PPARα激活物影响HepG-2细胞PAI-1表达机制初探

目的探讨不同的过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)激活物对HepG-2细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)活性和mRNA表达的影响及其可能的机制。方法分别以亚油酸和非诺贝特刺激HepG-2细胞,检测PAI-1活性和mRNA表达。基因瞬时转染含不同片段缺失的PAI-1启动子序列控制表达的报告基因质粒,测定亚油酸和非诺贝特诱导后的转录活性。结果亚油酸使HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及蛋白活性显著增加,而非诺贝特使其著降低。转染HepG-2细胞由PAI-1启动子全长控制的表达质粒,亚油酸诱导PAI-1转录活性显著增加,非诺贝特显著抑制其转录活性;转染PAI-1启动子序列核转录因子KB(NF-KB)反应元件缺失的质粒时,亚油酸和非诺贝特仍显著增加PAI-1转录活性;而转染PAI-1启动子序列极低密度脂蛋白(VLDL)／脂肪酸反应元件缺失的质粒时,亚油酸对PAI-1转录活性无诱导作用,非诺贝特可下调其转录活性。结论PPARα可能是亚油酸增强PAI-1表达所涉及的转录因子之一;非诺贝特下调PAI-1表达可能涉及对NF-κB信号转导途径的抑制作用。     

非诺贝特对糖尿病大鼠肾组织NF-κB表达的影响及意义

目的观察非诺贝特对糖尿病大鼠肾组织核转录因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法将36只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、非诺贝特治疗组,模型组及治疗组以链脲佐菌素诱发糖尿病,治疗组予非诺贝特灌胃,第4、8周观察各组脂代谢、血肌酐（SCr）、24h尿蛋白定量,采用免疫组化染色检测肾组织NF-κB表达水平。结果模型组TC、TG、SCr、24h尿蛋白定量水平及NF-κB表达较同期正常组和治疗组均明显增加。结论非诺贝特可抑制NF-κB的活性从而发挥对糖尿病肾病的保护作用。     

非诺贝特与过氧化体增殖物激活型受体α对人肝瘤细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂表达的影响

目的探讨非诺贝特对人肝瘤细胞株(HepG2)细胞1型纤维酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达的影响及机制。方法用不同浓度非诺贝特刺激HepG2细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PAI-1mRNA水平,发色底物法检测PAI-1的活性变化。构建4个荧光素酶报告基因质粒,分别由PAI-1启动子序列从-804至+17间不同长度片段驱动,体外转染HepG2细胞,检测荧光素酶的活性。结果非诺贝特能使HepG2细胞PAI-1mRNA表达及蛋白活性显著降低,且呈一定剂量依赖性;还可使PAI-1转录活性显著降低;当转染质粒含有PAI-1启动子序列-636~+17、-449~+17-、276~+17 bp 3个片段时,荧光素酶活性显著增高;共转染过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)表达质粒(PPAR-αpSG5)的细胞在非诺贝特诱导下PAI-1转录活性显著降低。结论非诺贝特可以抑制HepG2细胞PAI-1mRNA表达及其活性,调节PAI-1的基因转录,PPARα参与非诺贝特对PAI-1基因的表达调控。     

PAI-1 mRNA在糖尿病大鼠肾脏的表达与通心络胶囊的干预作用研究

目的研究纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)在糖尿病大鼠肾皮质的表达和中药通心络胶囊对其的干预作用。方法将SD大鼠随机分为两组,一组经链尿佐菌素诱发的糖尿病模型(DM)组,另一组为血糖正常对照组(C),两组均再随机分为DMl组、DM2组、Cl组、C2组,其中DM2组、C2组给予通心络治疗5周。治疗前后称体重、监测血糖,最后取肾脏称重,采用逆转录一多聚酶链式反应(RT-PCR)观测肾皮质PAI-1mRNA表达量。结果 DM组大鼠肾重/体重值及PAI-lmRNA表达明显高于C组(P0.01),DM2组PAI-1mRNA表达低于DMl组,差异有统计学意义(P0.05),肾皮质PAI-1mRNA表达量在C1与C2组间无统计学意义(P0.05)。结论 PAI-1mRNA在糖尿病大鼠肾皮质的表达增高,PAI-1增高参与糖尿病肾病的病理生理过程。中药通心络对糖尿病时PAI-1mRNA肾皮质的表达增高有下调作用。     

糖基化终末产物对大鼠肾皮质PAI-1表达和活性的影响

目的观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾皮质纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）表达和活性的影响。方法大鼠尾静脉注射AGE修饰大鼠血清蛋白（AGEs）6周，其中部分大鼠同时腹腔注射AGE形成抑制剂氨基胍（AG），以注射天然大鼠血清蛋白（RSP）和正常大鼠（Con）作为对照。免疫组织化学、Western blot、RT—PCR检测PAI-1表达水平，酶谱法分析纤溶酶原激活物（PA）活性，PAS染色评估细胞外基质（ECM）含量。结果与Con组及RSP组比较，AGEs组大鼠肾皮质ECM含量、PAI-1蛋白及mRNA表达水平均明显增高，PA活性明显降低（PAI-1 mRNAP〈0．01，其余P〈20．05），而同时注射AG的大鼠上述变化明显减轻。结论AGEs上调大鼠肾皮质PAI-1的表达，抑制PA活性，可能是糖尿病肾病ECM积聚的原因之一。     

非诺贝特对脂肪组织凝血和纤溶因子表达的影响

目的:探讨动脉粥样硬化兔脂肪组织组织因子(TF)和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达及非诺贝特对其的影响。方法:15只兔随机等分为3组,正常组予普通饲料喂养12周,动脉粥样硬化组给予高胆固醇饮食12周,非诺贝特组在高胆固醇饮食8周后加非诺贝特30mg·kg-1·d-1干预4周。实验第12周末取兔皮下脂肪组织,RT-PCR测定脂肪组织TF和PAI-1mRNA表达;同时采血10ml,分离血浆,用ELISA方法测定血浆TF活性,发色底物法测定血浆PAI-1活性。结果:高胆固醇饮食可显著升高血清总胆固醇(TC)(P<0·05),血清三酰甘油(TG)无明显升高;加用非诺贝特治疗4周,TC和TG均无明显改变。动脉粥样硬化组脂肪组织TF和PAI-1mRNA表达(分别为1.15±0.01和1.20±0.01)明显高于正常组(分别为1.03±0.01和1.10±0.01),均P<0·01;血浆TF和PAI-1活性[分别为(74.4±28.8)ng/L和(15.6±1.9)×103AU/L]较正常组[分别为(33.1±10.7)ng/L和(6.9±0.9)×103AU/L]增高(P<0·05)。非诺贝特组TF和PAI-1mRNA表达(分别为1.02±0.01和1.06±0.01)、血浆TF和PAI-1活性[分别为(40.3±12.2)ng/L和(7.5±1.5)×103AU/L]均有显著降低(P<0.01或P<0·05)。结论:动脉粥样硬化兔脂肪组织表达TF和PAI-1增加,活性增强,非诺贝特能抑制动脉粥样硬化兔脂肪组织TF和PAI-1的表达及活性,提示非诺贝特可能具有独立于降脂作用之外的抗血栓作用。     

非诺贝特对胰岛素抵抗大鼠肝脏肝细胞核因子mRNA表达的影响

目的　探讨非诺贝特对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝脏肝细胞核因子(HNF)-4α、HNF-1αmRNA表达的影响。　方法　对高脂饲料喂养诱导的 IR大鼠,给予非诺贝特治疗(100 mg·kg-1·d-1)2周。应用正常血糖 高血浆胰岛素钳夹技术检测大鼠胰岛素敏感性。采用逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)检测非诺贝特对 IR大鼠肝脏 HNF-4α及 HNF 1αmRNA表达的影响。　结果　非诺贝特治疗组大鼠的肝脏HNF-4αmRNA明显高于未治疗组(0.55±0.13 vs 0.44±0.14,P<0.05),但仍低于正常对照组(0.69±0.12,P<0.05)。而 HNF-1αmRNA在治疗组与未治疗组间差异不显著。与未治疗组相比,治疗组大鼠体重增加较少,血浆甘油三酯明显降低,平均葡萄糖输注率则有所提高。　结论　非诺贝特可使高脂诱导的 IR大鼠肝脏降低的HNF-4αmRNA表达水平得以部分恢复,这可能与非诺贝特的降脂效应有关。非诺贝特在降脂的同时还有胰岛素增敏作用,并能阻止高脂饮食引起的体重增加。     

非诺贝特对大鼠心肌损伤保护作用的实验观察

目的探讨非诺贝特对异丙基肾上腺素所致大鼠急性心肌缺血性损伤的保护作用。方法应用异丙基肾上腺素复制大鼠急性心肌缺血性损伤的动物模型,Wister大鼠随机分为3组,正常对照组、模型组(Iso)、非诺贝特保护组(FF),观察非诺贝特对大鼠心肌的形态学,血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶(CK,LDH)以及一氧化氮(NO)的影响。结果非诺贝特能对抗异丙基肾上腺素所致的大鼠急性心肌缺血性损伤,可使其病理损伤性改变减轻,抑制CK和LDH的释放,增加NO的产生。结论非诺贝特对异丙基肾上腺素所致大鼠急性心肌缺血性损伤具有保护作用。     

吡格列酮和非诺贝特在调节代谢综合征大鼠主动脉重构中的作用

目的 探讨非诺贝特和吡格列酮对果糖饲养的代谢综合征大鼠主动脉重构的影响.方法 用高果糖饮食饲养SD大鼠构建代谢综合征大鼠模型,分别单用非诺贝特或吡格列酮及二者合用干预.分析比较两种药物单用及合用干预后,代谢综合征大鼠在主动脉形态结构上的差异.结果 非诺贝特和吡格列酮干预均可使代谢综合征大鼠主动脉内膜变平滑,抑制中膜平滑肌细胞增殖,使血管壁变薄;吡格列酮干预还使代谢综合征大鼠主动脉中膜平滑肌细胞及弹力纤维排列更为整齐.舍用吡格列酮和非诺贝特干预,使主动脉结构更趋向于正常状态.结论 非诺贝特和吡格列酮干预均可抑制代谢综合征大鼠主动脉的病理性重构;但单用非诺贝特作用不如单用吡格列酮明显;合用非诺贝特和吡格列酮,可通过不同的机制和作用靶点,产生协同作用,进一步改善及逆转代谢综合征状态下的血管重构,降低发生心血管疾病的危险性.     

NADPH氧化酶Nox4调控非诺贝特的抗高血压心肌肥大效应

目的拟阐明NADPH氧化酶Nox4与非诺贝特抗高血压心肌肥大效应的关系。方法构建腹主动脉缩窄(abdominal aorta coarctation,AAC)诱导的高血压大鼠模型,观察非诺贝特对高血压大鼠左心室肥大的影响。结果非诺贝特可显著抑制AAC高血压大鼠左心室肥大。与假手术组比较,AAC组左心室中NADPH氧化酶Nox4蛋白和mRNA水平均显著增加;与AAC组比较,非诺贝特剂量依赖性降低AAC高血压大鼠左心室中NADPH氧化酶Nox4蛋白和mRNA水平。结论降低NADPH氧化酶Nox4表达可能是非诺贝特发挥抗高血压心肌肥大效应的重要机制。     

非诺贝特对慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢和心室重构的影响

目的研究非诺贝特对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌能量代谢和心室重构的影响。方法健康雄性Wistar大鼠随机选为假手术组18只;采用腹主动脉缩窄术制备CHF、并成功存活的38只再随机分为对照组20只、非诺贝特组18只[非诺贝特150 mg/(kg·d)],干预10周。计算左心室心肌重构指数、胶原容积分数(CVF)、心肌线粒体损伤程度分级用Flameng评分,免疫印迹法测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)、肌型肉碱棕榈酰转移酶1(MCPT 1)蛋白表达,RT-PCR测PPARα、MCAD和MCPT-1mRNA表达。结果与假手术组比较,对照组及非诺贝特组左心室心肌重构指数、CVF和Flameng评分均升高(P<0.05);非诺贝特组左心室心肌重构指数高于对照组、CVF和Flameng评分低于对照组(P<0.05);与假手术组比较,对照组、非诺贝特组心肌PPARα、MCPT-1、MCAD蛋白和基因表达均下调(P<0.05);非诺贝特组表达较对照组上调(P<0.05)。结论非诺贝特通过增强脂肪酸氧化,减轻线粒体损伤,改善心室重构,减轻心肌纤维化。     

非诺贝特对糖尿病大鼠主动脉组织中Trx mRNA表达的影响

目的应用非诺贝特干预治疗,观察药物对糖尿病大鼠主动脉组织中硫氧还蛋白（Trx）mRNA表达的影响,以探讨药物对抗氧化应激的作用。方法所有大鼠分为实验组及对照组,实验组建立糖尿病大鼠动物模型,分为糖尿病组（A组）、药物干预组（B组）,B组给予非诺贝特100 mg/（kg.d）药物干预,8周后比较血脂水平变化,检测大鼠主动脉组织中Trx mRNA表达水平。结果 A组高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）与B组、对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;B组LDL、HDL与对照组比较差异均无统计学意义。A组、B组Trx mRNA表达水平高于对照组（P〈0.05）,且B组高于A组（P〈0.05）。结论非诺贝特具有调脂以外的抗氧化应激作用。     

血脂变化对OLETF糖尿病大鼠肾小球细胞外基质成分含量的影响

目的：采用OLETF大鼠来观察血脂变化对2型糖尿病鼠肾小球细胞外基质含量的影响。方法：实验动物分为三组即正常对照组，糖尿病和非诺贝特治疗的糖尿病组，非诺贝特20mg.kg^-1.d^-1灌胃22周，用免疫组化的方法检测肾小球细胞外基质成分含量的变化，结果：糖尿病组血清总胆固醇，甘油三酯，极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平明显高于正常对照（P＜0．05），同时细胞外基质成分（Ⅳ型胶原，层粘连蛋白，纤维连接蛋白）含量亦较正常对照组增加（三者P＜0．01），降脂治疗后肾脏细胞外基质积聚明显减少（与糖尿病未治疗组比P＜0．05），结论：高脂血症可能与糖尿病肾小球硬化的发生有关，降脂治疗能够减缓肾脏的损害从而起到保护肾脏的作用。     

衰老对大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平的影响

目的观察衰老对大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平的影响,从而探讨衰老过程中出现脂质代谢异常的可能机制.方法雄性SD年轻大鼠(4～6周龄)16只和老年大鼠(24月龄)16只,分别随机分为对照组和非诺贝特组(非诺贝特喂养2周,每只给药总量为体重的0.5%),测定血清中甘油三酯和总胆固醇水平,采用半定量逆转录聚合酶链反应检测大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平.结果与年轻对照组比较,老年对照组甘油三酯和总胆固醇水平升高,大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平表达随年龄增长而减少.非诺贝特组与对照组比较,给药后老年非诺贝特组甘油三酯水平下降.非诺贝特影响不同年龄组大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平.结论衰老过程中大鼠肝脏组织酰基辅酶A氧化酶水平表达减少可能与老年脂质代谢异常有关.     

自体外周血内皮祖细胞移植联合PPAR激动剂治疗大鼠急性心肌梗死的实验研究

目的探讨自体外周血内皮祖细胞（EPCs）移植联合PPAR激动剂罗格列酮、非诺贝特治疗大鼠急性心肌梗死的可行性和疗效。方法40只SD雄性大鼠随机分为四组：心肌梗死对照组（组Ⅰ）、单纯EPCs移植组（组Ⅱ）、EPCs移植联合罗格列酮治疗组（组Ⅲ）、内皮祖细胞移植联合非诺贝特治疗组（组Ⅳ）,每组10只。应用密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,体外培养扩增获得较纯的EPCs后,移植到大鼠急性心肌梗死模型梗死区,罗格列酮组、非诺贝特组分别以罗格列酮（20mg·kg^-1·d^-1）和非诺贝特（20mg·kg^-1·d^-1）灌胃。8周后超声心动图检测大鼠心功能改变,测定血流动力学指标,免疫组化观察心肌内移植EPCs及大鼠心肌修复情况。结果细胞移植8周后,组Ⅱ、组Ⅲ和组Ⅳ大鼠心功能,左室收缩舒张功能较组Ⅰ明显改善（P〈0．05）,且组Ⅲ和组Ⅳ改变更显著（P〈0．05）。结论EPCs移植可以显著改善急性心肌梗死大鼠的心功能,EPCs移植联用罗格列酮和非诺贝特,优于单独应用EPCs移植。     

降脂药诺衡和非诺贝特治疗NIDDM脂代谢紊乱疗效评价

本文报道降脂药诺衡和非诺贝特治疗22树脂代谢紊乱糖尿病患者的疗效。结果发现两药均能明显降低TC、TG、HDL-TG、apoB_(100),升高HDL-G。诺衡在改善TG、HDL-C、apoB_(100)方面优于非诺贝特,此外诺衡尚能升高apoA-1。两药均不影响糖尿病的控制.多数病人对两药耐受良好.     

过氧化物酶体增殖物激活受体α对氧合血红蛋白诱导的蛛网膜下腔出血大鼠血管平滑肌细胞炎性细胞因子的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)对氧合血红蛋白(OxyHb)诱导的蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠血管平滑肌细胞炎性因子的影响。方法选用清洁级SD大鼠30只,雄性,体质量100~120 g,约4周龄。无菌状态下截取胸主动脉,分离血管壁中层细胞,采用贴壁法原代培养血管平滑肌细胞,传4~6代后,α-SMC-actin染色鉴定血管平滑肌细胞,选取合格细胞建立模型。将细胞随机分为对照组、OxyHb组(10μM OxyHb诱导)、非诺贝特1组(10μM OxyHb诱导前1 h加入100μM非诺贝特)、非诺贝特2组(10μM OxyHb诱导后0.5 h加入100μM非诺贝特)、GW1组(10μM GW6471预先0.5 h阻断非诺贝特1组)、GW2组(10μM GW6471预先0.5h阻断非诺贝特2组),各6只。给予OxyHb及相关干预因子孵育48 h后,细胞离心收取上清液,采用ELISA法检测各组TNF-α、IL-1β水平。结果对照组TNF-α为(122.9±7.0)ng/L,OxyHb组为(282.7±53.5)ng/L,非诺贝特1组为(164.8±24.4)ng/L,非诺贝特2组为(179.±26.8)ng/L,GW1组为(274.3±41.8)ng/L,GW2组为(293.9±29.6)ng/L;对照组IL-1β为(64.0±0.6)ng/L,OxyHb组为(183.8±21.1)ng/L,非诺贝特1组为(102.1±9.9)ng/L,非诺贝特2组为(122.4±7.4)ng/L,GW1组为(182.0±17.2)ng/L,GW2组为(180.1±15.1)ng/L。对照组、非诺贝特1组和非诺贝特2组TNF-α和IL-1β水平低于OxyHb组,对照组TNF-α和IL-1β水平低于非诺贝特1组,OxyHb组、非诺贝特2组、GW1组和GW2组TNF-α和IL-1β水平高于非诺贝特1组(P0.05)。结论 PPAR-α激动剂能明显抑制OxyHb诱导的SAH大鼠血管平滑肌细胞炎性因子的表达,且该作用能被PPAR-α抑制剂特异性阻断。     

非诺贝特对高脂饲养大鼠脂联素蛋白构成的影响

目的 观察非诺贝特对肥胖大鼠脂联素蛋白多聚体构成的影响.方法 SD大鼠随机分为普通对照组(NC组)、高脂对照组(HF组)和非诺贝特组(FF组).喂饲高脂饮食制作肥胖大鼠模型,以非诺贝特30mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃4周, ELISA法测定血清总脂联素,非还原非加热变性Western blot检测血清、皮下及内脏脂肪组织中各聚合态脂联素蛋白表达水平,计算高聚体(HMW) 脂联素比例.结果 HF组大鼠血总脂联素、血清和内脏脂肪中HMW脂联素及HMW比例、皮下脂肪中HMW脂联素低于NC组.FF组血清、内脏脂肪中HMW脂联素及内脏脂肪中HMW比例高于HF组(P<0.05).结论 非诺贝特能提高内脏脂肪和血清中HMW脂联素蛋白水平.     

非诺贝特对血管钙化的影响及机制研究

目的在大鼠血管钙化模型上,探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated re-ceptorα,PPARα)激动剂非诺贝特对血管钙化的影响及其可能的作用机制。方法实验动物按随机数字表法分正常组、钙化组及钙化+非诺贝特组,每组10只。钙化组采用维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化模型,钙化+非诺贝特组于造模后第2天开始,非诺贝特灌胃[30 mg/(kg·d)]。采用Von Kossa染色检测血管钙化程度,采用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙浓度和ALP活性,采用Beckman Coulter AU5800仪器检测血清三酰甘油(triacylglycerol,TG)浓度,采用放射免疫法检测大鼠血清单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)浓度,采用免疫组织化学法检测主动脉MCP-1受体表达。结果 Von Kossa染色可见血管钙化模型大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀,钙化组血管钙浓度、ALP活性高于正常组,差异有统计学意义(P0.01);同时,与正常组比较,钙化组血清MCP-1浓度和主动脉组织MCP-1受体表达明显上调(P0.01)。用非诺贝特干预后,血管钙化程度减轻(P0.01),同时血清MCP-1及其受体的表达下调,与钙化组比较差异有统计学意义(P0.01)。3组动物血清TG浓度比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 PPARα激动剂非诺贝特可抑制血管钙化,可能通过下调MCP-1表达和ALP活性抑制血管钙化的发生、发展过程。     

非诺贝特和吡格列酮对代谢综合征大鼠血压及体重的影响

目的:探讨非诺贝特和吡格列酮对高果糖诱导的代谢综合征(MS)大鼠血压及体重的影响.方法:用高果糖饮食饲养SD大鼠构建Ms大鼠模型,将存活的大鼠随机分为空白对照组(n=8),代谢综合征模型组(n=39).又将代谢综合征模型组分为4个亚组:模型对照亚组(n=10),非诺贝特亚组(n=8),毗格列酮亚组(n=11),非诺贝特+吡格列酮哑组(n=10)分别单用非诺贝特和吡格列酮及二者合用干预.分析比较两种药物单用及合用,对MS大鼠收缩压、体重等的影响.结果:吡格列酮亚组干预后与干预前比收缩压降低(P<0.01),胰岛素敏感指数(ISI)升高(P<0.01).非诺贝特亚组干预后与干预前比收缩压、ISI变化均不明显(P>0.05).非诺贝特+吡格列酮亚组干预后与干预前比收缩压降低,ISI升高(P均<0.01),差异有统计学意义.干预后,各药物干预亚组与模型对照亚组问体重差异无统计学意义(P>0.05).结论:单用吡格列酮或合用非诺贝特干预明显改善MS大鼠胰岛素抵抗、降低收缩压,可更好地控制其心血管病的危险因素.