CEA启动子驱动cd—tk表达对CEA阳性肿瘤细胞的杀伤作用

目的：大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ，ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）和Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＴＫ，ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ）融合基因ｃｄｔｋ，在癌胚抗原（ＣＥＡ，ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ）阳性肿瘤细胞表达，联合使用前体药５氟胞嘧啶（５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ，５ＦＣ）和丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）可明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：ＰＣＲ法分别扩增出ＣＥＡ启动子、ｃｄ和ｔｋ；构建真核表达载体ｐＣＥＡｃｄｔｋ；用脂质体将它导入ＣＥＡ阳性肿瘤细胞株ＨＴ２９、ＬｏＶｏ、ＳＧＣ７９０１、ＧＬＣ８２及ＣＥＡ阴性细胞株ＢＥＬ７４０２中；ＭＴＴ法检测５ＦＣ、ＧＣＶ对这类细胞的毒性作用及对放疗射线的增敏效果。结果：融合基因ｃｄｔｋ只在ＣＥＡ阳性细胞中表达，且表达该基因的肿瘤细胞对５ＦＣ和ＧＣＶ都很敏感。联合使用ＧＣＶ和５ＦＣ时，对这些肿瘤细胞的毒性明显增加，该体系也可明显增强放疗射线对细胞的杀伤作用。结论：与单独使用ＣＤ／５ＦＣ，ＴＫ／ＧＣＶ相比，ＣＤＴＫ／５ＦＣ＋ＧＣＶ体系对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强，该体系对放疗射线有较强的增敏作用。     

脂质体介导的基因转染效率与肺癌细胞的增殖特性的关系

目的：探讨阳离子脂质体介导的基因转染效率与肺癌细胞增殖特性的关系。方法：采用pCMVβ报告基因质粒及自杀基因E.colicd的真核表达载体评价脂质体介导的基因转染效率。肺癌细胞增殖特性的检测包括绘制细胞生长曲线、计算细胞群体倍增时间、流式细胞仪测量肺癌细胞的细胞周期分布。结果：肺癌细胞的类型对脂质介导的基因转染效率具有显著影响。细胞增殖速度越快,处于分裂期（G2／M）的细胞越多,则脂质介导的基因转染效率越高。结论：脂质介导的基因转染对细胞增殖的依赖,提示 由快速增殖细胞构成的组织更适合阳离子脂质介导的基因治疗。     

阳离子脂质体介导HSV-TK/ACV基因系统抑制人肺癌生长的实验研究

目的:探讨阳离子脂质体介导的HSV-TK/ACV基因系统治疗人肺癌的实验研究的意义.方法:利用已构建的真核表达质粒pCR3-TK,用阳离子脂质体LipofectAMINE为载体,将pCR3-TK转染Anip973细胞株,然后给予不同浓度的Aciclovir(ACV).结果:经MTT检测证实转染了TK基因的肺癌细胞对ACV的杀伤敏感性明显提高,FCM检测可以看到凋亡峰的出现,且相应的S期细胞比率增高.结论:HSV-TK/ACV系统对人类肺癌细胞株Anip973具有良好的抑制作用;阳离子脂质体LipofectAMINE对人类肺癌细胞株Anip973安全、低毒,有可能成为基因治疗应用到临床试验的有价值的载体.     

荷CEA-rV的DC增强CD3AK对CEA阳性肿瘤特异杀伤作用的研究

目的 观察荷CEA-rV的DC增强CD3AK细胞对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤功能。方法 用脐血制备脐血单个核细胞（UBMC），培养3h后，收集悬浮细胞制备CD3AK，重悬贴壁细胞制备DC。DC培养3d时加入CEA-rV，制备CEA-vV＋DC；在CD3AK培养8d时，加入CEA-rV＋DC混合培养，制备CEA-rV＋DC＋CD3AK。用MTT法测效应细胞UBMC，CD3AK，DC＋CD3AK，CEA-rV＋DC＋CD3AK，分别对CEA阳性靶细胞：LOVO，A549和CEA阴性靶细胞：肝癌细胞株BEL-7402，红白血病细胞株K652的杀伤活性。结果 ①用CEA兔抗人单克隆抗体对四种靶细胞株的鉴定结果表明，LOVO和A549确是CEA阳性细胞株，BEL．7402和K562确是CEA阴性细胞株。②培养10d的DC流式细胞仪检测结果示：高表达MHCI，Ⅱ类分子CD86（82．7％），CD80（51．1％），CD83（57．5％），CD40（69.4％），低表达CD123分子，光学和电子显微镜观察，DC细胞呈不规则形，有大量突起和伪足，成熟DC直径15-20um，胞浆线粒体，内质网丰富。证明为成熟DC。③CD3AK细胞和单纯UBMC细胞的流式细胞仪的免疫分子表型结果是，无论CD3，CD4，CD8和CD28，在CD3AK细胞组中的比率都是UBMC组的二倍以上。说明CD3AK组中成熟T淋巴细胞量明显高于UBMC细胞组。④三种效应细胞CEA-rV＋DC＋CD3AK，DC＋CD3AK和CD3AK对四种靶细胞的杀伤率均比单纯UBMC组明显提高（P〈0.01），而且CEA-rV＋DC＋CD，AK组〉DC＋CD3AK组〉CD3AK组〉UBMC组。说明细胞因子，DC和CEA-rV都有进一步提高UBMC广谱的杀伤肿瘤细胞活性的作用。⑤CEA-rV＋DC＋CD3AK和CD，AK相比较，对CEA阳性细胞LOVO和A549的杀伤活性提高的显著性（P〈0．01）明显优于对CEA阴性细胞K562和BEL-7402显著性（P〈0．05）。说明CEA-rV＋DC能显著提高CD3AK细胞对CEA阳性肿瘤的特异杀伤活性。CEA-rV＋DC＋CD3AK组和DC＋CD3AK组相比，对CEA阴性细胞株的杀伤活性无显著差异（P〉0．05），而对CEA阳性细胞株的杀伤活性确能明显提高（P〈0．01）。进一步证实了CEA-rV能明显提高CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用。结论 CEA-rV＋DC能明显提高CD3AK细胞对CEA阳性细胞株杀伤作用，单纯DC对提高CD3AK杀伤CEA阳性细胞的作用不显著，结果表明CEA-rV在提高CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用中起着关键作用。     

荷CEA-rV的DC增强CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用

癌胚抗原(carcino embryonic antigen,CEA)是一种常见的肿瘤相关抗原,是目前国际上公认的肿瘤标记物.在人体上皮细胞恶性肿瘤中,包括90%的胃肠道肿瘤、胰腺癌、80%以上的非小细胞肺癌和50%左右的乳腺癌,都呈CEA阳性.人们称这类肿瘤为CEA阳性肿瘤[1].罗超权等[2]用牛痘病毒构建的CEA-重组基因痘苗病毒(CEA-rV)既有CEA抗原的高表达,又可刺激机体产生CEA抗体.     

荷CEA-rV的DC增强CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用

癌胚抗原（carcino embryonic antigen，CEA）是一种常见的肿瘤相关抗原，是目前国际上公认的肿瘤标记物。在人体上皮细胞恶性肿瘤中，包括90％的胃肠道肿瘤、胰腺癌、80％以上的非小细胞肺癌和50％左右的乳腺癌，都呈CEA阳性。人们称这类肿瘤为CEA阳性肿瘤。罗超权等心。用牛痘病毒构建的CEA-重组基因痘苗病毒（CEA-rV）既有CEA抗原的高表达，又可刺激机体产生CEA抗体。     

阳离子脂质体介导小鼠白细胞介素2基因治疗头颈鳞癌的抗肿瘤作用研究

白细胞介素2(IL-2)是肿瘤兔疫治疗中最有效的细胞因子之一。运用转基因技术将IL-2基因转入肿瘤细胞并表达,可克服全身应用IL-2蛋白质制剂所带来的副作用。国内外一些研究认为合适的脂质体和核酸物质的质量比是形成复合物理化特性的决定性因素,并影响其转染效率。转染肿瘤因肿瘤细胞的类型、脂质体结构和电荷不同等因素影响而效果各异。我们利用多价阳离子脂质体LipofectAMINE携带小鼠IL-2基因的真核表达质粒转染头颈鳞癌SCCⅦ细胞株及其移植瘤,旨在探讨脂质体转染特性,寻求最佳脂质复合物(Lipoplexes)转染比例,为进一步基因治疗提供最佳转导途径。     

阳离子脂质体介导小鼠γ—干扰素的因素表达

为探讨γ－干扰素用于基因治疗的有效途径,应用ＲＴ－ＰＣＲ从小鼠脾脏获得小鼠γ－干扰素（ｍＩＦＮ－γ）全长ｃＤＮＡ,经序列测定后克隆到真核表达载体ｐＬＸＳＮ中,用阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导转染小鼠肝癌细胞,用ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ对该基因的整合和表达进行了鉴定,并对细胞培养上清中γ－干扰素的活性进行了检测。结果表明,该基因已经有效地整合到细胞基因组上并实现了表达,这为进一步开展细胞因     

慢病毒载体介导的自杀基因系统YCD/5-FC对人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞杀伤效应的研究

背景与目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)可将无毒性的抗真菌药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)转化为细胞毒性产物氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU),进而阻抑DNA、RNA和蛋白质合成,引起细胞死亡.本研究中构建含YCD基因的慢病毒载体质粒,体内外观察YCD/5-FC自杀基因系统的杀伤效应.方法:应用亚克隆技术将YCD和绿色荧光蛋白基因(green fluorescence protein,GFP)连接至慢病毒空载体pFUW,构建获得pGC-FU-YCD-GFP.将3质粒系统(含包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒)脂质体法共转染包装细胞293T,获得的慢病毒转染人Jurkat细胞,流式细胞仪(FACS)和Western blot检测Jurkat/YCD-GFP表达水平;加入前体药物5-FC,观察对靶细胞的杀伤情况和旁观者效应.转基因细胞接种至裸鼠前肢皮下,观察体内肿瘤杀伤情况.结果:慢病毒载体3质粒系统感染293T细胞后,获得的慢病毒滴度为1.2×108TU/mL.该病毒可高效转染人Jurkat细胞,感染率达96.93%,Western blot显示转基因细胞可分泌YCD蛋白.100 μmol/L 5-FC作用96 h可杀伤(89.37±6.57)%的Jurkat/YCD-GFP细胞.混合培养提示存在明显的旁观者效应.转基因细胞可在小鼠体内致瘤,5-FC可明显抑制肿瘤生长.结论:成功构建慢病毒载体pGC-FU-YCD-GFP,YCD/5-FC自杀基凶系统在体内外均有显著的特异性杀伤效应.     

Double‐targeted and double‐enhanced suicide gene therapy mediated by generation 5 polyamidoamine dendrimers for prostate cancer

Herpes simplex virus (HSV)‐thymidine kinase (TK)/ganciclovir (GCV) system is one of the most widely used and efficient suicide gene therapy for prostate cancer, but the lack of favorable gene vector and target limits its application. In this study, we established a novel system using nonviral gene vector G5‐PAMAM‐D to express HSV‐TK and connexin43 (Cx43) gene driven by prostate‐specific membrane antigen (PSMA) promoter, and evaluated the anti‐tumor effect of this system. G5‐PAMAM‐D delivered PSMAe/p‐TK‐Cx43 showed expression of TK and Cx43 only in LNCaP cells, but not in PC‐3 and other cells. The transfection efficiency of this system was comparable to lipofectamine 2000 by propidium iodide staining assay. With gemcitabine, folate‐G5‐PAMAM‐D delivered PSMAe/p‐TK‐Cx43 (folate‐G5‐PAMAM‐D/PSMAe/p‐TK‐Cx43) significantly decreased prostate cancer LNCaP cell proliferation and promoted apoptosis in vitro. With gemcitabine, the systemic deliver of folate‐G5‐PAMAM‐D/PSMAe/p‐TK‐Cx43 significantly inhibited tumor growth in the LNCaP xenograft animal model. Our study demonstrates that this double‐targeted and double‐enhanced system is effective in inducing cell growth inhibition and apoptosis in vitro and suppressing tumor growth in vivo. In conclusion, Cx43 and gemcitabine combined with HSV‐TK/GCV gene therapy using nonviral vector G5‐PAMAM‐D hold great potential as a novel approach for the gene therapy of prostate cancer. © 2011 Wiley Periodicals, Inc.     

转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因系统对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用

背景与目的 研究KDR启动子转录调控双自杀基因系统(CDglyTK)对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用.方法 应用分子生物学技术克隆KDR基因的启动子KDRP,构建KDR启动子调控的双自杀基因(CDglyTK)真核表达质粒pcDNA3-KDRp-CdglyTK.并将其导AL9981和人肝癌细胞HepG2中.给予不同的前药(GCV和/或5-FC)处理后,应用MTT法检测各组细胞的存活率.并应用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期和凋亡.结果 成功的克隆KDR启动子和构建pcDNA3-KDRp-CdglyTK质粒.pcDNA3-KDRp-CdglyTK转染后,L9981细胞中均可检测到CD和TK mRNA,而HepG2细胞中则无.联合应用5-FC+GCV处理对转双自杀基因细胞(L9981)的杀伤作用显著高于单独应用5-FC或GCV(P<0.05),且二者显示了良好的药物协同作用.结论 KDR基因启动子调控双自杀基因系统可以靶向性杀伤人肺癌细胞.     

放射诱导辣根过氧化物酶/吲哚乙酸自杀基因表达对肺癌细胞系的生物效应研究

目的 检测放射诱导的肿瘤特异性嵌合启动子介导的辣根过氧化物酶/吲哚乙酸自杀基因系统对肺癌细胞A549、SPC-A1的生物效应.方法 构建含有6个CArG元件的人端粒酶逆转录酶基因嵌合启动子调控的辣根过氧化物酶表达的质粒载体,及单个端粒酶逆转录酶启动子质粒和对照质粒,分别为pE6-hTERT-HRP、phTERT-HRP、pControl-HRP、pControl-luc.分别用细胞计数法、Annexin V-FITC染色检测此嵌合启动子质粒系统对肺癌细胞A549、SPC-A1和正常人胚肺细胞(hEL)的生长抑制及凋亡效应.利用成克隆分析法检测此系统对肺癌细胞A549、SPC-A1放射敏感性的影响.结果 在6 Gy放射线诱导下质粒pE6-hTERT-HRP、phTERT-HRP、pControl-HRP、pControl-luc介导的自杀基因系统对A549细胞的平均生长抑制率分别为72.92%、40.60%、51.00%、25.19%(F=67.31,P<0.01),对SPC-A1细胞的平均抑制率分别为64.63%、30.02%、48.23%、23.16%(F=64.94,P<0.01),而对正常hEL细胞则分别为20.81%、18.05%、44.20%、18.32%(F=52.19,P<0.01).同样四种质粒对A549细胞的平均早期凋亡率分别为36.63%、22.30%、24.33%、12.53%(F=50.99,P<0.01),对SPC-A1细胞的平均早期凋亡率分别为33.73%、17.37%、22.43%、11.20%(F=20.76,P<0.01),而对正常hEL细胞则分别为13.53%、12.5%、21.93%、12.16%(F=15.08,P<0.01).同样四种质粒对A549细胞放射增敏比分别为3.45、2.29、3.05、1.21,对SPC-A1细胞的放射增敏比则分别为2.68、2.15、2.28、1.15.结论 放射诱导的肿瘤特异性嵌合启动子介导的辣根过氧化物酶/吲哚乙酸自杀基因系统对肺癌细胞A549、SPC-A1具有特异杀伤作用,具有很好的应用前景.     

自杀基因HSV-TK对肺癌细胞增殖活性影响的实验研究

目的探讨自杀基因HSV-TK对肺癌细胞增殖活性影响.方法利用嗜银染色AgNOR观察肺癌细胞系Anip973在经阳离子脂质体介导的自杀基因系统HSV-TK转染后应用阿昔洛韦(ACV),观察细胞形态并计数,观察其增殖活性的变化.结果经AgNOR嗜银染色72h测定,其结果表明,G、G-Lipo、G-P细胞AgNOR平均数无明显差别,而G-pTK细胞的AgNOR平均数明显低于前三种细胞,具有显著差异.结论自杀基因HSV-TK/GCV系统对肺癌细胞株Anip973的细胞增殖活性具有抑制作用,对其临床应用具有理论意义.     

乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应

目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。     

Gene therapy utilizing the Cre/loxP system selectively suppresses tumor growth of disseminated carcinoembryonic antigen-producing cancer cells.

Recent clinical trials of cancer gene therapy have shown encouraging results for controlling localized tumors. However, to control metastatic or disseminated tumor cells, further modification of vectors is required to enhance specificity and infectivity against targets. We investigated whether utilization of the Cre recombinase(Cre)/loxP system contributes to enhanced antitumor effects together with minimal adverse reactions in specific gene therapy against disseminated carcinoembryonic antigen (CEA)-producing cancer cells in the peritoneal cavity of mice. CEA-producing cancer would be a good therapeutic target because it is found in lung, stomach and colon sites, which account for most cancers. We constructed a pair of recombinant adenoviral vectors (Ads), one of which expresses the Cre gene under the control of the CEA promoter (Ad.CEA-Cre); the other expresses the herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK) gene (Ad.lox-TK), or the beta-galactosidase gene (beta-gal) by Cre (Ad.lox-beta-gal). Intraperitoneal coinjection of Ad.CEA-Cre and Ad.lox-beta-gal into mice with peritonitis carcinomatosa by CEA-producing tumor cells showed selective expression of the beta-gal gene in tumor foci. Coinfection of Ad.CEA-Cre and Ad.lox-TK followed by ganciclovir (GCV) administration significantly suppressed the total tumor weight in the peritoneal cavity of the mice to 13% of that of the untreated mice and 22% of that of the mice treated with Ad.CEA-TK/GCV, an Ad that expressed the HSV-TK gene driven by the CEA promoter alone. Moreover, treatment with Ad.CEA-Cre and Ad.lox-TK/GCV completely suppressed tumors in 4 of 10 (40%) mice without significant weight loss, although 2 of 10 mice treated with Ad.CAG-TK/GCV, an adenovirus vector that strongly but nonspecifically expressed the TK gene, died due to severe side effects including diarrhea, weight loss and liver dysfunction. These findings suggest that cell type-specific gene therapy using the Cre/loxP system is effective against disseminated cancer cells without significant side effects.     

重组腺病毒Ad—hTERTp-HSV—TK／GCV系统的构建及其对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用及旁观者效应研究

背景与目的:肝癌的基因治疗已成为肝癌治疗的重要发展方向,本文探讨Ad-hTERTP-HSV-TK/GCV系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用;并观察其过程中旁观者效应的作用。方法:用重组腺病毒Ad-hTERTP-HSV-TK系统分别感染肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞L-02,加入前体药物更昔洛韦(GCV),四甲基偶氮唑盐比色法检测其对感染后细胞的杀伤作用;将感染后的TK阳性HepG2细胞和未感染的TK阴性HepG2细胞按不同比例浓度(0∶10、1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1、10∶0)混合,观察其旁观者效应。结果:肝癌细胞HepG2的存活率随病毒感染复数(MOI)和GCV浓度增加而逐渐降低,L-02细胞无明显变化。旁观者效应表明,在TK阳性HepG2细胞为10%时,细胞抑制率达28.06%,70%时达90.44%。结论:重组腺病Ad-hTERTP-HSV-tk/GCV系统对肝癌细胞HepG2有选择性杀伤作用及明显的旁观者效应。     

壳聚糖纳米粒介导的人类端粒酶反转录酶启动子连接的自杀基因耦联更昔洛韦靶向抗肝癌研究

目的比较壳聚糖（Ch）与半乳糖化壳聚糖（GC）纳米载体对肝癌细胞的转染效果;观察转染后的人类端粒酶反转录酶启动子连接的自杀基因（pGL3-hTERTp—TK）对肝癌细胞株HepG2生长及凋亡的影响。方法制备ch及Gc;构建pGL3,hTERTp—TK质粒及ch／DNA和GC／DNA复合物;转染HepG2细胞和正常肝细胞L-02;通过单光子液闪计数仪观察转染效率;流式细胞术（FCM）、Caspase-3万法观察自杀基因对肝癌细胞生长和凋亡的影响。结果质粒经酶切及电泳后在琼脂糖凝胶上出现300bp与1100bp两个清晰条带;在HepG2中,由Gc介导的pGL3-hTERTp．Luc^＋荧光素相对活性表达明显高于ch介导的pGL3-hTERTp—Luc^＋,但比去唾液酸糖蛋白（AF）介导的pGL3．hTERTp—Luc^＋低,而在正常肝细胞荧光素相对活性表达极低;治疗质粒Gc介导的pGL3-hTERTp—TK转染的HepG2细胞抑制率和L-02细胞抑制率,在前体药物更昔洛韦（GCV）的浓度为10μg／ml时差异有统计学意义（t=51．40,P=0．000）。HepG2细胞组GC—pGL3-hTERTp—TK凋亡率为65．28％,明显高于其他组（LSD法,均P〈0．05）。L-02细胞组GC—pGL3-hTERTp—TK凋亡率仅为10．R0％,明显低于对照组Ch—pGL3-control（LSD法,P=0,000）;FCM检测显示Ch—pGL3-hTERTp—TK转染HepG2细胞后其平均荧光强度为168．02±3．68,Gc—pGL3-hTERTp—TK转染后其平均荧光强度为204．45±3．45,两组差异有统计学意义（t=-12．504,P〈0．05）。结论Gc较ch能提高pGL3-hTERTp—TK质粒对肝癌细胞的转染率,GC—pGL3-hTERTp—TK可以靶向攻击肝癌细胞,对正常肝细胞几乎无影响。