DNA聚合酶链反应对结脑的诊断价值

ＤＮＡ聚合酶链反应对结脑的诊断价值王伟，王文汇，曲仪庆山东医科大学附属医院（２５００１２）ＤＮＡ聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术是在基因水平上检测结核菌的有效方法［１］。本文对ＰＣＲ技术对结核性脑膜炎（结脑）...     

用尿嘧啶－DNA－糖基化酶控制聚合酶链反应的产物污染

聚合酶链反应（ＰＣＲ）灵敏度极高，痕量的ＰＣＲ产物能污染新的ＰＣＲ体系（称为产物污染）导致假阳性结果，我们通过在所有的ＰＣＲ扩增中掺入ｄＵＴＰ使ＰＣＲ产物含“ｄＵ”，在以后的ＰＣＲ扩增前用尿嘧啶－ＤＮＡ糖基化酶（Ｕｒａｃｉｌ－ＤＮＡ－Ｇｌｙｃｏｌａｓｅ，ＵＤＧ）处理，然后加热去除ＵＤＧ活性防止了产物污染。ＵＤＧ切割磷酸糖骨架上的尿嘧啶，可阴止ＤＮＡ聚合酶对它的复制，而对普通ＤＮＡ（即含”ｄＴ”）无影响。因为ＵＤＧ不与ｄＵＴＰ反应，而且在ＰＣＲ扩增前加热变性失活，使含尿嘧啶的污染物的污染得到很好控制。     

RT—PCR检测血管外膜成纤维细胞中肝细胞生长因子及其受体基因的表达

目的 以Ｗｉｓｔａｒ大鼠和ＳＤ大鼠为研究对象,从分子水平研究肝细胞生长因子和ｃ－ｍｅｔ在血管外膜成纤维细胞中的表达及其意义。方法 （１）用套式聚合酶链反应及经典ＰＣＲ检测ＨＧＦ及其受体－ｃ－ｍｅｔ基因在血管外膜成纤维细胞中的表达。（２）测定ｃ－ｍｅｔ基因ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序物。结果 （１）ＰＣＲ产物电泳显示ｃ－ｍｅｔ基因在大鼠血管外膜成纤维细胞中有表达。（２）ｃ－ｍｅｔ基因ＰＣＲ产物的序列经ＤＮＡ     

RT-PCR检测血管外膜成纤维细胞中肝细胞生长因子及其受体基因的表达

目的 以Ｗｉｓｔａｒ大鼠和ＳＤ大鼠为研究对象,从分子水平研究肝细胞生长因子和ｃ－ｍｅｔ在血管外膜成纤维细胞中的表达及其意义。方法 （１）用套式聚合酶链反应及经典ＰＣＲ检测ＨＧＦ及其受体－ｃ－ｍｅｔ基因在血管外膜成纤维细胞中的表达。（２）测定ｃ－ｍｅｔ基因ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序物。结果 （１）ＰＣＲ产物电泳显示ｃ－ｍｅｔ基因在大鼠血管外膜成纤维细胞中有表达。（２）ｃ－ｍｅｔ基因ＰＣＲ产物的序列经ＤＮＡ     

聚合酶链反应检测HBV一DNA与乙型肝炎病毒血清学标志的关系

聚合酶链反应检测ＨＢＶ一ＤＮＡ与乙型肝炎病毒血清学标志的关系樊晓明，曾辉，李修岑，杨玉秀，李怀斌聚合酶链反应（ＰｏｆｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是一种特异性体外基因扩增技术，我们用ＰＣＲ检测了４７５例病人血清的ＨＢＶ一ＤＮＡ，与其...     

聚合酶链反应检测HBV DNA及其临床意义

聚合酶链反应检测ＨＢＶ　ＤＮＡ及其临床意义王金花，武菲菲，靳安佳，于方治聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是近年发展起来的体外特异性ＤＮＡ扩增技术，可使极微量单拷贝特定核苷酸片段在２～４ｈ内扩增到上百万倍，有利于检测...     

PCR检测HBV－DNA及对乙肝免疫学标志意义的再评价

ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ及对乙肝免疫学标志意义的再评价姚志伟，阮月芹，任全珺，高乐俊，彭新国（附属医院检验科，２５６６０３）关键词聚合酶链反应（ＰＣＲ）；ＨＢＶ－ＤＮＡ；乙肝免疫学标志（ＨＢＶＭ）ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ...     

PCR法检测乙肝病毒－DNA的几种血清预处理方法比较

ＰＣＲ法检测乙肝病毒－ＤＮＡ的几种血清预处理方法比较陈捷平，朱丽杰（临床医学研究所免疫室）目前聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术已广泛用于遗传病的诊断、传染性病源体的检测、癌基因的研究等诸多方面。ＰＣＲ方法具有...     

现代分子生物学技术系列讲座（三）聚合酶链反应（PCR）

现代分子生物学技术系列讲座（三）聚合酶链反应（ＰＣＲ）杜卫东（病理学教研室）聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｌｉａｉｎＲ－ｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是体外选择性扩增特异性核酸（ＤＮＡ或ＲＮＡ）片段的一项新技术。Ｍｕｌｌｉｓ１９８３年发明，１９８５年...     

一氧化氮合成酶mRNA在中枢和外周组织中的表达和分布

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ一ＰｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ一ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠小脑和肾脏ＮＯＳｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠中枢和外周一些组织中ＮＯＳｍＲＮＡ的含量，证明ＮＯＳｍＲＮＡ广泛存在于中枢和外周组织中，在中枢以小脑含量为最高，在外周组织中以肾脏含量为最高；定量ＰＣＲ方法测定ＮＯＳｍＲＮＡ较Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析更为灵敏。     

PCR技术应用中的辩证关系

聚合酶链式反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是美国Ｃｅｔｕｓ公司和加利福尼亚大学于１９８５年底联合创建的一种ＤＮＡ体外扩增技术。其基本原理是依据体内细胞分裂中ＤＮＡ半保留复制机理，以及在体外ＤＮＡ分子于不同温度下双链和单链...     

聚合酶链反应

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）是一种模拟ＤＮＡ复制的特定核酸序列体外扩增技术。在ＰＣＲ扩增的首轮循环中,待扩增的ＤＮＡ在高温下变性成为单链模板,在复性温度下,人工合成的两个寡核苷酸引物与目标片段两侧的两条链互补...     

血小板激活因子受体mRNA在小鼠附睾精子内的表达

目的 检测血小板激活因子受体（ＰＡＦＲ）ｍＲＮＡ在小鼠附睾精子内的表达,探讨ＰＡＦＲ对受精过程的影响。２方法 分离提高小鼠附睾精子ｍＲＮＡ,经逆转录（ＲＴ）合成ＰＡＦＲ－ｃＤＮＡ。利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＰＡＦＲ－ｃＤＮＡ,ＤＮＡ序列分析验证扩增产物的准确性。结果 小鼠附睾精子表达ＰＡＦＲ－ｍＲＮＡ;ＤＮＡ序列分析验证ＰＣＲ产物的小鼠ＰＡＦＲ－ｃＤＮＡ。④结论 小鼠附睾精子有ＰＡＦＲ－ｍＲＮ     

Dnmt3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆

目的 克隆与小鼠胚胎发育相关的新的新的全长ｃＤＮＡ。方法 从小鼠胚胎ｃＤＮＡ文库中筛选出一个新的ＥＳＴ,以８～９ｄ齿小鼠胚胎组织ｍＲＮＡ为模板进行ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ）,结合ＰＣＲ筛选ｃＤＮＡ文库,获得共全长ｃＤＮＡ序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测。整合后的ｃＤＮＡ两上物进行ＲＴ－ＰＣＲ,克隆ＰＣＲ产物,并对产物进行全序列测定,验证整     

在西安地区HBeAg阴性患者中检出乙型肝炎病毒前C区基因突变株

作用ＨＢｅＡｇ阴性，抗ＨＢｅ阳性患血清提取ＨＢＶ ＤＮＡ作为模板，用前Ｃ区引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），选择３份ＰＣＲ扩增阳性产物，用ＥｃｏＲＩ酶切获得长为３１２ｂｐ的基因片段。将其克至ＰＵＣ１８质粒中，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，提取质粒，经ＰＣＲ扩增及酶切鉴定后，用双脱氧末端标记法进行基因序列测定。结果发现，在２例患ＨＢＶ ＤＮＡ克隆中存在有前Ｃ区基因突变，即１８９６位的鸟嘌呤为腺嘌呤...     

一种简便快速的DNA序列分析法

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）进行了ＤＮＡ序列分析。该分析法在进行ＰＣＲ产物和ＧＣ含量较高的ＤＮＡ模板测序时，能防止模板的ＤＮＡ片段迅速复性，消除ＰＣＲ产物中剩余的扩增引物和脱氧核苷酸（ｄＮＴＰ）的影响，促使ＴａｑＤＮＡ聚合酶有效地通过模板中ＧＣ富含区和二级结构区域。本法系一简便、快速、准确的ＤＮＡ序列分析法。     

PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印普杂交（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３｀寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份传阅耕ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩     

用PTVS检测t（14；18）PCR产物的DNA序列

为确定聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛（ＤＩＧ）系统检测ｔ（１４；１８）的特异性，我们采用ＰＧＥＭ－Ｔｖｅｃｔｏｒ系统（ＰＴＶＳ）和双脱氧链终止技术克隆并测定了ＲＬ细胞系和一个ＮＨＬ患者－Ａｍｂｒｏｓｅｎ的ｔ（１４；１８）ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序列。结果表明两者的ＰＣＲ扩增产物均为ｂｃｌ－２－ＪＨ融合基因片段，证实ＰＣＲ－ＤＩＧ系统是一种特异的检测ｔ（１４；１８）的方法。同时还表明用ＰＴＶＳ对ＰＣＲ。产物进行克隆测序优于直接用双脱氧法测序。     

反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究：Ⅰ.具有？…

目的：检测反转录病毒介导的脑肿瘤基因治疗中具有复制能力野生型反转录病毒（ＲＣＲ）。方法．；ＲＣＲ检测主要方法有：ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ），反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交以及ｎｅｏ基因和ｌａｃＺ基因的补救分析。结果：建立了ＰＣＲ的检测系统，从ＤＮＡ水平、ＲＮＡ水平和病毒活体水平对产ＨＳＶ＿ＴＫ病毒我装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ），Ｃ６转ＴＫ基因细胞和实验动物血液可能存在的ＲＣＲ野生型     

聚合酶链反应在肝病中的应用

聚合酶链反应在肝病中的应用李祖苡济南铁路局中心医院％２５０００１乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶ—ＤＮＡ）是判断ＨＢＶ感染、复制、传染性及考核抗病毒疗效的一个重要标志。聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是一种检测Ｈ...