达特点。【结果】①腺上皮细胞中：瘦素和VEGF在异位内膜和在位内膜中的表达均高于正常子宫内膜（P〈0．05），并且异位内膜中的表达高于在位内膜（P〈0．01）；②间质细胞中：瘦素在异位内膜中的表达高于在位内膜、正常子宫内膜（P〈0．01），VEGF在异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）；异位内膜、在位内膜中的瘦素与VEGF均呈正相关表达（P〈0．01）。【结论】瘦素和血管内皮生长因子在卵巢子宫内膜异位症的发病机制中发挥作用，两者在异位内膜和在位内膜中的血管生成过程中密切相关。     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞PI3K/Akt信号转导通路活化的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞磷脂酰肌醇3激酶/Akt(PI3K/Akt)信号转导通路活化的影响,探讨PI3K/Akt信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用. 方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞.用1×10-6 mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间(0、10、20、30、120 min),然后用MTT法检测子宫内膜间质细胞的活性,Western blot法检测细胞Akt的活化情况,确定子宫内膜间质细胞活性最强的时间点.用Western blot和MTT法分别检测不同浓度PI3K抑制剂LY294002对1×10-6 mol/L 17β-E2作用子宫内膜间质细胞20 min后Akt、细胞活性的影响. 结果 1×10-6 mol/L 17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,Akt活化在17β-E2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着LY294002作用浓度的增加,Akt活化水平逐渐下降,浓度为50 μmol/L时已被完全阻断;随着LY294002作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50 μmol/L和100 μmol/L时活性最低,但此时仍高于空白对照组.结论 17β-E2增强在位子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的PI3K/Akt信号转导通路有关.     

VEGF在子宫内膜异位症在位内膜的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EMs）在位内膜与对照组子宫内膜表达的差异。材料与方法取EMs在位内膜16例、正常子宫内膜（对照组）16例，以免疫组化染色法，研究VEGF在不同月经周期的表达。结果（1）VEGF在对照组子宫内膜基质及腺体细胞均有较高的阳性表达，增殖期高于分泌期（P〈0．05）。（2）在EMs在位内膜中，VEGF于增殖期在基质及腺体中表达降低，而于分泌期在基质细胞中表达明显升高（P〈0．05）。结论VEGF在EMs在位内膜分泌期基质中的高表达，提示EMs在位内膜基质细胞在分泌期侵袭、种植能力增强，验证了EMs“在位内膜决定论”的新概念。     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞ERK1/2信号转导通路活化的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路活化的影响,探讨ERK1/2信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用.方法 体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞.用1×10-6 mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间(0～120 min),然后用MTT法和免疫印迹法(Western blot)检测子宫内膜间质细胞的活性和ERK1/2的活化情况,检测出子宫内膜间质细胞活性最强的时间点.用Western blot和MTT法分别检测不同浓度ERK1/2抑制剂PD98059对1×10-6mol/L 17β-E2作用20 min后子宫内膜间质细胞活性及ERK1/2活性的变化.结果 1×10-6 mol/L 的17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,ERK1/2活化在17β-E2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着PD98059作用浓度的增加,ERK1/2活化水平逐渐下降,浓度为50 μmol/L时已被完全阻断;随着PD98059作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50 μmol/L和100 μmol/L时,活性最低,但此时仍高于空白对照组.结论 17β-E2增强子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的ERK1/2信号转导通路有关.     

EMs异位及在位内膜间质细胞Cx43的表达及GJIC功能的体外研究

目的:研究子宫内膜异位症(EMs)的异位与在位内膜间质细胞中Cx43的表达及间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能,探讨间质细胞GJIC功能异常对EMs发病的影响.方法:取24例卵巢处子宫内膜异位灶、41例EMs在位内膜以及30例正常子宫内膜,分离出间质细胞,加入雌、孕激素培养,建立体外间质细胞培养模型.利用激光共聚焦显微镜(LSCM)分别检测三组间质细胞的Cx43表达及GJIC功能.结果:间质细胞成功培养率分别为:异位内膜组45.8%(11/24)、EMs在位内膜组92.7%(38/41)、对照组93.3%(28/30),异位内膜间质细胞纯度为95%,在位内膜间质细胞纯度达98%.EMs异位内膜间质细胞中Cx43表达水平及GJIC功能明显比其他两组低,正常对照组的Cx43表达水平及GJIC功能最高,且差异均有显著性(P＜0.01).结论:(1)同时建立EMs异位内膜、在位内膜及正常内膜间质细胞的体外模型,有助于研究EMs的发病机制;(2)间质细胞中Cx43蛋白表达下调及其GJIC功能异常与EMs发生有关,调节Cx43表达或GJIC功能可能是潜在的治疗策略.     

VEGF、Bcl-2与Bax在子宫内膜异位症中的表达

目的:探讨VEGF、Bcl-2和Bax在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法:SP法检测子宫内膜异位症76例异位内膜、64例在位内膜和72例正常子宫内膜组织中VEGF、Bcl-2和Bax的表达。结果:1VEGF表达强度异位内膜组、在位内膜组和对照组依次减弱;异位和在位内膜组分泌期强于增生期,对照组增生期和分泌期表达均较弱。2Bcl-2蛋白表达异位内膜强于在位内膜和对照组,Bax蛋白表达异位内膜组低于在位内膜组和对照组,均在分泌期差异有统计学意义;Bcl-2和Bax在对照组及在位内膜组均呈周期性变化:Bcl-2增生期强于分泌期,Bax分泌期强于增生期,异位内膜组失去周期性变化。3VEGF、Bcl-2、Bax间存在相关关系。结论:VEGF、Bcl-2和Bax在子宫内膜异位症发生发展中发挥重要作用,可能相互影响共同参与内异症的发生发展。     

肿瘤坏死因子-α在子宫内膜异位症中表达的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)发病机制中的作用。方法:采用免疫组化法检测39例内异症患者的在位内膜(在位组)及异位内膜(异位组)中TNF-α的表达,并与40例正常子宫内膜作对照(对照组)。结果:TNF-α染色主要定位于腺上皮细胞的细胞浆中,间质细胞浆中少量表达。对照组TNF-α蛋白的表达,分泌期高于增生期,差异有统计学意义(P<0.05),EMs在位及异位子宫内膜组织中各期表达均增高,增生期和分泌期比较,差异无统计学意义(P>0.05),与同期对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TNF-α在内异症患者异位内膜中的异常表达,可能在内异症的发生发展中发挥作用。     

血管内皮生长因子在异位和在位子宫内膜中的表达

目的研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在子宫内膜异位症（endometrio-sis,EM）患者的异位和在位内膜中的表达及其在EM发病机制中的作用。方法应用ELISA法检测有或无EM的妇女的血管内皮生长因子（VEGF）水平、采用免疫组织化学S-P法测定VEGF在EM患者异位与在位内膜及对照组增殖期和分泌期子宫内膜组织中的表达,并以抗第八因子相关抗原（F8-RA）抗体标记间质微血管并进行微血管计数（MVD）。结果在整个月经周期中,研究组异位和在位内膜中VEGF表达均持续高于对照组（P〈0.01）。EMs患者异位内膜和在位内膜的微血管密度（MVD）明显高于对照组内膜（P〈0.05）。结论VEGF在EMs患者的高表达,说明其通过促血管生成在该病发生发展中起着重要作用。     

环氧合酶-2在子宫内膜异位症子宫内膜组织中的表达

目的：研究环氧合酶-2（COX-2）在子宫内膜异位症（内异症）在位子宫内膜组织和异位子宫内膜组织中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测30例卵巢内异症在位内膜、10例卵巢巧克力囊肿壁异位内膜及27例正常子宫内膜中COX-2的分布和表达。结果：COX-2在3组子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞中均可见表达。COX-2在正常对照组内膜和卵巢内异症组在位内膜腺上皮细胞中的表达均是分泌期高于增生期（P<0.05)，而在间质细胞中的表达分泌期与增生期比较无统计学差异（P>0.05)。COX-2在卵巢内异症组在位和异位内膜中的表达均高于对照组（P<0.05），而内异症患者在位和异位内膜中COX-2的表达则无统计学意义（P>0.05）。结论：COX-2在卵巢内异症在位和异位内膜中表达增高，可能与卵巢内异症的病理异常有关。