干扰素-α对骨髓增殖性肿瘤JAK2V617F基因表达的影响

【目的】 研究干扰素-α在治疗骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的疗效及对JAK2V617F基因表达的影响。【方法】 分析73例应用干扰素-α治疗超过6个月的MPN患者的临床资料及JAK2V617F基因表达,并与同期单用羟基脲治疗的20例MPN做对照。治疗前后采用AS-PCR方法检测JAK2V617F基因表达。【结果】 干扰素-α治疗组中真性红细胞增多症、原发性血小板增多症分别有85.2 %、87 %达到完全或部分缓解(与对照组单用羟基脲治疗比较,P < 0.01)。随访1 ~ 6年,56例干扰素-α治疗组的真性红细胞增多症、原发性血小板增多症JAK2V617F突变基因转阴率分别为54%、41%,转阴患者100%达到临床及血液学完全缓解,而对照组无一例转阴。干扰素-α治疗过程中的副作用主要表现为流感样症状,但均能耐受。【结论】干扰素-α治疗MPN 能取得很好的疗效及较好的耐受性,JAK2V617F或可作为骨髓增殖性肿瘤患者能否达到分子生物学缓解的主要标志之一。     

成纤维生长因子(FGF) 23基因沉默对甲状旁腺激素(PTH)促成骨细胞分化作用的影响

 目的  研究内源性成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,应用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术(RNAi)沉默成骨细胞FGF23表达,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用real-time RT-PCR法检测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin,OCN)等基因mRNA水平,研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因沉默细胞的作用。结果  rhPTH1-34对培养成骨细胞增殖促进作用明显,分化促进作用弱。1×10-10~1×10-8 mol/L rhPTH1-34 作用3天,细胞增殖率增加31.6%~50.5% (P<0.05),而细胞比活性未见明显改变。同时其ALP和OCN转录水平轻度上调,分别较对照组增加35%(P<0.05)和16%(P>0.05)。rhPTH1-34上调成骨细胞FGF23 mRNA水平(4倍),该作用可被针对FGF23特异的shRNA转染所抑制。FGF23基因沉默后PTH促分化作用明显增强,其ALP和OCN mRNA水平分别较对照组增加1.8倍(P<0.05)和5.8倍(P<0.05),显示内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论  内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节,FGF23上调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。     

成纤维细胞生长因子23与血液透析患者血磷和甲状旁腺激素浓度的关系

目的 观察维持性血液透析患者血中成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor23,FGF23)浓度,探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis, MHD)患者FGF23的浓度及其与血磷、甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)浓度之间的关系。方法 选取稳定MHD患者50例,健康对照30人,透析患者根据PTH浓度分为A1组(PTH<300 pg/mL)、A2组(PTH为300~500 pg/mL)、A3组(PTH>500 pg/mL)。应用酶联免疫分析法测定血清FGF23和1,25-二羟活性维生素D₃［1,25-dihydroxy-cholecalciferol, 1,25-(OH)₂D₃］浓度,同时测定血清PTH、血钙(Ca²⁺)、磷(P^3－)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、白蛋白(albumin,ALB)等指标。结果 ①透析患者血清Log FGF23水平显著高于对照组,Log1,25-(OH)₂D₃水平显著低于对照组,差异有统计学意义。②Log FGF23水平在PTH>500 pg/mL组显著高于PTH<300 pg/mL组。③LogFGF23与Log PTH、血磷、Log ALP呈正相关,与Log 1,25-(OH)₂D₃呈负相关。④逐步多元线性回归分析显示,血磷、钙磷乘积、Log PTH是影响Log FGF23水平的独立影响因素。结论 维持性血液透析患者血清FGF23升高,且继发性甲状旁腺功能亢进者FGF23明显升高。     

全反式维甲酸、1,25二羟维生素D3对白血病细胞株SHI-1中几种糖基转移酶mRNA表达的影响

目的探讨在全反式维甲酸（ATRA）、1,25二羟维生素D3[1,25-（OH）2D3]的作用下,白血病细胞株SHI-1中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶（ppGalNAcTs）和某些N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（GnTs）表达的变化。方法应用RT-PCR法研究在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3作用下,白血病细胞株SHI-1中ppGalNAcTs、GnTs表达的变化。结果在SHI-1细胞株中,随着1,25-（OH）2D3浓度（10^-8～10-^6mol/L）的增加,ppGalNAcT1和T2表达增加,T3表达没有变化,T4表达减少;加入ATRA（10^-8～10^-6mol/L）后,细胞株中ppGalNAcT2、β6GnTV、O-GnT表达量升高。结论白血病细胞株SHI-1ppGalNAcTs各型表达水平不同;在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3的作用下,白血病细胞株SHI-1中各型ppGalNAcTs表达变化也不同。在SHI-1细胞株加入ATRA后细胞中β2GnTI、β6GnTV发生显著变化。ppGal-NAcT1、ppGalNAcT2、GnTs与白血病细胞株的分化可能有一定关系。     

Levels and dynamic changes of serum fibroblast growth factor 23 in hypophosphatemic rickets/osteomalacia

Background Hypophosphatemic rickets/osteomalacia is a group of diseases characterised by defective mineralization of bone due to hypophosphatemia and low 1,25-dihydroxy vitamin D. To explore the role of fibroblast growth factor 23 （FGF-23） in the regulation of phosphate homeostasis, we measured the circulating concentrations of this growth factor in healthy individuals and in patients with hypophosphatemic rickets/osteomalacia. Methods Nineteen patients with hypophosphatemic rickets/osteomalacia were included in hypophosphatemic group （HP, 12 female and 7 male, mean age was 30 years）, and 19 healthy age-matched individuals served as the control group. Full length FGF-23 fragments were measured by two-site enzyme-linked immunosorbent assay.Results Mean FGF-23 concentrations were significantly higher in the HP group （（87.4±43.6） pg/ml） compared with the control group （（19.2±6.16） pg/ml; P 〈0.001）. In 1 patient with tumour-induced osteomalacia, serum FGF-23 concentrations were 84.1 pg/ml; these concentrations were normalized 2 hours after a hemangiopericytoma resection （7.8 pg/ml）. Subsequently, serum 1,25（OH）2 vitamin D3 concentrations significantly increased from 21.3 pg/ml to 89.3 pg/ml, and serum phosphorus levels were normalized. Conclusions Serum FGF-23 concentrations were markedly elevated in patients with hypophosphatemic rickets. FGF-23 plays an important role in the pathogenesis of hypophosphatemic rickets/osteomalacia.     

活性维生素D3抑制大鼠间质成纤维细胞激活作用的研究

目的通过观察活性维生素D3(1,25-(OH)2VitD3,活性VitD3)抑制转化生长因子β1(Transforming growthfactorβ1,TGF-β1)诱导大鼠肾脏间质成纤维细胞(NRK-49F)合成纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)作用的研究,探讨活性VitD3阻止肾组织纤维化作用的机制。方法体外培养的NRK-49F细胞,分为对照组、不同时间TGF-β1处理组、活性VitD3处理组、不同剂量活性VitD3与TGF-β1联合处理组。通过蛋白免疫印迹、免疫荧光染色等实验方法,分别以α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)作为成纤维细胞被激活指标、FN作为细胞外基质合成的检测指标,比较不同浓度活性VitD3对经TGF-β1刺激的NRK-49F细胞表达α-SMA以及合成FN的变化。结果TGF-β1可以诱导NRK-49F的α-SMA和FN蛋白表达明显增加,并呈一定的时间依赖性,同时,还可影响α-SMA和FN蛋白结构的组装和沉积;活性VitD3单独作用对α-SMA和FN蛋白表达和组装无明显影响,而活性VitD3与TGF-β1同时作用于NRK-49F时,活性VitD3可以部分拮抗TGF-β1的效应,抑制α-SMA和FN蛋白表达,并呈剂量依赖关系。结论活性VitD3可以部分拮抗TGF-β1诱导的肾成纤维细胞的活化,抑制细胞外基质FN的合成分泌。     

终末期肾病患者血清成纤维细胞生长因子23的变化及临床意义

目的:观察终末期肾病患者血清成纤维细胞生长因子23(FGF-23)水平及其与钙磷代谢的关系.方珐:采集50例血透患者、24例腹透患者及20名健康对照者的静脉血,离心取血清.采用ELISA法测定FGF一23水平.同时检测水平在1,25-二弪维生素D[1,25一(OH)2 VitD]、全段甲状旁腺激素(iPTH)、血清肌酐(Scr)、钙(Ca)、磷(P)等水平.结果:FGF-23水平在血透组患者[(88.51±35.01)ng/L]、腹透组患者[(87.85±33.65)ng/L]均明显高于健康人群[(11.76±3.63)ng/L],但血透组和腹透组无统计学差异.而血透组、腹透组患者血清1,25-(OH)2VitD水平均明显低于健康对照组(P<0.01),且血透组明显低于腹透组(P<0.01).Pearson相关性分析结果显示血清FGF-23与血清肌酐、iPTH、磷、透析时间呈正相关(P<0.01),与1,25-(OH)2VitD负相关(P<0.01).结论:终末期肾病患者FGF-23水平明显升高,1,25-(OH)2VitD明显降低.FGF-23水平变化与血清肌酐、iPTH、磷、透析时间、1,25-(OH)2VitD等多种因素有关.     

Fibroblast growth factor 21 as a possible endogenous factor inhibits apoptosis in cardiac endothelial cells

Background Fibroblast growth factor 21 （FGF21） is a new member of FGF super family that is an important endogenous regulator for systemic glucose and lipid metabolism. This study aimed to explore whether FGF21 reduces atherosclerotic injury and prevents endothelial dysfunction as an independent protection factor.Methods The present study was designed to investigate the changes of FGF21 levels induced by oxidized-low density lipoprotein （ox-LDL）, and the changes of apoptosis affected by regulating FGF21 expression. The FGF21 mRNA levels of cultured cardiac microvascular endothelial cells （CMECs） were determined by real time-PCR and the protein concentration in culture media was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. We analyzed the different expression levels of untreated controls and CMFCs incubated with ox-LDL, and the changes of CMECs apoptosis initiated by the enhancement or suppression of FGF21 levels.Results The secretion levels of FGF21 mRNA and protein were significantly upregulated in CMECs incubated with ox-LDL. Furthermore, FGF21 levels increased by 200 μmol/L bezafibrate could reduce CMECs apoptosis, and inhibit FGF21 expression by shRNA induced apoptosis （P ＜0.05）.Conclusions FGF21 may be a signal of injured target tissue, and may play physiological roles in improving the endothelial function at an early stage of atherosclerosis and in stopping the development of coronary heart disease.     

骨化三醇对单侧输尿管梗阻大鼠肾的保护作用

目的:探讨骨化三醇[1,25(OH)2D3]对单侧输尿管梗阻大鼠肾的保护作用。方法:24只雄性6周龄SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,并分为四组:①治疗组6只,1,25(OH)2D3溶于无水乙醇中腹腔注射,3ng/(100 g.d)。②无水乙醇对照组6只,等容积无水乙醇腹腔注射。③空白对照组6只,仅行左侧输尿管结扎术。④假手术组6只。于第7天处死各组大鼠,采用光镜和RT-PCR观察肾组织纤维化和核因子-κB(NF-κB)表达的变化。结果:①UUO模型第7天时大鼠肾组织NF-κB明显升高,采用1,25(OH)2D3治疗后,肾组织NF-κB的异常升高能得到有效抑制,肾组织炎性细胞浸润明显减少。②治疗组大鼠肾间质纤维化程度较空白对照组和无水乙醇对照组明显减轻。结论:1,25(OH)2D3具有阻抑慢性肾疾病进行性发展的潜能,而这一作用与其能有效降低肾组织NF-κB的异常升高和减少肾组织炎性细胞浸润有一定关系。     

1,25-(OH)_2D_3及复方丹参对大鼠异基因骨髓移植后T细胞亚群和细胞因子的影响

目的 观察1,25-(OH)_2D_3及复方丹参对异基因骨髓移植(Allo-BMT)后大鼠T细胞亚群和细胞因子的影响.方法 以雄性SD大鼠为供鼠.雌性Wistar大鼠为受鼠,40只受鼠随机分成aGVHD组及干预组,干预组包括1,25-(OH)_2D_3组、复方丹参组、两约联合组,每组10只.观察各组T细胞亚群(CD4~+、CD8~+)和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10)的变化.结果 当aGVHD表现较明显时,CD4~+、CD8~+增高,以CD4~+增高为主,与移植前比差异有统计学意义(P<0.05);经干预方案处理后CD4~+、CD8~+增高的幅度较aGVHD组低,差异有统计学意义(P<0.05),以CD4~+更为明显;动态监测显示与Th1相关的细胞因子IL-2、IFN-γ在各干预组呈下降趋势,与Th2相关的细胞因子IL-10呈上升趋势,均在第21天变化较为明显,与第0天相比有统计学差异(P＜0.05);IL-4无显著性变化.结论 1,25-(OH)_2D_3及复方丹参能够降低CD4~+T淋巴细胞的数量,具有调节Th1/Th2平衡,抑制Th1的增殖及功能发挥,促进Th2细胞增殖,发挥免疫耐受的作用.     

碱性成纤维细胞生长因子对急性心肌梗死时心肌细内Bcl-2、Bax表达的影响

目的 bFGF对大鼠急性心肌梗死(AMI)时心肌细胞内Bcl-2、Bax表达的影响,并探讨其发生机制.方法 实验动物随机分为假手术组,缺血 生理盐水组,缺血 bFGF组,结扎大鼠左冠状动脉复制AMI模型.术前分别注入生理盐水及bFGF,于结扎后2、4和8h处死动物,采用免疫组织化学方法 检测大鼠缺血区心肌细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达水平.结果 在急性心肌梗死后第2、4 h时,缺血 bFGF组心肌细胞Bcl-2蛋白的表达(141.75±26.91)‰,(125.63±24.09)‰明显高于缺血 生理盐水组(15.63±5.05)‰,(42.12±14.08)‰,P＜0.01,Bax蛋白表达(11.25±3.80)‰,(30.87±8.05)‰明显低于缺血 生理盐水组(32.62±6.61)‰,(83.638±9.84)‰,P＜0.05.结论 bFGF可促进AMI时心肌细胞内Bcl-2的表达、抑制Bax的表达,对心肌细胞具有保护作用.