ELK-3蛋白在肝癌组织中的表达及其对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨转录因子ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系及ELK-3对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：选取80例肝癌患者癌组织及49例癌旁正常组织石蜡标本、18例肝癌患者癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测ELK-3蛋白在肝癌及癌旁正常组织中的表达,探讨ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系。选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,设立对照组（control-siRNA）和ELK-3干扰组（ELK-3-siRNA）,将ELK-3 siRNA转染至HepG2细胞,通过细胞划痕实验及体外Transwell小室实验观察肝癌HepG2细胞的迁移和侵袭能力。结果：石蜡组织标本免疫组织化学染色,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ELK-3蛋白阳性表达率明显升高（P<0.05）,且ELK-3蛋白阳性表达率与肝癌患者肿瘤数、TNM分期、Edmondson分级和门静脉浸润有关联（P<0.05）。新鲜术后标本Western blotting法检测,与癌旁正常组织比较,18例肝癌患者肝癌组织中ELK-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较,ELK-3-siRNA组细胞的迁移距离明显变短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ELK-3在肝癌组织中的表达水平明显升高。干扰ELK-3会抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,表明ELK-3蛋白可以通过抑制肝癌细胞的迁移和侵袭对其产生影响,从而在肝癌发生发展过程中起重要作用。     

索拉非尼联合顺铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的 探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对肝癌细胞HepG2的抑制作用及其可能分子机制.方法 单独及联合给药后以MTT法测定HepG2细胞的增殖,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,用Western blotting观察ERK及pERK蛋白的表达.结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用,两药联合具有协同或相加作用(P＜0.05).索拉非尼及DDP分别主要使细胞阻滞于G1及G2期.两药联用后同时阻滞于G1及G2期.联合组凋亡率明显比单药组高(P＜0.05).单用及联合用药对HepG2细胞ERK表达无明显影响,索拉非尼及联合用药减少pERK的表达.结论 索拉非尼和DDP对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用,其机制可能与细胞周期的双重阻滞及细胞增殖通路Raf/MEK/ERK的抑制有关.     

虫草素对人肝癌细胞迁移及侵袭的机制研究

目的 研究虫草素对人肝癌细胞Bel-7402迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 以人肝癌细胞Bel-7402为研究对象,虫草素处理Bel-7402细胞。MTT法检测细胞活力;划痕实验检测细胞迁移能力;侵袭小室实验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测MMP-2和MMP-9 mRNA 表达情况;Western blotting实验检测MMP-2、MMP-9、ERK、p-ERK、EGFR及p-EGFR蛋白表达水平。结果 虫草素在0～80?μmol/L时对细胞活力无明显影响;而在80～640?μmol/L时,细胞活力出现下降;在320和640?μmol/L时显著降低（P?<0.05）。40和80?μmol/L虫草素均能显著抑制细胞迁移和侵袭活动（P?< 0.05）。与空白对照组比较,虫草素（40和80?μmol/L）处理Bel-7402细胞48?h后,MMP-2和MMP-9 mRNA 及蛋白表达均下降（P?<0.05）。与空白对照组比较,虫草素（40和80?μmol/L）处理明显下调p-ERK和p-EGFR蛋白表达（P?<0.05）。结论 虫草素可能通过EGFR-ERK通路介导MMP-2和MMP-9表达下调,从而调控人肝癌细胞Bel-7402的迁移和侵袭活动。     

索拉非尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株HepG2的作用

目的检测索拉非尼(Sorafenib)单药、三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)单药以及两药联合对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨两药联用的协同抗肿瘤机制。方法以不同浓度的Sorafenib和不同浓度的As2O3分别组成单药组和Sorafenib As2O3联合用药组,另设不加药的对照组,作用于HepG2细胞。MTT法检测Sor-afenib、As2O3单药及联用对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。Western-blot检测ERK,p-ERK,Bcl-2,MCL-1蛋白表达。结果Sorafenib、As2O3单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,两药联用有交互效应(P<0.05)。Sorafenib、As2O3单药与联用均能诱导HepG2细胞凋亡,联合组更为明显(P<0.05)。用药后ERK蛋白表达无明显改变,而pERK表达下降,联合用药组更明显。MCL-1蛋白表达在Sorafenib组和联合用药组均下降,Bcl-2蛋白表达在As2O3组和联合用药组均下降,两种蛋白表达下降均以联合用药更明显。结论Sorafenib与As2O3联用作用于肝癌细胞具有协同增殖抑制及促凋亡作用,其机制可能是协同抑制抗凋亡通路及抑制Raf/MEK/ERK信号传导通路。     

金线莲苷对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨金线莲苷对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 选取不同浓度金线莲苷作用于HepG2细胞,用四唑盐比色法(MTT)和细胞增殖-毒性实验(CCK-8)检测HepG2细胞的增殖和活性,Tran-swell实验检测细胞的运动能力,划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 随着金线莲苷浓度的增加,HepG2细胞的...     

siRNA干扰骨形态发生蛋白2对肝癌SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的抑制作用

目的 设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins,BMP-2)的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 设计并化学合成针对BMP-2的3个siRNA分子序列,阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测细胞中BMP-2在mRNA水平和蛋白水平的变化,体外侵袭实验榆测转染后细胞侵袭能力的变化.实验共分6组,①正常对照组;②空白对照组;③阴性对照组;④～⑥分别为BMP-2-siRNA-A、BMP-2-siRNA-B、BMP-2一siRNA-C转染组.结果 RT-PCR和Western blot显示3对特异性BMP-2-siRNA转染肝癌细胞SMMC7721之后,其BMP-2的基凶和蛋白表达均受到抑制,以siRNA-B抑制效果最明显[(0.32±0.07)vs(0.92±0.14),(0.37±0.10)vs(0.89±0.17),P<0.01].体外侵袭实验显示转染后肝癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组[分别为(6.48±3.62)、(23.72±3.24)、(22.38 4-3.84),P<0.05].结论 BMP-2与肝癌的侵袭转移潜能相关,siRNA-BMP-2能明显抑制肝癌细胞SMMC7721的BMP-2表达,从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力.     

索拉非尼联合吴茱萸碱对肝癌HepG2细胞的协同抗肿瘤作用

目的 研究索拉非尼和吴茱萸碱联用对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法 以肝癌HepG2细胞为研究对象,采用CCK-8法检测索拉非尼单独或与吴茱萸碱联用对HepG2细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞检测细胞凋亡水平;Western blot测定凋亡相关蛋白的表达。结果 索拉非尼与吴茱萸碱对HepG2细胞增殖均具有明显抑制作用(P<0.05),两种药物联合应用的细胞凋亡率较单独用药组均明显升高(P<0.05);Western blot结果显示两药联合应用时,Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达水平较单独用药组明显增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 索拉非尼联合吴茱萸碱可通过协同作用显著抑制肝癌HepG2细胞增殖,其机制可能与诱导肿瘤细胞发生凋亡有关。     

丹参酮ⅡA对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的抑制作用 及促凋亡作用

目的：观察丹参酮ⅡA （Tan ⅡA）对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及诱发细胞发生迁移和凋亡作用,探讨其可能的作用机制。方法：常规体外培养人肝癌HepG2细胞,实验分为空白组和不同浓度Tan ⅡA组。不同浓度Tan ⅡA组分别加入终浓度为0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 mg·L^-1Tan ⅡA,继续培养24 h。倒置显微镜观察各组HepG2细胞形态表观,MTT法检测各组HepG2细胞增殖抑制率,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,RT-PCR法检测各组HepG2细胞中核转录因子κB （NF-κB）和基质金属蛋白酶9（MMP-9） mRNA的表达水平,流式细胞术检测各组不同细胞周期HepG2细胞百分比,TUNEL法检测各组HepG2细胞凋亡率。结果：不同浓度Tan ⅡA组细胞形态表观均发生改变。与空白组比较,1.0和2.0mg·L^-1Tan ⅡA组HepG2细胞体积缩小,连接疏散,生长状态差,1.0、2.0、5.0和10.0 mg·L^-1Tan ⅡA组HepG2细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性。细胞划痕实验检测,与空白组比较,2.0和5.0 mg·L^-1Tan ⅡA组HepG2细胞迁移数减少。RT-PCR法检测,与0.5 mg·L^-1Tan ⅡA组比较,1.0、2.0和5.0 mg·L^-1Tan ⅡA组HepG2细胞中MMP-9与NF-κB mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。流式细胞术检测,与空白组比较,1.0、2.0、5.0和10.0 mg·L^-1Tan ⅡA组S期HepG2细胞百分比降低（P<0.05）,G₀/G₁和G₂期细胞百分比升高（P<0.05）。TUNEL法检测,与空白组比较,0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 mg·L^-1 Tan ⅡA组HepG2细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）。结论：不同浓度Tan ⅡA均可明显抑制人肝癌HepG2细胞的增殖与迁移,并诱发细胞凋亡,且呈一定的剂量依赖关系,其机制可能与抑制HepG2细胞中NF-κB和MMP-9 mRNA表达有关。     

鸦胆子油乳剂对人胃癌细胞株HGC-27细胞迁移和侵袭的体外实验研究

目的:探讨鸦胆子油乳剂对人胃癌细胞株HGC-27细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法:采用MTT法检测鸦胆子油乳剂对HGC-27细胞增殖的影响。分别采用Transwell迁移和侵袭实验法检测鸦胆子油乳剂对HGC-27细胞迁移和侵袭的影响及其机制。结果:鸦胆子油乳剂能够明显抑制HGC-27细胞的增殖(P<0.05);鸦胆子油乳剂体外能够显著抑制HGC-27细胞的迁移和侵袭,且呈现剂量依赖关系,25üg·ml~(-1)剂量时迁移和侵袭抑制率分别为53.73%和54.41%。结论:鸦胆子油乳剂对HGC-27细胞增殖有明显抑制作用,并可有效抑制人胃癌细胞株HGC-27的迁移和侵袭能力。     

穿心莲内酯对人乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探究穿心莲内酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的抑制作用及机制。方法:用穿心莲内酯0,5,10,20,40和80 μmol/L处理MDA-MB-231细胞24 h,MTT法检测细胞存活率;伤口愈合和Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力;逆转录聚合酶链反应检测解偶联蛋白2（uncoupling protein 2,UCP2） mRNA表达;蛋白质印迹法检测UCP2和丙酮酸脱氢酶（pyruvate dehydrogenase,PDH）蛋白表达水平;乳酸试剂盒检测乳酸含量;JC-1染色后共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。结果:穿心莲内酯对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用具有浓度依赖性;与0 μmol/L组相比,10,20,40 μmol/L组MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力受到抑制（P<0.05或P<0.01）;UCP2的mRNA和蛋白表达下调（P<0.05或P<0.01）,线粒体膜电位升高,PDH蛋白表达上调,细胞内乳酸含量下降（P<0.05或P<0.01）。结论:穿心莲内酯可能通过抑制乳腺癌的糖酵解和改变能量代谢的方式抑制MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭,其机制可能与UCP2有关。     

PRDX6过表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制

目的:探讨过表达过氧化物氧化还原蛋白6(PRDX6)基因对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:人肝癌HepG2和Hep3B细胞分为过表达PRDX6组(转染过表达质粒PIRES-EGFP-PRDX6)和空载体组(转染对照质粒PIRES).实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western bl...     

水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制

目的：探讨水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞增殖、迁移及侵袭的影响和促凋亡作用,阐明其可能机制。方法：选取对数生长期的人胃癌SGC 7901细胞,分为对照组和不同浓度水蓟素组（分别给予15、30和60 mg·L^-1水飞蓟素）,倒置显微镜观察各组细胞形态表现,MTT法检测细胞周期和细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞增殖抑制率,划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力。结果：水飞蓟素作用SGC 7901细胞24 h后,与对照组比较,30和60mg·L^-1水飞蓟素组细胞贴壁密度变小,细胞形态不规则、体积变小,产生大量细胞碎片。与对照组比较,不同浓度水飞蓟素组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）,G₁期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,细胞迁移距离明显缩短（P<0.05）,穿膜细胞数量明显降低（P<0.05）。结论：水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞的增殖抑制作用可能是通过诱导G₁期细胞阻滞和早期凋亡引起的。     

吉西他滨联合索拉非尼对胆囊癌细胞生长侵袭的抑制作用

目的评估吉西他滨和索拉非尼联合用药对胆囊癌细胞株SGC996,生长、凋亡、辽移和侵袭的影响、方法 采用吉西他滨和索托非尼单独或联合处理SGC996细胞,吉西他滨雌独处坪组浓度分别为0．1、1．0、2．0、4．0和10．0μg/mL;索拉非尼单独处理组浓度分别为0．1、1．0、2．5、5．0、10．0和20．0μmol／1．;两药联合处理组：索拉非尼浓度分别为2．5、5．0、10,0和20．0μmol／L,吉西他滨浓度分别为2．0、4．0和10．0μg／mL。未经药物处理的SGC996细胞作为空白对照组。采用MTT法检测SGC996细胞的生长状况;应用Transwell实验检测SGC996细胞的迁移和侵袭能力应用FITC—AnnexinV／PI双染法检测SGC996细胞的凋亡率。结果 索拉非尼可抑制SGC996细胞生长,并且这种抑制作用具有浓度和时间依赖性（P〈0．05）;同时还可抑制SGC996细胞的迁移和侵袭（P〈0．05）,但不诱导细胞凋亡（P〉0．05）。吉西他滨对SGC996细胞的生长和辽移并无显著抑制作用（P〉0．05）．但可以抑制细胞的侵袭,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）,索托非尼和吉西他滨联合用药可以抑制SGC996细胞的生长、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）、结论 吉西他滨和索托非尼联合用药对胆囊癌细胞的抑制作用显著强于单独用药,可能成为治疗胆囊癌的有效化疗方案。     

消癌平联合X射线照射对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过检测消癌平（XAP）联合X射线照射后肝癌HepG₂细胞增殖、周期和凋亡的变化,阐明二者联合抗肿瘤作用的相关机制。方法：选取处于对数生长期的人肝癌HepG₂细胞,分为对照组、XAP组、2 Gy照射组和XAP+2 Gy照射组。采用75 mg·L^-1终浓度XAP注射液处理细胞,12 h后给予2 Gy X射线照射。采用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,采用PI单染和Annexin Ⅴ-FITC双染流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3的表达。结果：经药物处理后,在12、24和48 h时,与对照组比较,XAP组、2 Gy照射组和XAP+2 Gy照射组细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,S期和G₂/M期细胞周期百分率明显增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;且与XAP组和2 Gy照射组比较,XAP+2 Gy照射组变化更明显（P<0.05或P<0.01）;Western blotting法检测,caspase-3被切割成相对分子质量为17000和19000的片段,与对照组比较其表达水平升高。结论：XAP联合X射线照射可以抑制肝癌细胞增殖、诱导G₂/M期细胞阻滞和凋亡,二者联合应用具有协同抗肿瘤作用。     

芹菜素对人肺癌细胞株A549迁移和侵袭能力的抑制作用及机制

目的 探讨芹菜素对肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响和机制。方法 采用0、5、10、20、40、80、160 μmol/L浓度的芹菜素培养液与A549细胞共培养,利用CCK8法检测A549细胞的生存率,Transwell迁移和侵袭实验检测芹菜素对A549细胞迁移和侵袭能力的影响,酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白质印迹法分析芹菜素对细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)活性和蛋白表达的改变。结果 CCK8显示40~160 μmol/L的芹菜素可抑制A549细胞增殖,并呈浓度依赖性 (P <0.05);与对照组比较,经芹菜素处理后A549细胞迁移和侵袭能力降低,相对应的MMP-2、VEGF蛋白表达和分泌减少(P <0.05);但对于MMP-9,芹菜素不能抑制其蛋白的表达和分泌。结论 芹菜素可有效抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与芹菜素降低细胞MMP-2、VEGF的蛋白表达和分泌相关。     

白花丹素对肝癌索拉菲尼耐药细胞HepG2R增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨白花丹素（PLB）对肝癌索拉菲尼耐药细胞HepG2R增殖和凋亡的影响,阐明其可能机制。方法：体外培养肝癌HepG2细胞,建立索拉菲尼耐药细胞模型HepG2R,MTT法鉴定耐药倍数和筛选药物作用浓度及时间,依据其结果选择索拉菲尼和PLB作用浓度分别为5μmol·L^-1和2μmol·L ^-1,各组药物作用时间为48 h。将HepG2R细胞随机分为对照组、索拉菲尼（5μmol·L^-1）组、PLB （2μmol·L ^-1）组和索拉菲尼（5μmol·L^-1）联合PLB （2μmol·L ^-1）组（联合组）。MTT法检测各组细胞活力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成率,Hoechst33342实验和细胞流式术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中cleaved Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平,计算Bax/Bcl-2比值。采用活性氧（ROS）检测试剂盒检测细胞中ROS水平。结果：随着索拉菲尼浓度的升高,HepG2和HepG2R细胞活力逐渐降低,耐药细胞HepG2R对索拉菲尼的半数抑制浓度（IC₅₀）值是HepG2的4.5倍（P<0.05）。随着PLB浓度升高和作用时间延长,耐药细胞对索拉菲尼敏感性升高。与对照组、索拉菲尼组和PLB组比较,联合组耐药细胞克隆形成率降低（P<0.05或P<0.01）。Hoechst33342实验,对照组细胞核淡染,索拉菲尼组和PLB组细胞核少部分浓染、明亮;联合组细胞核大部分浓染,细胞核染色质固缩、明亮。流式细胞术和Western blotting法检测,与对照组、索拉菲尼组和PLB组比较,联合组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,细胞中cleaved Caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.05或P<0.01）。联合组细胞中ROS水平明显高于其他各组（P<0.05或P<0.01）。结论：PLB能改善肝癌对索拉菲尼的耐药情况,其机制可能与升高耐药细胞中ROS水平有关。     

五味子脂A联合卡铂对人卵巢癌Skov3细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制

目的：探讨五味子脂A （GA）与卡铂（CBP）联用对人卵巢癌Skov3细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用及其机制,阐明GA的协同抑瘤作用。方法：采用不同浓度GA与CBP单独或联合对卵巢癌Skov3细胞株进行干预,MTT法检测细胞增殖抑制率,根据其结果选择GA和CBP合适浓度。实验分为对照组、GA （0.04 μmol· L^-1）组、CBP （16mg· L^-1）组、GA （0.04 μmol·L^-1）联合CBP （16mg·L^-1）组（GA+CBP组）,药物处理48h后,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力,RT-PCR法检测各组细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9） mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MMP-2、MMP-9、AKT1和pAKT1蛋白表达水平。结果：与GA组和CBP组比较,GA＋CBP组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.01）,且GA和CBP浓度分别为0.04 μmol·L^-1、16 mg·L^-1时量效比最佳。克隆形成实验,与对照组比较,CBP组和GA+CBP组Skov3细胞克隆形成率均降低（P<0.05或P<0.01）;GA+CBP组Skov3细胞形成率明显低于GA组和CBP组（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,GA组和CBP组Skov3细胞迁移的数量减少;GA+CBP组细胞迁移的数量明显低于GA组和CBP组。Transwell实验,与对照组比较,GA组和CBP组Skov3细胞穿过细胞外基质（ECM）的能力降低;与GA组和CBP组比较,GA+CBP组Skov3细胞穿过ECM的能力降低。RT-PCR法,与GA组和CBP组比较,GA+CBP组Skov3细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;Western blotting法,与GA组和CBP组比较,GA+CBP组Skov3细胞中MMP-2、MMP-9、AKT1和pAKT1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：GA可增强CBP抑制人卵巢癌Skov3细胞增殖、侵袭和转移的能力,从而发挥化疗的减毒增效作用。