左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠骨密度、骨保护素mRNA及核因子κB受体活化因子配体mRNA的影响

目的探讨左归丸联合温和灸治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法 40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组,每组10只。模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组采用手术完整摘除双侧卵巢法制造骨质疏松症模型。造模3个月后左归丸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃,左归丸+温和灸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃+长强穴艾灸治疗,空白组和模型组予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。各组均干预6周。干预前后测定大鼠股骨近端及第2腰椎骨密度,干预后通过PCR法检测大鼠骨组织骨保护素(OPG)mRNA和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL降低,RANKL mRNA表达上升(P0.05或P0.01);与模型组比较,左归丸组、左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均升高,RANKL mRNA表达降低(P0.05或P0.01),且左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均较左归丸组升高,RANKL mRNA表达较左归丸组降低(P0.05)。结论左归丸联合温和灸能明显升高骨质疏松症大鼠的骨密度,上调OPG mRNA表达、下调RANKL mRNA表达可能是其作用机制之一。     

金刚健骨片对骨质疏松症模型大鼠骨组织OPG/RANKL/RANK系统影响的实验研究

目的:观察金刚健骨片对骨质疏松症模型大鼠体内OPG/RANKL/RANK系统表达的影响。方法:采用卵巢摘除法建立SD大鼠骨质疏松模型,设立假手术组、模型组(单纯去卵巢组)、雌激素组(尼尔雌醇组)和金刚健骨片组。造模成功后4周开始给药,给药12周后RT-PCR检测各组大鼠骨组织中OPG/RANKL/RANK mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组的OPG表达降低、RANKL表达增加,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,金刚健骨片组和雌激素组的OPG表达增高,RANKL表达降低,差异均有统计学意义(P0.05);金刚健骨片组与雌激素组之间比较,差异无统计学意义(P0.05);RANK的mRNA表达在各组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:采用卵巢摘除法成功建立大鼠骨质疏松模型;金刚健骨片可促进OPG在骨质疏松大鼠中的表达,抑制其RANKL的表达,这可能是金刚健骨片治疗骨质疏松症的作用机制之一。     

筋骨胶囊对骨质疏松大鼠骨髓细胞OPG和RANKL mRNA表达量的影响

目的:观察筋骨胶囊对骨质疏松大鼠骨髓细胞护骨素(OPG)和核因子kB受体活化子配体(RANKL)mRNA表达量的影响,从分子水平上进一步探讨筋骨胶囊治疗骨质疏松症的有效机制。方法:取健康6月龄雌性SD大鼠48只,采用摘除双侧卵巢去势方法造成大鼠骨质疏松模型,随机分为假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组(0.5mg/kg)、筋骨胶囊组(0.27g/kg)4组。用药12周后,处死所有大鼠,并取双侧股骨骨髓为标本,运用现代分子生物学RT-PCR技术,测量各大鼠骨髓基质细胞的OPG和RANKL mRNA表达量。结果:模型组OPG和RANKL mRNA表达量均明显高于假手术组(P0.01);阿仑膦酸钠组OPG mRNA表达量与模型组对比差异无统计学意义(P0.05),阿仑膦酸钠组RANKL mRNA表达量明显低于模型组(P0.01);筋骨胶囊组OPG mRNA表达量明显高于模型组(P0.01),筋骨胶囊组RANKL mRNA表达量明显低于模型组(P0.01);筋骨胶囊组OPG mRNA表达量明显高于阿仑膦酸钠组(P0.01),筋骨胶囊RANKL mRNA表达量与阿仑膦酸钠组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:筋骨胶囊能有效地上调OPG mRNA表达量,并抑制RANKL mRNA的表达,通过影响OPG/RANKL系统,抑制骨吸收,并促进骨形成,能有效地防治骨质疏松症。     

补肾通络方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨组织RANKL/OPG基因表达的影响

目的:研究补肾通络方对去卵巢骨质疏松模型大鼠细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)基因表达的影响,探讨补肾通络方治疗原发性骨质疏松症的分子机制.方法:通过卵巢去势的方法造成大鼠骨质疏松模型,造模后随机分为6组:假手术组、模型组、仙灵骨葆组(5.0 g·kg-1)、补肾基础组(5.4 g·kg-1)、通络组(0.9 g·kg-1)、补肾通络组(6.3 g·kg-1).ig给药,1次/d,共10周.治疗10周后,在无菌条件下取出大鼠L3椎体,剔除软组织及骨膜,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测骨组织RANKL/OPG基因mRNA的表达.结果:与模型组相比,补肾通络组、补肾基础组、通络组RANKL mRNA表达明显下降,RANKL/OPG明显下降(P＜0.01),3组间比较,补肾通络组的干预作用明显优于补肾基础组与通络组(P＜0.05).结论:补肾通络方治疗原发性骨质疏松症的作用机制可能与调控RANKL mRNA表达,改善RANKL/OPG,从而抑制破骨细胞活性,降低骨吸收有关.     

电针刺激后大鼠血清对成骨细胞OPG、RANKL mRNA及其蛋白表达的影响

目的观察电针刺激去卵巢骨质疏松症模型大鼠的血清对体外培养成骨细胞的骨形成因子骨保护素(osteoprotegerin, OPG)和骨吸收因子(receptor activator for nuclear factor-?B ligand, RANKL)mRNA表达及其蛋白浓度的影响。方法将45只雌性SD大鼠,随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、电针刺激组(C组),每组15只。除A组外,B组、C组均切除双侧卵巢。造模成功后,C组给予电针刺激,B组正常饲养,A组不做任何处理,常规正常饲养。12周后,采用水合氯醛麻醉各组大鼠,心脏采血,经过处理后加到体外培养的大鼠成骨细胞培养液中。采用碱性磷酸酶(ALP)检测成骨细胞活性,RT-qPCR法检测大鼠血清对OPG、RANKL mRNA表达的影响,ELISA法检测大鼠血清对OPG、RANKL蛋白浓度的影响。结果各组大鼠血清处理成骨细胞后,与A组比较,B组ALP的活性明显降低(P0.05),C组电刺激后成骨细胞内ALP的活性明显增加(P0.05)。与B组比较,A组及C组OPG mRNA表达及其蛋白浓度表达明显降低(P0.05);与A组比较,C组OPG mRNA表达及其蛋白浓度均明显降低(P0.05)。与B组比较,C组及A组RANKL mRNA表达及其蛋白浓度表达明显降低(P0.05);与A组比较,C组RANKL mRNA及蛋白浓度明显降低(P0.05)。C组大鼠骨密度明显高于B组(P0.05)。结论电刺激后的大鼠血清可以提升ALP、OPG水平,降低RANKL水平,其治疗骨质疏松症的机制可能与此有关。     

补肾活血颗粒对去势骨质疏松大鼠OPG/RANK/RANKL系统的影响

目的:观察补肾活血颗粒对去势骨质疏松大鼠骨组织骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)mRNA表达及其骨密度的影响,探讨补肾活血颗粒治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症(OP)提供实验依据。方法:将雌性SD大鼠80只随机分为模型组、补肾活血颗粒治疗组、倍美力阳性对照组、正常对照组4组;除正常组外,其余各组大鼠行双侧卵巢去除术,正常组大鼠行假手术处理;各组大鼠给予相应处理12 W。采用双能X线骨密度仪测定大鼠右股骨上干骺端骨密度、HE染色观察骨组织形态改变、免疫组织化学染色方法及荧光定量PCR检测骨组织OPG、RANK、RANKL相关蛋白和基因的表达。结果:补肾活血颗粒能够显著增加去势骨质疏松大鼠的骨密度;提高其骨组织OPG、RANK mRNA及蛋白的表达水平,降低RANKL mRNA及蛋白的表达水平;作用与阳性对照组相当。结论:补肾活血颗粒可显著增强去势骨质疏松大鼠的骨密度,促进OPG、RANK mRNA和蛋白的表达及抑制RANKL mRNA和蛋白表达是其部分作用机制。     

补肾中药对去卵巢大鼠骨组织ER、OPG表达的促进作用

通过检测去卵巢大鼠给予补肾中药后腰椎内ERmRNA及OPG mRNA的表达,进一步探讨补肾中药防治骨质疏松的分子机制.将雌性3月龄SD大鼠48只,随机分为卵巢切除 补肾中药防治(HDP),卵巢切除 雌激素(倍美力)防治(ER),骨质疏松(卵巢切除)(OVX)及正常对照组(SHAM)4组,每组12只.术后12周处死大鼠,取L3椎体,异硫氰酸胍一步法提取总RNA,嵌套式反转录聚合酶链反应(NRT-PCR),扩增待检测各组ERmRNA及OPGmRNA的表达.同时取L4椎体,行骨组织形态计量学检测.结果显示HDP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率分别为75.0%和66.7%;EP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均为83.3%;OVX组各例ER mRNA均无表达,2例OPG mRNA呈弱阳性表达(阳性率为16.7%);SHAM组呈ER mRNA及OPG mRNA阳性表达.χ2检验,HDP组与ER组比较ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均无显著性差异(P＞0.05);该两组与OVX组比较,ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均有高度显著性差异(P＜0.01);而与SHAM组比较,HDP组ERmRNA,ER组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率无显著性差异(P＞0.05),但HDP组OPG mRNA阳性表达率有显著性差异(0.01＜P＜0.05).骨组织形态计量学检测,OVX组骨体积、骨小梁厚度及骨小梁数目均比SHAM组显著减少,而骨小梁间隔显著增大.同EP组相似,HDP组骨体积、骨小梁厚度显著增加,虽也使骨小梁间隔稍有减少,但与OVX组比较无统计学差异.表明补肾中药通过直接作用于骨组织中ER,增强ER mRNA的表达,并刺激OPG的分泌,从而有望替代雌激素,对去卵巢大鼠的骨质疏松有明显的防治作用.     

外源性H_2S供体GYY4137对骨质疏松大鼠OPG和RANKL表达的影响

目的:观察H2S供体GYY4137对骨质疏松大鼠的防治作用及机制。方法:选取6月龄的SPF级健康雌性SD大鼠随机分成5组,每组8只,假手术组(SHAM组)、模型对照组(OVX组)、GYY4137低、中、高剂量组。假手术组大鼠行双侧卵巢探查术,其他大鼠行双侧卵巢摘除术以建立骨质疏松模型。随后GYY4137低、中、高剂量组大鼠分别给予10 mg·kg~(-1),30 mg·kg~(-1)和50 mg·kg~(-1) GYY4137。12周后测定血清中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的含量。Western blot和实时定量聚合酶链式反应(PCR)检骨组织中护骨素(OPG)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达。结果:OVX组大鼠血清中ALP、OC含量明显低于假手术组,而TRACP有所升高(P 0.05)。经GYY4137处理后,ALP和OC增高,TRACP降低;OVX组中OPG mRNA和蛋白表达水平降低,GYY4137处理后,其水平有所增高(P 0.05);而RANKL mRNA和蛋白表达水平增高,但GYY4137处理可降低其表达水平(P 0.05)。结论:GYY4137可以改善骨转换标志物水平,其机制与影响RANKL表达、增加OPG/RANKL的比值有关。     

大豆异黄酮抗绝经后骨质疏松骨丢失分子机制的初步研究

目的:观察大豆异黄酮(Soybean Isoflavaones)对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(ODF)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA表达的影响,探讨大豆异黄酮抗绝经后骨质疏松(PMO)骨丢失的可能分子机制.方法:健康3月龄雌性SD大鼠30只,随机平均分为假手术组,去卵巢组和大豆异黄酮组(大豆异黄酮,50mg/kg·d,灌胃).假手术组仅牵动卵巢,其余两组均行卵巢切除术.12周后取第3～6腰椎做骨密度检查;取股骨提总RNA,实时定量PCR(Real-time quantitative PCR)法检测上述因子mRNA的表达情况.结果:大豆异黄酮能够增加去卵巢大鼠腰椎骨密度,并可上调去卵巢大鼠骨组织OPG的mRNA表达,下调M-CSF的mRNA表达,使ODF/OPG值下降.结论:大豆异黄酮抗绝经后骨质疏松骨丢失的分子机制可能与其调控OPG和M-CSF的表达和ODF/OPG值有关.     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠血清骨保护素和核因子κB受体活化因子配体蛋白表达及骨密度的影响

目的观察姜黄素对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达以及骨密度的影响,探讨姜黄素防止类风湿关节炎(rhuematoid arthritis,RA)骨破坏的作用机制。方法取SD大鼠30只,随机分为模型组、姜黄素组及正常组,第28天腹主动脉取血,采用ELISA法来检测血清中RANKL、OPG蛋白的表达,取血后处死大鼠,剥离大鼠右侧胫骨,行骨密度检查。结果 (1)与正常组比较,造模组即模型组与姜黄素组大鼠血清RANKL均显著升高(P0.01),血清OPG显著降低(P0.01),RANKL/OPG比值显著升高(P0.01);(2)与模型组比较,治疗组即姜黄素组血清RANKL显著降低(P0.01),血清OPG均显著升高(P0.01),RANKL/OPG比值均显著降低(P0.01);(3)3组大鼠胫骨整体骨密度无显著性差异(P0.05),姜黄素组大鼠兴趣区骨密度值显著高于模型组(P0.01)。结论姜黄素对AA大鼠具有良好的治疗作用,能够通过调节血清RANKL及OPG的表达,来调节OPG/RANKL通路,从而提高AA大鼠骨密度,抑制其骨丢失。     

骨质疏松胶囊对实验性大鼠骨质疏松症的药效学研究

目的观察骨质疏松胶囊对实验性骨质疏松大鼠的药效学作用。方法以骨质疏松胶囊1.0g/kg、2.0g/kg、4.0g/kg低、中、高三个剂量灌胃去卵巢骨质疏松大鼠模型,连续12周,观察本品对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、血液生化指标的影响。结果:骨质疏松胶囊明显改善去卵巢骨质疏松大鼠一般状况;中、高剂量骨质疏松胶囊显著降低骨质疏松大鼠体重(P0.05);明显增加骨质疏松大鼠骨密度(P0.05);降低骨质疏松大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b及血清骨碱性磷酸酶活性(P0.05,P0.01);显著提高骨质疏松大鼠血清雌二醇水平(P0.05,P0.01),对血清钙、磷含量无明显影响。结论骨质疏松胶囊具有增加去卵巢骨质疏松大鼠骨密度;抑制骨吸收、促进骨形成的作用。     

蓬草除痹汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导SD大鼠关节炎模型OPG/RANKL/RANK通路影响

目的:探讨蓬草除痹汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导SD大鼠关节炎模型OPG/RANKL/RANK通路的影响。方法:选取60只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、蓬草除痹汤高、中、低剂量组和雷公藤组,每组10只,除正常组外,其它各组采用胶原蛋白诱导法建立关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功后,按设计给予灌胃药物,连续干预4周,观察干预期间各组大鼠关节炎指数(AI),检测干预4周后踝关节病理形态学评分、骨密度、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素17 (IL-17)、护骨素(OPG)、核因子-k B受体活化因子受体配体(RANKL)表达水平差异。结果:与正常组对比,模型组大鼠AI值、病理形态学评分、TNF-α、IL-17表达显著升高,骨密度显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05);与模型组相比,干预4周后,蓬草除痹汤各组、雷公藤组AI值、病理形态学评分、TNF-α、IL-17显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05);蓬草除痹汤高、中剂量组TNF-α、IL-17降低程度与雷公藤组相当,差异无统计学意义(P 0. 05);与正常组对比,模型组RANKL、OPG阳性表达显著升高,差异有统计学意义(P 0. 05);随着蓬草除痹汤用量的增加,RANKL、OPG阳性表达逐渐降低。结论:蓬草除痹汤能有效改善Ⅱ型胶原蛋白诱导SD大鼠关节炎症状,降低关节炎指数,其机制可能与抑制CIA大鼠RANKL表达,抑制OPG/RANKL/RANK信号对破骨细胞分化、成熟相关。     

黄芪甲苷通过调控FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路抑制去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的:通过调控转录因子叉头框蛋白O3a(FoxO3a)/分泌型糖蛋白2(Wnt2)/β-连环蛋白(β-catenin)通路评价黄芪甲苷对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并探讨其作用机制。方法:雌性SD大鼠随机均分6组,分别为假手术组,模型组,阳性药组(尼尔雌醇,1.5 mg·kg-1),黄芪甲苷低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1),每组8只。通过摘除大鼠双侧卵巢复制绝经后大鼠骨质疏松模型。术后6周,灌胃给药,每日1次,连续8周。酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测大鼠骨钙素(bone gla protein,BGP),降钙素(calcitonin,CT),骨保护素(osteoprotegerin,OPG),核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL),丙二醛(malondialdehyde,MDA),过氧化氢酶(catalase,CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,双能X射线骨密度检测仪分别测定股骨和腰椎的骨密度值(bone mineral density,BMD),采用三点弯曲法测量胫骨生物力学指标,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠股骨组织中β-catenin,FoxO3a,Wnt2,p66~(shc),p-p66~(shc)蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪甲苷组CT和OPG水平显著升高,BGP和RANKL水平则显著降低(P0.05,P0.01);黄芪甲苷显著升高腰椎、股骨的BMD和胫骨的最大载荷及最大应力(P0.05,P0.01);同时,黄芪甲苷显著降低MDA水平(P0.05),升高CAT,SOD和GSH-Px水平(P0.05,P0.01)。Western blot显示,黄芪甲苷显著降低p-p66~(shc)/p66~(shc)水平(P0.05);升高β-catenin和Wnt2蛋白表达水平(P0.05,P0.01),抑制FoxO3a蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪甲苷能够有效缓解氧化应激介导的去卵巢大鼠的骨质疏松,该作用可能与其调节FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路有关。     

桃红四物汤治疗骨质疏松症的药效学研究

目的考察桃红四物汤对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨形态学和骨载荷能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、仙灵骨葆胶囊(0.4 g/kg)组以及桃红四物汤低、高剂量(0.2、0.4 g/kg)组,每组8只。除对照组外,其余各组大鼠去除双侧卵巢建立骨质疏松模型。各给药组ig相应药物,连续3个月。采用三点弯曲实验检测各组大鼠股骨荷载能力;采用苏木素-伊红(HE)和番红固绿染色观察各组大鼠胫骨病理变化;采用微计算机断层扫描技术(micro computed tomography,Micro-CT)分析各组大鼠胫骨骨密度、骨小梁宽度和分离度等形态学参数;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测各组大鼠胫骨破骨细胞数量;采用免疫组化法检测各组大鼠胫骨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白表达情况。结果与模型组比较,桃红四物汤组大鼠股骨最大载荷、最大应力和弹性载荷均显著升高(P0.05、0.01);胫骨骨丢失程度改善,骨小梁数量和连接增多;胫骨骨密度、骨小梁与骨组织面积比、骨小梁宽度和骨小梁数量显著升高(P0.05、0.01),骨小梁分离度显著降低(P0.01);胫骨破骨细胞数量减少,OPG表达增加,RANKL表达降低。结论桃红四物汤能够增加骨密度及荷载能力,促进成骨细胞功能,抑制破骨细胞功能亢进引起的骨吸收,从而发挥抗骨质疏松作用。     

Influence of KangShu JianGu Granules on OPG and RANKL of Osteoporotic Rats

目的:观察抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠骨保护素(OPG)和核因子κβ受体活化因子配基(RANKL)的影响,探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机理.方法:60 只大鼠随机分为6 组,每组10 只,除假手术组外切除大鼠双侧卵巢诱发大鼠骨质疏松症模型,连续给不同剂量的药物灌胃12 周,心脏取血,离心取上清,采用ELISA 法检测血清中OPG和RANKL 含量,并与假手术组、模型组和尼尔雌醇组进行比较.结果:假手术组、尼尔雌醇组、抗疏健骨颗粒大剂量组OPG 及OPG/RANKL 与模型组比较P＜0.01;抗疏健骨颗粒中剂量组OPG、OPG/RANKL 及大剂量组RANKL 与模型组比较P＜0.05;抗疏健骨颗粒小剂量组OPG、RANKL、OPG/RANKL 与模型组比较P＞0.05;抗疏健骨颗粒中剂量组RANKL 与模型组比较P＜0.01;OPG 含量随着抗疏健骨颗粒剂量的增大逐渐增高.结论:抗疏健骨颗粒能够升高OPG,抑制成骨细胞表达RANKL,从而达到防治骨质疏松症的作用.     

左归丸拆方通过调节β2-AR介导的OPG/RANKL信号通路提高去卵巢大鼠骨密度

目的:探讨左归丸及其拆方治疗绝经后骨质疏松症(PMOP)的作用机制。方法:去卵巢法建立骨质疏松症模型,将40只SD大鼠平均随机分为假手术组,模型组(0. 1 mL·kg~(-1)·d~(-1)),17β-雌二醇组(50μg·kg~(-1)·d~(-1))和左归丸补阳药低、高剂量(0. 55,1. 1 g·kg~(-1)·d~(-1))组。灌胃给药12周后,显微CT(μ-CT)检测右侧远端股骨骨密度(BMD)及显微结构;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠股骨形态学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽(β-CTX)和骨特异性碱性磷酸酶(BALP)浓度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑β2-肾上腺素能受体(β2AR),胫骨平台骨保护素(OPG)和核转录因子-κB受体激活因子配体(RANKL)蛋白及mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠BMD显著下降(P0. 01),骨组织形态破坏;血清BALP含量降低,β-CTX含量升高(P0. 01);下丘脑β2AR,胫骨RANKL mRNA及蛋白表达量升高(P0. 05,P0. 01),胫骨OPG mRNA及蛋白表达量降低(P0. 05,P0. 01)。治疗后,与模型组比较,各用药组大鼠BMD升高(P0. 01),骨组织形态改善;血清BALP含量升高,β-CTX含量降低(P0. 01);下丘脑β2AR,胫骨RANKL mRNA及蛋白表达降低(P0. 05,P0. 01),胫骨平台OPG mRNA和蛋白表达升高(P0. 05,P0. 01)。结论:左归丸拆方中补阳药能通过调节β2AR介导的OPG/RANKL信号通路提高去卵巢大鼠骨密度,"阳中求阴"配伍特点是左归丸治疗PMOP的关键之一。     

骨康对去势大鼠骨密度、OPG、RANKL的影响

目的:通过对去势大鼠的骨密度和血清OPG、RANKL进行研究,探讨中药骨康对细胞因子轴OPG/RANKL/RANK系统的影响。方法:将48只SD雌性大鼠按照1:3的比例随机分为空白组、手术模型组,手术模型组制备成为去势大鼠模型,3个月后再将其进一步分为3组:模型对照组、尼尔雌醇组、中药骨康组,分别予以蒸馏水、尼尔雌醇、中药骨康进行灌胃2个月,观察治疗前后大鼠的骨密度、血清OPG、RANKL值水平的变化。结果:造模后3个月手术模型组与空白组相比较骨密度显著下降(P<0.05);经过2个月的治疗,其中尼尔雌醇组、骨康组与模型对照组大鼠各部位骨密度、血清OPG、RANKL含量相比有显著性意义(P<0.01)。血清中RANKL水平与左股骨远端,腰椎以及全身骨密度之间存在负相关,而血清中OPG水平与左股骨远端,腰椎以及全身骨密度之间存在正相关。结论:中药骨康对细胞因子轴OPG/RANKL/RANK系统有调节作用,能够有效提高去卵巢大鼠全身及局部骨密度,可不同程度的提高血清OPG含量,降低RANKL含量。     

补肾健脾法对骨质疏松大鼠OPGmRNA、RANKLmRNA表达影响的实验研究

目的：研究中医药补肾健脾法对骨质疏松症大鼠OPG、RANKL基因表达情况的影响。方法：：取10月龄大鼠36只随机分成三组：补肾健脾组（BSJP）、正常组、模型组。BSJP组及模型组无菌条件下摘取双侧卵巢制造骨质疏松模型,正常组采取假手术。术后1周开始给药,12周后处死。取出大鼠腰3锥体液氮冻存。经Trizol法抽提总RNA,RT-PCR半定量检测OPG、RANKL基因表达情况,经美国BritainGGM/D2凝胶图象分析系统分析各组目的基因的表达强度。结果：BSJP组大鼠RANKL的表达强度（Rv值）分别与正常组比较结果P〈0.05,有显著差异;与模型组比较,结果P〈0.01,有显著差异。将BSJP组的OPG的Rv值与正常组比较结果P〉0.05,没有有显著差异;与模型组比较结果P〉0.05,也没有显著差异。BSJP组OPGmRNA/RANKLmRNA与正常组比较P〈0.01,与模型组比较P〈0.01,有显著差异。结论：中医药补肾健脾法可以明显抑制RANKL的表达,降低破骨细胞活性,同时有促骨形成作用。     

去卵巢骨质疏松大鼠骨组织OPG/RANKLmRNA动态表达研究

目的:建立去卵巢大鼠骨质疏松症动物模型,检测造模成功后不同时期大鼠胫骨OPG/RANKLmRNA表达量及血清雌二醇水平,分析OPG/RANKLmRNA表达变化规律。方法:选取3月龄雌性SD大鼠60只随机分为2组即去卵巢组与对照组,每组30只。去卵巢组去除双侧卵巢,对照组仅去除腹腔少许脂肪。分别在造模12周后0个月、6个月、12个月每组随机处死10只,检测不同时期大鼠胫骨OPG/RANKLmRNA表达量及血清雌二醇水平。采用SPSS 17.0软件进行统计,分析数据,得出结论。结果:与对照组相比,去卵巢组胫骨OPGmRNA表达量、血清雌二醇浓度在各时间点上均显著降低(P<0.05),RANKLmRNA表达量则显著增高(P<0.05);去卵巢组0个月与6个月、6个月与12个月比较,胫骨OPGmRNA表达量及血清雌二醇浓度下降,差异具有统计学意义(P<0.05),RANKLmRNA表达量增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:造模成功后12个月内,去卵巢大鼠胫骨骨组织OPGmRNA表达量持续减少,血清雌二醇浓度均持续降低,RANKLmRNA持续高表达,OPG/RANKL比值缩小。     

熊果酸对CIA大鼠关节软组织RANKL、RANK、OPG mRNA表达的影响

目的:探讨熊果酸(UA)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节软组织RANKL、RANK、OPG mRNA表达的影响。方法:选取雌性SD大鼠复制CIA模型,造模成功后随机分为CIA模型组、熊果酸低剂量组、熊果酸高剂量组、甲氨蝶呤组、熊果酸+甲氨蝶呤组,并给予相应处理。于初次免疫30d后处死大鼠,取炎症关节进行研究,荧光定量PCR法检测RANKL、RANK、OPG在大鼠关节匀浆中的表达。结果:与CIA模型组比较,UA大鼠高剂量组关节RANKL mRNA的表达明显降低(P0.01);与MTA组比较,UA+MTA组关节RANKL mRNA的表达明显降低(P0.05)。结论:UA影响CIA大鼠关节软组织RANKL mRNA的表达,其机理可能与抗炎作用有关。