乙型肝炎病毒血清学标记物与PCR HBV—DNA检测结果的比较

对309例乙型肝炎病毒血清学标记物15种阳性形式进行PCR HBV－DNA检测比较，HBsAg( )、HBeAg( )形式的PCR阳性率95．2％；HBsAg( )、HBeAg( )、抗-HBc( )形式的PCR阳性率83．3％。抗－HBs( )、抗-HBc( )形式的PCR阳性率为0；抗－HBc( )形式的PCR阳性率亦为0。结论：PCR HBV－DNA检测具有特异性高、敏感性强、准确性大的优点，值得推广应用。     

荧光定量PCR法和巢式PCR法检测新生儿脐血人巨细胞病毒DNA的比较

目的 比较荧光定量PCR法和巢式PCR法在检测新生儿人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染中的灵敏度,为HCMV先天性感染的快速特异性检测提供实验依据.方法 随机收集36例脐血标本,分离单核细胞,提取总DNA,进行巢式PCR和荧光定量PCR检测.结果 巢式PCR法检测HCMV糖蛋白(gB) DNA的阳性率为22.2%(7/...     

标本的处理对PCR检测结核杆菌结果的影响

目的 :应用核酸纯化法处理结核标本在 PCR中的价值。方法 :从 12例诊断为活动性肾结核的病人处 ,收集尿液标本 ,分别用核酸纯化法与常规法处理尿液标本。两种处理方法用定量 PCR与定性 PCR各重复做 3次扩增 ,分析其结果。结果 :用核酸纯化法处理的标本 ,定量 PCR检出率为 91.6 7% (11/12 ) CV(0 .3413) ,定性 PCR检出率为 83.33% (10 /12 )。用常规法处理的标本 ,定量 PCR检出率为 75 % (9/12 ) CV(0 .74 38) ,定性 PCR检出率为 5 0 %(6 /12 )。经配对 χ2检验核酸纯化法与常规法对结核杆菌 PCR检出率差异有显著性 P<0 .0 5。结论 :在结核标本的前处理时 ,必须要进行核酸纯化 ,减少标本中的抑制物 ,可提高结核杆菌 PCR的检出率 ,对结核病的诊断治疗起着非常重要的作用     

PCR微板杂交检测生殖器疱疹病毒感染

以 PCR扩增生殖器疱疹病毒 DNA,然后用特异性 DNA探针微孔板检测疱疹病毒扩增产物 ,同时用普通 PCR检测同样的标本。结果 4 3例病例组中 ,PCR微板杂交 35 (83% )例阳性 ,8例 (17% )阴性 ;普通 PCR37(86 % )例阳性 ,6 (14 % )例阴性 ,二者无显著性差异 ;对照组 PCR微板杂交 19例 2例阳性 ,17例阴性。同时 ,普通 PCR则有 5例阳性 ,14例阴性。PCR微板杂交具有快速、灵敏度高、特异性强、抗污染能力强的优点 ,适用于检测可疑 HSV感染 ,具有临床使用价值     

荧光探针定量PCR技术

PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。     

SARS冠状病毒的稳定性和抵抗力

分子生物学检测方法 聚合酶链式反应(PCR)可以检测各种标本中(血、粪便、呼吸道分泌物或体液)的SARS冠状病毒(SARS-CoV)的基因物质。世界卫生组织(WHO)网站已公布了SARS-CoV的PCR引物;PCR试剂盒,包括引物、阳性和阴性对照也即将面市。PCR实验是非常特异的,但缺乏敏感性。这就意味着阴性结果不能除外SARS-CoV感染。另一方面,如果实验室质量控制不好造成标本污染,也可有假阳性结果。同时,PCR的检测结果还要与临床和流行病学资料     

聚合酶链反应检测弓形虫感染的临床应用

本文根据DNA复制原理,从弓形虫(TOX)基因组保守区域选择一对寡聚核苷酸引物,建立检测TOX的聚合酶链反应(PCR)。同时采用PCR法与ELISA法对144例原因不明的低热、头痛、头晕病人进行检测,结果PCR检出率(22.2％)明显高于 ELISA检出率(17.4％),经统计学配对计数资料比较的X~2检验有显著性差异(p<0.05)。结果表明,PCR具有快速、敏感、特异等优点,是临床检测 TOX的可行方法之一。     

两种检测乙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应比较

目的 :评价普通聚合酶链式反应 (C PCR)和荧光定量聚合酶链式反应 (FQ PCR)检测乙型肝炎病毒核酸 (HBVDNA)的临床应用价值。方法 :用C PCR和FQ PCR分别检测 2 4 9例乙型肝炎患者和 5 1例健康体检者血清HBVDVA。乙型肝炎血清学标志物用ELISA测定。结果 :用C PCR和FQ PCR检测HBVDVA阳性率分别为 :HBeAg (+)组 80 5 0 %和 10 0 0 0 % (P <0 0 1) ;抗HBe (+)组 17 39%和 82 6 0 % (P<0 0 1) ;HBeAg ( )抗HBe ( )组 14 5 1%和 4 0 32 % (P <0 0 1)。健康体检者两法均为阴性。结论 :FQ PCR对乙型肝炎诊断、传染性的判断和抗病毒药物疗效评价方面比C PCR更具有临床应用价值。     

聚合酶链反应检测肝病患者血液中纳米细菌的研究

目的 评价PCR检测慢性肝病和肝癌患者血液中纳米细菌(NB)的临床价值.方法 对68例慢性乙型肝炎(CHB)、54例慢性重型乙型肝炎(CSHB)、66例肝硬化(CL)、23例肝癌(HCC)患者采用免疫组化染色、透射电镜扫描和PCR技术,检测血液中的纳米细菌,并与40例健康人结果比较.结果 PCR检测纳米细菌阳性率分别为27.69%、50.00%、61.29%、52.38%和5.00%,慢性肝病和肝癌患者阳性率明显高于健康人(P＜0.005).慢性乙型肝炎阳性率低于其他肝病(P＜0.005).PCR测定结果与免疫组化染色比较,两法阳性率无明显差异(P＞0.05),PCR灵敏度为46.51%,特异性为73.95%,总有效率66.67%.结论 PCR对纳米细菌的检测具有重要的参考价值.慢性肝病和肝癌患者血液中纳米细菌感染率高于健康人.     

PCR法和TP-ELISA法检测梅毒的结果分析

目的:探讨巢式PCR法在血液样本梅毒检测中适用性.方法:运用常规及巢式PCR 扩增了梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)的DNA多聚酶I基因(DNA polymerase I,polA) 的特异性片段,与血清学方法比较,评价了两方法在诊断梅毒中的意义.结果:用PCR法和TP-ELISA检测89份拟诊为梅毒的血液标本,TP-ELISA方法与巢式polA(DNA polymerase I)PCR结果差异有统计学意义;巢式PCR敏感性高于常规PCR.结论:巢式polA(DNA polymerase I )PCR虽然具有高度敏感、特异等优点,但对全血、血清等标本要求较高,是否适合用于血液样本的检测有待进一步研究.     

聚合酶链反应和改良抗酸染色诊断L型结核杆菌感染

目的　探讨 L 型抗酸菌的 IK染色和 PCR检测的临床应用价值 .方法　采用 IK染色和 PCR技术 ,对结核病患者(35例 )、非特异性淋巴结炎患者 (30例 )和正常胎儿 (1 0例 )的石蜡切片进行对比研究 .结果　两种方法 (PCR和 IK染色 )对上述 3组 75例的检测阳性率分别为 80 % ,83% ;6 7% ,6 0 %及 0 % .结论　 PCR技术及 IK染色 ,检测抗酸菌 L 型的阳性率及灵敏度均较高     

实时荧光定量PCR的研究进展及应用

实时定量PCR(real-time PCR)的应用范围非常广泛,包括mRNA表达的研究、DNA拷贝数的检测、单核苷酸多态性(SNPs)的测定等。由于传统的PCR技术不能准确定量,使其在实际应用方面受到很大限制,因此,对PCR产物进行准确定量,尤其是病毒性病原的动态监控,成为迫切需要。     

荧光定量PCR和超高倍显微诊断系统检测沙眼衣原体

目的探讨荧光定量PCR和超高倍显微分析仪活体检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断价值。方法应用荧光定量PCR和MMDI法对40例患者进行沙眼衣原体(CT)检测,并将两种方法进行比较。结果两者均阳性18例(45.0%);两者阴性19例(47.5%),荧光定量PCR阳性、MMDI阴性2例(5.0%);荧光定量PCR阴性、MMDI阳性1例(2.5%)。两法检出率比较,差异无统计学意义(McNewmar检验,P=1.000)。结论实验证明荧光定量PCR和MMDI均能很好地检测沙眼衣原体。MMDI是检测沙眼衣原体的一种快速、直观的诊断方法,而荧光定量PCR检测较为客观。     

细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究

目的:比较不同方法检测生殖器疱疹病毒感染的效率。方法:采用病毒培养和PCR法检测疑为生殖器疱疹病毒感染者标本60例,并用PCR作病毒分型。结果:根据病史及临床表现确诊的生殖器疱疹患者标本60例中,病毒培养法阳性36例,阳性率60%(36/60);PCR检测单纯疱疹病毒(HSV)阳性45例,阳性率75%(45/60),和病毒培养相比,差异非常显著(χ2=26.76,P<0.01);PCR分型结果显示阳性标本均为单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)。水疱和脓疱标本的病毒培养和PCR检测阳性率均较高(80.0%~93.3%),糜烂、结痂、斑丘疹标本检测中PCR阳性率(20.0%~66.7%)高于病毒培养(0~33.3%)。结论:对疑为生殖器疱疹患者作病原学诊断,采集水疱、脓疱标本进行病毒分离或PCR检测较佳。     

聚合酶链反应技术在淋菌性尿道炎诊断中的价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)技术对淋菌性尿道炎的诊断价值.方法320例淋菌性尿道炎患者分别采用PCR法及涂片(Smear)法染色进行检测,并对阳性检出率进行比较.结果320例中PCR法、Smear法阳性检出率分别为92%、 56%,PCR法明显高于Smear法(P＜0.01).结论PCR法检测淋菌优于涂片法,并具有快速、特异性高、敏感性强等特点,对临床诊断及治疗有重要的指导意义.     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒

聚合酶链反应 (PCR)是目前检测血清中 HBV- DNA的最敏感方法 ,但 PCR只能定性分析 ,无法给出临床需要的定量结果 ,其最终产物需用电泳法检测 ,易引起 PCR产物的交叉污染 ,且操作繁琐 ,不利于进行大规模样品分析。本文采用实时荧光定量 PCR方法 (PCR,FQ- PCR) [1 ] 测试了 2 0 1份血清标本 ,并同时采用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)进行对照 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　标本来源 :收集本院病房及门诊确诊或怀疑乙肝患者血清 171份 ,健康献血员血清 30份。1.2　仪器 :PE770 0自动荧光 PCR仪 (美国 Perkin Elmer公司 )和日立…     

PCR检测胸水中结核分枝杆菌DNA的临床意义

应用聚合酶链反应(PCR)对82例胸腔积液患者的胸水进行结核分枝杆菌(MTB)DNA检测,并与胸水涂片抗酸染色结果进行比较 。结果显示82例胸水的MTB-DNA PCR总阳性率为48.8％,其中53例结核性胸水的PCR和涂片检测结果分别为75.5％和5.7％(P<0.01);29例非结核性胸水的涂片结果均为阴性,但2例(6.9％)出现PCR阳性结果。PCR检测的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.5％、93.1％、95.2％和67.5％。结果表明,PCR检测胸水标本中的MTB具有快速、敏感、特异等优点。对影响PCR检测结果的某些因素进行了讨论。     

PCR中耐热DNA聚合酶催化DNA合成错误

PCR(Polymerase Chain Reaction)是近年来发展起来的用于体外扩增特定DNA片段的方法,PCR早期使用的DNA聚合酶为大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段(Klenow片段),随后采用耐热DNA聚合酶(Taq DNA polymerase),不仅使PCR操作过程大为简化,而且其催化DNA合成片段的长度、忠实性都有较大改进.但仍有极低的错误率发生.错误率发生的高低与PCR扩增条件有关.我们应用PCR技术从Ⅱ型糖尿病人(非胰岛素依赖型糖尿病)基因组DNA中扩增出胰岛素基因片段(大小为1128bp),并将PCR产物直接克隆到M_(13)载体中(M_(13)mp18/M_(13)mp19 RFDNA),再用双脱氧链终止法作DNA序列分析     

PCR-SSCP法分析载脂蛋白E基因多态性

目的:建立一种快速、简便、敏感的载脂蛋白E(ApoE)基因多态性检测方法。方法:酚/氯仿法提取46例原发性肾病综合征(primarynephroticsyndrome,PNS)患儿全血基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增ApoE第四外显子,取PCR产物10μl加入等体积含有甲酰胺的上样缓冲液中,变性后行8%聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显示结果。同时对PCR产物进行测序,确认单链构象多态性(single strandconformationpolymorphism,SSCP)的检测结果。结果:PCR SSCP法筛选出的各基因型与测序结果完全符合。结论:PCR SSCP法可以快速准确地检测ApoE常见基因型。