β-肾上腺素能刺激促进离体小鼠心脏缺氧/复氧诱导的细胞凋亡

目的：观察β-肾上腺素能刺激与缺氧/复氧损伤对离体小鼠心脏细胞凋亡的影响。 方法： 逆行灌注离体小鼠心脏，观察不同剂量异丙基肾上腺素（Iso）和不同时间缺氧/复氧心肌细胞凋亡率的变化，并观察β1-肾上腺素能受体阻滞剂、caspase-拮抗剂、Bcl-2对其凋亡率的影响，以TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。 结果： 单独Iso未引起心肌细胞凋亡率的变化，但可增加缺氧/复氧所诱导的细胞凋亡率；Bcl-2转基因鼠细胞凋亡率明显低于正常小鼠；β1-受体拮抗剂（美托洛尔）及caspase -拮抗剂（zVAD.fmk）可明显抑制Iso和缺氧/复氧所致细胞凋亡。 结论： β-肾上腺素能受体激动剂可促使缺氧/复氧所诱导心肌细胞凋亡，其诱导凋亡的作用主要通过β1-受体介导，β1-受体拮抗剂可抑制二者共同作用所诱导心肌细胞凋亡。     

心脏特异性β_2-肾上腺素能受体的过度表达导致心脏病变和心力衰竭

目的 :β2 -肾上腺素能系统在心力衰竭方面的作用始终存有争议 ,一种观点认为慢性激活的 β -肾上腺素能系统有害于心脏 ,而另一观点则指出减弱 β -肾上腺素能活性会减少其对心肌收缩性的支持 ,从而导致衰竭的进一步加剧。本研究旨在探明高水平的 β2 -肾上腺素能受体 ( β2 -ＡＲ)的过度表达对小鼠心脏表现型的长期影响。方法 :1 对 30 0倍 β2 -ＡＲ过度表达的转基因 (ＴＧ)小鼠 (美国ＨｏｗａｒｄＨｕｇｈｅｓ医学研究所提供 ,ｎ =2 6)及对照小鼠 (ｎ =2 6)在 4～ 1 5月龄期间进行连续的超声心动图观察 ( 1 2ＭＨｚ探头 )。 2 监测生…     

异丙基肾上腺素诱导大鼠慢性心力衰竭神经内分泌与细胞因子的改变

目的 建立异丙基肾上腺素(Isopreterenol,ISO)诱导SD大鼠慢性心力衰竭(CHF)模型,观察神经内分泌与细胞因子的变化.方法 用ISO(170 mg*kg-1)对SD大鼠皮下注射2次,建立大鼠CHF模型,在造模后18周进行心脏超声检测左室舒张末径(LVEDD)、左室收缩末径(LVESD)、射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS),取血检测去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)、醛固酮(ALD)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),并取心肌观察病理形态学特征. 结果 与正常对照组相比,模型组大鼠LVEF、FS下降,LVEDD、LVESD扩大(P＜0.01),左心室重量指数明显增加(P＜0.01),NE、ANGⅡ、ALD、TNF-α显著升高(P＜0.01).光学显微镜结果 显示,ISO组大鼠心肌细胞肥大,部分心肌细胞有嗜酸变性和/或坏死,心肌间质结缔组织增生. 结论 应用大剂量ISO诱导大鼠慢性心力衰竭出现神经内分泌、细胞因子激活.     

大鼠心脏功能改变时心脏β-肾上腺素能受体的变化

本研究采用放射配基结合法(RBA)检定了肾血管性高血压大鼠心功能改变时心脏β-肾上腺素能受体的变化,以及给予β-受体阻滞剂后心脏β-受体密度的改变与心功能改变的关系。     

细胞因子信号传导抑制蛋白-1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

目的 构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白－1（SOCS-1）蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法 克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β 、TNF-α、IFN-γ 、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果 成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。 结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。     

β-肾上腺素受体介导成纤维细胞旁分泌IL-6促进心脏miR-21表达

目的:探讨β-肾上腺素受体(β-adrenergic receptor,β-AR)激动剂异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISO)促进心脏微小RNA-21(miR-21)表达的调控机制。方法:采用酶消化法分离原代乳小鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞,分别给予ISO(10μmol/L)处理1、6、12、24和48 h,采用real-time PCR法检测细胞miR-21表达水平,采用Western blot法检测细胞p-STAT3和STAT3的蛋白水平,采用ELISA法检测细胞上清中白细胞介素6 (IL-6)的浓度。给予细胞转染含miR-21启动子区萤光素酶报告基因质粒p GL3-21PPR,采用萤光素酶报告基因实验检测条件培养液对miR-21的转录活性的影响。结果:以ISO作用于心脏成纤维细胞产生的培养液上清作为条件培养液,其可使心肌细胞miR-21的表达量随ISO作用于成纤维细胞时间的延长而逐渐增高(P 0.05);该条件培养液可引起心肌细胞miR-21的转录活性显著增加,其中ISO作用24 h和48 h的培养液分别使其转录活性增加94.9%和77.1%(P 0.01);ISO作用成纤维细胞形成的条件培养液中IL-6浓度显著增加,通过旁分泌作用于心肌细胞,引起转录因子STAT3活性增强,促进了miR-21的转录和表达。结论:激动β-AR可介导成纤维细胞合成和表达IL-6,旁分泌作用于心肌细胞,通过IL-6/STAT3途径,上调心脏miR-21表达水平,参与心脏重构。     

慢性缺氧和炎性细胞因子刺激对大鼠颈动脉体中IL-1β表达的影响

采用免疫组织化学染色和图像分析方法观察慢性低压性缺氧和腹腔注射重组鼠IL-1β(rmIL-1β)对颈动脉体中IL-1β表达的影响。雄性SD大鼠20只,随机分为4组:T1组缺氧并腹腔注射rmIL-1β;T2组单纯缺氧;T3组仅腹腔注射rmIL-1β;T4组不缺氧也未腹腔注射rmIL-1β。T1组和T2组采用慢性低压性缺氧模型,大鼠在低压氧舱内连续缺氧2周,每天9h(PB=375Torr)。T3组和T4组也每天放入低压氧舱内9h,但不给予低压缺氧。T1组和T3组在第13d放入低压氧舱前,给予腹腔注射rmIL-1β1000ng/kg,T2组和T4组给予腹腔注射相同体积的生理盐水。第14d四组动物分别在低压缺氧舱中缺氧或常氧处理6h后,注射与前一天相同量的rmIL-1β或生理盐水,然后继续低氧或对照处理3h。处理完毕后麻醉处死动物。结果显示:与未给予缺氧和rmIL-1β刺激的T4组相比,T2组(单纯缺氧组)或T3组(单纯注射rmIL-1β)颈动脉体中IL-1β表达均上调(P<0.05);双因素方差分析的结果表明,缺氧和腹腔注射rmIL-1β之间无交互作用(P>0.05)。以上结果提示:慢性缺氧和炎性细胞因子刺激均可导致颈动脉体内IL-1β的上调,IL-1β可能与颈动脉体的功能调节有关。     

外周炎症性疼痛刺激诱导丘脑中胶质细胞激活及细胞因子的表达

目的:研究完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠丘脑中线核群和板内核群中星形胶质细胞标记物(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达变化.方法:逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),免疫印迹法,免疫组织化学.结果:在炎症刺激后的4 h、3 d和14 d,丘脑中线核群和板内核群中小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子IL-1β,TNF-α的mRNA和蛋白均有增加;星形胶质细胞标记物GFAP在炎症后的3 d和14 d,其mRNA和蛋白有显著增加.结论:外周炎症性刺激能够相继激活丘脑中线核群和板内核群的小胶质细胞和星形胶质细胞,并使炎症前细胞因子表达增多.提示该部位的胶质细胞可能通过细胞因子参与对炎症性疼痛的调节.     

自身抗体和β-肾上腺素受体

近年来认为抗激素或神经体液因素的细胞表面受体的自身抗体可自然产生,并且能使异常的内分泌或神经肌肉功能的临床状态明显化。例如,骨骼肌乙酰胆硷受体的自身抗体与重症肌无力、促甲状腺激素受体的自身抗体与突眼性甲状腺肿有关;在一些病人     

心脏的抑制性β-肾上腺素受体

70年代末 ,Ｌａｎｄｓ等认为 β -肾上腺素受体 (β-ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒ,β-ＡＲ)可分为β1-和β2 -ＡＲ两种亚型 ,此后在人和啮齿动物上这种推测相继得到证实[1] 。后来发现β-ＡＲ激动剂介导的啮齿动物白色脂肪组织(ｗｈｉｔｅａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅ,ＷＡＴ)和棕色脂肪组织(ｂｒｏｗｎａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅ,ＢＡＴ)的脂解作用不被传统的β-ＡＲ拮抗剂所阻断 ,同时Ａｒｃｈ等报道一些新合成的β-ＡＲ激动剂如ＢＲＬ2 81 40、ＢＲＬ3 73 44、ＢＲＬ3 5 1 1 3等虽然对 β1-ＡＲ和β2 -ＡＲ介导的作用很小 ,但它…     

微米级磨损微粒刺激溶骨性细胞因子表达

目的 比较钛合金和超高分子质量聚乙烯两种微米级磨损微粒对溶骨性细胞因子表达的影响。 方法 每2d 1次于大鼠背部皮下注射过滤后的空气 3ml,共6次。1周后,囊腔内分别注射微粒悬液（A组为钛合金,B组为超高分子质量聚乙烯）和生理盐水（C组）。14 d后取囊腔组织称重,石蜡包埋、HE染色,光镜下观察,全自动生化分析仪测定血清AKP活性,免疫组化法检测IL-6及TNF-α的表达,实时定量PCR法检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的mRNA含量。结果 囊腔组织类似于无菌性松动假体周围界膜组织。B组重量高于C组（P<0.05）。光镜下,A、B组可见大量吞噬细胞。A、B组血清AKP活性、IL-6的表达和EMMPRIN的mRNA含量均高于C组（P<0.05）。 结论 钛合金和超高分子质量聚乙烯微粒均能刺激溶骨性细胞因子产生及活性,形成人工关节无菌性松动。     

张力刺激对关节软骨细胞β-肌动蛋白mRNA表达的影响

目的 观察张力刺激对关节软骨细胞β-肌动蛋白(β-aetin)mRNA表达的影响.方法 分别获取正常和骨关节炎关节软骨细胞,给予3%、6%和15%的张力刺激,运用实时定量PCR方法检测不同张力刺激强度下关节软骨细胞β-actin mRNA表达的变化.结果 6%和15%的张力刺激均可明显提高lE常关节软骨细胞β-actinmRNA表达(1.34±0.05,1.36±0.04,P＜0.05),而只有15%的张力刺激才能明显增加骨关节炎关节软骨细胞β-actin mRNA表达.结论 关节软骨细胞β-actin mRNA表达量随张力刺激强度不同而变化,不同内外环境使关节软骨细胞对张力刺激的反应不同,故在其相关生物力学研究中不能应用β-actin作为内参.     

β-肾上腺素能受体的免疫学研究

为了解β肾上腺素能受体(β-受体)的免疫学特性,并为β受体的生物化学研究提供必要的手段,围绕β受体多克隆和单克隆抗体进行了一系列研究。     

β-肾上腺素受体亚单位的证实

多种激素和神经递质是与腺苷酸环化酶相结合的特异性受体起作用的。Sutherland等首先提出,此受体构成具有使腺苷酸环化酶变构效应点的调节亚单位。最近,有两方面的实验资料支持这种主张,即β-受体和膜上腺苷酸环化酶位于分离的大分子上。Lefkowitz等用分子筛色谱法从毛地黄甙溶解红细胞膜所得腺苷酸环化酶中分离出β-受体。Schramm等证明,火鸡红细胞的β-受体可被     

外周炎性痛刺激诱导杏仁核内星形胶质细胞激活及细胞因子的表达

为了观察完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激对杏仁核内星形胶质细胞标记物(GFAP)以及细胞因子(IL-β,TNF-α)表达的影响,本研究结合行为学检测、RT-PCR和Westernblot方法,观察了大鼠后爪注射CFA后的痛行为变化,并检测了在不同时间点杏仁核内GFAP、IL-β和TNF-α在基因水平和蛋白水平的表达变化。结果显示:注射CFA后,注射侧后爪出现热痛敏和机械性触诱发痛;大鼠的热痛敏在14d时基本恢复正常,但机械性痛敏持续至21d时仍未恢复正常;GFAP在亚急性期和慢性期有显著增加;而IL-β和TNF-α在急性期、亚急性期及慢性期均有增加。上述结果表明:星形胶质细胞可能与疼痛的维持相关,而细胞因子表达的增加可能在痛觉过敏的产生和维持中均起重要作用。     

β_1-肾上腺素受体自身抗体通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡

目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Western blot法和免疫组化法检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12的蛋白表达。利用亲和层析法纯化的β_1-AA处理H9c2心肌细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理H9c2心肌细胞,再给予β_1-AA干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡的变化情况。结果:与对照组相比,主动免疫大鼠血清中β_1-AA水平在免疫2周时显著增加,进一步增加至8周,并且主动免疫2周大鼠心肌组织凋亡率明显升高,持续升高至8周。与对照组相比,主动免疫大鼠心肌组织中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表达在免疫4周和8周时均明显增加。β_1-AA引起H9c2心肌细胞活力持续降低,凋亡明显增加。与β_1-AA单独处理组相比,内质网应激抑制剂4-PBA预处理H9c2心肌细胞可以有效逆转β_1-AA诱导的细胞凋亡增加和活力下降。结论:β_1-AA可以通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡。     

长期糖尿病大鼠心脏β肾上腺素受体及其亚型的改变

目的：观察长期糖尿病大鼠心脏β肾上腺素受体（β－ＡＲ）及其亚型的改变。方法：链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱导糖尿病大鼠动物模型,用放射配体结合实验和离体左心房收缩功能实验。结果：糖尿病大鼠心脏β－ＡＲ的最大结合容量下降３４％（Ｐ＜００５）,ＫＤ值不变。ＣＧＰ２０７１２Ａ竞争抑制曲线两位点分析显示β１－和β２－ＡＲ之间比例未发生改变。糖尿病组异丙肾上腺素（ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ,ＩＳＯ）激动β－ＡＲ介导的最大收缩反应（Ｒｍａｘ）较对照组下降６４％（Ｐ＜００５）,ｐＤ２值显著增大（Ｐ＜００５）,ＣＧＰ２０７１２Ａ阻断β１－ＡＲ后,β２－ＡＲ介导心肌的Ｒｍａｘ不变,而ｐＤ２值显著高于对照组（Ｐ＜００５）;ＩＣＩ１１８５５１阻断β２－ＡＲ后,β１－ＡＲ介导心肌的Ｒｍａｘ显著低于对照组（Ｐ＜００５）,ｐＤ２值与对照组相比无显著差异。结论：长期糖尿病大鼠心脏β－ＡＲ总数明显下调,且β１－和β２－ＡＲ下调的程度相同;β－ＡＲ对ＩＳＯ敏感性的增加,主要是由β２－ＡＲ的改变引起,β－ＡＲ介导的最大收缩反应的降低,是由β１－ＡＲ的改变引起。     

运动训练能够抑制异丙基肾上腺素诱导的心脏炎症反应

<正>目的:明确运动训练能否抑制β-肾上腺素受体激动剂异丙基肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的小鼠心脏炎症反应。方法:将成年C57雄性小鼠分为10组(n=6),分别为安静对照组、安静给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组、跑步训练对照组、跑步训练给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组。ISO组均为给予ISO 5 mg/kg皮下注射,跑步训练组为应用小鼠跑步机训练6