氨甲喋呤在KLH诱导的豚鼠内耳炎症模型中的作用

目的 探讨使用免疫抑制methotrexate(MTX)直接进行内耳灌注是否可以减轻或抑制免疫反应介导的内耳炎症。方法 选健康Hartley豚鼠35只,随机分为4组,以钥孔戚血蓝素(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)作抗原(0.5mg/0.5ml)经皮下注射进行基础免疫。手术显微镜下进行乳突根治术,暴露耳蜗,选蜗底鼓阶做微孔(直径≤30μm),灌注KLH制作内耳迷路炎模型。实验耳灌注KLH,或MTX,或二者之混合物,对照耳灌注PBS。随机选11只豚鼠进行血清抗KLH抗体的ELISA检测。借助听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)和内耳的组织形态学改变观察MTX肌肉注射与内耳灌注对KLH诱导的豚鼠内耳炎症模型的听力保护作用。结果 ABR及内耳组织学均支持KLH诱导的豚鼠内耳迷路炎模型;血清抗KLH抗体ELISA检测显示KLH免疫后血清相应的抗体升高;肌肉注射或内耳局部灌注MTX,均不能阻止或减轻KLH诱导的豚鼠内耳炎症。结论 本研究不支持免疫抑制剂MTX可减轻或阻止豚鼠内耳炎症。     

豚鼠外源性血管内皮细胞生长因子增强内耳屏障转运作用的磁共振成像研究

目的观察血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor, VEGF)能否改变血迷路屏障和血外淋巴屏障的物质转运作用。方法11只300 ~900g雌雄兼并的杂色豚鼠在甲苯噻嗪(16mg/kg)和氯氨酮(60mg/kg)基础麻醉下接受手术,通过圆窗膜(明胶海绵吸附)将VEGF(6耳)或磷酸盐缓冲液(PBS, 5耳)投放至内耳。用T1对比剂二乙烯三胺五乙酸双甲酰胺钆(gadolinium diethylenetriamine pentaacetate bismethylamide, Gd DTPA BMA)作为内耳屏障转运示踪剂,用4 7T场强, 40cm孔径的BrukerBiospecAvance47 /40试验磁共振系统进行豚鼠耳蜗二维磁共振成像观测,用Paravision软件进行图像密度分析,用AdobePhotoshop6 0软件进行图像呈示。结果圆窗膜投放PBS未影响血外淋巴屏障渗透性变化。圆窗膜投放VEGF可显著增强处理侧血外淋巴屏障渗透性,VEGF处理的耳蜗鼓阶内Gd DTPA BMA转运显著增加(P<0 01 ), VEGF处理的耳蜗前庭阶内Gd DTPA BMA转运也显著增加(P<0 01)。VEGF处理的耳蜗中阶内Gd DTPA BMA转运无明显增加(P>0 05)。结论VEGF显著增强血外淋巴屏障的物质转运作用并可能有利于内耳在各种有害环境下的代偿及修复。     

豚鼠耳蜗内淋巴囊免疫反应后可诱导一氧化氮合酶的表达

在豚鼠耳蜗内淋巴囊注入钥孔(虫戚)血蓝素(KLH)之后，对豚鼠耳蜗内可诱导性一氧化氮合酶(iNOS或NOSⅡ)进行了免疫组织化学研究。所选实验动物为体重约350～400克的豚鼠12只，均被证实耳廓反射阳性，并用显微镜观察排除了中耳炎疾患。将动物分成两组，实验组注射KLH，对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS)。实验组内淋巴囊内注射KLH后，每只动物耳……     

用4.7特斯拉磁共振成像活体内观测豚鼠实验性内淋巴积水

目的探讨用4.7特斯拉试验用磁共振成像系统能否在豚鼠中检测内淋巴积水.方法20只白色或者杂色豚鼠用于该研究.5只正常豚鼠作为对照组,15只豚鼠用于制作内淋巴积水模型.9只内淋巴囊破坏组中的5只和6只内淋巴囊完整组(与乙状窦游离)动物采用gadolinium(Gd)-DTPA-BMA增强MRI检测内淋巴积水.结果由于Gd-DTPA-BMA主要进入鼓阶和前庭阶,耳蜗的三个阶可在所有动物中由MRI清晰显示.在内淋巴囊完整组,内淋巴囊手术后6天MRI即可检测到内淋巴积水,并且由组织学证实.在内淋巴囊破坏组中的1只动物,因内耳屏障的严重破坏而使Gd-DTPA-BMA快速漏入中阶,MRI可检测到该变化,其听力损失为60dB.结论用Gd-DTPA-BMA增强的高分辨MRI可检测出内淋巴积水,有可能对积水程度进行定量测试.在Gd-DTPA-BMA的帮助下,内耳屏障损伤或可能的膜破裂可以被检出.     

豚鼠内耳微循环障碍对血迷路屏障通透性的影响

目的　研究豚鼠耳蜗微循环障碍动物模型的血迷路屏障通透性变化特点 ,了解血迷路屏障通透性变化在内耳缺血性损伤中的可能作用。方法　采用光化学法建立豚鼠耳蜗微循障碍动物模型 ,改良伊文蓝荧光法定量检测其血迷路屏障通透性变化特点。结果　豚鼠耳蜗发生微循环障碍后 2h和 4h ,伊文蓝通过血迷路屏障的量分别为每只 ( 1.70 9± 0 .76 9) μg( x±s,下同 )和 ( 2 .849±0 6 5 3) μg ,t检验P <0 .0 1。 结论　豚鼠耳蜗发生微循环障碍后其血迷路屏障通透性明显增高 ,并随时间的延长而加重 ,可能是微循环障碍致内耳损伤的重要机制之一。     

豚鼠耳蜗内淋巴囊免疫反应后可诱导一氧化氮合酶的表达

在豚鼠耳蜗内淋巴囊注入钥孔血蓝素 (KLH)之后 ,对豚鼠耳蜗内可诱导性一氧化氮合酶 (i NOS或NOS )进行了免疫组织化学研究。所选实验动物为体重约 35 0～ 4 0 0克的豚鼠 12只 ,均被证实耳廓反射阳性 ,并用显微镜观察排除了中耳炎疾患。将动物分成两组 ,实验组注射 KL H,对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS)。实验组内淋巴囊内注射 KLH后 ,每只动物耳蜗内均发生了形态学变化 ,主要是前庭膜发生了典型的结构变化。注射 KLH1天后发现在豚鼠耳蜗侧壁、螺旋器和螺旋神经节细胞都发生了 i NOS免疫反应 ,并且在耳蜗内均观察到增强的 i NOS表…     

用4．7特斯拉磁共振成像活体内观测豚鼠实验性内淋巴积水

目的:探讨用4．7特斯拉试验用磁共振成像系统能否在豚鼠中检测内淋巴积水。方法:20只白色或者杂色豚鼠用于该研究。5只正常豚鼠作为对照组,15只豚鼠用于制作内淋巴积水模型。9只内淋巴囊破坏组中的5只和6只内淋巴囊完整组(与乙状窦游离)动物采用 gadolinium(Gd)-DTPA-BMA增强MRI检测内淋巴积水。结果:由于 Gd-DTPA-BMA主要进入鼓阶和前庭阶,耳蜗的三个阶可在所有动物中由MRI清晰显示。在内淋巴囊完整组,内淋巴囊手术后6天MRI即可检测到内淋巴积水,并且由组织学证实。在内淋巴囊破坏组中的1 只动物,因内耳屏障的严重破坏而使Gd-DTPA-BMA快速漏入中阶, MRI可检测到该变化,其听力损失为60dB。结论:用Gd-DTPA-BMA 增强的高分辨MRI可检测出内淋巴积水,有可能对积水程度进行定量测试。在Gd-DTPA-BMA的帮助下,内耳屏障损伤或可能的膜破裂可以被检出。图4表4参12     

耳蜗振动创伤后血迷路屏障变化的磁共振成像表现

目的 在动物模型中探讨电钻振动诱导听力减退的机制和可能的血迷路屏障变化。方法 用电磁振荡器在5只豚鼠听泡上产生可重复的振动，其振动频率为250Hz，用复合动作电位评估其听功能，振动后3小时至4天用4．7特斯拉磁共振成像分析其血迷路屏障变化。静脉注射T1增强剂Gadolinium-diethylenetriaminepentaacetate-bismethylamide （Gd-DTPA-BMA）作为血迷路屏障的示踪剂。结果 振动诱导平均听力损失40dBHL，在振动后立即测试的耳蜗中．其中阶摄取Gd-DTPA-BMA，提示血迷路屏障通透性增加。在振动后2天至4天的动物中，其中阶内无Gd-DTPA-BMA摄取。结论 250Hz振动使血路屏障通透性增加是使导致听力减退的原因之一。其通透性的变化为一个可逆的过程。     

尼莫地平对内耳缺血/再灌注豚鼠耳蜗血迷路屏障通透性的影响

目的研究尼莫地平对内耳缺血/再灌注后豚鼠耳蜗血迷路屏障通透性的影响。方法随机将32只豚鼠分为4组,每组8只,分别为缺血用药组、缺血对照组、再灌注用药组、再灌注对照组。采用小脑前下动脉FeCl3诱导血栓形成制备耳蜗缺血豚鼠模型,缺血1小时后再经股静脉给予尿激酶溶解血栓制备再灌注模型,分别于缺血后早期及再灌注后静脉注射尼莫地平,各对照组以等量生理盐水代替尼莫地平注射。采用激光多普勒血流测量仪监测耳蜗血流量(cochlear bloodflow,CoBF),测量实验前后豚鼠听性脑干反应(ABR)波Ⅲ反应阈值;分别在股静脉推注伊文思蓝2小时后采用荧光定量检测其血迷路屏障通透性变化。结果豚鼠耳蜗发生缺血后早期应用尼莫地平组与缺血对照组伊文思蓝通过血迷路屏障的平均量分别为每只0.245±0.108和0.442±0.153μg,差异有统计学意义(P<0.05);耳蜗发生缺血再灌注后应用尼莫地平组与再灌注对照组,伊文思蓝通过血迷路屏障的平均量分别为每只0.963±0.261和0.620±0.148μg,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在内耳缺血早期使用尼莫地平,能减轻血迷路屏障的损伤;但在缺血再灌注后使用尼莫地平,则加重血迷路屏障的损伤,使其通透性增加。     

抗淋巴细胞球蛋白在鼠内耳免疫损伤中的作用

目的研究抗淋巴细胞球蛋白(Antilymphocyte Globuli ALG)经内耳给药后能否改善豚鼠内耳免疫反应动物模型的免疫损伤。方法 24只清洁级健康Hartley豚鼠随机分为三组,即试验组、阳性对照组、阴性对照组(n=8),试验组、阳性对照组以钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin KLH)建立右耳免疫反应动物模型,阴性对照组右耳以PBS对照;建模后第3天试验组、阴性对照组予内耳注射兔抗鼠免疫球蛋白,阳性对照组予PBS对照。通过观察听性脑干反应(auditory brainstem response ABR)、外淋巴液抗KLH抗体,了解ALG对内耳异常免疫调节作用。结果造模后3天试验组及阳性对照组听力较阴性对照组有明显下降(p﹤0.05),ALG干预后1周,试验组听力较阳性对照组有明显改善(p﹤0.05),4周后与阴性对照组无明显差异(p﹥0.05);在KLH免疫后外淋巴抗KLH抗体升高,ALG可阻止或减轻抗KLH抗体在内耳的表达(p﹤0.05)。结论 ALG可阻止或减轻内耳异常免疫反应,对梅尼埃病等内耳病症有临床应用前景。